比色法测定银杏酚酸的含量
复方银杏叶制剂中总银杏酸含量测定方法的优化
复方银杏叶制剂中总银杏酸含量测定方法的优化郑云枫;阚宏飞;杨阳;严辉;潘苏华;郭海英【摘要】目的:优化复方银杏叶制剂中银杏酸(GA)的测定方法.方法:以白果新酸对照品结合总银杏酸对照品定位,采用HPLC测定复方银杏叶制剂中5种银杏酸成分总含量,并比较石油醚提取/甲醇溶解、甲醇提取/氯仿萃取和甲醇提取/正己烷萃取法对制剂中银杏酸含量测定结果的影响;进一步以甲醇浓度、溶剂体积、提取时间为影响因素,以总银杏酸含量测定值为评价指标,通过Box-behnken响应面法分析与优化测定方法.结果:甲醇提取/正己烷萃取法对复方银杏叶制剂中总银杏酸的提取精制效果最好.响应面法分析显示,提取溶剂及溶剂体积对总银杏酸含量值具有显著性影响(P<0.01),最佳提取条件:提取溶剂为85％甲醇,溶剂体积为100 mL,提取时间为1.8 h,在此条件下方法的平均回收率达97.7％,精密度RSD为1.42％.结论:HPLC简便可行,测定结果准确,可用于测定银杏叶提取物及复方制剂中银杏酸的含量测定.【期刊名称】《中国现代中药》【年(卷),期】2018(020)010【总页数】6页(P1282-1287)【关键词】复方银杏叶制剂;总银杏酸;含量测定;响应面曲线法;Box-Behnken设计【作者】郑云枫;阚宏飞;杨阳;严辉;潘苏华;郭海英【作者单位】南京中医药大学,江苏南京 210023;南京中医药大学,江苏南京210023;南京中医药大学,江苏南京 210023;南京中医药大学,江苏南京 210023;南京中医药大学,江苏南京 210023;南京中医药大学,江苏南京 210023【正文语种】中文银杏叶制剂中残留银杏酸（ginkgolic acid，GA）的问题一直受到国内外学者的关注[1]，它被认为是银杏叶提取物（EGb）及制剂中的主要有害物质，可引起肝损伤、免疫毒性、胚胎毒性及严重的过敏反应[2-3]。
为了保障银杏叶制剂使用的安全性，所有EGb及其制剂必须建立相应的银杏酸检测方法，并严格限定其含量[4-5]。
举例说明黄酮的提取分离方法
举例说明黄酮的提取分离方法组长：宁组员：翟雪王璐璐子涵子惠罗春雨红成1.提取方法1.1热水提取法热水提取法一般仅限于提取苷类. 在提取过程中要考虑加水量、浸泡时间、煎煮时间与煎煮次数等因素. 此工艺成本低、安全,适合于工业化大生产。
以水做溶剂,同时提高浸提温度、延长浸提时间和增加液料比(60倍) ,可以明显提高芦丁的产率。
实例桑叶：采用热水提取法测定桑叶中各有效成分含量，发现黄酮类化合物含量为1%以上,其中霜后桑叶黄酮类化合物含量最高为1.54% ,其次是晚秋桑叶,春季桑芽和后期桑叶含量最低。
甘草：过去甘草黄酮的提取主要为水提法,其主要原理通过甘草粉与水按一定配比,加热混合至80～95 ℃浸提甘草粉,利用甘草黄酮的水溶性进而提取甘草黄酮。
此法虽然要求设备简单,但因提取杂质多、提取时间长、提取液存放易腐败变质、后续过滤操作困难、收率较低等缺点,现已不常使用。
1.2有机溶剂萃取法其原理是利用黄酮类化合物与混入的杂质极性不同,选用不同的溶剂萃取。
常用的有机溶剂有甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等,一般采取乙醇为提取溶剂。
高浓度的乙醇(如90 %～95 %) 适于提取苷元,浓度60 %左右的乙醇适于提取苷类。
提取次数一般为2～4 次,提取方法有热回流提取和冷浸提取两种方式。
实例桑叶：使用乙醇提取桑叶中总黄酮的最正确工艺条件为：乙醇的浓度为70%，料液比为1:15，在80℃的条件下浸泡3h。
