猪源耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐表型及其SCCmec基因分型研究

有ｎｕｃ基因和 ｍｅｃＡ 基因进行 ＭＲＳＡ 鉴定；以肉汤稀释法进行 药 物 敏 感 性 试 验；应 用 多 重 ＰＣＲ 方 法 进 行 ＳＣＣｍｅｃ 基 因 分 型；
同时检测杀白细胞素（ＰＶＬ）基因。结果 共计分 离 得 到 １３９ 株 ＳＡ，其 中 ７０ 株 ＭＲＳＡ，ＭＲＳＡ 的 检 出 率 为 ３０．２％ （７０／２３２）。
对截断侧耳类人医新药全部耐药，这也提示我们要防控 动 物 源 耐 药 菌 或 耐 药 基 因 通 过 食 物 链 或 者 环 境 向 人 类 的 传 播 的 潜 在
风险。
关 键 词 ：ＭＲＳＡ；耐 药 性 ；ＳＣＣｍｅｃ 基 因 分 型 ；杀 白 细 胞 素
中 图 分 类 号 ：Ｒ３７８．１
中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目（Ｎｏ．２０１２ＪＢ０９） ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｆｏｏｄ ｃｈａｉｎｓ ｏｒ ｔｈｅ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ．
通 讯 作 者 ：马 志 永 ，Ｅｍａｉｌ：ｚｈｉｙｏｎｇｍａ＠ｓｈｖｒｉ．ａｃ．ｃｎ 作 者 单 位 ：河 北 工 程 大 学 农 学 院 ，邯 郸 ０５６０３８
基因分型显示均为 ＳＣＣｍｅｃⅣｂ型，未检测 到 ＰＶＬ 基 因，药 敏 结 果 显 示 ＭＲＳＡ 除 对 利 奈 唑 胺，万 古 霉 素，阿 米 卡 星 全 部 敏 感
外，对头孢噻呋，庆大霉素，诺氟沙星耐药率分别为７４．３％，６２．９％ 和 ４２．９％，对 阿 奇 霉 素，红 霉 素，氟 苯 尼 考，氯 霉 素，苯 唑 西
ＷＡＮＧ Ｘｕｅ－ｍｉｎ１，ＹＡＯ Ｊｉａｎ－ｎａｎ１，２，ＬＩ Ｂｅｉ－ｂｅｉ ２， ＹＡＮＧ Ｃｈｕａｎ－ｄｉｎｇ１，ＳＨＡＯ Ｄｏｎｇ－ｈｕａ２，ＷＡＮＧ Ｓｈａｏ－ｈｕｉ ２，ＭＡ Ｚｈｉ－ｙｏｎｇ２
（１．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｈｅｂｅｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｈａｎｄａｎ０５６０３８，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ，Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｓｈａｎｇｈａｉ ２００２４１，Ｃｈｉｎａ）
甲 氧 西 林 金 黄 色 葡 萄 球 菌 （Ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ－ｒｅｓｉｓｔ－ ａｎｔ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ，ＭＲＳＡ）目 前 已 经 成 为 医院和社区获得性 感 染 的 主 要 病 原 菌 之 一，它 可 以 引起人的心 内 膜 炎、肺 炎、菌 血 症 等 致 死 性 感 染 。 ［１］ 近年来，ＭＲＳＡ 的临床分离率呈明显上升趋势，并 且对临床使用的多种常用抗菌药物表现出交叉耐药 和多重耐 药 的 特 点，这 给 临 床 治 疗 带 来 了 严 峻 挑 战。ＭＲＳＡ 的耐 药 机 制 主 要 是 获 得 了 外 源 性 甲 氧 西林 决 定 子 基 因 （ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔ Ａ，ｍｅｃＡ ），该 基 因 编 码 青 霉 素 结 合 蛋 白 ２α，造 成 对所有β－内酰胺类药物耐药。而 ＳＣＣｍｅｃ是一种可 移动的 遗 传 元 件，该 元 件 还 携 带 除 ｍｅｃＡ 基 因 外 的 其他抗生素 耐 药 基 因，造 成 多 重 耐 药。ＳＣＣｍｅｃⅠ， Ⅱ，Ⅲ型 主 要 存 在 于 医 院 获 得 性 ＭＲＳＡ（Ｈｏｓｐｉｔａｌ－ ａｃｑｕｉｒｅｄ／ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ＭＲＳＡ，ＨＡ－ＭＲＳＡ）中 ，该 菌 种 中 ｍｅｃＡ 复 合 体 的 下 游 带 有 多 个 质 粒 及 转 座 子。 ＳＣＣｍｅｃＩＶ 型 和 ＳＣＣｍｅｃＶ 型 通 常 存 在 于 社 区 获 得 性 ＭＲＳＡ（Ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ－ａｃｑｕｉｒｅｄ／ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ＭＲＳＡ， ＣＡ－ＭＲＳＡ）和非 多 重 耐 药 ＭＲＳＡ 菌 株 中，其 分 子 较小，除 ｍｅｃＡ 外几乎不携带其他多重耐药基因，易 移动并通过质粒或噬菌体传播至不同遗传背景的葡 萄球菌中，容易 在 人 群 中 传 播 和 定 植。 