银耳菌种规范化生产工艺讲座_二_银耳菌种分离方式与操作技术
食用菌菌种分离的方法和操作步骤以及注意事项
食用菌菌种分离的方法和操作步骤以及注意事项食用菌菌种分离的方法和操作步骤菌种分离即是进行食用菌菌丝纯化的过程，它是制种工作的重要环节，通俗地讲就是把食用菌菌丝从自然中单独分离出来进行纯培养，从而获得纯食用菌菌丝的过程。
菌种分离是一项重要而又细致的工作，每个环节都必须严格按照无菌操作规程进行。
食用菌的分离方法很多，常用的有组织分离法、孢子分离法和基内菌丝分离法三种。
1.组织分离法组织分离法是将食用菌的部分组织移接到斜面培养基上获得纯培养的方法。
其特点：一是属于无性繁殖，能够保持原有菌种的优良特性，是生产中获得纯菌种的常用方法，且简单易行，取材广泛，菌丝萌发快。
二是组织分离操作简便，又不易带入杂菌，容易获得纯菌种。
但对银耳、黑木耳等胶质菌因其子实体种菌丝极少，如用组织分离培养，则往往不易成功。
1.1子实体分离种菇要选择朵大盖厚、柄短、八九分成熟的优良品种。
切去菇体基部，在超净工作台用75%的酒精棉球进行擦拭菌盖与菌柄两次，进行表面消毒。
接种时，只要将种菇撕开，用消毒后的小刀在菌柄与菌盖的交界处切取一小块组织，再用接种针将组织块放入PDA培养基的试管斜面中间。
置于24℃温度下培养3-5天就可以看到组织块上产生白色绒毛状菌丝，转管扩大即得到菌种。
如香菇、平菇等可以使用此方法。
1.2菌核组织分离茯苓、猪苓、雷丸等食用菌的子实体不易采集。
而常见的是它储藏营养的菌核。
用菌核分离，同样可以获得菌种。
方法是将菌核表面洗净，用酒精消毒，切开菌核，取中间组织一小块，约黄豆大小，接种在PDA培养基斜面上，在24℃下培养，产生菌丝后进行分离纯化。
应注意的是，菌核是储藏器官，大部分是多糖类杂质，只有少量的菌丝，因此挑选的组织块要大一些，如果组织块过小，则不易分离出菌种。
1.3菌索分离法菌索分离常用于蜜环菌分离。
方法是选新鲜的活菌索，用75%酒精棉球将菌索表面消毒后，去掉菌鞘，把白色菌髓部分用无菌剪刀切成小段，接入PDA斜面培养基上，在24℃下培养，有白色菌丝长出且无污染，即表明分离成功。
银耳的菌种怎么制作
银耳的菌种怎么制作银耳种植的原料广泛，取材容易，因此大有发展前途。
你知道银耳的菌种要怎样制作吗?下面店铺为大家介绍一下银耳的菌种制作方法，希望对你有帮助。
银耳配料种植银耳的培养料，根据当地资源，因地制宜选择主要原料，并配合其他辅料制成。
阔叶树如杨、柳及各种果树的木屑均可用。
也可将这些树的枝条切成薄片，晒干，再粉碎成粉状的木屑。
棉籽壳是种植银耳的好原料，单产比木屑可提高20—30%，此外玉米芯、甘蔗渣、花生壳、葵花籽等，晒干后粉碎成细屑均可用于种植。
配方1: 木屑100千克，麸皮25千克，石膏粉4千克，尿素0.4千克，石灰粉0.4千克，硫酸镁0.5千克，水100—110千克。
配方2: 棉籽壳100千克，麸皮25千克，石膏粉4千克，尿素0.4千克，石灰粉0.4千克，水100—200千克。
配方3: 甘蔗渣40千克，棉籽壳20千克，木屑40千克，麸皮30千克，石膏粉3千克，过磷酸钙2千克，尿素0.5千克，水100—110千克。
选定配方后，把主要原料同麦皮、石膏粉等干料倒在水泥地上，把蔗糖、化肥、硫酸镁等放入水中溶化后，倒进干料中，经三次反复搅拌，过筛，打散团块，拌匀，含水量掌握55—65%。
配料要选择晴天或阴天上午进行，雨天不宜。
银耳装袋拌好的培养料必须抓紧时间装入种植袋。
银耳种植袋，应选择低压高密度聚乙烯筒膜，直径扁宽12厘米，薄膜厚度3.5—4丝米，长50厘米，每千克筒料可裁制成220—240个种植袋。
也可用罐头瓶作种植容器。
一般农户采用手工装料。
