核酸的琼脂糖凝胶电泳
核酸电泳方法
核酸电泳是一种分离核酸的方法，主要包括琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。
以下是两种核酸电泳方法的介绍：
1.琼脂糖凝胶电泳：
（1）将琼脂糖在所需缓冲液中加热熔化成清澈、透明的溶胶，然后倒入胶模中，凝固后将形成一种固体基质，其密度取决于琼脂糖的浓度。
（2）将凝胶置电场中，在中性pH值下带电荷的核酸通过凝胶网孔向阳极迁移，迁移速率受到核酸的分子大小、构象、琼脂糖浓度、所加电压、电场、电泳缓冲液、嵌入染料的量等因素影响。
（3）在不同条件下电泳适当时间后，大小、构象不同的核酸片段将处在凝胶不同位置上，从而达到分离的目的。
（4）凝胶的制备和电泳操作方法包括以下步骤：选择琼脂糖、配制缓冲液、加热熔化琼脂糖、灌制凝胶、电泳、染色和观察。
2.聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）：
（1）聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺和交联剂聚乙烯吡咯烷酮（PVP）在催化剂作用下形成的三维网状结构。
该凝胶具有孔径大小适合核酸分离，且与样品间无反应的特点。
可通过改变基质的百分比来调整孔径大小，从而有效分离不同大小的核酸。
（2）凝胶电泳常用于分离蛋白质，例如SDS-PAGE技术是常用的蛋白表达分析技术之一。
它根据检体中蛋白质分子量大小的不同，使其在电泳胶中分离。
在大肠杆菌表达纯化外源蛋白的实验中，SDS-PAGE 是必不可少的操作步骤。
（3）聚丙烯酰胺凝胶电泳适用于分离同工酶及其亚型、大分子核酸等。
核酸琼脂糖凝胶电泳原理
核酸琼脂糖凝胶电泳原理核酸琼脂糖凝胶电泳是一种常用的核酸分析方法。
它通过核酸分子在琼脂糖凝胶上的迁移速度，实现对核酸分子的大小分离和纯化。
这种方法被广泛应用于DNA和RNA的分离和检测，可用于研究生物学中许多问题，如基因组分析、DNA测序、PCR产物分析、RNA剪接等。
核酸琼脂糖凝胶电泳的原理是基于核酸带电分子在电场作用下在琼脂糖凝胶中迁移，由此分离不同大小的分子。
琼脂糖凝胶是一种多孔性的凝胶材料，它可以通过孔径大小的不同选择不同大小的核酸分子。
琼脂糖凝胶存在于不同的浓度（即凝胶密度）中，根据不同的要求选择不同的密度，可以得到分离效果更好的凝胶。
在电泳前，琼脂糖凝胶被浸泡在缓冲溶液中，以保持凝胶的稳定性和适宜pH值。
核酸的分离和检测是通过核酸电泳仪来实现的。
核酸电泳仪由外部电源、电泳仪仪器、电容器、多通道探针等组成。
核酸试样通过特定方法加入到琼脂糖凝胶的槽内，接下来加入电泳缓冲液，使缓冲液和试样混合均匀。
然后将电泳仪按需要设置电泳时间、电场强度等，并且使缓冲液移动到大夹板中。
通过施加特定电场，核酸分子被迫移动，最终到达琼脂糖凝胶的底部。
在电泳结束时，用染料对琼脂糖凝胶进行染色，以使DNA或RNA带能够被清晰地观察到。
核酸琼脂糖凝胶电泳的准确性取决于许多因素，如电场强度、凝胶浓度、琼脂糖凝胶孔径和核酸带电质量等。
如果核酸分子太大，可能会受到凝胶的限制，从而无法被完全分离。
另一方面，如果核酸分子太小，可能会被快速通过凝胶而无法被分析。
因此，实验者需要逐步优化核酸琼脂糖凝胶电泳条件，以获得最佳的分离效果。
总之，核酸琼脂糖凝胶电泳是一种可靠的核酸分离和检测方法。
它适用于许多生物学研究领域，是现代分子生物学中不可缺少的技术。
琼脂糖凝胶电泳
琼脂糖凝胶浓度与DNA分子的有效分离范围