使用多种有机溶剂提取发现桑叶中黄酮类化合物的最正确提取溶剂是60%丙酮。
西芹：使用无水乙醇为提取剂，按西芹鲜重与提取剂的比例(W/ V) 1∶2 ,在80 ℃下回流提取2～4h ,制备西芹总黄酮。
银杏叶：从银杏叶中提取总黄酮时, 随乙醇浓度的增加总黄酮提取率逐渐上升, 当乙醇浓度增至70% 时提取率最高, 之后反而下降, 应选用70% 的乙醇作浸提剂最正确。
生：生黄酮提取用40倍原料的90%甲醇溶液, 在60 ~ 65℃条件下提取4 h 为其优化组合, 而其试验组合中以用40倍原料的75%甲醇溶液,在60~ 65 ℃条件下提取2 h的提取效果最好。
白补药酚酸含量及抗氧化活性的测定
白补药酚酸含量及抗氧化活性的测定曹晖【摘要】Tanshinol was as control,phenolic acids of Salvia scapiformis and ·OH clearance were de-tected,and antioxidant activity of tanshinol of Salvia scapiformis was evaluated. The result showed that the content of phenolic acids of Salvia scapiformis in Leigongshan was 77 . 25 mg · g-1 . The method was fast,convenient and reliable,can be used to detect phenolic acids of Salvia scapiformis. ·OH clearance of Salvia scapiformis was significantly higher than VC and BHT. EC50 was respectively 2.99μg·mL-1 ,4. 82 μg·mL-1 and 9. 12 μg·mL-1 . The antioxidant activity of phenolic acids of Salvia scapiformis was high,can be developed.%以丹参素钠为对照，采用紫外分光光度法测定雷公山野生白补药酚酸的含量，并通过对羟基自由基（·OH）清除率的测定，评价了白补药酚酸的抗氧化活性.实验结果表明，雷公山野生白补药酚酸的含量为77.25 mg·g-1，该测定方法快速、简便、可靠，可用于白补药酚酸的含量测定.对羟基自由基（·OH）的清除率明显高于阳性对照VC和BHT，EC50分别为2.99μg·mL-1，4.82μg·mL-1和9.12μg·mL-1，说明雷公山野生白补药酚酸抗氧化活性较高，有一定的开发价值.【期刊名称】《凯里学院学报》【年(卷),期】2016(034)006【总页数】4页(P64-67)【关键词】白补药;抗氧化能力;丹参素;酚酸;紫外分光光度法【作者】曹晖【作者单位】凯里学院，贵州凯里 556011【正文语种】中文白补药为唇形科植物花茎状丹参(Salvia scapiformis)的全草，为多年生的草本植物.可治疗虚弱干瘦，劳伤盘骨，头目眩晕[1]，主要形态特征与丹参相同[2].有文献报导[3]，白补药的水相成分中含有酚酸类及糖类物质.酚酸是一类广泛存在于植物体内的次生代谢天然产物，具有多种生物活性、抗病作用，对人类抗衰老、抗癌防癌有显著作用，是一种非常有潜力的抗氧化剂资源[4 - 5].随着自由基与疾病关系的深入研究，人们对抗氧化剂的关注也不断增强.如心脑血管病、癌症、关节炎、衰老等疾病的发生都和自由基有关[6].