装一半时抖一抖，压实后再装。
大面积生产应采用食药用菌专用装袋机，每小时可装400袋。
装袋要求装紧装实，袋口用塑料绳绑扎。
在料袋璧上打4—5个接种穴，穴口直径1.2厘米，深1.5厘米，然后擦去袋面沾的木屑后，用3.3×3.3厘米的方块纸胶带贴封穴口，即成种植银耳的培养基。
从拌料到装袋结束最好不超过5小时，以防培养基发酸变质。
银耳灭菌在大锅灶上放蒸笼，把袋子叠于蒸笼内，胶带一面要朝上。
银耳的菌种分离技术
银耳的菌种分离技术1. 引言银耳（Auricularia auricula-judae），又称黑木耳、银耳菇，是一种重要的食用真菌。
它具有丰富的营养价值和药用价值，在中国和东南亚地区广泛种植和消费。
银耳菌种分离技术是研究银耳的基础工作之一，通过菌种分离可以获得纯种菌株，为银耳的种植和研究提供基础数据。
本文将介绍银耳菌种分离技术的步骤和注意事项。
2. 菌种分离技术的原理银耳菌种分离技术基于真菌的生物学特性和培养条件的优化，通过分离和筛选，得到纯种菌株。
其基本原理包括以下几个步骤：2.1 菌丝分离首先，从银耳的菌丝体上采样，可以选择新鲜的银耳子实体或已培养的菌丝体作为样本。
将样本切碎，均匀地涂抹在培养基表面，并进行适当的培养条件，如温度、湿度等。
2.2 菌丝生长放置培养皿在适当的温度和湿度下，等待菌丝生长。
银耳菌丝具有较快的生长速度，通常几天后就可以观察到菌丝的生长。
2.3 菌丝筛选观察培养皿上的菌丝，筛选出生长良好、无污染、纯净的菌丝进行后续的操作。
可以根据菌丝的颜色、形态等特征进行筛选，有经验的研究人员可以凭借肉眼识别，也可以借助显微镜进行观察。
3. 菌种分离技术的步骤银耳菌种分离技术的步骤如下：3.1 准备工作准备培养基和培养设备，确保无菌条件。
常用的培养基包括马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）、苹果蔗糖琼脂（AS）等。
同时，需要准备菌种采样工具、无菌操作箱、显微镜等设备。
3.2 菌丝分离从银耳的菌丝体上采样，取适量的样本均匀涂抹在培养基上。
注意避免污染，保证操作无菌。
3.3 培养菌丝将培养皿放置在恰当的培养条件下，如温度、光照和湿度等，并以适当的时间间隔观察菌丝的生长情况。
3.4 菌丝筛选观察培养皿上的菌丝，筛选生长良好、无污染、纯净的菌丝，并进行备份保存。
筛选的依据可以包括菌丝的颜色、形态、生长速度等特征。
3.5 目视鉴定将筛选出的菌丝进行目视观察和鉴定，以确定是否为所需的银耳菌株。
目视鉴定主要依据菌丝的形态特征、产孢器的形状和颜色等进行判断。
种植银耳的技术
种植银耳的技术银耳也叫白木耳，它不仅是宴席上的珍品，而且具有重要的医疗保健作用。
那银耳怎么种植呢?下面是为你整理的，希望对您有用。
一、种植季节银耳属于中温型菌类，菌丝生长最适宜的温度为24～25℃，子实体发育适宜的温度为20～25℃。
种植季节以春、秋两季的自然气温最为适宜，也可以采取冬季种植房加温，夏季野外搭荫棚种植，使银耳一年四季都可以种植。
二、培养料的配制种植银耳的原料十分广泛，以棉籽壳最为理想，此外，杂木屑、玉米芯、甘蔗渣等也是常用的原料。
常用的培养料配方为：①棉籽壳85%，麦麸13%，石膏粉1.5%，蔗糖0.5%;②棉籽壳80%，麦麸15%，玉米粉3%;石膏粉1%，蔗糖1%;③杂木屑76%、麦麸20%、石膏粉2%、蔗糖1.3%、硫酸镁0.4%、尿素0.3%。
农户可以根据自己的实际情况，任选一种配方。
配制培养料时，先把木屑、棉籽壳、甘蔗渣等原料进行过筛，剔除混入的沙石、金属、木块等物质。
然后将棉籽壳或木屑倒入拌料场上，堆成山形，再把麦麸从山尖均匀地往下撒开，并把石膏粉均匀地撒向四周。
