紫外诱变酿酒酵母筛选耐高温菌株
小议高产酒精酵母菌的紫外线诱变选育
聂世现，王钰，黄文静，季必霞0 引言石油是世界经济与发展的基本能源之一，其储备有限。
20世纪70年代世界范围发生石油危机，使利用可再生的资源（如高淀粉作物）发酵生产酒精作为生物能源的研究成为人们关注的焦点。
生物能源与石油相比具有可再生、污染小、减少温室效应等优点，能部分或全部代替汽油。
目前，燃料酒精的生产占世界酒精总产量的66%，并且还有进一步增加的趋势。
发酵法是酒精生产的重要方法，发酵法生产酒精的关键是酵母菌株，酒精酵母的优劣不仅直接影响发酵率的高低，而且会影响酒精的产量和质量。
我国酒精生产行业中普遍存在亟待解决的问题是发酵强度低,生产成本高,能耗大。
因此，高产酒精酵母的选育是提高酒精产率，节约生产能源的关键。
为了开展非粮作物甘薯等转化酒精的研究，本论文探讨了酵母菌A4原生质体制备和再生的适宜条件，并用紫外线作诱变剂，对酵母菌原生质体进行诱变处理，旨在筛选出发酵力强、酒精产量高的优良酵母菌株，为下一步以高产淀粉品种甘薯为原材料生产酒精的研究工作奠定基础。
1 材料与方法1.1 材料1.1.1 菌种酵母菌（A4）为本实验室保藏菌种。
1.1.2 培养基麦芽汁液体培养基：将麦芽汁（购于合肥市华润雪花啤酒厂）糖度调至12°Brix，过滤后121℃灭菌20min。
YPD培养基(g/L)：液体培养基：酵母提取物10，蛋白胨20，葡萄糖20。
固体培养基：在YPD液体培养基中加入琼脂20，NaOH0.1。
原生质体再生培养基：在YPD固体培养基中分别添加KCl至0.7mol/L，山梨醇至0.8mol/L，甘露醇至0.8mol/L，17%的蔗糖。
以上培养基于115℃灭菌20min。
TTC上层培养基(g/L)：TTC（三苯基四氮唑盐酸盐）0.5，葡萄糖5，琼脂15。
TTC下层培养基(g/L)：葡萄糖10，蛋白胨2，酵母膏1.5，K2HPO41，MgSO4·7H2O4，琼脂20，pH5.5。
1.1.3 试剂缓冲液：pH6.8的柠檬酸-磷酸缓冲液。
耐高温酒精酵母的选育
２３ 如有条件一般 应使 用较好的 酵母 ， ． 保证 酒的 口感 。但如 自己无力培养 、保存 纯种啤酒 酵母 又难 以购买到纯种酵母 的
用户 ， 也可使用酒 用干酵母 ， 出的啤酒 风味较差 ， 酿 一般略带 酸味。用来酿造黑啤酒 、 小麦啤酒风味稍好 一些 。
酒为例 ， 配料的 比例不同 ， 直接影响着色泽和 口感（ ２ 。 表 ）
李振林 夏 海华 ， ， 吕伟 民
（． １ 黑龙江省轻工科学研究院 哈尔滨 １ ０ １ ；． ５００２ 黑龙江省科学院微生物研究所 ， 哈尔滨 １０ １ ） ５００
摘
要： 以酒精 酵母 Ｋ２ 出发菌株 ， 为 通过紫外线诱 变， 获得 一株耐 高温酵母 茵株 Ｂ 在 ４ ￣ ， ２Ｃ的条件 下， 以正 可
１ ．． ． ２２耐高温 一淀粉 酶（ ０ ０／ Ｌ ： １ ２ ０ ｕｍ ）张家港市金源生物化 ０
工 有 限公 司
１ ．． ． ２３糖化酶（ Ｏ Ｏ ／ Ｌ ： １ Ｓ Ｏ ｕｍ ）张家港市金源生物化工有 限公司 Ｏ １． ． ３培养基 １ １１ ． ．． １斜面种子培养基 ３ 采用速 成片剂酵母培养基（ 院专利） 本 。
Ａｂ ｔ ａ ｔ ｌ ｏ ｏ ｅ ｓ ａ ｔｔｄ ｗｉ ｌ ａ ｉｌ ｔ ａ ｉｔ ｎ ａ ｄ ａ ｔ ｅ ｍｏ ｔｌ ｒ ｎ ｅ ｓ ｓ ａ ｎ Ｂｌ Ｗ ｂ ａｎ ｄ ｔ ｉ １ ｃ ｕｄ ｓ ｒ ｃ ：ａｃ ｈ ｌｙ ａ ｔＫ２Ｗ ｍｕ ａｅ ｔ ｕ ｔ ｖ ｏｅ ｄ ａｉ ｎ ｈ ｒ —ｏ ｅ ａ ｔｙ ａ ｔ ｔ ｉ ６ ａ ｏ ｔ ｉ ｅ ．Ｓｒ ｎ Ｂ ６ ｏ ｌ ｓ ｈ ｒ ｒ ｏ ｒ ｓ ａ ｐ ｒｏｍ ｏ ａ ｔ ａ ｏ ｆｒ ｅ ｔｔ ｎ ａ ４ ℃ ． ｅｆｒ ｎ ｒ ｌ ｅｈ ｎ ｌ ｅ ｍ ｍ ｎ ａ ｉ ｔ ２ ｏ Ｋｅ ｒ ｓ Ｔ ｅ ｏｏｅ ａ ｔ ｌ ｃ ｈ ｌｙ ａ ｔ ｃ ｅ ｎ ｎ ｙ ｗｏ ｄ ： ｈ ｒ ｔ ｌｒ ｎ ；ａ ｏ ｏ ｅ ｓ；ｓ ｒ ｅ ｉ ｇ ｍ