同时也随着科学的进步以及一次性资源的逐步消耗和环保要求的升高，合成抗氧化剂的危害也渐渐凸现[7].植物酚酸是一类天然的强还原性物质，在自由基清除方面具有比常用抗氧化剂强的特性，并且植物酚酸作为一类贮存厚实、可再生的绿色资源，故在食品、药物、日化等领域将有广阔的应用前景.雷公山海拔2 178.8 m，属亚热带季风性湿润气候区，被联合国教育、科学及文化构造称为“现今人类留存最好的一块未受污染的生态文明净地”.本研究以贵州雷公山野生白补药为研究对象，以丹参素钠为对照品，采用紫外分光光度法，首次对白补药酚酸含量进行测定，并以VC和BHT为对照，测定白补药酚酸对羟基自由基(·OH) 的清除率，从而评价白补药酚酸的抗氧化活性，为开发本地白补药提供参考.1.1 实验材料白补药于2016年6月采自贵州雷公山自然森林保护区，洗净、晾晒、粉碎过100目筛，备用.1.2 实验试剂丹参素钠标准样品(上海金穗生物科技有限公司)，硫酸亚铁、无水乙醇、双氧水、石油醚均为分析纯，水为蒸馏水.1.3 实验仪器紫外-可见光谱仪(UV - 2550型，日本岛津公司)；常压微波合成仪(MAS - Ⅱ，上海新仪微波化学科技有限公司)；电子天平(FA1004，上海良平仪器仪表有限公司)；超声波清洗机(WH - 300，济宁万和超声电子设备有限公司)；循环式真空泵(SHZ - D(III)，巩义市科瑞仪器有限公司)；万能高速粉碎机(北京永兴仪器有限公司).1.4 样品处理及提取液制备称取10.0 g白补药，置于索式提取器中，以1∶10石油醚回流11 h脱脂、脱色，过滤，挥干得白补药粉末.参考王金等文献[8]，稍作修改.精密称取1.0 g白补药置于100 mL锥形瓶中，加入40.0 mL 35%乙醇液浸泡2 min.设定功率400 W，于75 ℃微波提取5 min，抽滤，加入35%乙醇补足40.0 mL.用移液管精密吸取0.3 mL滤液置于25 mL容量瓶，定容，得白补药酚酸提取液，备用.1.5 标准溶液的配制精密称取烘干至恒重的125 mg丹参素钠标准品，加入少量的无水乙醇溶解，全部转移至50 mL容量瓶并用无水乙醇定容，从中精密吸取5.00 mL丹参素钠标准溶液置于25 mL容量瓶中，定容，摇匀，则可得到浓度为500 μg·mL-1的丹参素钠标准溶液.备用.1.6 最大吸收波长的确定精密移取丹参素钠标准溶液以及白补药酚酸提取液各2.00 mL置于25 mL容量瓶中，无水乙醇定容、摇匀.将对照品和样品在200～800 nm处进行光谱扫描，二者均在282 nm处有最大吸收[9]，故以282 nm为测定波长.1.7 白补药中丹参素含量的测定平行称量5份脱脂、脱色的白补药粉未，按1.4制成提取液，以2.1项方法分别测定吸光度，并代入标准曲线回归方程计算出白补药中酚酸含量(以丹参素钠计). 1.8 羟基自由基(·OH) 清除率测定参照范现丽[10]等的研究，取7.5 mmol·L-1FeSO4溶液，9 mmol·L-1水杨酸-乙醇溶液和1% H2O2各1 mL于10 mL容量瓶中，然后分别加入1 mL 6个不同浓度的白补药酚酸样品溶液，用蒸馏水定容，混合均匀，在510 nm处测定其吸光度.取等体积的蒸馏水代替白补药样品溶液作空白对照，用与样品溶液酚酸同浓度的 VC 和 BHT 溶液作阳性对照.以样品溶液浓度为横坐标，自由基清除率为纵坐标作图分析样品的自由基清除能力.计算公式为：K(%)=[A1-(A3-A2)]/ A1×100%，式中，K表示自由基的清除率；A1 表示空白的吸光度；A2 表示本底的吸光度；A3 表示样品溶液和羟基自由基溶液混合液的吸光度.2.1 丹参素钠标准曲线确定用吸量管精确移取0.0，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 mL丹参素钠标准溶液置于25 mL容量瓶，定容，用无水乙醇做空白.