把上面的干料先搅拌均匀，然后把可溶性的添加物，如蔗糖、硫酸镁、尿素等溶于水中，再倒入干料中反复搅拌均匀。
每100千克干料加水100～130千克，使培养料的含水量在60%左右。
检测的办法是：手抓培养料握紧，如果手指缝间有水渗出，但不滴下，这时候最为适宜。
三、装袋、灭菌、接种1.装袋培养料拌匀后，要及时装入塑料袋内。
种植银耳用的塑料袋通常由高密度低压聚乙烯原料制成，半透明，柔而韧，抗寒、抗张力强，能耐100℃的高温。
种植袋长55厘米左右，直径8～10厘米，袋底密封良好。
规模化种植银耳通常采用装袋机装料，每小时可以装800～1000袋。
装料的方法是：把袋口张开，整袋套进装料机出料口的套筒上，双手托紧塑料袋。
当培养料从套筒源源输入袋内时，右手撑住袋头往内紧压，使培养料装紧装实。
当培养料装到离袋口5厘米左右的位置时，用棉纱线缠扎袋口3～4圈，再反折过来捆扎3～4圈，这样，袋口就密封好了。
银耳菌种分离方法
银耳菌种分离方法获得银耳菌种的方法主要有担孢子弹射分离法、组织分离法和耳木分离法：1、孢子弹射法这是利用新鲜的、成熟的子实体自动弹射出担孢子来获得纯菌种的方法。
取朵大、色白、无病虫害的新鲜银耳作为种耳。
用无菌水漂洗银耳数次，再用无菌纱布或吸水纸，把银耳表面的水分吸干。
因为耳片表面若有薄水层，便会影响银耳担孢子的弹射，并容易污染上杂菌。
再把种耳切一小块，以放入三角瓶或放入试管中不会碰到瓶壁或管壁为度，随后用不锈钢小钩钩住小耳片，迅速悬挂在三角瓶或试管内，同时注意勿使种耳碰到培养基表面，以防污染杂菌，塞上棉塞，然后放在20-25℃条件下，经24小时，从耳片上弹射出来的担孢子，落在光滑的培养基表面上形成一个雾状的孢子印。
此时，在无菌箱或无菌室中，将悬于瓶内的耳片取出，再塞上棉塞，移到20-25℃的室中培养，经2-3天，培养基表面就会出现许多乳白色、糊状的小菌落。
此系银耳的酵母状分生孢子。
当培养基上出现酵母状分生孢子的菌落时，为了防止和减少污染，应尽快地进行提纯，即挑取少许没有杂菌的银耳酵母状分生孢子，移入新的试管中进行培养。
不管银耳担孢子或酵母状分生孢子都不容易萌发成菌丝，所以直接用于生产时有困难，目前已较少采用。
不过，为了获得银耳有性繁殖的后代，必须采用担孢子分离法，并使之萌发成单核菌丝，然后进行配对实验。
2、组织分离法和香菇、平菇不同，银耳组织分离法比较难操作，实用意义也不大。
因为耳片一旦胶质化之后，就不容易再长出菌丝，况且段木种植的或野生的银耳，暴露在外界的生长时间很长，耳片上必定会附着各种杂菌，组织分离时既不容易把附着的杂菌洗掉，又不容易用药品进行表面的灭菌处理，且容易导致银耳和条菌同归于尽。
只有位于树皮和木质部之间的肥厚的耳基比较容易进行组织分离，可以获得银耳的纯菌丝。
不过用耳基分离来的银耳纯菌丝常是鹅黄色的或橙黄色的，不是纯白的，菌丝生长的速度也比较慢，效果也不太理想。
3、耳木分离法利用长了银耳子实体的段木（简称耳木）来进行分离，是目前获得有实用价值的银耳菌种最主要的方法。
银耳菌种规范化生产工艺讲座_六_银耳菌种退化与病害预防技术
银耳菌种规范化生产工艺讲座(六))))银耳菌种退化与病害预防技术丁湖广(福建省古田县新元食用菌研究所,古田352200)关键词银耳;菌种;退化;原因;纯化;病害防治1菌种退化的原因与防止措施通过自然选育、有性杂交、人工诱变和细胞融合等方法,选育出优良菌株,再经过菌丝无性繁殖,应用于生产。
从遗传学上看,这样无性繁殖后代,一般都能保持固有的遗传特性。
但一个新菌株育成后,经数年推广,由于种种原因,总会出现退化现象。
退化的菌种很难复状,不能应用于生产。
