拮抗芒果炭疽病菌的红树内生细菌筛选及AiL3菌株抗菌物质研究
生防菌对杧果主要病害病原菌室内抑菌试验
生防菌对杧果主要病害病原菌室内抑菌试验张贺;杨石有;汪熊梦琦;刘晓妹;漆艳香;蒲金基【摘要】为筛选对杧果重要病害有良好防效的生防菌,选用前期得到的7种生防菌和市售11种生防菌剂对刺盘孢属Colletotrichum、链格孢属Alternaria、镰孢属Fusarium的27个病菌菌株进行室内抑菌研究,并引入热图对抑菌效果进行可视化展示.结果表明:对刺盘孢属病菌,生防菌剂枯草芽孢杆菌S3的抑制效果最好,平均抑菌率达36.77％,其次是生防菌剂巨大芽孢杆菌S6和枯草芽孢杆菌FCK;对链格孢属病菌,生防菌6a-3抑菌效果最好,平均抑菌率达28.63％,其次是生防菌剂枯草芽孢杆菌S3和生防菌枯草芽孢杆菌FCK;对镰孢属病菌,生防菌剂枯草芽孢杆菌S3的抑制效果最好,平均抑菌率达50.95％,其次是枯草芽孢杆菌FCK.【期刊名称】《中国森林病虫》【年(卷),期】2018(037)006【总页数】4页(P16-19)【关键词】杧果病害;生防菌;抑菌率;热图【作者】张贺;杨石有;汪熊梦琦;刘晓妹;漆艳香;蒲金基【作者单位】中国热带农业科学院环境与植物保护研究所,海南海口571101;海南大学热带农林学院,海南海口570228;中国热带农业科学院环境与植物保护研究所,海南海口571101;海南大学热带农林学院,海南海口570228;中国热带农业科学院环境与植物保护研究所,海南海口571101;中国热带农业科学院环境与植物保护研究所,海南海口571101【正文语种】中文【中图分类】S763.1杧果种植过程中常遭受多种病害，如刺盘孢属Colletotrichum spp.真菌引起的杧果炭疽病，链格孢属Alternaria spp.真菌引起的杧果链格孢叶斑病，以及由镰孢属Fusarium spp.真菌引起的且在金沙江干热河谷暴发成灾的杧果畸形病[1-4]，这些病害不同程度地威胁着杧果健康生长[5]。
施用农药是防治病害的重要措施，随着杧果种植面积逐年扩大，病害防治难度加大，化学农药使用量总体呈上升趋势。
拮抗细菌对芒果炭疽病生物防治研究进展
拮抗细菌对芒果炭疽病生物防治研究进展潘朝勃;莫贱友;李其利;郭堂勋;黄穗萍;韦继光【摘要】芒果炭疽病是芒果主要病害之一,筛选拮抗细菌对其进行防治已成为研究热点.文章简述了近年来拮抗细菌对芒果炭疽菌的抑菌作用及对炭疽病的防病作用,指出利用拮抗细菌防治芒果炭疽病的研究在菌源、抑菌机理、防病机制及安全等问题上尚缺乏深入、系统的研究,提出高效及拮抗机制多样化菌株的筛选、抑菌物质的抑菌机理及其合成应用、拮抗细菌对芒果诱导抗病的刺激应答机理及拮抗细菌应用的安全评估等应是今后研究工作的重点.【期刊名称】《南方农业学报》【年(卷),期】2013(044)004【总页数】5页(P602-606)【关键词】拮抗细菌;芒果炭疽病;生物防治;研究进展【作者】潘朝勃;莫贱友;李其利;郭堂勋;黄穗萍;韦继光【作者单位】广西大学农学院,南宁530005;广西农业科学院植物保护研究所,南宁530007;广西农业科学院植物保护研究所,南宁530007;广西农业科学院植物保护研究所,南宁530007;广西农业科学院植物保护研究所,南宁530007;广西大学农学院,南宁530005【正文语种】中文【中图分类】S436.67;S432.440 引言芒果炭疽病主要由胶孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides）引起，是芒果生长期间和采后发生最严重的病害之一，在世界各芒果产区均有发生（Govender et al.，2005；张鲁斌等，2010）。
该病菌以分生孢子侵染植物的叶梢、花穗、果，引起梢枯、叶斑、落叶和落花落果等，并能潜伏在果实上在采后贮运期引起果实腐烂（冯双庆等，1991）。
