血管生成拟态
血管拟态形成实验报告
一、实验目的本研究旨在通过体外细胞培养实验，观察和探究血管拟态（Vasculogenic Mimicry，VM）的形成过程，并分析其形成的相关因素。
二、实验材料与试剂1. 材料：人肝癌细胞系HepG2、人皮肤黑色素瘤细胞系A375、人血管内皮细胞系HMEC-1、胎牛血清（FBS）、DMEM培养基、青霉素-链霉素混合抗生素、胰蛋白酶、0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液。
2. 试剂：Matrigel基质胶、Transwell小室、多聚赖氨酸、吖啶橙（AO）、台盼蓝染色剂、免疫组化试剂盒、抗血管内皮细胞标记物抗体（CD31）、抗细胞外基质蛋白抗体（IV型胶原）、荧光显微镜、凝胶成像系统等。
三、实验方法1. 细胞培养：将HepG2、A375、HMEC-1细胞分别接种于培养皿中，置于37℃、5%CO2培养箱中培养。
2. VM形成实验：（1）将Transwell小室置于培养皿中，下室加入含有10%FBS的DMEM培养基作为细胞外基质。
（2）将HepG2、A375细胞接种于上室，上室加入含有10%FBS的DMEM培养基。
（3）将Transwell小室置于培养箱中培养，观察VM形成情况。
3. VM鉴定：（1）取出Transwell小室，用多聚赖氨酸处理，固定细胞。
（2）用胰蛋白酶-EDTA溶液消化细胞，收集细胞悬液。
（3）用台盼蓝染色剂检测细胞活力。
（4）用免疫组化试剂盒对细胞进行染色，检测CD31和IV型胶原的表达。
（5）观察并记录VM的形成情况。
四、实验结果1. 观察到HepG2、A375细胞在Transwell小室中形成VM，表现为细胞在基质胶上形成管状结构。
2. 免疫组化结果显示，VM区域CD31和IV型胶原表达阳性，证实了VM的形成。
3. 细胞活力检测结果显示，VM形成过程中细胞活力保持良好。
五、讨论本研究通过体外细胞培养实验，成功观察到HepG2、A375细胞在Transwell小室中形成VM。
VM的形成可能与以下因素有关：1. 细胞来源：本研究中的VM形成主要来源于HepG2、A375细胞，这些细胞具有较强的侵袭和转移能力，可能与VM的形成有关。
肿瘤血管生成拟态研究现状
环状和 网络样。而血管生成 的二维组织切 片中不具 此特征。 （ ）不表达 ｖＭ 肿瘤动 物模型可见 到中央缺血 坏死 ，而具 ３
ＶＭ的即使瘤体直径 达 １ 时仍未见 中央坏 死灶。 （ ） ０ ｍｍ ４
ＶＭ 基质衬 附的类血管 内很少 见到红 细胞 逸 出，而血管 生
成 中可在瘤细胞问见到红细胞渗漏。
（ａｃｌｇｎｓ ）则 是 胚 胎 期 中胚 层 祖 细 胞 （血 管 母 细 胞 、 ｖｓｕ ｅｅｉ ｏ ｓ 成 血 管 母 细 胞 ）逐 渐 分 化 ，形 成 具 有 Ｅ Ｃ的原 始 血 管 网络 。
１１ 血 管 生成 拟 态 ．
比较 ，表达 ＶＭ 的乳腺癌有更 高的血 道转移率 和较差 的预
（ａ ｕｏｅｅｉ）和血 管 生成 （ｌｉｇｎｓ ）两种 方 式 ，均 ｖｓ ｌ ｎｓ ｃ ｇ ｓ ａ ｏｅｅｉ ｑ ｇ ｓ
存在 内皮细胞 （ｎｏｈｌｌｅ ，Ｅ ） ｅｄｔｅａ ｃｌ Ｃ 。血 管生成 （ｎ ｉ ｅ — ｉ ｌ ａ ｇ ｇｎ ｏ ｅｉ ｓ ）是在已有的血管网雏基础 上 ，局 部细胞通过 分裂 、芽 ｓ 生、扩展 、延 伸等机制 ，成熟为有 Ｅ Ｃ的血管 网。血管发生
的相关 基 因 ，如 ｃｎｅｔ ｅｔｓｅｇｏ ｔ ｆｃ ｒ Ｃ ＧＦ ｎ ｏ ｎｃｉ ｉｕ ｒｗ ｈ ａｔ ， Ｔ 、ａ — ｖ ｓ ｏ