耐高浓度酒精的酵母筛选及发酵工艺研究[开题报告]
![耐高浓度酒精的酵母筛选及发酵工艺研究[开题报告]](https://img.taocdn.com/s3/m/584d9fabb4daa58da0114af6.png)
毕业论文开题报告生物工程耐高浓度酒精的酵母筛选及发酵工艺研究1 选题的背景和意义石油作为国民经济发展的战略物资在经过人类近二百年的开采后，面临全球桔竭的局面。
特别是近年来，随着经济的持续增长和石油需求迅速膨胀，我国已成为继美国之后的第二大能源消费国。
针对我国人多地少、粮食紧缺和石油短缺的国情，依据不与人争粮、不与粮争地，能源原料多元化，实现持续发展的原则，开发非粮燃料乙醇生物能源，降低生产成本，提高转化效率，确保现代社会发展的需求，已成为国家新能源战略发展最紧迫的任务。
传统酿酒酵母的酒精发酵最适温度不高，一般为25℃一30℃；耐酒性较差，耐酒精浓度在10％左右。
一方面，在杂菌污染严重的情况下，生产上不仅要求无菌条件严格，操作难度较大，而且为了控制因发酵热所引起的温度上升，需要加入大量冷却水(甚至在部分气温较高地区，因发酵过程中过热，根本无法进行正常生产)，导致乙醇生产成本增加[1-2]；另一方面，酵母的耐酒精度较低，产物的抑制作用降低乙醇酵母的产乙醇潜力。
因此，耐受性酒精高温酵母的选育研究已成为国内外酒精行业的研究热点[3-4]。
乙醇酵母对生活条件的变化有迅速的适应能力，并且随着外界环境的变化，其群体能迅速产生变种，这为耐酒精酵母的筛选提供了可能[1]。
耐高温酵母不是微生物分类学上的名词，而是从生态方面表达此类酵母对温度的忍耐性与普通酵母的差异。
筛选耐高温的乙醇酵母菌株，其生产上的优势主要体现在：①具有较高的发酵能力，即能快速并完全将糖分转化成乙醇，能够解决糖化温度和发酵温度不协调的矛盾，实现真正意义上的边糖化边发酵，从而减少葡萄糖对纤维素酶的抑制作用，提高纤维素酶的糖化率，进而提高纤维素发酵生产燃料乙醇的得率[2-3]；②繁殖速度快，即具有高的比生长速度，高温发酵还能够提高发酵效率，降低发酵时的冷却成本[4]；③具有高的耐酒精能力，即对本身代谢产物的稳定性高．因而可以进行浓醪发酵；④抗杂菌能力强，即对杂菌代谢产物的稳定性高．耐有机酸能力强；⑤对培养基的适应性强。
紫外_硫酸二乙酯复合诱变选育酒精高产菌株_夏帆
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图 ２ 结果表明 ， 经过 ＤＥＳ 处 理 ５０ ｍｉｎ 、 ６０ ｍｉｎ 和
７０ ｍｉｎ 后 Ｋ － ８０ 的 致 死 率 分 别 为 ６４．４ ％ 、 ８０．６％ 和 ８９．２ ％。 ２．３．２ 正交试验确定 （ ＤＥＳ） 诱变参数 影响 ＤＥＳ 诱变的因素有 ＤＥＳ 浓度 ， 处理温度和处 理时间 ， 以此为条件做 ３ 因 素 ３ 水 平 正 交 实 验 ， 结 果 见 表 ２ 和表 ３。
缓冲液 ： ０．２ ＭＮａ２ＨＰＯ４－ ＮａＨ２ＰＯ４ 缓冲液 ， ｐＨ６．０ 。
１
材料与方法
１．１ 材料 １．１．１ 菌种 Ｋ 氏酵母 （ Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｏｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｓ） ， 湖北工业大学
微生物实验室保藏。
１．１．２