以吸光度为纵坐标，丹参素钠浓度(μg·mL-1)为横坐标，绘制标准曲线.将其结果进行线性回归得回归方程：y=0.013 82x-0.004 43，相关系数R=0.999 8.丹参素钠在10～50 μg·mL-1之间线性关系良好.2.2 白补药中丹参素含量由1.7项操作，首次测得雷公山白补药中丹参素的含量为77.25 mg·g-1.将白补药酚酸提取液浓缩后稀释成不同浓度(10，30，60，90，120 μg·mL-1)，对白补药酚酸对羟基自由基(·OH)清除率测定提供所需的样品溶液.2.3 精密度、稳定性和回收率试验精密度试验：精密称取1.4提取液1.0 mL置于25 mL容量瓶中，定容.对同一供试品溶液，以282 nm为测定波长，连续测定6次，计算RSD.试验结果见表2.由表2知，RSD为0.21%.表明了该方法具有较高的精密度，达到了样品分析的要求.稳定性试验：精密移取1.4提取液1.0 mL置于25 mL容量瓶中，定容.每隔10 min测定1次吸光度，记录90 min内的吸光度，计算RSD.试验结果见表3.由表3知，白补药酚酸提取液在90 min内吸光度测定值的 RSD 为0.5%，表明白补药酚酸提取液在90 min内稳定，说明该方法稳定性较好.回收率试验：分别平行准确移取6份已知浓度(637.7 μg·mL-1)的2.0 mL提取液置于25 mL容量瓶，并加入3 mL 500 μg/mL丹参素标准溶液，测定吸光度并计算平均回收率和RSD.试验结果见表4.由回收率试验结果表4知，该方法的平均回收率为99.2%， RSD为1.28%，符合测试要求.2.4 白补药总对羟基自由基(·OH)的清除通过白补药酚酸、VC 和 BHT 对羟基自由基清除率试验，考察白补药酚酸提取液抗氧化能力，结果见表5.从表5知，在选定的浓度范围内(10～120 μg·mL-1)，随着白补药酚酸浓度的增大，白补药酚酸、VC和BHT对羟基自由基(·OH)清除率增大，且呈现线性关系，线性拟合程度良好.计算得白补药酚酸提取液、VC 和 BHT 清除羟基自由基(·OH) 50% 时的有效浓度，EC50分别为2.99 μg·mL-1，4.82 μg·mL-1和9.12 μg·mL-1，表明白补药酚酸提取液的抗氧化活性比 VC 和 BHT 强，是一种抗氧化活性较强的天然抗氧化剂.植物酚酸的测定方法有Folin - Ciocalteu比色法[11]、紫外分光光度法[12]、高压液相色谱分析法[13]、RRLC - UV法[14]等，本研究首次将紫外分光光度法用于雷公山白补药酚酸的测定，雷公山白补药酚酸含量为77.25 mg·g-1，并对该方法进行精密度、稳定性和加标回收率等方法学考察，结果显示紫外分光光度用于测定白补药酚酸具有良好的稳定性、精密度、可靠性.本研究以VC 和 BHT为阳性对照，采用羟基自由基(·OH)清除率对白补药酚酸的抗氧化活性进行了评价.实验结果表明，白补药酚酸对羟基自由基(·OH) 清除率与其浓度呈正相关.白补药酚酸、VC 和 BHT 清除羟基自由基(·OH) 50% 时的有效浓度，EC50分别为2.99 μg·mL-1，4.82 μg·mL-1和9.12 μg·mL-1，结果显示白补药酚酸的抗氧化活性比 VC 和 BHT 强，具有良好的抗氧化活性.本测定为雷公山白补药的开发提供了理论基础.【相关文献】[1] 肖艳华，任浩，帅维.以气质联用技术对白补药中挥发性成分的分析[J]．