一直以来，化学防治是植物病害防治的主要手段并起着重要作用，避免和挽回了一定的经济损失，但同时带来了病菌抗药性、环境安全和食物安全等问题且日益严重（Budi et al.，2000；Patin-Vera et al.，2005）。
近年来，利用拮抗细菌防治植物病害成为研究热点，并取得了一定成果，使生物防治策略得到迅速发展（Bloemberg and Lugtenberg，2001），而且细菌在地球分布广泛，种类繁多，资源丰富，利用细菌作为植物病害防治材料具有明显的资源优势。
海南台农芒采后果实炭疽病病原鉴定
海南台农芒采后果实炭疽病病原鉴定陈亭妤;李聪;周国英;李河【摘要】刺盘孢属(Colletotrichum)真菌是芒果的重要病原菌.本研究采用形态和分子生物学鉴定了海南省台农芒果实采收后炭疽病的病原菌.从台农芒发病果实上总共分离纯化获得38株刺盘孢属真菌.基于形态学特征和多基因序列(核糖体转录间隔区、钙调蛋白、3-磷酸甘油醛脱氢酶、谷氨酰胺合成酶、肌动蛋白、微管蛋白),确定引起台农芒采后炭疽病的病原为暹罗炭疽菌(C.siamense)、亚洲炭疽菌(num)和果生炭疽菌(C.fructicola).其中果生炭疽菌是我国芒果炭疽病原的首次报道.【期刊名称】《热带作物学报》【年(卷),期】2018(039)007【总页数】6页(P1396-1401)【关键词】芒果;炭疽病;刺盘孢属真菌;多基因系统发育【作者】陈亭妤;李聪;周国英;李河【作者单位】森林有害生物防控湖南省重点实验室,中南林业科技大学林学院,湖南长沙 410004;森林有害生物防控湖南省重点实验室,中南林业科技大学林学院,湖南长沙 410004;森林有害生物防控湖南省重点实验室,中南林业科技大学林学院,湖南长沙 410004;森林有害生物防控湖南省重点实验室,中南林业科技大学林学院,湖南长沙 410004【正文语种】中文【中图分类】S31台农芒果实营养丰富，甜度极高，核小皮薄肉厚，果肉细致无纤维，主要分布在广西、广东和海南等华南广大地区。
炭疽病是芒果的第一大病害，特别是芒果果实采收后抗病性降低，可利用的营养物质增加，炭疽病原菌导致果实在田间或储运中腐烂，有时病果率达60%以上，病果品质下降，每年造成的经济损失高达8 000万元以上，严重威胁着芒果产业的健康发展[1-4]。
刺盘孢属（Colletotrichum）真菌的大多数相似种无法通过形态学特征来进行区分，目前国内外对炭疽病病原菌的研究主要采用形态学特征结合多基因序列分析鉴定。
Weir等[5]在形态学基础上结合多基因系统发育学方法在胶孢炭疽菌复合群（C. gloeosporioides complex）下确定了22个合格种和1个亚种，包括已经发现的合格种13个、描述新种10个。
3种生防细菌2种药剂剂型对芒果炭疽病菌的拮抗作用初探
3种生防细菌2种药剂剂型对芒果炭疽病菌的拮抗作用初探王琴;高青;缪卫国;郑服丛【摘要】3种生防细菌短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)HAB-5、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)A178、萎缩芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)HAB-1,对多种植物病原菌具有较好的拮抗作用.通过优化条件培养,将3种生防细菌制备成胶悬剂(SC)和微胶囊(CS)两种剂型,以芒果炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides Penz.)C7-2菌株为靶标病菌,测试两种剂型对3种菌拈抗能力的影响.