培养基 液 体 完 全 培 养 基 （ ＹＥＰＤＳ ） ： 葡 萄 糖 ２ ％ ， 蛋 白 胨
紫外诱变法选育高产酒精及酯类酿酒酵母
紫外诱变法选育高产酒精及酯类酿酒酵母方佩佩;王世清;李静;谭海刚;刘晓莉;付均鹏【摘要】采用紫外诱变法进行酿酒酵母的诱变，选育发酵速度较快、产酒精能力较强的酿酒酵母工业菌株。
以致死率和正突变率为主要指标，以突变株的酒精发酵性能为参考，结合单因素实验和正交实验，确定出紫外诱变法的较佳诱变条件为：辐照功率20 W，紫外灯辐照时间10 min，辐照距离9 cm。
以出发菌株 F1为对照，对7株酵母突变株进一步进行全面的生理性能测试，结果表明，菌株F4的CO2失重量最高、残糖含量低、乙醇和酯类物质的产生量高，是一株优良的正向突变株。
对该菌株进行形态观察，其细胞个体饱满呈卵圆型，群体菌落颜色呈乳白色；用于紫甘薯汁发酵，起酵速度快、发酵液酒精度可达11.08％（V ／V），香气浓郁，具有良好的工业生产潜力。
%Saccharomyces cerevisiae induced by UV mutagenesis to breeding the strains of high fermenta-tion rate and alcohol production are investigated.Regarded fatality rate and percentage of plus mutants as main criterion,ethanol fermentation performance of mutant as reference,the proper condition of UV muta-genesis experimented by single factor and orthogonal experiment are as follows:UV radiation time for 10 min by ultraviolet lamp of 20w,distance from the lamp to sample at 9cm.And with the original strain F1 as control,physiological comprehensive performance tests of the seven mutant stains are conducted.The results are shown that an excellent positive mutated S.cerevisiae F4 is obtained,which has a high loss of carbon dioxide weight,low amount of residual sugar,superior production of ethanol and esters.The cell of this mutated strain F4 is full,its shape isoval,and its color is ivory -white or cream.It could be applied in the wine of purple sweet potato,of which the fermentation rate and alcohol production are high,the al-cohol degree of fermentation broth can reach at 11.08%,the aroma is strong.So the potential industrial production of this mutated strain is well.