111退化原因菌丝在培养基上生长很慢,长势弱,稀疏,伸入培养基深层无力,分泌色素差;子实体形态不一致,大小、厚薄不等,颜色也有所改变;出耳慢或中途停止生长,产量低。
菌种的这种表现,如果不是栽培技术和环境因素所致,那就是菌种退化。
菌种退化的原因主要有以下几方面。
(1)基因突变。
基因突变是菌种退化的主要原因。
它可使原来纯的菌株变为不纯。
银耳为异核细胞,当某一核发生不利的突变,随着传代,核即发生分离,造成性状多样化,菌种出现变异,产量也随之发生变化。
(2)无限继代。
银耳制种技术已成为群众性的生产技术。
群众性菌种生产在技术和条件上差别很大,违反科学生产的现象时有发生。
如有的制种户只作组织分离,不作出耳鉴定;有的把分离出来的菌种直接应用于生产;有的无限制地继代、转管,这些都会加快菌种的退化。
(3)营养不良。
原种的培养基多数用木屑、麦麸和米糠等,配方大同小异。
使用基本相同的培养基,营养成分不能满足其生理要求,长期繁殖下去,便造成营养不良。
或因菌种培养时间长,瓶内养分耗尽,菌丝生长活力由强变弱。
(4)环境欠佳。
菌种发育长期处于不良的环境中,也会加速菌种退化,因为培养条件能对细胞核的数量产生影响。
此外,杂菌污染也会导致母种退化。
112防止措施根据菌种衰老退化的原因,可采取以下有针对性的措施。
(1)减少扩接。
银耳菌种的退化、种性变异,是在繁殖过程中发生的,常用控制菌种移接次数来防止。
银耳系统生产工艺流程重点问答式交流
银耳系统生产工艺流程重点问答式交流1、银耳的纯白菌丝如何获得？有以下三种方法获得：1、使担孢子或芽孢萌发2、耳基组织分离3、耳木浅层分离；2、香灰菌丝（羽毛状菌丝）从哪里分离而来？从耳木中分离而来的，即从耳木表面无树皮的部分可以获得；3、银耳孢子萌发需要哪些条件？要使孢子萌发成菌丝，首先应是纯银耳孢子，培养基表面无游离水，应呈湿润状，营养要丰富，PH值在5.6-6.2之间，在断木或木肖米糠培养基上则必须有香灰菌丝为之开路，预先分解木材，造成适合于银耳菌丝生长发育的营养条件。
4、采种作为种子的子实体和耳木的要求？（一）、选子实体：朵打、肉厚、无病虫害、耳片无齿状、园正、生长旺盛、七分成熟的。
采后排在阴凉通风的地方阴干（不晒、烤）备用。
（二）耳木：1、子实体与上同2、肉眼在耳木上观察不到任何杂菌（特别是绝对不应有多孔菌、齿菌、棉府菌、革菌、伞菌等），看木材剖面，杂菌之间诘抗线有没有。
否则，将给分离和纯化工作带来极大的困难。
3、采刚生1-2次银耳的段木。
木质尚结实，未成腐朽状。
（因腐朽木材木质疏松水易渗入，细菌多）。
4、耳木内部不能有虫蛀。
并要药杀耳木表面小虫及螨类··5、分离时子实体、耳木表面用什么药物灭菌？为了表面灭菌达到彻底又不会影响子实体或耳木内部孢子或菌丝的存活，就必须注意药物的选择、药液的浓度、处理时间与方法。
表面处理常用的几种药品及浓度：0.1%的升汞水、0.1%的硝酸银溶液、10%的漂白粉溶液、1%的次氧酸纳溶液、75%的乙醇溶液、1：500倍抗菌素溶液均可作表面消毒。
注意升汞溶液侵泡30分钟，其他溶液掌握在2分钟左右。
升汞溶液配法：称1克溶于25毫升的浓盐酸中，再加入1000毫升水就可以了。
加盐酸的目的在于增加升汞的溶解度并防止沉淀。
浓盐酸也可以加5克食盐代替。
6、耳木在无菌操作下如何切？横切、纵切、弦切自己觉得防变操作均可。
但不能把分布较浅的银耳菌丝切掉，导致分离不成功。
银耳菌种的制作
斜面培养基上，加棉塞后置22-24℃下恒温培养6-8天。
当银耳菌丝长至似绣球状如黄豆大小时，再连同香灰母种一起移入接种室（箱）里，按无菌操作用接种铲在距银耳纯菌丝团约2厘米处，接入一小块香灰菌丝母种，培养2天在接种块上便可见到白色菌丝，7天左右即形成白毛团而覆盖银耳纯菌丝团，12-15天在白毛团的上方可见到有红、黄色水珠即为成功。