结果表明,在制备的3种生防菌的胶悬剂中,只有A178胶悬剂在稀释10倍和800倍时抑菌效果好于原始菌株,其他的均弱于原始菌株,HAB-1胶悬剂甚至失去了抑菌能力;3种生防菌微胶囊剂型中,A178的100～800倍稀释浓度下抑菌效果好于原始菌株,抑菌能力分别提高0.49％、0.29％、3.04％;HAB-5的微胶囊剂型10、100、400、800、1 000倍的稀释度下,抑菌效果都高于原始菌株,分别提高5.00％、3.30％、5.11％、2.22％、1.74％、4.25％,但HAB-1微胶囊剂型抑菌效果较其原始菌株减弱,说明微胶囊剂型能够增强HAB-5和A178菌株对病原菌的抑菌作用.【期刊名称】《广东农业科学》【年(卷),期】2014(041)011【总页数】7页(P82-88)【关键词】短短芽孢杆菌;枯草芽孢杆菌;萎缩芽孢杆菌;胶悬剂;微胶囊;拮抗作用【作者】王琴;高青;缪卫国;郑服丛【作者单位】海南省热带生物资源可持续利用重点实验室/海南大学环境与植物保护学院,海南海口570228;海南省热带生物资源可持续利用重点实验室/海南大学环境与植物保护学院,海南海口570228;海南省热带生物资源可持续利用重点实验室/海南大学环境与植物保护学院,海南海口570228;海南省热带生物资源可持续利用重点实验室/海南大学环境与植物保护学院,海南海口570228【正文语种】中文【中图分类】S476利用有益微生物防治植物病害始于 1921年Hartely利用真菌防治猝倒病[1]。
美极梅奇酵母抑制芒果炭疽菌的拮抗机理初探
美极梅奇酵母抑制芒果炭疽菌的拮抗机理初探田亚琴;葛念念;周易;邵远志【摘要】通过体内体外实验,评价了美极梅奇酵母(Metschnikowia pulcherrima,M.pulcherrima)对芒果炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides,C.gloeosporioides)的抑菌效果.结果表明:在YPD培养基中关极梅奇酵母对胶孢炭疽菌有明显的抑菌效果;在15℃和25℃贮藏条件下,在芒果果实上美极梅奇酵母对病原菌的抑菌率达到了57.81％和40.87％.同时对抑菌机理做了初步探索:扫描电镜显示,酵母菌能够产生物膜,抑制胶孢炭疽菌的入侵;美极梅奇酵母分泌胞外裂解酶-几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶,能有效抑制胶孢炭疽菌繁殖;拮抗酵母微量吸收周围环境中的铁元素,增强了抑菌效果.%The yeast Meyerozyma pulcherrima (M.pulcherrima)was evaluated for their effectiveness against Colletotrichum gloeosporioides(C.gloeosporioides) in the mango by in vitro experiment.The results showed that M.pulcherrima had a significant bacteriostatic effect on C.gloeosporioides in YPD medium.M.pulcherrima showed a high antagonistic effect in mangos,with significant inhibition of 57.81％ and 40.87％of anthracnose at 15 ℃ and 25 ℃,respectively.At the same time,the possible action mechanisms involved in the inhibition was studied,Scanning electron microscopy showed that yeast could produce biofilm,it could inhibit the invasion of C.gloeosporioides.M.pulcherrima could secrete chitinase and β-1,3-glucanase,which had a role of inhibiting pathogens.Antagonistic yeast could also traceably absorb iron of surrounding environment to increase the effects of inhibiting the growth of pathogens.