ｇ ｐ ｉ ｉ ｒ ｅ ｔ 一１ ｉ 一１ ｐ ｈ ｌ ｌ ｅ ｉａ ，Ｅ Ｋ等 。 ｉ ｏ ｔ ｐｏ ｏ ｅ ｎｅ ｃ ｒ ，Ｔ ｅ 、ｅ ｉ ｅ ａ ｃｌ ｋ ｓ Ｃ ｔ ｉ ｌ ｎ
一
的 Ｐ Ｓ阳性物质将 瘤细胞与血流分 开。 （ ）血管图案呈 Ａ ２
Ｅ Ｃ衬覆 ，肿瘤细胞仿组织 血管结构 ，形成 网状通道 壁 ，与
血管生成拟态的研究进展
２ 血 管 生成 拟态 的分 子调 节机 制
２１ 肿 瘤 细胞 方 面
脊椎动物转录因子 Ｔ ｉｌ ｗｓ 是肿瘤上皮 一问质转变（ ｐｔｅｉｌ ｔ ｅｉ ｌ — ｈ ａ ｍ ｓｎ ｈ ｍ １ ｒｎ ｉｏ ， ＭＴ） ￣ｅ ｅ ｙ ａ ａ ｓ ｉ Ｅ ｔ ｔｎ 过程 中的 一个重 要调 控闲 子 ， 对
ｉ ｕ Ｍ ｅ ，Ｃｈ ｎ ｓ ｅ ｉ ａ ｒ ｅ ｔ Ｃ ｎ ｅ ｔ ． ａ ｆ ｎ ａ ａ ａ ｅ ａ ｄ Ｖｉ ａ ａ ａ ｅ ａ ｄ ｔ ｅ ｏ ｎ ｈ ｔｔ ｅ ｄ ｖ ｌ ｐ ｎ ｆ ｎＰ ｂ ｄ ｉ ｅ ｅ Ｍ ｄ ｃ ｌＣｕ ｒ ｎ ｏ ｔ ｎ ｓ Ｗ ｎ ａ ｇ ｄ ｔ ｂ ｓ ｎ ｐ ｄ ｔ ｂ ｓ ｎ ｈ ｎ ｗｅ ｆ ｕ ｄ Ｉ ａ ｈ ｅ ｅ ｏ ｍｅ ｌｎｌ Ｖａ ｃ ｌ ｇ ｎ ｅ ｍｉ ｃ ｙ ｔ ｅ ｒ ｎ ｔ ｅ ｐ ｓ ｔ ｎ ｙ ａ ｓｗａ ｕ ｐ ｉ ｉ ｇａ ｄ ｔ ｅ ｅ ｓｕ ｉ ｓｗｅ ｅ ｍａ ｎ ｙ ｆ ｃ ｓ ｄ ｏ ｈ ｌｃ ｌ ｒｍｅ ｈ ｎ ｓ ｆ ｓ ｕ ｏ ｅ ｉ ｍｉ ｒ ｈ ｏ ｙ ｉ ａ ｔ ｅ ｅ ｒ ｓｓ ｒ ｒｓｎ ｎ ｈ ｓ ｔ ｄ ｅ ｒ ｉ ｌ ｏ ｕ ｅ ｎ ｔ ｅ ｍｏ ｅ ｕ ａ ｅ ａ ｉｍｓｏ ｈ Ｖａ ｅ ｌ ｇ ｎ ｃ ｍｉ ｃ ｙ ａ ｄ ｉ ｌ ｉ ａ ｉ ｎ ｆｃ ｎ ｅ Ｔ ｉ ｔ ｄ ｕ ｓ ｕａ ｅ ｉ ｍｉ ｒ ｎ ｔ ｃ ｉ ｃ ｌｓｇ ｉ ａ ｃ ． ｈ ｓ ｓｕ ｙ ｓ ｍｍａ ｉ ｅ ｈ ｅ ｅ ｔａ ｖ ｎ ｅ ｆ ａ ｅ ｌｇ ｎ ｃ ｍｉ ｃ ｙ ａ ｄ ｔ ｅ ｒ ｓ ｌｓ ｓ ｎ ｉ ｒｚ ｄ ｔ ｅ ｒ ｃ ｎ ｄ ａ ｃ ｓ ｏ ｓ ｕ ｏ ｅ ｉ ｍｉ ｒ ｎ ｈ ｅ ｕ ｔ ｖ
血管生成拟态和血管生成及其意义
国外医学肿瘤学分册２００３年６月第３０卷第３期血管生成拟态和血管生成及其意义张诗武１，高欣１综述孙保存２审校（１天津武警医学院病理教研室，天津３００１６２２．天津市肿瘤医院病理科，天津３０００６０）摘要：血管生成拟态（ｖａｓｃｕ［ｏｇｅｎｋ：ｍｉｍｉｃｒｙ）是近雨年来提出的一种全新的肿瘤内血管生成模式。
其特点为：肿瘤细胞通过自身变形和基质重塑产生血管样通道，通道内无内皮细胞衬覆，通道外基底膜ＰＡＳ染色为阳性。
该血管样通道生成机制、管壁结构等都与传统的肿瘤内血管生成不一样，因此通过血管生成拟态构建的血管样通道有可能成为某些肿瘤新的治畹靶§．ｊｊ关键词：血管生成拟态；血管生成；葡萄膜黑色素瘤中圈分类号：Ｒ７３０２３文献标识码：Ａ文章编号：１０００—８２２５（２００３】０３０１８００３１９９９年美国Ｉｏｗａ７ｓ大学的Ｍａｎｉｏｔｉｓ等”。
研究人的眼葡萄膜黑色素瘤微循环而发现了一种与经舆的肿瘤血管生成（ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ）途径完全不同的、不依赖内皮细胞的全新的肿瘤血管生成模式。
Ｍａｎｉｏｔｉｓ等认为在葡萄膜黑色素瘤中，黑色素瘤细胞通过自身变形并与细胞外基质相互作用模仿血管壁结构形成可输送血液的管道系统，从而重建肿瘤的微循环，并在某个环节与宿主血管相连使肿瘤获得血液供应，并将这个过程命名为血管生成拟态（ｖａｓｃｕｌｏｇｅｎｉｃｍｉｍｉｃｒｙ）。