需要指出，用银耳与香灰菌的斜面混合母种扩接原种时，应切去斜面的前后端，只取其绣球状的银耳纯白菌丝及附近黑灰色的香灰菌丝用于转接。
因此1支斜面母种只能接1瓶原种。
2、瓶装木屑原种混接法 如果没有银耳纯菌丝，将银耳孢子培养出芽孢母种，再接入瓶装木屑培养基制成的香灰菌母种，混合培养而成。
根据接种需要量，按1支香灰斜面母种扩接12-15瓶木屑培养基的比例，将香灰菌母种试管和经灭菌的瓶装木屑培养基，以及接种用的器具，一起放入接种箱里，按无菌操作，用接种铲挑取黄豆大小的香灰菌母种一块，接入木屑培养基瓶中。
接种完毕，移至24-26℃下培养，约经2天即可见到接种块上萌发白色菌丝。
此后要隔天检查，发现杂菌及时检出剔除。
一般培养11天左右，香灰菌丝可向培养基内延伸约3厘米，此时可观察到培养基表面有灰褐色或黑褐色的分泌物，这表明香灰菌丝生长旺盛，应及时接入银耳芽孢母种。
按1：12－15的比例，取银耳芽孢母种试管和培养好的木屑培养基香灰菌母种；一起放入接种室（箱）中，按无菌操作，用无菌接种刀划破香灰菌丝表层，再用无菌接种铲挑取少量银耳芽孢，接入香灰菌丝体中。
混合后将瓶移至23-25℃下培养，经10天左右即可见到银耳芽孢接种处生长浓白色菌丝。
再培养18天左右即出现红、黄色水珠，25天左右便可观察到有扭结状子实体原基，说明培养成功。
1瓶这样的木屑混合种可扩接30-40瓶原种（二级种）。
栽培种的生产 根据原种生长的好坏，耳基大小，银耳菌丝“吃料”的深度，来决定每瓶原种应扩接的瓶数。
为了保证质量，尽量控制在40-60瓶之内。
银耳菌种规范化生产工艺讲座_五_银耳菌种培养管理与菌种质量鉴别
银耳菌种规范化生产工艺讲座(五) 银耳菌种培养管理与菌种质量鉴别丁湖广(福建省古田县新元食用菌研究所,古田 352200) 关键词 银耳;菌种;培养;质量;鉴别1 菌种培养管理关键技术获得优良的品种只是菌种分离或选育走完第一步,而按照其种性要求,人为创造相适应的环境条件使其继续健康生长则颇为重要。
如果培育环境不适应,会造成种性退化,甚至导致菌种萎缩死亡。
以下介绍菌种培养科学管理 五个关键 。
1 1 检杂 各级菌种在扩繁接种转入培养管理后,第一关就是检杂。
起检时间一般是接种后3天,以后每天一次。
检查方法是用工作灯照射菌种瓶,认真观察接种块、培养基表面及瓶内四周有否出现黄、红、黑、绿等斑点或稀薄白色菌丝,稍有怀疑即拣出隔离,作杜绝污染源处理,宁弃勿留。
1 2 控制适温 菌种培养室以控制在22~23 为适。
越冬采用室内安装暖气管,锅炉蒸汽管输入暖气片,使用暖气管升温的方法效果理想,而采用空调机电力升温则更好。
一般菌种厂可在培养室内安装电炉或保温灯泡升温。
要注意瓶内菌温一般会比室温高,因此在升温时应掌握室温比适温低2~3 。
随着菌丝的生长发育,菌瓶内温度也逐步上升,因此在适温的基础上,培养室的温度需每5天降低1 。
1 3 干燥防潮 在培养基水分适宜情况下,菌种培养的湿度较易控制。
培养室内的空间相对湿度要求控制在70%以下,一般依照自然条件即可。
但梅雨季节湿度高,容易使棉花塞受潮,引起杂菌污染,因此要特别注意培养室的通风除湿。
方法是在培养室内存放生石灰粉吸潮,并利用排风扇等通风。
若气温低,还可利用加温除湿的方法降低室内湿度。
1 4 排除废气 冬季用煤炭加温时,应注意通风透气,防止室内二氧化碳沉积伤害菌丝。
在菌种排列密集的培养室,室内上下应各设若干窗口,便于冷热空气对流通风,窗口大小依菌种数量和房间大小而定。
1 5 适度光照 银耳菌种培养需要散射光,以利于刺激香灰菌丝发育,吸收养分供芽孢萌发。
但不可阳光直射,以免培养基水分蒸发。
银耳原种的制作方法!