【期刊名称】《食品工业科技》【年(卷),期】2018(039)001【总页数】6页(P82-86,91)【关键词】美极梅奇酵母;芒果果实;炭疽病;作用机制【作者】田亚琴;葛念念;周易;邵远志【作者单位】海南大学食品学院,海南海口570228;海南大学食品学院,海南海口570228;海南大学食品学院,海南海口570228;海南大学食品学院,海南海口570228【正文语种】中文【中图分类】TS201.3芒果是五大热带水果之一,素有“热带果王”之称[1]。
芒果炭疽病的生物防治策略研究与应用效果评估
芒果炭疽病的生物防治策略研究与应用效果评估引言：芒果是世界上重要的水果作物之一，但芒果炭疽病给其种植和产量带来了巨大的威胁。
传统的化学防治方法存在许多问题，因此，生物防治策略的研究和应用变得尤为重要。
本文将探讨芒果炭疽病的生物防治策略，以及对这些策略的应用效果进行评估。
一、生物防治策略研究1. 生物防治剂的筛选生物防治剂是指能够抑制芒果炭疽病菌生长和病原性的微生物或其代谢产物。
研究人员通过从自然界中筛选和鉴定微生物资源，寻找适合用于芒果炭疽病的生物防治的菌株。
常用的生物防治剂包括拮抗菌、拮抗真菌和产生抗性诱导物质的细菌等。
2. 拮抗机制研究拮抗机制是生物防治剂抑制芒果炭疽病菌生长和病原性的关键环节。
研究人员通过对生物防治剂与病原菌的相互作用进行深入研究，了解生物防治剂通过竞争营养物质、产生抗菌物质或激活宿主植物防御机制等方式拮抗病原菌的机制。
3. 环境因素的影响研究人员还对环境因素对生物防治策略的影响进行了研究。
环境因素包括温度、湿度、光照等，并且这些因素对芒果炭疽病的发病和生物防治效果有着重要的影响。
因此，在生物防治策略的研究中，充分考虑环境因素的影响是非常必要的。
二、生物防治策略的应用效果评估1. 田间试验田间试验是对生物防治策略应用效果评估的主要方法之一。
研究人员会选择不同的生物防治剂和施用方法，在真实的芒果种植环境中进行试验，观察病情发展情况，比较生物防治策略与传统化学防治方法的效果差异。
2. 室内试验室内试验通常用于研究生物防治剂对芒果炭疽病病原菌生长的影响。
研究人员将不同的生物防治剂应用于炭疽病菌培养基中，观察菌落生长情况，并通过测定抑菌率等指标评估生物防治效果。
3. 经济效益评估生物防治策略的应用不仅要考虑防治效果，还需要进行经济效益评估。
研究人员会分析生物防治策略的施用成本、减少化学农药使用量带来的节约以及增加产量所带来的收益，综合评估该策略的经济效益。
结论：生物防治策略是一种可行的芒果炭疽病防治方法，并且在研究和应用中取得了显著的进展。
芒果炭疽病拮抗菌的筛选及防治效果研究
病 在 各 芒 果 产 区均 有 分 布 ．贮 运 期 病 果 率 一 般 为
验 以及 采 后芒 果 果 实 炭 疽 病 防 病 试验 结 果从 ２ ４个 菌 株 中筛 选 得 到 １ 有 效 抑 制 炭 疽 病 菌 的芽 孢 杆 菌 Ｍ ５ 株 ３ ，其
抑 菌 圈 大 于 １ ｍ ．而且 其 发 酵液 对 炭疽 病 菌 也有 明显 的抑 制 作用 ；果 实 防病 试 验结 果 也 显示 ，该 菌株 对 于芒 果 采 ３ｍ 后 炭疽 病 有显 著 的 防治 效 果 ，且 随着 该 拮抗 菌菌 悬 液浓 度 的 增加 ，防 病 效 果提 高 ，在 浓 度 为 １ ０Ｃ Ｕ Ⅱ ｉ Ｆ ／ｌ ，发 Ｘ Ｌ时
病率 为 ４ ％ ５ ．病 斑 直 径 为 １． Ｉ 。 ４ １Ｂ ｍ
关键词
分类 号
拮 抗 菌 ；分 离 ；筛 选 ；防 病 效 果
￥３ ． ４６５