武汉工程大学学报，2014，36(2)：11 - 13．[2] 国家药典委员会．中华人民共和国药典:第1部[M]．北京：化学工业出版社，2005．[3] 帅维．白补药化学成分的研究[D]．湖北：武汉大学，2013．[4] 鲁玉妙，马惠玲．植物多酚SCI文献计量及生物活性研究热点分析[J]．食品科学，2013，34(23)：375 - 383．[5] 沈潘潘，常丽新，贾长虹．植物抗氧化剂的研究现状与展望[J]．河北联合大学学报(自然科学版)，2013，35(1)：77 - 82．[6] 郑晶泉．抗氧化剂抗氧化实验研究进展[J]．国外医学：卫生学分册，2000，27(1)：37 - 40．[7] 吕双双，李书国．植物源天然食品抗氧化剂及其应用的研[J]．粮食食品科技，2013，21(5)：60 - 65．[8] 王金，赵永明，贾英华，等．土木香中总酚酸和绿原酸的微波辅助提取工艺优选[J] ．中国实验方剂学杂志，2014，20(4)：22 - 24．[9] 夏苗芬，周双林．紫外分光光度法测定香丹注射液中水溶性酚和酚酸的总含量[J]．科技通报，2004，20(6)：549 - 551.[10] 范现丽，王高，王宏，等．香桃木叶片粗多酚抗氧化活性的研究[J]．植物研究，2009，29(3)：375 - 379．[11] 邱涛涛，王华，毛世红，等．石榴叶总酚测定及提取工艺研究[J]．食品与科学，2009，30(11)：131 - 132．[12] 雷银瓶，徐冠玲，谢梦，等．紫外分光光度法测定滇白珠中的总酚酸[J]．华西药学杂志，2015，30(1)：124 - 125．[13] 田晓清，王锡昌，吴文惠，等．高压液相色谱分析法测定大佛指银杏酚酸含量[J]．营养学报，2010，32(6)：608 - 609．[14] 王莉，赵明波，何文顺，等．RRLC - UV法同时测定丹参中酚酸类成分的含量[J]．中国中药杂志，2009，34(19)：2481 - 2483．。
银杏酚酸的提取分离方法_检测方法_药理作用及制剂研究进展_付强强
中国药房2017年第28卷第4期China Pharmacy 2017V ol.28No.4Δ基金项目：山东省重点研发计划项目（No.2015GSF 119013）；临沂大学2015年大学生创新创业训练计划项目（No.43、44）＊学士。
研究方向：药物新剂型与新技术。
E-mail ：932291822@#通信作者：讲师，硕士。
研究方向：药物新剂型与新技术。
E-mail ：zhenshengao@ 银杏酚酸属漆酚类物质[1]，其为6-烷基或6-烯基水杨酸的衍生物，广泛存在于银杏叶、外种皮和种仁中，主要存在于银杏的外种皮内，可分为银杏酸（白果酸、氢化白果酸、氢化白果亚酸）、银杏酚、银杏二酚等[2-3]。
银杏酚酸具有免疫毒性、细胞毒性和致敏性，是银杏提取物及其制剂中引起中毒的主要物质[4-5]。
潘红梅等[6]采用高效液相色谱（HPLC ）法检测银杏酚酸粗提物时发现，银杏酚酸主要由C 13∶0、C 15∶1、C 17∶2、C 15∶0、C 17∶1等5种酚酸组分组成，银杏外种皮、叶以及种仁中的银杏酚酸种类一致，但是色谱图中还有未知的小峰，有待于进一步分析确定其成分。
笔者以“银杏酚酸””“提取”“药理”“检测”“Ginkgo phenol acid ”“Ginkgolic acids ”等为关键词，组合查询2000年1月－2016年6月在PubMed 、Springer 、Sci-enceDirect 、中国知网、万方、维普等数据库中的相关文献。
结果，共检索到相关文献321篇，其中有效文献54篇。