银耳原种的制作方法！
将试管母种移接到瓶装木屑培养基上进行繁殖，所获的的菌种成为原种。
为了生产的需要，必须将母种进一步培育成原种。
1.接种方法
可采用两种方法，一种是用已消毒的接种针在母种的白毛团四周划一圈，将其与香灰菌丝分开，然后从中央挑起白毛团，迅速接入原种培养基上，接入时注意白毛菌丝朝上。
一支母种一般能接一瓶原种。
如果母种数量有限，也可将银耳菌丝用接种刀分割成2-4块，分别接入2-4个菌种瓶，但不可切得太小，以免降低原种质量。
另一种方法是在木屑培养基上混合培养母种，母种培养结束后，选择已形成子实体原基的菌种一瓶，与待接原种料瓶按1：30-40的比例，连同接种工具一起放入接种箱，按无菌操作方式，用接种刀、长柄镊或其他铁器小心地敲去母种瓶的上部，再用接种刀将上部的结块和黑点清除干净，露出白色菌丝，然后任取一瓶原种培养基，横置于接种接上，瓶口接近酒精灯火焰，用接种匙在白毛团周围约3CM处挖取菌丝体，迅速移入原种培养基瓶中，压碎、搅匀后从中分别取出花生米大小的菌块，接入原种培养基内，一般每瓶母种可接入原种30-40瓶。
2.培养基管理
接种后的菌瓶要及时搬入已消毒过的培养室内，分层摆放于培养架上，瓶间留一定的空隙。
头10天室温控制在23℃-25℃，空气相对湿度在70%以下，每间隔3天检查一次，
发现杂菌及时剔除，每天注意通风2-3次，每次30min。
10天后将室温将至20-22℃，2-3d检查一次，每天通风4-5次，每次20min。
注意保持室内干燥、清洁、防止阳光直射，以利菌丝生长。
在适当条件下，经15-20d，可见菌种块上分泌出红、黄色水珠。
继而出现胶纸状原基并展开耳片，原种基培育成功。
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Zhejiang Shiyongjun2010,18(3):16~19)))银耳菌种分离方式与操作技术丁湖广(福建省古田县新元食用菌研究所,古田352200)关键词银耳;菌种;分离;标准1母种分离的种耳标准银耳母种分离的种耳,来源于野生和人工栽培。
野外采集标本时,必须注意生态环境,特别是植被和植物群落组成;了解其采集地的基质、气温、地温、湿度、光照强度等,为驯化提供原始参考资料。
各地科研部门驯化银耳菌种已取得成效,许多菌株已有大面积人工栽培,成为定型的速生高产菌株。
现有银耳的制种,大部分是从人工栽培菌株中选择的种耳。
标准的种耳应具备以下条件:¹种性稳定。
经大面积栽培,普获高产优质,且无种性变异或偶变现象。
º生活力强。
菌丝生长旺盛,原基分化正常,出耳快,长势好;新鲜子实体耳肉厚,叶片大,展片疏松,形似牡丹花;基质和子实体无病虫害。
»确定季节。
种耳以春秋产季的为好,冬春产季的耳花展片差,不宜使用。
¼成熟程度。
通常在接种后30天左右、子实体展片成形、弹性强时采集。
此时若在种耳的底部铺上一张塑料薄膜,一天后用手抚摸,有滑腻的感觉,表明已弹射担孢子。
½环境考验。
室内栽培的银耳,还必须将被选作种耳的菌袋搬到环境适宜的野外,考验1~2天后取回,使其适应自然环境。
¾入选编号。
确定被选的种耳,适时采集1~2朵,编号,并标记原菌株代号。
2孢子分离与提纯技术211孢子的收集(1)分离前消毒。
采集的种耳,表面可能带有杂菌,可用75%的酒精擦洗2~3遍,然后用无菌水冲洗数次,再用无菌纱布吸干表面水分。
分离前,先要进行器皿的消毒。
把烧杯、玻璃罩、培养皿、剪刀、不锈钢钩、接种针、镊子、无菌水、纱布等,一起置于高压灭菌器内灭菌。
然后将酒精灯和75%酒精或011%升汞溶液,以及装有经过灭菌的琼脂培养基的三角瓶、试管和经过消毒的种耳等,放入接种箱或接种室内一并进行消毒。
(2)孢子的收集方法。
收集的方法具体可分整朵插种、三角瓶钩悬、试管琼脂或木屑培养基贴附3种。
操作要求在无菌条件下进行。
¹整耳插种法。
在接种箱内,将经消毒处理的整朵种耳插入无菌孢子收集器里,再将孢子收集器置于适温下,让其自然弹射孢子。
º三角瓶钩悬法。
将消毒过的种耳,用剪刀剪取拇指大小的耳片,挂在钢钩上,迅速移入装有培养基的三角瓶内。