Ａｎ ａ ｏ ｉｔ ｅｅ ｔ ｎ ａ ｄ Ｔｈ ｉ ｎ ｒ ｌＥｆｅ ｔ ｏ ａ ｇ ｔ ｒ ｃ ｏ ｅ ｔｇ ｎ ｓｓ Ｓ ｌｃｉ ｎ ｅｒ Ｃｏ ｔｏ ｆ ｃ ｎ Ｍ ｎ ｏ Ａｎ ｈ ａ ｎ ｓ ｏ
２ １ 年 ５月 ００
Ｍａ ．２ ０ ｙ ０１
热 带 农 业 科 学
ＣＨＩ ＮＥＳ ＯＵＲＮＡＬ ＯＦ Ｔ ＥＪ ＲＯＰ Ｃ Ｉ ＡＬ ＡＧＲＩ ＣＵＬ ＵＲＥ Ｔ
第 ３ 第 ５期 Ｏ卷
Ｖｏ ．０ Ｎｏ ５ １ ， ． ３
芒果炭疽病拮抗菌的筛选及防治效果研究①
张 鲁斌 ② 常金 梅③ 詹 儒林
ｌ １ ０ＣＦ ｍＬ． ｘ ０ Ｕ／
红树植物内生真菌的分离鉴定及抗菌活性菌株的筛选
红树植物内生真菌的分离鉴定及抗菌活性菌株的筛选陈昭华;伍菱;杨秋明;王骥妍;朱敏佳;杜希萍【摘要】本文对厦门集美红树植物无瓣海桑(Sonneratia apetala),海马齿(Sesuvium portulacastrum)和秋茄(Kandelia candel)的多个部位进行内生真菌的分离和形态鉴定,并采用菌饼法对分离到的内生真菌进行抗菌活性筛选.结果显示,从3种红树植物的根、茎、叶中分离得到25株内生真菌,分别隶属8个类群,以链格孢属和曲霉属为主,分别占菌株总数的28.0％和24.0％;有19株菌株对至少一种指示菌有抑制作用,占菌株总数的76.0％.研究结果表明,红树植物来源的内生真菌数量多,种属丰富,同时具有良好的抗菌活性,是研究抗菌活性化合物的重要资源.【期刊名称】《激光生物学报》【年(卷),期】2013(022)003【总页数】4页(P263-266)【关键词】红树植物;内生真菌;分离鉴定;抗菌活性【作者】陈昭华;伍菱;杨秋明;王骥妍;朱敏佳;杜希萍【作者单位】集美大学生物工程学院,福建厦门361021;集美大学生物工程学院,福建厦门361021;集美大学生物工程学院,福建厦门361021;集美大学生物工程学院,福建厦门361021;集美大学生物工程学院,福建厦门361021;集美大学生物工程学院,福建厦门361021;福建省食品微生物与酶工程重点实验室,福建厦门361021;福建省高校食品微生物与酶工程技术研究中心,福建厦门361021;厦门市食品与生物工程技术研究中心,福建厦门361021【正文语种】中文【中图分类】Q939内生真菌(endophyte)是指生活于健康植物组织内部、不引发植物产生明显病症的一类真菌。
不但对促进宿主植物的生长发育，增强抗逆性起到重要作用，而且许多内生真菌能产生与宿主相同或相似的生物活性物质［1-2］。
目前已从植物内生真菌中发现多种具有抗肿瘤、抗病毒、降血糖、抗菌、杀虫、免疫抑制、酶抑制剂或激活剂等活性代谢产物，在医药业、农业的生物防治方面都显示出重要的应用价值［3-6］。
杧果采后病原菌的分离、鉴定及致病力研究
杧果采后病原菌的分离、鉴定及致病力研究
江小冰;谭小丽;陶能国
【期刊名称】《湘潭大学学报:自然科学版》
【年(卷),期】2022(44)2
【摘要】从自然发病的杧果果实分离纯化得到4株致病菌,经生理生化实验结合分子鉴定,分别为杧果蒂腐病致病菌小新壳梭孢(Neofusicoccum parvum)、葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea)、杧果炭疽病致病菌暹罗炭疽菌(Colletotrichum siamense)和胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides).致病力和生物学特性分析结果显示,小新壳梭孢致病力最强,其最适生长温度为28℃,最适生长pH为6.0~8.0,孢子致死温度为60℃;葡萄座腔菌的最适生长温度为28~30℃,最适生长pH为6.0~9.0,孢子致死温度为55℃;暹罗炭疽菌和胶孢炭疽菌的最适生长温度为28~30℃,最适生长pH为7.0~9.0,孢子致死温度为55℃.本研究分离得到的致病菌可为杧果采后病害发生和控制提供理论参考和研究材料.
