保健食品中肉碱的测定
婴幼儿食品和乳品中左旋肉碱测定的方法验证
婴幼儿食品和乳品中左旋肉碱测定的方法验证作者：石永倩张天博来源：《企业科技与发展》2021年第12期【摘要】為了验证采用分光光度法测定婴幼儿食品和乳品中左旋肉碱含量方法的准确性与可靠性，判断测定结果是否达到标准要求，文章采用《食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中左旋肉碱的测定》中的方法测定乳品中左旋肉碱的含量，并根据《合格评定化学分析方法确认和验证指南》中的相关规定对其线性、线性范围、检出限、定量限、精密度、回收率6个参数进行验证。
【关键词】左旋肉碱;脂肪代谢;方法验证;适用性【中图分类号】TS252.7 【文献标识码】A 【文章编号】1674-0688（2021）12-0025-03左旋肉碱，别名L-肉碱或维生素BT，分子式C7H15NO3，是一种白色晶体或者白色透明粉末，易溶于水、酒精和碱性溶液，200 ℃以上熔化分解。
左旋肉碱是由俄国科学家Gulewitsch和Krimberg在骨骼肌中发现的。
左旋肉碱是参与生物体新陈代谢的重要物质，具有多种生理功能。
奶粉中的左旋肉碱是促进奶粉中的脂肪分解、代谢和供能的重要营养素，同时能促进体内的脂肪转化为能量，属于一种类氨基酸类的营养物质[1]。
人体内的左旋肉碱主要来源于羊肉、牛肉、猪肉等红色肉类，奶粉中适量添加左旋肉碱对人体无害，可以促进体内脂肪代谢和利用。
婴幼儿饮食结构比较单一，主要饮食来源为各种乳制品，主要的能量来源为乳制品中的脂肪，宝宝体内缺乏左旋肉碱，导致脂肪的利用率下降，不利于宝宝体格发育，添加左旋肉碱可以提高宝宝对奶粉中脂肪的利用率[2]。
本文研究的目的在于通过对方法的线性、线性范围、检出限、定量限、精密度、回收率6个指标进行验证，证明采用这种检测方法测定婴幼儿食品和乳品中左旋肉碱的可行性[3]。
1 试验方法——《食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中左旋肉碱的测定》（GB 29989—2013）1.1 原理概述将样品中的蛋白质用高氯酸溶液沉淀，过滤后的滤液用氢氧化钾溶液皂化，使左旋肉碱游离。
功效成分及卫生指标检验规范
1 主题内容和适用范围本规范规定了保健食品和原料的卫生要求、功效成分和卫生指标的检验项目和方法。
本规范适用于保健食品的检验受理、项目的确定和方法的选择。
2 基本要求凡保健食品，必须符合"保健食品通用卫生要求"，该"要求"所列的各项目必须按规定执行。
附表1所列检测项目是对"保健食品通用卫生要求"补充规定。
保健食品中使用的添加剂必须符合＂GB2760食品添加剂使用卫生标准＂规定的品种名单。
检测机构根据产品配方检测合成色素、防腐剂、甜味剂及抗氧化剂的含量。
凡使用有机溶剂提取物为原料的产品，其使用的有机溶剂要符合GB2760附录D食品工业用加工助剂推荐名单要求。
保健食品应具有与产品配方和申报的保健功能相适应的功效成分或特征成分，申报时须检测配方中主要原料所含的功效成分或特征成分。
附表2所列原料为主的产品须检测表中规定的项目。
保健食品评审专家委员会可根据产品的具体配方、工艺等相关资料，要求申报单位检测指定的项目。
功效成分、特征成分、营养成分及卫生学指标的检测方法应根据其产品适用的方法学范围选择国家标准、卫生部部颁标准、行业标准以及国际上权威分析方法进行测定。
在没有相应的标准方法之前，其产品中所声称（具有）的功效成分或特征成分的检测方法及检测所需的标准品对照品及特殊试剂均由申报单位提供，并说明其产品中功效成分或特征成分分析方法的来源。
如属自主开发研究的分析方法，需提供方法学研究的相关资料，同时将方法学研究的资料报卫生部保健食品功效成分检测协作组（中国疾病预防控制中心营养与食品安全所）备案，必要时卫生部将组织方法学验证，其费用由申报单位承担。
检验机构受理保健食品检测时，申报单位应提供该产品的配方、工艺及企业标准等相关资料。
2.9卫生部对保健食品的功效成分的检测机构进行认定，检测机构的名单由卫生部门公布。
保健食品的功效成分检测工作应在卫生部认定的检测机构进行。
4-保健食品功效成分检测技术与方法