Ｍａｎｉ—ｏｔｉｓ和Ｆｏｌｂｅｒｇ等｜“认为可以通过…些无创伤的检蠢和诊断于段对眼葡萄膜黑色素瘤进行确诊，以避免对肿瘤组织的刺激而造成肿瘤的扩散。
同时因葡萄膜黑色素瘤有其独特的微循环发生机制，用一些抑制血管生成拟态的药物进行治疗也可以收到较好的临床疗效．，１葡萄膜黑色素瘤微循环ＰＡＳ阳性图案及其临床意义ＦＨｂｅｒｇ等”１采用ＵＥＡ一１荧光标记及共聚焦激光扫描显微镜来检测葡萄膜黑色素瘤中特殊的微血管，发现各种各样的血管图案都可以看见，包括长的、直的、环形、平行聚集的和十字交叉的血管样图案等。
平滑肌肉瘤中血管生成拟态的初步研究和预后相关性分析
Ｐｉ ｔ ｕ ｙ ａ ｄＣｌ ｉａ ｏ ｎ ｓｓＳｉ ｎｆ ａ ｃ ｆ ｓ ｕｏ ｅ ｉ ｍｉｒ ｅｏ ｙ ｓ ｒｏ ａ ｌ ｄ ｎ ｉｃ ｌ ｏ Ｓｔ ｎ Ｐｒ ｇ ｏ ｉ ｇ ｉｃ ｎ ｅ ｏ ｉ Ｖａ ｃ ｌｇ ｎｃ Ｍｉ ｃ ｙｉ Ｌ ｉｍ ｏ ａ ｃ ｍ ｎ ＷＡ ＧＬｎ ＷＡ ＧＸａｙ ， Ｕ Ｙ ｎｕ ， Ｈ Ｎ ｈ ｕ Ｓ ＮＢ ｏｕ Ｎ ｉ， Ｎ ｉ ｕ Ｇ ａｊｎ Ｚ Ａ ＧＳ ｉ ， Ｕ ａｃ ｎ ｏ ｗ Ｄ ｐ ｒ ｅ ｔ ａ ｏ ｇ， ａｃｒ ｏｐｔｌ Ｔａ ｉＭｅ ｉａ Ｕ ｉｅｓｙ Ｔａｊ ０ ０ ０Ｃ ｉ ｅａｔ ｎ ｔ ｌ ｙ Ｃ ｎｅ ｓｉ ｉ ｊｎ ｄｃ ｎｖｒｉ， ｉ ｉ ３ ０ ６ ，ｈｎ ｍ ｏ ｈｏ ｆＰ Ｈ ａｏ ｎ ｆ ｌ ｔ ｎｎ ａ
ｆｕ ｄ ｉ ５ｏ ｅ４ ｅｏ ｏ ａｃｍａｃ ｓｓ （ ５６ ） Ｔ ｅｅｗ ｓａｓａｉ ｉａ ｉ ｉｃ ｎ ｅｂ ｔ ｅ ｎ ｔｅｃ ｓ ｓｗｔ ｎ ｉ ｏ ｔ ｏ ｎ ２ ｆ ｈ ５ｌｉｍｙ ｓｒｏ ａｅ ５ ．％ ． ｈ ｒ ａ ｔｔ ｔ ｌ ｇ ｆ ａ ｃ ｅｗ ｅ ｈ ａｅ ｉ ａ ｄ ｗ ｔ ｕ ｎ ｔ ｓ ｃ ｓｎ ｉ ｈ ｈ
Ｃｏ ｃｕ ｉｎ： ｅ ｖ ｓ ｕ ｏ ｅ ｉ ｍｉ ｒ ｘｓｓ ｉ ｅｏ ｏ ａ ｃ ｍａ ｗ ｉｈ ｉ ａ ｎ ａ ｏ ａ ｌ ａ ｔｒｉｆｕ ｎ ｉｇ ｐ ｏ ｎ ｓｓｏ ｅ ｎ ｌ ｓｏ Ｔ ａ ｃ ｌｇ ｎ ｃ ｍｉ ｃ ｅ ｉｔ ｎ ｌ ｉｍｙ ｓ ｒ ｏ ， ｈ ｃ ｓ ｎ ｕ ｆｖ ｒ ｂ ｅ ｆ ｃｏ ｌ ｅ ｃ ｎ ｒ ｇ ｏ ｉ ｆｔ ｈ ｙ ｎ ｈ
床和 预后 资料完 整的平滑肌 肉瘤组织切 片 ４ ５例 ， 复习切片明确诊断后进行 Ｃ ３ Ｄ ４和 Ｐ Ｓ双重染色 ， Ａ 证实肿瘤组织 中
人结肠癌细胞中血管生成拟态与肿瘤细胞迁移和侵袭能力的关系
人结肠癌细胞中血管生成拟态与肿瘤细胞迁移和侵袭能力的关系刘见荣;管宇;可飞;李文;罗梅宏;侯风刚【摘要】目的:观察人结肠癌细胞中血管生成拟态(VM)的形成及密度,阐明VM与细胞的迁移、侵袭能力之间的相关性,为结肠癌的临床治疗提供新的切入点和理论依据.方法:体外三维培养人结肠癌细胞株HCT8、HCT116、LS174T和HT29,在倒置显微镜下观察VM形成情况,计算VM密度;采用划痕实验观察4株细胞的迁移能力;Transwell小室法观察4株细胞的侵袭能力;直线相关分析法分析VM密度与肿瘤细胞迁移距离和穿膜细胞数之间的相关性.结果:HCT8和HCT116细胞在体外三维培养条件下均能够形成VM,其密度分别为(6.75±0.957)和(5.75±0.957)个/视野;LS174T和HT29细胞则不能形成VM.