【总页数】9页(P12-20)
【作者】江小冰;谭小丽;陶能国
【作者单位】湘潭大学化工学院
【正文语种】中文
【中图分类】Q93-3
【相关文献】
1.红肉火龙果采后病原菌分离鉴定与植物精油抑菌研究
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BTH防治芒果采后炭疽病及其系统获得抗性机理的开题报告
BTH防治芒果采后炭疽病及其系统获得抗性机理的开题报告一、背景芒果是我国南方地区具有重要经济价值的一种水果，然而芒果采后炭疽病是芒果果实腐烂的主要原因之一，导致巨大经济损失。
传统的控制方法主要采用化学药剂和生物防治，但存在药残和微生物抗性等问题。
因此，开发新型的炭疽病防治策略具有重要的意义。
二、研究目的本研究旨在研究BTH对芒果采后炭疽病的防治效果，并探究其获得系统抗性的机理，为芒果采后炭疽病的综合防治提供理论依据。
三、研究方法1.筛选菌株：从采自芒果果实的炭疽病病斑上分离得到不同菌株，经PCR检测确认为炭疽病菌，筛选菌株进行后续的实验。
2.处理方法：分别用250 mg/L的BTH、10 mg/L的硅溶胶、水作为处理组和对照组，在芒果果实上进行预处理，然后接种炭疽病菌，培养3 d，观察病斑的扩展情况。
3.植物抗性酶活性分析：测定处理和对照组的POD、CAT、SOD等植物抗性酶活性的变化情况。
4.相关基因的表达分析：利用qPCR检测BTH预处理后与炭疽病菌接种后芒果果实相关基因的表达水平变化情况。
四、研究意义1.探究BTH预处理对芒果采后炭疽病的防治效果，为芒果采后炭疽病的防治提供新思路。
2.研究BTH获得系统抗性的机理，为植物的抗病建立提供理论基础。
3.为农业生产提高效率，减少经济损失做出贡献。
五、研究进度安排1.调研与论文撰写：1个月2.菌株筛选及处理方法确定：2个月3.实验设计与实验操作：4个月4.数据统计和分析：1个月5.讨论和撰写研究总结：2个月六、预期结果1.研究BTH对芒果采后炭疽病的防治效果。
2.探究BTH获得系统抗性的机理。
3.为芒果采后炭疽病的综合防治提供理论依据。
七、参考文献1. Siddiqui, M. W., Praveen Siddiqui, M., Imran A., and Shaukat, S. S. (2013). Combinatorial effect of Trichoderma harzianum with fungicides against mango anthracnose and evaluation of induction of defense-related enzymes and phenolic compounds. J. Plant Interact. 8, 223–231.2. Liang X.Y., Fang Q.L., Yang X.F., and Hu G.B. (2011). The role of β-aminobutyric acid in enhancing disease resistance of mango fruit against anthracnose disease caused by Colletotrichum gleosporoides. J. Phytopathol. 159, 487–494.3. Hu, M.J., Sun, S., Lu, L., Liu, X. F., Wang Z.C., and Wang, Y.Q. (2014). 2,4‐Dichlorophenoxyacetic acid induces the β‐1,3‐glucanase‐related defense response in mango fruit during postharvest storage. J. Food Process. Preserv. 38, 1299–1307.。
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收稿日期:2009 11 02基金项目:科技部农业科技成果转化资金项目(2008GB23260386);芒果公益性行业科技项目(nyhyz x07 032 3);广东省科技计划项目(2006B20301007);中央级非盈利性研究机构基本科研业务费研究专项(s scri200702、sscri200711)作者简介:柳凤(1984-),女,硕士,E mai l:liufengneau@163 com;*通讯作者,E mail:z hanrulin555@163 com 。