保健食品成效成分检测技术与方法提纲一．保健食品的查验有关要求二．保健食品理化查验及常用的阐发方法介绍三．保健食品成效成分的检测四．保健食品成效成分检测其它有关问题一、保健食品的查验有关要求1、查验依据2、查验要求1、主要查验依据➢保健食品办理方法〔1996年卫生部46令〕➢保健食品注册办理方法➢卫生部健康相关产物查验机构认定与办理方法〔卫法监发［1999］第76号〕➢卫生部发布的与保健食品相关的文件➢保健食品通用卫生要求〔1996年〕➢保健〔功能〕食品通用尺度〔GB16740〕➢保健食品查验与评价技术尺度〔2003年版〕➢食品国标GB/T5009——2003➢企业尺度2、查验要求保健食品查验机构➢CDC系统➢药检系统查验要求1.保健食品应具有与产物配方和申报的保健功能相适应的成效成分或特征成分，申报时须检测配方中主要原料所含的成效成分或特征成分。
查验要求1.保健食品评审专家委员会可按照产物的具体配方、工艺等相关资料，要求申报单元检测指定的工程。
2.查验机构受理保健食品检测时，申报单元应提供该产物的配方、工艺及企业尺度等相关资料。
3.保健食品的成效成分检测工作应在SFDA和卫生部本来认定的检测机构进行。
查验要求1.成效成分或指标性成分、含量及其查验方法◆按照产物及原料确定，应与申报的功能有必然的关系◆成效成分或指标性成分、含量及其查验方法应别离列出◆依据以下二方面确定产物的成效成分〔或标记性成分〕并说明理由➢与申报保健功能有关的成效成分➢代表产物特性的标记性成分◆按尺度〔尺度〕规定的检测方法检测➢无尺度检测方法的，应用比较权威的检测方法，并标明方法的出处➢无相关检测方法的，申请人应提供详细的检测方法和方法学研究及验证成果。
研究及验证成果包罗查验方法、线性范围、精密度、准确度和至少5批加样回收率等内容及验证陈述查验要求成效成分、特征成分、营养成分及卫生学指标的检测方法应按照其产物适用的方法学范围选择以下进行测定：国家尺度卫生部部颁尺度行业尺度国际上权威阐发方法查验要求1.在没有相应的尺度方法时，企业应建立本身的企业尺度。
肉毒碱(AC0)检测
迪信泰检测平台
肉毒碱（AC0）检测
肉毒碱（Carnitine，AC0），又称为维生素BT、肉碱、左卡尼汀（L-carmitine, LC），是一种类维生素，存在于动植物体内，是动物组织中一种必需的辅酶，与脂肪代谢有关。
具有改善心肌缺血、改善心功能、保护肝脏等作用，在临床上应用广泛。
迪信泰检测平台采用ACQUITY UPLC/TripleQuad5500（Waters/AB Sciex）方法，可实现对肉毒碱的定性定量分析。
此外，我们还提供其他酰基肉碱(C0-C18)检测服务，以满足您的不同需求。
LC-MS测定肉毒碱样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。
周期：2~3周。
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）。
2. 相关质谱参数（中英文）。
3. 质谱图片。
4. 原始数据。
5. 肉毒碱含量信息。
迪信泰检测平台可根据需求定制其他物质测定方案，具体可免费咨询技术支持。
保健食品卫生学理化检验规范
保健食品卫生学理化检验规范（征求意见稿）Standards for Hygienic Physical and Chemical Examination of Health Food目录第一部分总则.................................................. 错误!未定义书签。
一、主题内容和适用范围 ...................................... 错误!未定义书签。
二、基本要求................................................. 错误!未定义书签。
第二部分二十五种功效成分和标志性成分检验方法.................. 错误!未定义书签。
一、保健食品中红景天苷的测定.................................. 错误!未定义书签。
二、保健食品中大蒜素的测定 ................................... 错误!未定义书签。
三、保健食品中芦荟苷的测定 ................................... 错误!未定义书签。
四、保健食品中肉碱的测定 ..................................... 错误!未定义书签。
五、保健食品中α-亚麻酸、γ-亚麻酸的测定...................... 错误!未定义书签。
六、保健食品中人参皂苷的测定.................................. 错误!未定义书签。