耳片距离培养基约2~3厘米,不可接触到瓶壁,随手把棉塞塞入瓶口。
为便于筛选,一次可以多挂几个瓶子。
»试管贴附法。
取一支试管,从消毒过的种耳上剪取3厘米耳片,往管内推进约3厘米,贴附在管内斜面培养基表面,管口塞好棉塞,保持棉塞与种耳间距1厘米。
也可将种耳片贴附在经灭菌冷却的木屑培养基上,让耳片孢子自然散落在基料上。
212 培养移接与提纯选育方法(1)培养移接。
种耳挂瓶孢子弹射后,打开接种箱,把孢子收集器或三角瓶及时置于25e 条件下培养24小时。
当看到培养基上方有雾状的孢子后,再搬入接种箱内,取出钢钩和耳片,塞好棉塞,然后置于恒温箱或培养室内培养2~3天。
这时在培养基的表面上,就能看到白色糊状、边缘光滑的菌落,此系银耳分生孢子。
此时用接种针挑取少许,接入装有琼脂培养基的试管中继续培养,即得银耳菌丝或芽孢。
采用试管或菌种瓶贴附法的,待看到雾状的孢子散落于培养基后,取出耳片,然后按照上述同样方法进行。
11出耳菌种 21耳中消毒 31冲洗 41吸干 51接种 61木屑母种图1 耳片分离示意图 (2)提纯选育。
弹射出来的孢子,并不是每一颗都是优质的。
有的孢子未成熟,有的生长畸形,不能萌发或发芽力弱,也有的孢子发芽后菌丝蔓延困难。
因此,孢子采集后还必须进行筛选提纯分离。
具体方法有以下几种。
¹悬浮液注射法。
在接种箱内,用灭过菌的注射器吸取5毫升无菌水,注入盛有孢子的培养皿内,轻轻搅动使孢子均匀地悬浮于水中,即成孢子悬浮液;再将注射器插上长针头,吸入孢子悬浮液,让针头朝上静放几分钟,使饱满的孢子沉于注射器的下部;推去上部的悬浮液,吸入无菌水将孢子稀释;然后把装有培养基的试管棉塞拔松,针头从试管壁处插入,注入孢子悬浮液1~2滴,使其顺培养基斜面流下。
然后抽出针头,塞好棉塞转动试管,使孢子悬浮液均匀分布于培养基表面。
º多次稀释筛选提纯分离法。
取5支试管,其中1支装10毫升蒸馏水,另4支各装9毫升蒸馏水。
操作时先将孢子置于10毫升无菌水试管中,摇晃,使孢子分散成悬浮液;再用无菌注射器或吸管,吸取1毫升孢子悬浮液注入第2支试管中,摇振使其分散;然后从第1支试管中,吸取1毫升孢子悬浮液注入第3支试管。
如此依次稀释到第5支试管。
然后把稀释的孢子悬浮液注入试管培养基表面。
»平板划线法。
平板划线法是通过接种环,使孢子多方向连续在平板培养基表面划线,随着接种环的移动,使孢子得以分散。
经培养后分散的单个孢子即萌发生长成单个菌落,分离获得纯种。
操作时,在近酒精灯火焰处,左手拿培养皿底,右手拿接种环,灼烧接种环,冷却后蘸取少许孢子悬浮液在平板上划线。
划线时要使接种环与平板表面成30~40b 角轻轻接触,以腕力在表面作轻快的滑动,切勿将平板表面划破。
每划毕一区,要把培养皿转动约70b 角再划线。
最后一区切勿与第一区的线相连接,否则达不到分离的目的。
划线有扇形、连续形和方格形。
把经上述方法接种的试管或培养皿及时移入恒温箱内培养。
在23~25e 条件下,培养5~8天,在培养基上可看到许多乳白色的芽孢菌落。
选择边缘整齐、光滑,中间凸起,较大的菌落,在接种箱内移接到新的试管培养基上进行扩大繁殖,并逐一标上代号和日期,在适温条件下进行培养。
当培养基上长满菌丝时,即得银耳母种。
但生产中,银耳母种还必须与羽毛状香灰菌混合培养,方可成为生产用一级母种。
3 组织分离技术组织分离,通常是指从子实体中分离获取菌丝。
这是一种快速而又简单易行的诱变育种法,能在短期内收到较好的效果,所以常被制种户采用。
银耳组织分离有两种方式,一种是从耳片中分离孢子萌发菌丝,另一种是从菌丝纽结团(白毛团)分离,获得母种。
311 耳片分离法新鲜的银耳耳片表面,粘附有银耳纯菌丝和香灰菌丝,可以直接从耳片中获得银耳菌种。
具体操作步骤与方法(图1)为:¹挑选种耳。
可从专门培养于封闭、无杂菌菌种瓶内的银耳子实体当中,挑选出耳前白毛团健壮丰满、胶质化,形成原基快、出耳早,子实体朵形圆正,耳片肥厚,色泽洁白的作为分离材料。
从这种生长于无污染基质上的健壮子实体中分离的菌种纯品率较高。
也可以从银耳栽培袋的群体中,选择符合种耳标准的子实体,#17#丁湖广:银耳菌种规范化生产工艺讲座(二)作为分离材料,但要认真做好消毒处理。