划痕实验,HCT8、HCT116和LS174T细胞在图片上的迁移距离分别为(3.833±0.831)、(3.967±0.975)和(0.817±0.333) cm,HT29细胞无迁移趋势.Transwell小室法,HCT8、HCT116、LS174T和HT29细胞在高倍视野下的穿膜细胞数分别为(71.6±4.506)、(22.4±1.517)、(0.6±0.894)和(0.2±0.447)个.VM密度与迁移距离呈正相关关系(r=0.934,P＜0.05),VM密度和Transwell侵袭实验中的穿膜细胞数亦呈正相关关系(r=0.853,P ＜0.05).结论:人结肠癌细胞中存在VM现象,VM可能与结肠癌的迁移、侵袭能力有关联.【期刊名称】《吉林大学学报（医学版）》【年(卷),期】2013(039)006【总页数】6页(P1201-1205,后插5)【关键词】结肠肿瘤;血管生成拟态;三维培养;迁移;侵袭【作者】刘见荣;管宇;可飞;李文;罗梅宏;侯风刚【作者单位】上海中医药大学附属市中医医院肿瘤科,上海200071;上海中医药大学附属市中医医院实验室,上海200071;东南大学医学院病理与病理生理学系,江苏南京210009;上海中医药大学附属市中医医院肿瘤科,上海200071;上海中医药大学附属市中医医院实验室,上海200071;上海中医药大学附属市中医医院肿瘤科,上海200071【正文语种】中文【中图分类】R735.3结肠癌是发生于结肠部位的常见的消化道恶性肿瘤，其发病率占胃肠道肿瘤的第3位[1]，且呈逐年上升趋势。
血管拟态的研究方法
血管拟态的研究方法血管拟态是指在体内或体外模拟血管环境，培育具有血管相似结构的材料或细胞。
血管拟态研究旨在模拟人体血管环境，促进血管新生、血管再生及组织修复等方面的研究。
本文将重点介绍血管拟态的研究方法。
一、动物实验1. 神经管转染法神经管转染法是将具有小时后功能的神经管内充填有成纤维细胞，表达VEGF等刺激新生血管的蛋白质。
神经管置于背侧的皮下脂肪组织中，可使充填的成纤维细胞及VEGF最终生成结构类似于血管的通透的管状物，与背面的血管相连。
2. 内皮细胞迁移法内皮细胞迁移法是将含有内皮细胞的组织移植到体内，如在裸鼠体内移植血管内皮细胞以上的组织，可形成“祖孙血管”，这种血管新生模式不依赖于成纤维细胞的存在，但需要关闭原有血管。
3. 同种异体再造法同种异体再造法是将孕鼠或成年小鼠运用同样复杂的操作培育出一整副或更多子宫组织，通过手术按照准备好的孔洞将子宫组织注入到一个异常处，细胞生长和再生的过程中，向周围输送所需的养分和信号，这种方法通过子宫多能干细胞的母源进行生殖系统再生，在实验大鼠中建立了一种生殖器再生的效果，这种方法已经有一定的应用前景。
二、细胞培养法1. 三维细胞培养法三维细胞培养法是将细胞转移到生物材料或细胞支架上，培植出更具有三维结构的细胞模型，使细胞趋于生物结构与生理行为上更趋于真实的模拟。
2. 微绝缘区培植法微绝缘区培植法是将细胞种植物种子沉降到微绝缘区培养皿中，采用人工振荡处理技术，使实验动物细胞自然生长，增加细胞细微刺激，加速生长的效果，生成的细胞在三维构造中表现出真实成分及异质性。
三、生物材料修复法1. 人工血管2. 规则微米级纳米级沟槽手术刀刻蚀法这种方法要直接对生物材料进行修改，通过增加纳米级微米级沟槽的数目和大小，来使生物材料达到随机和有序梯度型拟态标准，并且具有生物相容性和生物相似性。
3. 生物相容性材料植入术生物相容性材料植入术是通过将生物材料经过特定物理处理后，植入体内，达到修复或替代受损或缺陷的血管或血管组织。
血管生成拟态和马赛克血管与肾癌的靶向治疗