胶浓度（％） 0.3 0.6 0.7 0.9 1.2 1.5 2.0 线性DNA分子大小（kb） 5～60 1～20 0.8～10 0.5～7 0.4～6 0.2～4 0.1～3
二、仪器设备及材料
1、电泳装置：包括电泳槽（多采用水平方式）、 胶床和梳子三部分组成。 2、稳压电泳仪：电压可变范围0～300～600V， 电流可变范围0～250～500mA。 3、紫外线检测仪：可产生254、302、366nm 3个 波段紫外线，并配备防护眼镜和5mm厚的黑色 有机玻璃防护板。 4、照相机： 5、微波炉： 6、其它：三角烧瓶、量筒、胶带纸、一次性手套等。
3、铺胶：将冷却致60℃的凝胶倒入准备好的胶
床内，凝胶厚度3～5mm。 4、室温下静置1小时左右，凝胶固化。撕去胶床 两端的胶带纸，将带凝胶的胶床置于电泳槽中， 并使样品孔位于电场负极。 5、向电泳槽中加入0.5×TBE电泳缓冲液，以越 过凝胶表面1～2mm为宜。 6、轻轻拔出固定在凝胶中的梳子。 原梳齿处 (样品孔) 即被缓冲液充满，如发现 有气泡，应设法去除。 7、样品准备：向核酸样品中加入约为样品体积 1/6的上样缓冲液，用加样器轻轻混匀。
8、上样：用加样器吸取样品，轻轻的加入到凝 胶的样品孔中。加样量一般10～30μl。
9、盖上电泳槽，接通电源，开始电泳。 开始电泳前，再次确认凝胶样品孔处于电场的负极。 电泳条件：电压1～5v/cm；时间1小时左右。 10、电泳结束后，切断电源，取出凝胶。
11、电泳结果分析： ①紫外检测仪直接观察电源条带； ②摄影记录； ③凝胶成像分析系统处理。
溴化乙锭缺点：
EB是一种强诱变剂，并有中度毒性。 注意：①操作中务必带上防护用手套。 ②如不慎皮肤与溶液接触，应立即用清水彻底冲洗。 ③含溴化乙锭的溶液使用后应进行净化处理，使其 致诱变活性下降为原来的1/200左右，方可丢弃。
琼脂糖凝胶电泳
琼脂糖凝胶电泳1.原理琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。
其分析原理与其他支持物电泳最主要区别是：它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用。
琼脂糖凝胶具备网络结构，物质分子通过时会受阻力，大分子物质在汹涌时受的阻力小，因此在凝胶电泳中，磁铁颗粒的拆分不仅依赖于天量电荷的性质和数量，而且还依赖于分子大小，这就大大提高了辨别能力。
但由于其孔径相当大，对大多数蛋白质来说其分子筛效应微不足道，现广为应用于核酸的研究中。
蛋白质和核酸会根据ph不同带有不同电荷，在电场中受力大小不同，因此跑的速度不同，根据这个原理可将其分开。
电泳缓冲液的ph在6~9之间，离子强度0.02~0.05为最适。
常用1%的琼脂糖作为电泳支持物。
琼脂糖凝胶约可区分相差100bp的dna片段，其分辨率虽比聚丙烯酰胺凝胶低，但它制备容易，分离范围广。
普通琼脂糖凝胶分离dna的范围为0.2-20kb，利用脉冲电泳，可分离高达10^7bp的dna片段。
dna分子在琼脂糖凝胶中泳动时存有电荷效应和分子筛效应。
dna分子在低于等电点的ph溶液中带负电荷，在电场中向负极移动。
由于糖-磷酸骨架在结构上的重复性质，相同数量的双链dna几乎具备等量的净电荷，因此它们能够以同样的速率向负极方向移动。
2操作方式流程准备干净的配胶板和电泳槽琼脂糖凝胶电泳：水平电泳注意dna酶污染的仪器可能会降解dna，造成条带信号弱、模糊甚至缺失的现象。