º剪取1平方厘米(约小指甲大小)左右的小耳片,置于无菌水中冲洗或用酒精擦拭耳片表面,再用纱布吸干水分后,接入预先灭好菌的瓶装木屑培养基上。
一次接种30瓶以上,以供筛选。
整个操作过程均在接种箱内进行。
»置于23~24e 下培养,并逐日观察,发现杂菌污染的,立即淘汰。
待孢子散落在培养基上,萌发成白色芽孢后取出耳片,塞好瓶口棉塞。
一般从耳片入瓶到芽孢出现需10~15天。
当原有种耳部位出现小米粒大的白毛团后,用接种针钩取其中洁白、圆满的1粒,移接到木屑母种培养基上,在22~24e 下继续培养30~35天。
选其中香灰菌丝长势旺盛,黑色素分泌均匀,白毛团胶质化快,原基健壮、出耳早、朵形圆正的菌种瓶,待子实体长至拇指大小时,即成木屑母种。
312 单团分离法单团分离法速度快,可在短期内生产出大量菌种。
但只能一次性使用,反复使用容易引起香灰菌丝退化,影响产量。
在菌种室内选取性状符合商业化生产的菌种作为分离材料,其菌龄10天左右。
要求选用培养基表层菌丝生长健壮、白毛团圆满结实,香灰菌丝生长旺盛,分泌黑色花纹清晰,无杂菌污染,无害虫的菌种。
将其搬入接种箱内,打开瓶口棉塞,在众多的白毛团中,瞄准理想的一个,用接种针钩取单个白毛团,迅速移接到琼脂培养基或木屑培养基表面,每支试管或每个菌瓶移接1粒。
一次移接40~50瓶,便于筛选。
接种后在22~24e 下,经10~15天的培养和观察,待香灰菌丝蔓延斜面,白毛团周围出现晶状或淡黄色水珠,继而形成碎米状原基时,即为琼脂母种。
接种在木屑菌种瓶培养基上的白毛团,一般经30~35天培养,子实体长至拇指大时,进行选优,获得木屑母种。
4 基内分离技术基内分离是从银耳子实体的基部分离出混合菌丝的一种方法。
在银耳耳基内含有银耳纯菌丝和香灰菌丝,通过分离可以直接获得新的菌丝,培育成母种(图2)。
11破瓶 21取出菌丝块 31剥去木屑取基下菌丝41接入纯化培养 51单团选育图2 基内分离菌种示意图411 选种消毒分离材料选择出耳早,长势快,耳片洁白、朵形圆正,子实体直径4~6厘米,无杂菌污染和病虫害的栽培袋。
若是选用菌种瓶内生长的子实体,应敲破瓶子上半部,用利刀切取子实体,以耳基作为分离材料。
为防止耳基内可能潜伏的杂菌和害虫为害,分离前应将栽培袋(瓶)移入0~4e 冰箱内,经24小时后再用敌敌畏熏蒸,以冻死或杀死害虫和杂菌。
取出后再用75%酒精进行栽培袋(瓶)及耳基表面消毒,然后连同接种工具和经过灭菌的母种培养基一起放入接种箱内。
412 取基移接将割去子实体并消毒后的分离材料,在无菌条件下,用接种铲挖取耳基正下方及周围较硬的基质块,用小刀将其剖开,将切面上半部的老菌丝连同耳基一起铲除,使之露出白色菌丝,以此作为分离材料。
基内菌丝块移接方法有两种:一是散接,即将基内菌丝块捣碎,反复搅拌后,用接种匙取半匙菌种,移接到木屑培养基上;二是粒接,用接种针钩取米粒大小的菌丝块,经搅拌后移接到木屑培养基上。
一次接30~40瓶,以供筛选。
413 培养认定接种后置于22~24e 下培养3~5天,检查接种块菌丝生长情况。
有的可能只长香灰菌丝,有的可能有杂菌,还有的可能只长银耳纯白菌丝。
为此必须进行认真鉴别,认定纯菌后继续培养8~10天。
当散接的菌种瓶内培养基表面出现许多白毛#18# 2010年第18卷第3期团,粒接的菌种块长出一簇白毛团,香灰菌丝长势健壮,培养基上出现黑色花纹时,选优去劣,进行/单团纯化0。
414 选优纯化用接种针在散接法的培养基上,钩取一个洁白丰满的白毛团,移接在经灭菌的菌瓶木屑培养基表面中央,一次移接20~30瓶。
在22~24e 下培养20天左右,白毛团分泌淡黄色或浅褐色水珠;继续培养10~15天,出现碎米状胶质化淡黄色的原基,并分化成子实体,前后共培养30~35天。
然后按照/3110(3)中的标准优选出银耳木屑母种。
如果是在琼脂斜面上培养,则要用接种针钩取一小粒菌丝块,移接到琼脂斜面上,一次可移接20~30支试管。
接种后,在22~24e 下培养2~3天,菌丝即恢复生长,7天后白毛团周围分泌出无色或淡黄色水珠,此时从中选优去劣,获取银耳斜面母种。