拮抗芒果炭疽病菌的红树内生细菌筛选及AiL3菌株抗菌物质研究柳凤1,2,何红2,詹儒林1*,赵艳龙1,何衍彪1(1 中国热带农业科学院南亚热带作物研究所海南省热带园艺产品采后生理与保鲜重点实验室,湛江524091;2 广东海洋大学农学院,湛江524088)摘要:采用对峙生长法测定了24株红树内生细菌对芒果炭疽菌Colletotrichum gloeos porioides 不同菌株的拮抗作用,其中来自老鼠Acanthus ilici f olius 叶片的菌株AiL3拮抗效果较好,对芒果炭疽菌3个菌株的抑菌带均大于10mm 。
该菌株对辣椒疫霉Phytophthora capsici 、黄瓜枯萎病菌Fusarium o xys porum f.sp.cucumerinum 等8种植物病原菌亦有较强的拮抗作用。
菌株培养滤液经有机溶剂萃取和硫酸铵沉淀分析发现,硫酸铵沉淀物具有抑菌活性;沉淀物经蛋白酶K 和胃蛋白酶作用后,拮抗作用消失,说明菌株AiL3产生的抗菌物质是蛋白类物质。
该蛋白对热和酸碱稳定、对紫外线不敏感。
关 键 词:红树;内生细菌;芒果炭疽病菌;抗菌蛋白中图分类号:S436 67;S482 292 文献标识码:A 文章编号:1005 9261(2010)03 0293 07Screening of Mangrove Endophytic Bacteria against Colletotrichumgloeosporioides and Characterization of Antifungal SubstanceProduced by Strain AiL3LIU Feng 1,2,HE Hong 2,ZHAN Ru lin 1*,Z HAO Yan long 1,HE Yan biao 1(1 South Asia Tropical Crop Research Insti tute,Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences,Key Laboratory of Hainan Province for Post harvest Physiology and T echnology of Tropical Horticultural Products,Zhanjiang 524091;2 College of Agriculture,Guangdong Ocean University ,Zhanjiang 524088,Chi na)Abstract:Antagonism of 24endogenous bacteria strains against Mango anthracnose pathogen,Col letotrichum gloeos porioides ,was determined by dual cultural tests.Strain AiL3from the leaves of Acan thus ilici f olius was demonstrated to be highly antagonistic against the pathogenic fungus.Spectrum tests also showed that the strain could inhibit other 8pathogens,including Phytophthora capsici,Fusarium o xysporum f.sp.cucumerinum,etc.Substance from the fermentation of strain AiL3precipitated by am monium sulfate exhibited high antifungal activity.The antagonism disappeared when the substance was29326(3)293-299 中国生物防治 Chinese Journal of Biological Control 2010年8月中国生物防治 第26卷treated with proteinase K and pepsin,indicating that the antifungal substance produced by strain AiL3 was a protein.The antifungal protein was thermo stable,insensitive to acid,alkali and ultraviolet(UV) radiation.Key words:mangrove;endophytic bacteria;Colletotrichum gloeosporioides;antifungal protein芒果炭疽病是芒果生产中发生最普遍、危害性最大的一种病害,在世界各种植区均有发生[1,2]。
该病是由胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeos porioides)引起的侵染性病害,主要为害新抽发的嫩叶,叶片未转绿前易受该病菌侵染,在熟果期发病迅速,为害更大,常造成贮运期芒果果实的严重损失[3]。