(1)电泳方法1一般的核酸检测只需要琼脂糖凝胶电泳就可以；如果需要分辨率高的电泳，特别是只有几个bp的差别应该选择聚丙烯酰胺凝胶电泳；用普通电泳不合适的巨大dna链应该使用脉冲凝胶电泳。
注意巨大的dna链用普通电泳可能跑不出胶孔导致缺带。
(2)凝胶浓度对于琼脂糖凝胶电泳，浓度通常在0.5～2%之间，低浓度的用以展开大片段核酸的电泳，高浓度的用以展开大片段分析。
低浓度胶坚硬，小心操作方式和采用质量不好的琼脂糖就是解决办法。
琼脂糖凝胶电泳分离核酸分子量
琼脂糖凝胶电泳分离核酸分子量
琼脂糖凝胶电泳是一种常用的核酸分子量分析方法。
在琼脂糖
凝胶电泳中，核酸样品首先被混合到琼脂糖凝胶中，然后通过电场
进行分离。
琼脂糖凝胶的孔隙大小会影响核酸分子的迁移速度，从
而实现分子量的分离。
琼脂糖凝胶电泳分离核酸分子量的过程中，我们需要考虑一些
因素。
首先是琼脂糖的浓度，不同浓度的琼脂糖凝胶可以分离不同
范围大小的核酸分子。
其次是电场的强度和时间，这些参数会影响
核酸分子的迁移速度和分离效果。
另外，还需要考虑使用何种缓冲
液来维持电泳过程的稳定性。
在实际操作中，我们通常会使用DNA或RNA分子量标准品作为
参照物，通过与标准品的比较来确定待测核酸分子的分子量。
此外，琼脂糖凝胶电泳也可以结合染色剂如乙溴化蒽酮（Ethidium Bromide）来观察核酸分子的迁移情况，从而进一步分析核酸的分子量。
总的来说，琼脂糖凝胶电泳是一种简单而有效的核酸分子量分
析方法，通过合理设置实验条件和对照标准品，可以准确地分离和
测定核酸分子的分子量。
这种方法在生物学和分子生物学领域被广泛应用，为研究人员提供了重要的实验数据。
琼脂糖凝胶电泳实验
琼脂糖凝胶电泳实验⼀、实验原理：琼脂糖凝胶电泳是分离和纯化DNA ⽚段的常⽤技术。
把DNA样品加⼊到⼀块包含电解质的多孔⽀持介质（琼脂糖凝胶）的样品孔中，并置于静电场上。
由于DNA分⼦的双螺旋⾻架两侧带有含负电荷的磷酸根残基，因此在电场中向正极移动。
在⼀定的电场强度下，DNA分⼦的迁移速度取决于分⼦筛效应。
具有不同的相对分⼦质量的DNA⽚段泳动速度不⼀样，因⽽可依据DNA分⼦的⼤⼩来使其分离。
凝胶电泳不仅可分离不同分⼦质量的DNA，也可以分离相对分⼦质量相同，⽽构型不同的DNA分⼦。
在电泳过程中可以通过⽰踪染料或相对分⼦质量标准参照物和样品⼀起进⾏电泳⽽得到检测。
相对分⼦质量标准参照物相对可以提供⼀个⽤于确定DNA⽚段⼤⼩的标准。
在凝胶中加⼊少量溴化⼄锭(ethidium bromide, EB)或者ＥＢ类似物，其分⼦可插⼊DNA的碱基之间，形成⼀种络合物，在254～365nm波长紫外光照射下，呈桔红⾊荧光，因此也可对分离的DNA进⾏检测。
⼀般琼脂糖凝胶电泳适⽤于⼤⼩在0.2kb～50kb范围内的DNA⽚段。
三种不同构型分⼦进⾏电泳时的迁移速度⼤⼩顺序为：超螺旋DNA>线性DNA>开环DNA正确选择凝胶浓度对于琼脂糖凝胶电泳，浓度通常在0.5～2％之间，低浓度的⽤来进⾏⼤⽚段核酸的电泳，⾼浓度的⽤来进⾏⼩⽚段分析。
低浓度胶易碎，⼩⼼操作和使⽤质量好的琼脂糖是解决办法。
注意⾼浓度的胶可能使分⼦⼤⼩相近的DNA带不易分辨，造成条带缺失现象。
适合的电泳缓冲液常⽤的缓冲液有TAE和TBE，⽽TBE⽐TAE有着更好的缓冲能⼒。
电泳时使⽤新制的缓冲液可以明显提⾼电泳效果。
注意电泳缓冲液多次使⽤后，离⼦强度降低，PH 值上升，缓冲性能下降，可能使DNA电泳产⽣条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。