七、保健食品中原花青素的测定.................................. 错误!未定义书签。
八、保健食品中核苷酸的测定 ................................... 错误!未定义书签。
九、保健食品中洛伐他汀的含量测定.............................. 错误!未定义书签。
国家局关于征求保健食品中大蒜素的测定等15个保健食品功效成分或标志性成分检测方法意见的函
附件：一、保健食品中大蒜素的测定1 范围本方法适用于以大蒜及其制品为原料的保健食品中大蒜素（三硫二丙烯，C6H10S3）的含量测定。
本方法最低检出浓度为0.0430mg/mL；取100mg试样，提取定容5.0mL时，试样中大蒜素最低检出质量浓度为0.20g/100g。
本方法最佳线性范围： 0.320mg/mL～3.00 mg/mL。
2 原理：根据大蒜素为挥发性油成分，经有机溶剂提取，用气相色谱仪分析，采用外标法定量。
3 试剂除特殊说明，所用试剂均为分析纯。
3.1 无水乙醇3.2 正己烷3.3标准溶液：称取0.1000g标准品，置于10mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，该溶液中含大蒜素浓度为10.0mg/mL。
此溶液可在冰箱中保存七天。
取该溶液1.0mL，置于10mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，此溶液含大蒜素浓度为1.0mg/mL。
4 仪器4.1气相色谱仪：附氢火焰（FID）检测器4.2数据处理机或积分仪4.3分析天平：万分之一4.4超声清洗机4.5离心机：3000r/min5分析方法5.1试样提取5.1.1固体试样：称取试样适量（相当于含大蒜素5mg，精确至0.001g），加无水乙醇适量，密塞，超声70min，取出冷却，加正己烷定容（调节大蒜素含量约为1mg/mL），振摇，静置分层后，取上层溶液进样。
5.1.2液体试样吸取试样适量（相当于含大蒜素5mg，精确至0.001g），置于分液漏斗中，加5mL 正己烷振摇提取1min ，静置（或离心）分层后，取上层溶液进样。
5.2 气相色谱参考条件5.2.1 色谱柱：HP-5(30m×0.25mm)5.2.2 柱箱温度：100℃（3min ）min)10(℃200℃150℃/min 20℃/min 10−−−→−−−−→−5.2.3 进样口温度：220℃ 5.2.4 检测器温度：250℃ 5.2.5 载气：氮气（1mL/min ）5.2.6 氢气：40mL/min ；空气：400mL/min 5.2.7 进样量：1μL5.3 定性分析：在参考操作条件下，以对照品与试样比较保留时间定性。
肉碱含量测定实验报告
一、实验目的1. 了解肉碱的化学性质和检测方法。
2. 掌握高效液相色谱法（HPLC）在肉碱含量测定中的应用。
3. 通过实验，学会样品前处理、色谱条件优化、数据处理等实验技能。
二、实验原理肉碱（L-carnitine）是一种含氮有机化合物，具有促进脂肪代谢、增强免疫力等生理功能。
本实验采用高效液相色谱法测定肉碱含量，其原理是利用肉碱在特定色谱条件下的保留时间，通过比较标准品和样品的峰面积，计算出样品中肉碱的含量。
三、实验仪器与试剂1. 仪器：高效液相色谱仪、超声波清洗器、电子天平、样品处理装置等。
2. 试剂：肉碱标准品、甲醇、乙腈、水等。
四、实验步骤1. 样品前处理（1）准确称取一定量的样品，加入适量的甲醇溶液，超声提取30分钟。
（2）将提取液离心，取上清液过0.45μm滤膜，备用。
2. 色谱条件（1）流动相：甲醇-水（80:20，V/V）。
（2）流速：1.0 mL/min。
（3）柱温：30℃。
（4）检测波长：215 nm。
3. 标准曲线绘制（1）准确称取肉碱标准品，用甲醇溶液配制成浓度为1.0 mg/mL的标准溶液。
（2）分别取0.1 mL、0.2 mL、0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL标准溶液，依次加入流动相稀释至1.0 mL，制备成不同浓度的标准溶液。
（3）按照色谱条件进行色谱分析，记录峰面积，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。