【期刊名称】《粮油食品科技》【年(卷),期】2016(000)001【总页数】5页(P86-90)【关键词】紫外诱变;酵母菌;育种;紫甘薯【作者】方佩佩;王世清;李静;谭海刚;刘晓莉;付均鹏【作者单位】青岛农业大学食品科学与工程学院，山东青岛 266100;青岛农业大学食品科学与工程学院，山东青岛 266100;青岛农业大学食品科学与工程学院，山东青岛 266100;青岛农业大学食品科学与工程学院，山东青岛 266100;青岛农业大学食品科学与工程学院，山东青岛 266100;青岛农业大学食品科学与工程学院，山东青岛 266100【正文语种】中文【中图分类】TS201.3酵母菌，一般泛指能发酵糖类的各种单细胞真菌[1]。
耐高温、高浓度酒精酵母的选育与耐受性能初步鉴定
耐高温、高浓度酒精酵母的选育与耐受性能初步鉴定彭源德;朱作华;唐守伟;严理;温岚;汤清明;熊和平【摘要】针对传统酿酒酵母的酒精发酵温度低、耐酒性差、乙醇产率低和成本高等问题,进行了耐高温、高浓度酒精酵母的选育与耐受性能初步鉴定研究.通过广泛采集菌样,初筛、复筛,从22个样品中经分离得到S11、S12、S15、S17 4株在40℃均能较好生长的耐高温酵母菌:对S15、S17菌株进行紫外诱变育种,获得1株编号为S132的耐受性优良酒精酵母.与对照丹宝利耐高温酵母相比,S132耐受40℃高温和16%(v,v)乙醇的能力分别高出20.9%和15%,是一株良好的高耐受性酒精酵母.【期刊名称】《中国麻业科学》【年(卷),期】2010(032)003【总页数】6页(P135-139,142)【关键词】耐受性;酵母菌;酒精发酵【作者】彭源德;朱作华;唐守伟;严理;温岚;汤清明;熊和平【作者单位】中国农业科学院麻类研究所,湖南,长沙,410205;中国农业科学院麻类研究所,湖南,长沙,410205;中国农业科学院麻类研究所,湖南,长沙,410205;中国农业科学院麻类研究所,湖南,长沙,410205;中国农业科学院麻类研究所,湖南,长沙,410205;中国农业科学院麻类研究所,湖南,长沙,410205;中国农业科学院麻类研究所,湖南,长沙,410205【正文语种】中文【中图分类】Q93-335石油作为国民经济发展的战略物资在经过人类近二百年的开采后，面临全球枯竭的局面。
特别是近年来，随着经济的持续增长和石油需求迅速膨胀，我国已成为继美国之后的第二大能源消费国。
针对我国人多地少、粮食紧缺和石油短缺的国情，依据不与人争粮、不与粮争地，能源原料多元化，实现持续发展的原则，开发非粮燃料乙醇生物能源，降低生产成本，提高转化效率，确保现代社会发展的需求，已成为国家新能源战略发展最紧迫的任务。
传统酿酒酵母的酒精发酵最适温度不高，一般为25℃-30℃；耐酒性较差，耐酒精浓度在10%左右。
酿酒酵母的紫外诱变选育及发酵条件研究
酿酒酵母的紫外诱变选育及发酵条件研究作者：杨亚珍，查凡，果然，等来源：《湖北农业科学》 2015年第7期杨亚珍ａ，查凡ａ，果然ａ，张建民ｂ（长江大学，ａ．生命科学学院；ｂ．农学院，湖北荆州４３４０２５）摘要：以果园土为菌种来源，采用平板分离法得到５种酵母菌，对其进行紫外线诱变，筛选出７株酵母菌突变株，通过测定突变株的发酵性能，从中筛选出１株液化酶活力、糖化酶活力、蛋白酶活力及发酵力均较好的酵母突变株Ｎ４－４，其发酵液化酶活力、糖化酶活力、蛋白酶活力和发酵力比对照菌株分别提高了６．７％、７．５％、８．１％和３９．０％，通过单因素和正交试验确定该突变株的最佳发酵条件。
结果表明，在３０℃、１２０ｒ／ｍｉｎ的培养条件下，突变株最佳发酵条件为３％葡萄糖、３％（ＮＨ４）２ＳＯ４、ｐＨ５．０、３％接种量（Ｖ∶Ｖ）。