Marker的选择DNA电泳⼀定要使⽤DNA Marker或已知⼤⼩的正对照DNA来估计DNA⽚段⼤⼩。
琼脂糖凝胶电泳详解
一、简介琼脂糖凝胶电泳是以琼脂糖凝胶作为支持介质、利用核酸分子在电场中时的电荷效应和琼脂凝胶的分子筛效应，达到分离核酸混合物的一种电泳技术。
1、琼脂糖的分子筛效应1）琼脂糖（Agarose）来源于海洋红藻细胞壁，是一种大分子线性聚合物，基本结构是由D-半乳糖和3,6-anhydro-α-L-半乳糖通过β-1,4糖苷键结合而成的双糖单位在α-1,3糖苷键的连接下形成的一个长链。
琼脂糖具有亲水性，并几乎完全不存在带电基团，对敏感的大分子极少引起变性和吸附，是理想的惰性载体。
常用作电泳、层析等技术中的半固体支持物，用于生物大分子或小分子物质的分离和分析。
琼脂糖在水中一般加热到90℃以上溶解，温度下降到40℃左右形成良好的半固体状凝胶。
琼脂糖加热溶解后分子呈随机线团状分布，当温度降低时链间糖分子上的羟基通过氢键作用相连接，形成直径从50nm-200nm不等的孔径结构，孔径的大小由凝胶浓度控制。
琼脂糖凝胶中孔径的大小，影响了通过的核酸分子的大小以及通过的速度。
通常来说，琼脂糖凝胶的浓度越高，孔径越小，能够通过的核酸分子越小，迁移速度也越慢。
DNA片段越小，所需的胶浓度越大；而DNA 片段越长，所需的胶浓度则越小。
选择合适的胶浓度才能更好的分离片段。
2）琼脂的质量评价琼脂糖通常通过其凝胶强度和电内渗情况判断质量好坏。
强度越高，凝胶性能越好。
质量较好的琼脂糖强度通常在1200g/cm2以上，硫酸根含量在0.2%以下，电内渗在0.13以下。
琼脂糖是从琼脂中分离而来的。
琼脂由琼脂糖和琼脂果胶组成的，琼脂果胶是由许多更小的分子组成的异质混合物，和琼脂糖结构相似，但带硫酸根和羧基组分，凝胶能力差。
在琼脂糖制备过程中需要把琼脂果胶尽量去除，否则琼脂糖有可能存在极微量硫酸根和丙酮酸取代电离基团，附着到琼脂糖的多糖基质上，造成电内渗（EEO）。
电内渗会导致缓冲液中产生正电荷反向离子，它们向负极移动，从而造成与DNA反方向迁移的液流，使DNA的分离效果变差。
琼脂糖凝胶电泳实验
琼脂糖凝胶电泳实验技巧核酸分子是两性解离分子，在高于其等电点的电泳缓冲液(pH8.0-8.3)中，基其碱基不解离，而磷酸基团全部解离，核酸分子因而带负电荷，电泳时向正极迁移。
琼脂糖主要多海洋植物琼脂中提取而来并经糖基化修饰，为一种聚合链线性分了，使用琼脂糖凝胶作为电泳支持介质，发挥分子筛功能，使得大小和构象不同的核酸分子的迁移率出现较大差异，从而达到分离的目的。
琼脂糖凝胶电泳操作简单、快速、通过调整其使用浓度，使得分辨率达到大多实验的要求。
因此成为分离、鉴定、纯化核酸分子的常用方法。
一、操作过程中要注意以下一些问题。
1、凝胶制作1.1 凝胶浓度凝胶的浓度据实验需要而变，一般在1.8%-2.0%之间，没有用完的凝胶可以再次融化，但随着融化次数的增加，水分丢失也越多，凝胶浓度则会越来越高，导致实验结果不稳定。
补水办法：一是在容器上标记煮胶前的刻度，煮胶后补充水分到原刻度；二是在煮胶前称重，煮胶后补充水至原重量。
粗略一点的办法是通过多次较恒定的煮胶条件得出一个经验补水值，以保证凝胶浓度基本维持在原浓度。
如果条带要回收最好不要用回收胶。
1.2 梳板的选用一般每个制胶模具均配有多个齿型不同的梳板。
梳齿宽厚，形成的点样孔容积较大，用于DNA片段回收实验等；相反，梳齿窄而薄，形成的点样孔容积就较小，用于PCR产物、酶切产物鉴定等。
回收的话还可以将几个齿用透明胶带粘起来，形成一个窄而长的大孔以加大点样量提高回收率。