4. 样品测定（1）取0.1 mL样品溶液，加入流动相稀释至1.0 mL。
（2）按照色谱条件进行色谱分析，记录峰面积。
（3）根据标准曲线，计算样品中肉碱的含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线线性范围：经实验验证，本实验的标准曲线线性范围为0.1～0.5mg/mL，相关系数R²=0.999。
2. 重复性实验：对同一批样品进行6次测定，相对标准偏差为1.2%，说明实验具有良好的重复性。
3. 准确度实验：对已知含量的样品进行测定，测定值与理论值之间的相对误差为1.5%，说明实验具有较高的准确度。
药品保健食品检测项目
药品保健食品检Байду номын сангаас项目
理化指 水分、灰分、红外鉴别、比旋度、密度、净含量、崩解时限 标 总皂甙、总黄酮、苦参碱、氧化苦参碱、肌醇、人参皂甙、红景天甙、 芦荟甙、芍药苷、洛伐他丁、L-肉碱、原花青素、大豆异黄酮、硫酸软 中药、 骨素、粗多糖、10 羟基-α-癸烯酸、大蒜素、葛根素、番茄红素、京尼 保健食 平甙（栀子苷）、吡啶甲酸铬、虫草素、水飞蓟素、三萜类、褪黑素、 品功效 蜂胶液中高粱姜素、白杨素、荷叶碱、腺苷、粗多糖、超氧化物歧化酶 成分 (SOD)、灵芝多糖、灵芝三萜、咖啡因、乌头碱、绿原酸、丹参酮ⅡA、 天麻素、大黄素和大黄酚、维生素类、矿物质等 农药残 滴滴涕、五氯硝基苯等有机氯类；对硫磷、甲胺磷等有机磷类农药 留检测 重金属 铅、镉、砷、汞、铜等 检测 微生物 菌落总数、大肠菌群、霉菌和酵母菌、致病菌等 检测 各种辅 β-环糊精、交联聚维酮等 料 西药成 环磷酰胺、头孢曲松、头孢哌酮、头孢噻肟聚合物 分
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保健食品中肉碱的测定
Determination of carnite in health food
．范围1本方法规定了片剂、胶囊保健食品中肉碱的测定
方法。
胶囊中肉碱的本方法适用于以肉碱为主要原料的片剂、测定。
0.27ug。
本方法最低检出量为。
—本方法最佳线性
范围：0.050mg/mL2.0mg/mL
原理2.的盐酸超声提取，反相色谱试样中的肉碱以
0.5mmol/L 以峰面积外标法定量。
分离，与标准品的保留时间比较定性，试剂 3.除特殊说明，所用试剂均为分析纯。
实验用水为去离子水或同等纯度的蒸馏水。
．
3．1 磷酸氢二钾
3．2 辛烷磺酸钠
3．3 0.50mmol/L盐酸
3．4 肉碱标准溶液：精密称取干燥至恒重的肉碱标准品(含量98%)0.0200g，用0.50mmol/L盐酸溶解并定容为10.0mL，此溶液浓度为2.0mg/mL。
4.仪器
4．1 HPLC系统，配有紫外检测器和色谱工作站；
4．2 超声波提取器；
4．3 溶剂微孔过滤器带0.45um水相滤膜。
5.分析步骤
5．1 试样预处理：准确称取粉碎并混合均匀的式样0.50g （含肉碱约40毫克）；液体试样取5.0mL，于50mL容量瓶中，加入0.50mmol/L盐酸约35mL，超声提取10min，用盐酸定容，混匀，过滤，弃初滤液数毫升，收集0.50mmol/L．滤液，过0.45um水相滤膜，为试样处理液。
供HPLC分析。
5．2 试样分析
5．2．1 色谱条件：Shim—pakCLC ODS 柱；4.6×
200mm,10um；
5．2．2 流动相：0.05mol/L(3.4g) 磷酸氢二钾溶液，
0.002mol/L辛烷磺酸钠; 10%乙腈；PH2.5。
5．2．3 流速：0.8mL/min；
5．2．4 检测器：紫外检测器；检测波长：210nm；
5．3 标准曲线：分别取标准溶液
0.0,0.25,0.50,1.0,2.0,2.5,5.0mL标准溶液（3.4）于5mL比色管中；用0.50mmol/L盐酸稀释并定容为5.0mL，分别进样20uL进行色谱分析。
用标准浓度—峰面积绘制标准曲线。
5．4 试样测定：取20uL试样处理液（5.1）注入色谱仪中，
以保留时间定性，
面积定量。
5.5 色谱图
5. 6分析结果表述
试样中肉碱的含量按5.5.1式计算
5．6．1 计算
C×V
X=
m
；为试样中肉碱的含量，mg/g X—式中：g；m—为试样质量，；—为试样处理液中肉碱的浓度，Cmg/mL 。
—
为试样处理液体积，mL V 5.6.2 结果表示结果保留三位有效数字。
技术参数6 .。
6.0%小于RSD重复测定值的．
回收率：90.3~101.1%。