杀 白 细 胞 素 （Ｐａｎｔｏｎ－Ｖａｌｅｔｉｎｅ Ｌｅｕｋｏｃｉｄｉｎ，ＰＶＬ）是 金 黄 色 葡 萄 球菌产生 的 一 种 可 以 导 致 坏 死 性 感 染 的 细 胞 外 毒 素，严重时可以引起人的坏死性肺炎等 。 ［２］ 近 年 来， ＭＲＳＡ 流行病学发生很 大 变 化，出 现 了 另 一 类 导 致 人类严重 感 染 的 牲 畜 相 关 性 ＭＲＳＡ（Ｌｉｖｅｓｔｏｃｋ－ａｓ－ ｓｏｃｉａｔｅｄ ＭＲＳＡ，ＬＡ－ＭＲＳＡ），已 有 多 篇 文 献 报 道 ＬＡ－ＭＲＳＡ 能 够 在 猪 和 人 之 间 传 播［３－５］，所 以 猪 源 ＭＲＳＡ 引起 了 全 世 界 的 广 泛 关 注。 本 研 究 通 过 调 查上海地区猪源 ＭＲＳＡ 的流行状况、耐药谱特征及 其 ＳＣＣｍｅｃ基因分型特点，阐明上海地区猪源 ＭＲ－ ＳＡ 的流行 情 况 及 其 主 要 的 流 行 型，以 期 指 导 猪 场 合理用药，同时为动物源 ＭＲＳＡ 向人传播的风险评 估提供科学依据。
文 献 标 识 码 ：Ａ
文 章 编 号 ：１００２－２６９４（２０１３）０９－０８４１－０５
Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ＳＣＣｍｅｃｔｙｐｉｎｇ ｏｆ ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｆｒｏｍ ｓｗｉｎｅ
２０１３，２９ （９）
中国人兽共患病学报
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｚｏｏｎｏｓｅｓ
ＤＯＩ：１０．３９６９／ｃｊｚ．ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－２６９４．２０１３．０９．００３
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
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猪源耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药表型 及 其 ＳＣＣｍｅｃ 基 因 分 型 研 究
王 雪 敏１ ，姚 建 楠１，２ ，李 蓓 蓓２ ，杨 传 定１ ，邵 东 华２ ，王 少 辉２ ，马 志 永２
ＡＢＳＴＲＡＣＴ：Ｔｈｅ ｐｕｒｐｏｓｅ ｏｆ ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｔ ｓｔｕｄｙ ｉｓ ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ａｎｄ ＳＣＣｍｅｃｔｙｐｉｎｇ ｏｆ ｍｅｔｈｉｃｉｌ－ ｌｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ （ＭＲＳＡ）ｉｓｏｌａｔｅｓ ｆｒｏｍ ｓｗｉｎｅ ｉｎ Ｓｈａｎｇｈａｉ ａｒｅａｓ．Ａ ｔｏｔａｌ ｏｆ ２３２ｓａｍｐｌｅｓ ｏｆ ｓｗｉｎｅ ｎａｓａｌ ｓｗａｂｓ ｗｅｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ５ｓｗｉｎｅ ｆａｒｍｓ ａｎｄ １ｓｌａｕｇｈｔｅｒｈｏｕｓｅ ｉｎ Ｓｈａｎｇｈａｉ ａｒｅａｓ．Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ７．５％ ｓｏｄｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ ｂｒｏｔｈ ａｎｄ ＣＨＲＯＭ ａｇａｒ．Ａｎｄ ＭＲＳＡ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｗｅｒｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｂｙ ｄｕｐｌｅｘ ＰＣＲ ｗｉｔｈ ｎｕｃ ｇｅｎｅ ａｎｄ ｍｅｃＡ ｇｅｎｅ．Ｍｉｎｉｍｕｍ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ（ＭＩＣｓ）ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ ｗｅｒｅ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｂｙ ｂｒｏｔｈ ｄｉｌｕｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｔｈｅ ｇｅｎｏ－ ｔｙｐｅｓ ｏｆ ｔｈｅｓｅ ＭＲＳＡ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ ｃａｓｓｅｔｔｅ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ ｍｅｃ （ＳＣＣｍｅｃ）．Ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ａ ｔｏｔａｌ ｏｆ １３９ Ｓ．ａｕｒｅｕｓ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ，ａｎｄ ７０ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｆｏｒ ＭＲＳＡ ａｎｄ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒａｔｅ ｗａｓ ３０．２％ （７０／２３２）．Ｔｈｅｓｅ ＭＲＳＡ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｔｏ ｂｅ ＳＣＣｍｅｃⅣｂ ｔｙｐｅ ａｎｄ ｎｏ ＰＶＬｇｅｎｅ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ．Ａｌｌ ｏｆ ｔｈｅ ＭＲＳＡ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｗｅｒｅ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ ｔｏ Ｌｉｎｅｚｏｌｉｄ，Ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ ａｎｄ Ａｍｉｋａｃｉｎ．Ａｎｄ １００％ ｏｆ ｔｈｅｓｅ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｔｏ Ａｚｉｔｈｒｏｍｙｃｉｎ，Ｅｒｙｔｈｒｏｍｙｃｉｎ，Ｃｈｌｏｒａｍ－ ｐｈｅｎｉｃｏｌ，Ｆｌｏｒｆｅｎｉｃｏｌ ａｎｄ Ｏｘａｃｉｌｌｉｎ．Ｔｈｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｒａｔｅｓ ｏｆ Ｃｅｆｔｉｏｆｕｒ，Ｇｅｎｔａｍｉｃｉｎ ａｎｄ Ｎｏｒｆｌｏｘａｃｉｎ ｗｅｒｅ ７４．３％，６２．９％ ａｎｄ ４２．９％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｉｎｔｅｒｅｓｔｉｎｇｌｙ，ａｌｌ ｔｈｅ ＭＲＳＡ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｗｅｒｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｔｏ ｐｌｅｕｒｏｍｕｔｉｌｉｎ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ （Ｔｉａｍｕｌｉｎ，Ｖａｌｎｅｍｕｌｉｎ ａｎｄ Ｒｅｔａｐａｍｕｌｉｎ）．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｓｗｉｎｅ ＭＲＳＡ ｗｅｒｅ ＳＣＣｍｅｃⅣｂ ａｎｄ ｗｅｒｅ ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｓｔｒａｉｎｓ ｉｎ Ｓｈａｎｇｈａｉ ａｒｅａｓ，ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙ，ａｌｌ ｏｆ ｔｈｅ ＭＲＳＡ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｗｅｒｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｔｏ ｐｌｅｕｒｏｍｕｔｉｌｉｎ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ （Ｒｅｔａｐａｍｕｌｉｎ）．Ｔｈｅｓｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ａｌｓｏ ｓｕｇ－ ｇｅｓｔ ｔｈａｔ ｗｅ ｓｈｏｕｌｄ ｐｒｅｖｅｎｔ ｔｈｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｒ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｇｅｎｅｓ ｆｒｏｍ ａｎｉｍａｌ ｔｏ ｈｕｍａｎ，ｗｈｉｃｈ ｃｏｕｌｄ ｂｅ
林的耐药率均为１００％，值得注意的，本研究中分离的全 部 ＭＲＳＡ 都 对 截 短 侧 耳 类 药 物 泰 妙 菌 素、沃 尼 妙 林 以 及 人 医 新 药 瑞