梳板的选择主要是看上样量的多少而定。
一般来说，上样量小时尽量选择薄的梳板制胶，此时电泳条带致密清晰，便于结果分析。
另外，每次制胶时都要注意梳齿与底板的距离至少要1mm，否则，拔梳板时易损坏凝胶孔底层，导致点样后样品渗漏。
当然，点样孔的破坏还与拔梳板的时间和方法有关，一般凝胶需冷却30min以上方可拔出梳板，应急的情况下可以将成型的凝胶块入4度冰箱中冷却15min左右，拔梳板的方法是将制胶槽放置在电泳槽中的电泳缓冲液中，然后垂直向上慢慢用力，因为有液体的润滑作用，梳板易拔出且不易损坏点样孔。
核酸电泳原理
核酸电泳原理
核酸电泳是一种分离和分析DNA或RNA的方法，其原理基于核酸在电场下的运动速率受其分子长度和电荷量的影响。
首先，核酸样品会被加入到含有琼脂糖的琼脂糖凝胶中。
琼脂糖凝胶是一种聚合物基质，具有孔隙结构。
这些孔隙可以使核酸分子根据其大小和电荷移动通过。
然后，在电泳槽两端建立一个电场，通常是通过在槽中放置两个电极并连接电源。
核酸样品会在电场作用下沿着凝胶孔隙向电极移动。
较小的核酸片段移动得更快，而较大的核酸片段移动得更慢。
在电泳过程中，核酸样品会在凝胶中形成一条或多条带状物。
这些带状物的位置和宽度反映了核酸样品中不同片段的大小和相对丰度。
为了可视化这些带状物，可以在核酸中加入荧光染料或通过其他方法进行标记。
然后，在电泳结束后，可以使用影像分析仪或紫外光照射来观察和记录核酸带状物的位置和强度。
总的来说，核酸电泳是通过利用核酸分子在电场下的运动速率差异来分离和分析核酸样品中的不同片段。
它是一种常用的核酸研究技术，可以用于检测DNA或RNA的长度、纯度、相对丰度以及其他相关信息。
琼脂糖凝胶电泳实验报告
琼脂糖凝胶电泳实验报告一、实验目的琼脂糖凝胶电泳是一种用于分离和分析 DNA、RNA 等核酸分子的常用技术。
本次实验的目的在于：1、掌握琼脂糖凝胶电泳的基本原理和操作方法。
2、学会制备琼脂糖凝胶，以及正确上样和电泳。
3、能够通过电泳结果判断核酸样品的质量和大小。
二、实验原理琼脂糖是一种从海藻中提取的线性多糖聚合物。
当琼脂糖溶液加热到沸点后冷却凝固，便会形成网状结构的凝胶。
核酸分子在电场中会向正极移动，由于其分子大小、电荷等性质的差异，在琼脂糖凝胶中的迁移速度不同，从而实现分离。
较小的分子在凝胶中迁移速度较快，较大的分子则迁移较慢。
此外，核酸分子带负电荷，在电场作用下会从负极向正极移动。
通过在凝胶中加入核酸染料（如溴化乙锭），可以在紫外线照射下观察到核酸分子的条带。
三、实验材料与设备1、材料DNA 样品（已知大小的标准 DNA 样品和待测 DNA 样品）琼脂糖50×TAE 电泳缓冲液（Tris乙酸EDTA 缓冲液）核酸染料（溴化乙锭）上样缓冲液（6×Loading Buffer）2、设备电泳仪水平电泳槽微波炉移液器紫外透射仪四、实验步骤1、制备琼脂糖凝胶根据所需凝胶浓度（通常为 08% 2%），称取适量的琼脂糖粉末，加入一定体积的 1×TAE 电泳缓冲液。
例如，制备 1%的琼脂糖凝胶，可称取 1g 琼脂糖加入 100ml 的 1×TAE 缓冲液。
将混合液在微波炉中加热，使其完全溶解，期间需小心搅拌，避免溶液溢出。
待溶液冷却至 50 60℃时，加入适量的核酸染料（如溴化乙锭），轻轻摇匀。
将溶液倒入已放置好梳子的电泳槽中，使其自然凝固。
2、样品处理取适量的 DNA 样品，与上样缓冲液按一定比例混合。
上样缓冲液的作用是增加样品密度，使样品能够沉入加样孔，同时含有指示染料，便于观察电泳进程。
将混合后的样品短暂离心，使样品集中在管底。