关键词：酵母菌；紫外线诱变；发酵条件中图分类号：TS261.1；Q93.3文献标识码：A文章编号：0439－８114（２０15）07－1664-04DOI:10.14088/ki.issn0439-8114.2015.07.034酵母菌是白酒发酵过程中的一种重要微生物，白酒风味的形成与发酵过程中各种酵母菌息息相关［１］。
酵母菌的主要作用是将原料糖化后的绝大部分糖类物质转化为乙醇和二氧化碳，同时生成甘油、高级醇、酯、醛等代谢产物，直接影响着白酒的色泽、香气及口感，决定着白酒的质量。
酵母菌的发酵特性常常因菌株的不同而存在明显的差异［２］，野生型酵母菌在工业发酵过程中不可避免地受到胁迫条件（如乙醇毒性、高温胁迫等）的影响，最终影响到乙醇产率和白酒品质以及其经济效益。
工业上常常采用紫外线诱变的方法，对酿酒酵母工业菌株进行改良来提高菌株对胁迫条件的耐受性［３］。
本试验采用紫外线诱变的方法对果园土中分离到的５株酵母菌进行诱变，以期筛选出发酵力较高的突变株，为提高白酒的产量和质量提供参考。
１材料与方法１．１材料菌种来源：分离自陕西省周至县邵家堡村苹果园土壤中。
酿酒酵母温度敏感性突变株的选育
酿酒酵母温度敏感性突变株的选育岳希洁;蒋雪薇;罗晓明;周慧;刘永乐;陈代文;周志明【摘要】为获得酵母胞内产物的高效分泌,以酿酒酵母二倍体(2n)及单倍体(n)为出发菌,经紫外诱变处理,筛选获得5株可能具有温度敏感性的突变株.为进一步鉴定,以野生菌Y1为对照菌,测定其胞外核酸、蛋白质及果糖-1,6-二磷酸(FDP)的含量,发现突变菌株Ts4(2n)自溶程度最高,其核酸、蛋白质渗透率达1.709,1.483,胞外FDP浓度为38 μg/mL,较Y1(2n)提高了24.1％.此外突变株Ts2(n)、Ts3(.)(n)也会发生一定程度的自溶.因此,该试验共获得温度敏感性突变株3株,即Ts4 (2n)、Ts2(.)(n)和Ts3* (n).【期刊名称】《食品与机械》【年(卷),期】2016(032)008【总页数】5页(P9-12,16)【关键词】酿酒酵母;紫外诱变;温度敏感性突变株;自溶【作者】岳希洁;蒋雪薇;罗晓明;周慧;刘永乐;陈代文;周志明【作者单位】长沙理工大学化学与生物工程学院,湖南长沙410004;长沙理工大学化学与生物工程学院,湖南长沙410004;长沙理工大学化学与生物工程学院,湖南长沙410004;长沙理工大学化学与生物工程学院,湖南长沙410004;长沙理工大学化学与生物工程学院,湖南长沙410004;连南瑶族自治县奇乡生物科技有限公司,广东清远 513300;连南瑶族自治县奇乡生物科技有限公司,广东清远 513300【正文语种】中文酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)作为一种模式生物，具有安全可靠、遗传背景清晰等优点，被认为是外源基因最理想的真核生物表达系统[1-2]。
由于其不能有效释放外源基因所表达的蛋白[3-4]，故在工业中的应用存在着明显的局限性。
近年来国内外开展了一些利用酵母细胞膜通透性提高外源蛋白分泌的研究，多集中在两个方面：① 采用物理方法处理[5-7]，通过超声波、高压脉冲及光照等方法对细胞膜结构产生破坏，提高胞内物质及外源蛋白的分泌能力；② 利用基因工程的手段[8-10]，重组或改造外源基因中的信号肽，增强外源蛋白的分泌能力。
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紫外诱变酿酒酵母筛选耐高温菌株
李艾;李云凯;程磊
【摘要】以实验室保存的酿酒酵母为初始菌株,采用紫外分光光度法测定菌株浓度,绘制出菌株生长曲线,由此确定出最佳诱变菌龄为3～10 h,在此期间利用紫外线对菌株进行诱变,筛选出一株适于在高温下发酵的菌株,紫外线诱变条件为:紫外灯功率10 W,照射距离30 cm,照射时间3 min.此菌株在37℃下培养72 h,其成熟发酵醪酒精产率为3.837％.