目前生产实践中化学防治仍是控制芒果炭疽病的首选措施,但综合评价其对食品和环境的污染、对人类健康潜在的危害、对非靶标生物的影响以及导致病原菌抗药性等,化学防治现已受到越来越多的质疑。
生物防治尤其是拮抗微生物的利用,受到普遍关注和重视[4,5]。
但随着研究的深入,从陆生资源中分离筛选植物病害新的有效生防菌变得越来越困难。
因此,探索、研究和利用新的生防资源已是迫切需求。
海洋微生物由于其生长环境特殊而倍受研究者的关注,并已有从海洋中分离筛选植物病害生防微生物的报道[6,7],但用海洋微生物防治芒果炭疽病尚未见报道。
本文从海陆两栖植物 红树林体内分离的内生细菌中筛选对芒果炭疽病菌具有较强抑制作用的海洋细菌,并对其中拮抗作用很强的AiL3菌株分泌的胞外抗菌物质的性质进行了研究,以期为海洋微生物用于芒果炭疽病的生物防治、保鲜制剂的研制与开发应用等提供理论依据。
1 材料与方法1 1 供试菌株及来源供试菌株:内生细菌菌株均为本实验室从老鼠(Acanthus ilici f olius)、秋茄(Kandelia can del)、红海榄(Rhizophora stylosa)、木榄(B ruguiera gymnorrhiza)、卤蕨(Acrostichum aureurm)、白骨壤(Auicennia marina)6种红树的根、茎、叶等组织分离获得。
AiL3菌株从红树植物老鼠叶片内分离获得,经形态学观察、生理生化特性测定及分子生物学分析鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amylolique faciens)。
芒果炭疽病菌菌株编号分别为ZR46、ZS19和ZS69。
其他植物病原菌:辣椒疫霉(Phytoph thora capsici)、黄瓜枯萎病菌(Fusarium o xysporum f.sp.cucumerinum)、西瓜枯萎病菌(F.oxys po rum f.sp.niveum)、香蕉枯萎病菌(F.oxysporum f.sp.cubense)、香蕉炭疽病菌(C.musae)、辣椒炭疽病菌(Gloeos porium piperatum)、剑麻斑马纹病菌(Phytophthora nicotianae)及水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani),均为本实验室保存。
1 2 供试培养基营养肉汤培养基:蛋白胨5g、牛肉浸膏3g、葡萄糖2 5g、蒸馏水1000ml,pH7 5;加入琼脂20g,制成NA固体培养基,用于细菌菌株的纯化和培养。
马铃薯葡萄糖培养基(PDB):马铃薯200g、葡萄糖20g、蒸馏水1000ml;加入琼脂20g,制成PDA培养基,用于病原菌的纯化和培养及拮抗筛选。
PSS培养基:土豆200g、蛋白胨5g、蔗糖20g、蒸馏水1000ml,pH7 5,用于菌株的发酵。
294第3期 柳凤等:拮抗芒果炭疽病菌的红树内生细菌筛选及AiL3菌株抗菌物质研究1 3 拮抗芒果炭疽病菌细菌菌株的筛选在直径为9cm的PDA(加蛋白胨5g/L)平板中央接入一直径为8mm的芒果炭疽病菌菌块,同时在平板边缘(1 5cm处)接入一小环(直径为5mm)待测细菌菌落(25海水NA上培养24h),27黑暗培养5~7d,测量抑菌带宽。
每处理重复3次。
1 4 红树内生细菌AiL3菌株抑菌谱测定采用对峙生长测定法。
在直径为9cm的PDA平板中央接入直径为8mm的植物病原真菌菌块,同时在平板边缘(1 5cm处)点接一环细菌菌株,25培养3d,测量抑菌带宽。
每个处理重复3次。
1 5 AiL3菌株抗菌物质的分离提取1 5 1 菌株发酵液预处理 将AiL3菌株在NA平板上划线接种,25培养2d后,接种于盛有100ml NA培养液的500ml三角瓶中;25、180r/min振荡培养18h后,以此作为种子液,按5%的接种量接入PSS培养液内,25、180r/min振荡培养72h。
8000r/min离心20min,上清液于4保存备用。
1 52 抗菌物质的萃取 取同一批预处理好的发酵上清液60ml,分成10等份,分别加入等体积的三氯甲烷、正丁醇、乙酸乙酯、异戊醇、石油醚及环己烷,室温振摇1h,4静置过夜,管碟法测定萃取液和萃余液对芒果炭疽菌的抑菌活性。
1 5 3 抗菌物质的硫酸铵沉淀 将同批预处理发酵上清液500ml分成5等份,分别向其中缓慢加入固体硫酸铵至饱和度30%、40%、50%、60%和90%,4静置过夜;8000r/min离心20min,分别收集沉淀及上清液,将各沉淀物用10mmol/L的磷酸盐缓冲液(pH7 0)复性至完全溶解;将所得溶液经截留分子量为8000~12000的透析袋4透析96h,并用磁力搅拌器搅拌以加快透析速度,外透液用蒸馏水并经常更换,收集内透液,-20冷冻备用。