3、加样凝胶凝固后，小心拔出梳子，形成加样孔。
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六、材料 前期实验中提取的基因组DNA和质粒DNA，琼脂糖 (Agarose) 七、设备 水平式电泳装置,电泳仪, 微量移液枪, 微波炉或电炉, 紫外透射仪或凝胶成像系统。 八、 试剂 1、 5×TBE电泳缓冲液：称取 Tris 54g，硼酸 27.5g，并加入 0.5M EDTA (pH8.0) 20ml，定溶至 1000ml。 2、 6×电泳载样缓冲液：0.25％ 溴粉蓝，40％(w/v) 蔗糖水溶液（或30 ％ 甘油），贮存于 4℃。 3、 溴化乙锭(EB)溶液母液:将EB配制成10mg/ml,用 铝箔或黑纸包裹容器,储于室温即可。
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思考题： 1. 琼脂糖凝胶电泳的适用范围？ 2.当两条碱基数相差不大（比如50bp)的双链DNA 分子混在一起时，电泳时将采取什么措施将两 条DNA分子分开？
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3、 DNA分子的构象 当DNA分子处于不同构象时,它在电场中移动距离 不仅和分子量有关,还和它本身构象有关。相同分子量 的线状、开环和超螺旋DNA在琼脂糖凝胶中移动速度 是不一样的,超螺旋DNA移动最快,而线状双链DNA移 动最慢。 4、 电源电压 在低电压时,线状DNA片段的迁移速率与所加电压 成正比。但电压增加，琼脂糖凝胶的有效分离范围将 缩小。要使大于2kb的DNA片段的分辨率达到最大,所 加电压不得超过5v/cm。
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五、影响凝胶电泳的因素 在电场中,在中性pH值下带负电荷的DNA向阳极迁移,其 迁移速率由下列多种因素决定: 1、 DNA的分子大小: 线状双链DNA分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的迁移 速率与DNA分子量对数成反比。 2、 琼脂糖浓度 一个给定大小的线状DNA分子,其迁移速度在不同 浓度的琼脂糖凝胶中各不相同。DNA电泳迁移率的对数 与凝胶浓度成线性关系。凝胶浓度的选择取决于DNA分 子的大小。
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4 、 加样：取 8μlDNA 样 品 与 2μl 6×载样液混 匀,用微量移液枪小心加入样品槽中。 5、 电泳：加完样后,合上电泳槽盖,立即接通电 源。控制电压保持在60-80V,电流在40mA以上。 电泳方向由负极向正极，当溴酚蓝条带移动到距 凝 胶 前 沿 约 2cm 时 , 停 止 电 泳 。 6 、 染 色 ： 未 加 EB 的胶 板 在电泳 完毕 后 移 入 0.5μg/ml 的 EB 溶液 中 , 室温 下染色 20-25 分 钟 。 7、 观察和拍照：在波长为254nm的长波长紫外 灯下观察染色后的或已加有EB的电泳胶板。DNA 存在处显示出肉眼可辨的桔红色荧光条带。紫光 灯 下 观察 时 应戴上防护眼镜 或 有 机玻璃面罩 , 以 免损伤眼睛。
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核酸的琼脂糖凝胶电泳