【期刊名称】《唐山学院学报》
【年(卷),期】2013(026)003
【总页数】3页(P35-37)
【关键词】酿酒酵母;菌株;诱变;耐高温
【作者】李艾;李云凯;程磊
【作者单位】唐山学院环境与化学工程系,河北唐山 063000;唐山学院环境与化学工程系,河北唐山 063000;唐山学院环境与化学工程系,河北唐山 063000
【正文语种】中文
【中图分类】TS261.1;TS262.2
乙醇（俗称酒精）是一种绿色燃料，具有污染小、可再生、容易运输和储藏等优点［1］。
乙醇主要来源于粮食和糖料作物，通过微生物发酵把其中的淀粉或糖转化而得。
发酵主要由酵母菌引起。
酵母发酵温度一般不应超过36℃，温度过高，会
导致酵母的老化或死亡，使发酵过程不能正常进行。
因此在发酵生产酒精过程中往往需要有冷却这一工序，其目的在于使主发酵的基质维持在一个适宜温度，保证较高的酵母活性以便获得较高的产酒率。
假如能使主发酵基质的温度维持在38℃到40℃之间，那么既可以节省能源，又能在我国夏季高温时节进行正常的酒精发酵［2］。
此外，酒精生产时糖化酶的最适温度为60℃，若提高了发酵温度，不仅
可减少冷却水的用量、使酶活力上升而且单位时间内可发酵性糖的转化率提高，发酵周期也会有所缩短。
因此，筛选耐高温、产酒性能好的菌株是很必要的［3］。
本文以实验室保存的酿酒酵母菌株为初始菌株，对其进行紫外诱变，筛选一株耐高温、产酒率高的菌株，并进一步探讨其发酵特性。
1 材料和方法
1.1 实验材料
菌株：酿酒酵母购自中国工业微生物菌种保存中心，实验室4℃冰箱保存。
1.2 实验方法
1.2.1 酿酒酵母生长曲线的测定方法
采用紫外分光光度法测定菌株（酿酒酵母）浓度。
首先利用紫外分光光度计在
560nm处以空白试剂作参比测得酿酒酵母OD（光密度）值。
在一定范围内，菌
体的浓度和所测得的光密度或浊度呈线性关系。
因此，定时测定培养液的OD值，然后以OD值为纵坐标，生长时间为横坐标，绘制出酿酒酵母生长曲线。
1.2.2 酿酒酵母紫外诱变方法
采用单一诱变剂（紫外线）照射酿酒酵母，设定紫外灯功率10W，照射距离
30cm，改变照射时间，筛选出耐高温、产酒精高的菌株。
2 实验结果与分析
2.1 酿酒酵母生长曲线
取酿酒酵母斜面菌种1支，无菌操作接入YEPD培养液中，在30℃下恒温培养
24h，制成种子培养液。
用2mL无菌移液管准确吸取2mL种子培养液加入三角瓶中，于30℃下振荡培养。
然后分别对培养时间为0h，2h，4h，6h，8h，10h，12h，14h，16h的培养液测定OD值。
酿酒酵母生长曲线见图1。
图1 酿酒酵母生长曲线
由图1可明显观察到酿酒酵母菌体细胞生长出现3个阶段：延滞期、对数期、稳定期。
生长曲线直观地反映了该菌群在培养过程中的生长、繁殖规律，该菌群在培养0～3h为延滞期，3～10h为对数生长期，10～16h为稳定期。
在对数生长期，酵母菌活菌数目以稳定的几何指数增长。
此期间菌落形态、生物活性、染色都很典型，对环境因素的作用很敏感，因此选择本实验的紫外诱变在此期间进行。
在稳定期，生长菌群总数处于基本平稳阶段，但细胞群体活力变化很大。
由于培养基中营养物质的不断消耗、pH值下降、毒性产物积累等不利因素的影响，菌落染色、形态、生物活性出现改变，菌体开始产生代谢产物，有利于发酵产物的积累。
2.2 酿酒酵母的诱变
2.2.1 菌悬液的制备