血管生成拟态和马赛克血管与肾癌的靶向治疗邓建华;李汉忠【摘要】Renal cell carcinoma is one of the most common malignant tumors of urinary system. The annual incidence rate is approximately 17.9/100 000 populations, and there is a continually rising trend in number of new diagnosis. Metastatic and high-risk renal cell cancer is associated with a poor prognosis and is resistant to traditional chemotherapy and/or radiotherapy. Although cytokine-based therapied (interferon and interleukin-2 ) have been widely used, their effectiveness remained unsatisfactory due to their low response rates and short survival. Drugs targeting anti-angiogenesis pathways have shown benefits in relapse-free survival. In this review, we introduce the recent advances in the treatment of renal cancer, especially the application of vas-culogenic mimicry and mosaic vessels. Although targeted therapies with anti-angiogenic properties have proposed new treatment criteria for advanced renal cell carcinoma, new drugs or new combinations are needed to improve the clinical efficacy and minimize adverse effects.%肾癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一,年发病率为17.9/10万,有逐年增加趋势.转移性和高危肾细胞癌预后差,且对化疗和/或放疗均不敏感.虽然细胞因子(干扰素和白介素-2)治疗被广泛应用,但因其反应率低和生存期短,故而疗效欠佳.针对抗血管生成途径,运用靶向药物行术前辅助或术后辅助治疗肾细胞癌显著提高了患者的无复发存活率.本文主要综述从基础到临床,尤其是有关血管生成拟态和马赛克血管在肾癌治疗中的一些重要进展.虽然抗血管生成的靶向治疗已确立了治疗转移性肾癌的新标准,但是仍需要新的药物或联用来提高疗效,减少药物相关的毒性.【期刊名称】《中国医学科学院学报》【年(卷),期】2011(033)004【总页数】6页(P462-467)【关键词】肾细胞癌;血管生成拟态;马赛克血管;靶向治疗【作者】邓建华;李汉忠【作者单位】中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院泌尿外科,北京100730;中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院泌尿外科,北京100730【正文语种】中文【中图分类】R737.11随着各种影像学技术的发展，肾癌的检出率越来越高，每年的平均增幅为2%～3%［1］，2008年美国大约有54390例被诊断为肾癌，其中13010例死亡［2］。