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一、琼脂糖凝胶电泳的功用 琼脂糖凝胶电泳是分离鉴定和纯化DNA片 段的标准方法。该技术操作简便快速，可以分 辨用其它方法（如密度梯度离心法）所无法分 离的DNA片段。当用低浓度的荧光嵌入染料溴 化乙啶(Ethidium bromide, EB)染色,在紫外光 下至少可以检出1-10ng的DNA条带,从而可以确 定DNA片段在凝胶中的位置。此外,还可以从电 泳后的凝胶中回收特定的DNA条带,用于以后的 克隆操作。
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四、电泳指示剂： 核 酸 电 泳 常 用 的 指示剂 有两 种 ，溴 酚 蓝 （ bromophenol blue, Bb ）呈蓝紫色；二甲苯晴 （ xylene cyanol, Xc ）呈蓝色，它携带的电荷 量 比 溴 酚蓝 少，在凝胶中的 迁移率比 溴 酚蓝 慢。 胶浓（%） 溴酚蓝 二甲苯青 0.6 1 1.4 2 1kb 0.6kb 0.2kb 0.15kb 2kb 1.6kb
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九、操作步骤 1、 取5×TBE缓冲液20ml加水至200ml,配制成 0.5×TBE稀释缓冲液,待用。 2、 胶液的制备：称取0.4g琼脂糖,置于200ml锥形瓶 中,加入50ml 0.5×TBE稀释缓冲液,放入微波炉里(或电 炉上)加热至琼脂糖全部熔化,取出摇匀,此为0.8％琼脂 糖凝胶液。加热过程中要不时摇动,使附于瓶壁上的琼 脂糖颗粒进入溶液。加热时应盖上封口膜,以减少水份 蒸发。 3、 胶板的制备：将融化的琼脂冷却至50-60℃，而后 到 入 制胶模具 （ 预先插上样 品梳子）中， 待 胶 完 全 凝 固后拨出梳子 ，取出胶块，放入加有0.5×TBE 电泳缓 冲液的电泳槽内。
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二、实验原理： 在 pH 值为 8.0～8.3 时，核酸分子碱基几乎 不解离，磷酸全部解离，核酸分子带负电，在电 泳时向正极移动。采用适当浓度的凝胶介质作为 电泳支持物，在分子筛的作用下，使分子大小和 构象不同的核酸分子泳动率出现较大的差异，从 而达到分离核酸片段检测其大小的目的。核酸分 子中嵌入荧光染料（如 EB ）后，在紫外灯下可 观察到核酸片段所在的位置。
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三、琼脂糖电泳分离DNA的范围 琼脂糖可以形成各种形状、大小的孔隙度。 琼脂糖凝胶分离DNA片度大小范围较广,不同浓度 琼脂糖凝胶可分离长度从200bp至近50kb的DNA 片段。琼脂糖通常用水平装置在强度和方向恒定 的电场下电泳。
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5、嵌入染料的存在 荧光染料溴化乙啶用于检测琼脂糖凝胶中的DNA, 染料会嵌入到堆积的碱基对之间并拉长线状和带缺口 的环状DNA，使其刚性更强,还会使线状DNA迁移率降 低15％。 6、 离子强度影响 电泳缓冲液的组成及其离子强度影响DNA的电泳 迁移率。在没有离子存在时(如误用蒸馏水配制凝胶), 电导率最小,DNA几乎不移动,在高离子强度的缓冲液 中(如误加10×电泳缓冲液),则电导很高并明显产热, 严重时会引起凝胶熔化或DNA变性。