取已培养的24h的活化酿酒酵母斜面一支，用10mL生理盐水将菌苔洗下，倒入试管中强烈振荡10min，打碎菌块，离心（1 000r／min）5min，弃上清液，将菌体用无菌水重复洗涤2次，最后制成菌悬液，使用XB－K－25型的血球计数板在显微镜下对酵母菌的细胞数进行测定，并调整细胞浓度为107～108个／mL。
血球计数板（规格25×16）测定酵母菌细胞数的计算公式为
酵母细胞数稀释倍数。
2.2．2 诱变
取菌悬液加入到6cm培养皿中，放入无菌磁力搅拌棒在距离10W紫外灯30cm 处边照射边搅拌。
诱变时间分别为2min，3min。
关闭紫外灯，在黑暗中放置
5min。
2.2.3 培养
取诱变后的菌悬液1mL用生理盐水稀释10倍，取2．5mL进行涂板。
将紫外诱
变后的酿酒酵母菌株和初始酿酒酵母菌株分别在35℃，37℃，40℃条件下进行培养，其长势情况见表1。
表1 初始菌株和诱变菌株不同培养温度下的生长情况注：“＋＋”表示长势较好，“＋”表示长势一般，“±”表示长势较弱，“－”表示无菌落长出菌株 35／℃ 37／℃ 40／℃诱变2min的菌株＋＋±诱变3min的菌株＋＋＋＋－初始菌株± ± －
由表1可知初始酿酒酵母菌株在35℃，37℃条件下长势明显变弱，在40℃的高
温下无菌落长出，说明高温破坏了菌体酶的活性，不利于菌株的生长。
经紫外诱变的菌株在35℃，37℃条件下长势明显好于初始菌株，且诱变3min的长势明显优
于诱变2min的长势，说明诱变时间长，菌株的致死率相对较高，产生的变异效果明显。
2.3 酿酒酵母的发酵实验与酒精含量测定
2.3.1 酿酒酵母发酵实验
在无菌操作台内用接种环分别挑两环初始菌株、诱变2min的菌株和诱变3min的菌株至YEPD培养基中，分别放入温度为35℃，37℃，40℃培养箱中先120r／min的振荡培养18h，后静置培养54h。
2.3.2 酒精度测定
取以上各发酵液150mL，加入少量沸石进行蒸馏，收集馏出液。
用酒精计测定其
酒精度。
将菌株进行编号，字母A代表诱变时间为2min的菌株，B代表诱变时间为3min的菌株，阿拉伯数字1代表35℃，2代表37℃，3代表40℃。
酒精度的测定结果见表2。
表2 初始菌株及诱变菌株发酵酒精度的测定计算公式：实际酒精度＝蒸馏的发酵液体积（mL）×测量酒精度／馏出液体积（mL）A1B1A2B2A3馏出液体积／菌株初始菌株（35℃）初始菌株（37℃）mL 84 88 85 84 90 86 83测定的酒精度（%） 1 0．6 2 2 1．8 2.2 0实际酒精度（%）1．786 1．023 3．529 3．571 3 3．837 0
由表2可知初始菌株，在35℃和37℃高温条件下其发酵能力明显下降。
而诱变时间3min，诱变温度37℃的菌株发酵能力最强，其成熟醪酒精的体积分数可达3．837%；诱变时间3min，诱变温度为35℃的菌株发酵能力次之，其成熟醪酒精的体积分数为3．571%。
结果表明，酿酒酵母经诱变3min可适应37℃的较高温度，且具有较高的产酒率，故B2菌株为本实验筛选目的菌株。
因此，通过紫外诱变成功选育出了一株耐高温、高酒精产率的酿酒酵母菌株。
3 结论
本实验采用紫外诱变方法，诱变筛选耐高温、高产酒率的酿酒酵母。
该方法简单易行，且有较高的诱变效率。
利用紫外分光光度法测定菌株浓度，绘制出酿酒酵母生长曲线，由此选择了最佳的菌株诱变菌龄为3～10h，以此提高诱变得率。
紫外线诱变的条件为：紫外灯功率10W；照射距离30 cm，照射时间3min。
此条件下筛选出了一株耐37℃高温，酒精产率为3．837%的酿酒酵母菌株。
【相关文献】
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