现对银杏酚酸的提取分离方法、检测方法、药理作用及其制剂研究等进行综述，以期为银杏的综合利用和银杏酚酸的进一步研究提供参考。
1银杏酚酸的提取分离方法银杏酚酸的提取分离方法有回流法、微波法、层析法、树脂吸附法和超临界CO 2萃取法等。
1.1回流法和微波法张衡等[7]采用回流法提取银杏酚酸，将银杏外种皮预处理，称取一定量的银杏外种皮粉末于烧瓶中，按照一定的料液比加入萃取溶剂，恒温水浴回流提取，得到银杏酚酸粗提物。
银杏叶提取物中脱除银杏酚酸的工艺研究
银杏是我们 国家古老珍 稀树种之一 ， 具 有“ 活化石 ” 之美 誉， 对银杏 叶的研究始 于上世纪 ６ ０年代 ， 银杏 叶提取 物 中的 黄酮醇苷和萜类 内酯分别具有改善微循环 、 抗氧化 、 保护血管 以及改善记忆功能 、 增强抵抗 力等药理作用 ， 各 国药物研究者 对此兴 趣极大 ， 目前 已经上市 的制剂 主要 有片剂 、 滴丸 、 注射 液， 但是 由于其提取物中含有银杏酚酸类物质 ， 此类物质具有 强致敏性和细胞毒性… ， 也 是导致银杏 叶制剂 发展 中受到制约 的主要因素 。而在 欧盟地 区， 银杏 叶提取物 中银杏酚酸的限量 为 ５ ￣ ｇ ／ ｇ ， 特 别是 德 国， 德 国是 世界上最早 对银杏酚 酸的 限量 做 出规定的国家之一。中国的银杏叶制剂起步较晚 ， 为了与国 际接轨 ， ２ ０ １ ０版《 中国药 典》 规定 银杏酚酸的限量 为 ｌ Ｏ ｉ ｘ ｇ ＠２ ￣ 。 本 文就脱 酸工艺做 出探索 ，主要 目的是找到一个能保证银 杏 酚 酸 的 限量 在 ５ ￣ ｇ ／ ｇ以下 的 生 产 工 艺 ，至 于生 产 成 本 方 面 ， 未 有 过 多研 究 。
６ ２
北方药学 ２ ０ １ ４年第 １ １ 卷第 ４期
银 杏叶提 取物 中脱除银杏酚酸 的工艺研 究
朱 斌 刘 芬 严兆华 （ 南昌 大学 南昌 ３ ３ ０ ０ ３ １ ）
摘要 ： 目的 ： 探 索一条脱除银 杏酚酸的工艺， 使银 杏酚酸的含量能够控制在 ５ Ｐ Ｐ Ｍ 以下 。 方 法： 乙醇提取后大孔吸附树脂纯化 ， 最 后 用有机溶 剂萃取 。结果 ： 银杏叶八 月采摘 ， 银杏叶粉碎 ， 过 １ ０目筛， 用６ 倍量 ７ ０ ％乙醇加 热回流 ２次 ， 每 次大约 ２小时， 收集 滤液 ， 过Ｄ Ａ ２ ０ １ 或者 Ｈ Ｐ Ｄ 一 ５ ０ ０ ０树 脂 ， 柱 温控 制 在 室 温条 件 下 ， 流速选择 ２ Ｂ Ｖ ／ ｈ ， 收 集不超过 ３ ． ５倍 上 柱 量 的 溶 液 ， 经 乙酸 乙酯 萃取 ， 银杏酚酸的含 量分别为 ２ ． ５ ５ Ｐ Ｐ Ｍ， １ ． ４ ８ Ｐ Ｐ Ｍ。结论 ： 银杏酚酸的含量能够控制在 ５ Ｐ Ｐ Ｍ 以下 ， 符合 实验设计要 求。由于银 杏
银杏酚酸的提取
将试验结果进行方差分析可知， 6 个因子对浸提 效果的影响与单因子试验结果基本相同。各因子对浸 提效果影响的大小顺序为：溶剂用量（因子 C） G 提取 （因子 ,） （因子 H） （因子 次数 G 提取温度 G 提取时间 。溶剂用量对银杏酚酸的提取达极显著水平，增加 I） 溶剂用量有利于银杏酚酸的溶出，提取次数对银杏酚
中图分类号： X,)*1 )0 文献标识码： P 文章编号： %--* . !!/- 2 *--/ 3 -/ . --!* . -"
（OE@LD5QE65QFR’ ） 银杏 外种皮是银杏果仁的皮层， 即种子硬壳外面部分， 我国每年有大量的银杏外种皮被 废弃， 未被开发利用， 既浪费资源又污染环境， 而且皮肤 接触它常引起漆毒样皮炎 。 银杏外种皮内含有t; #&# $> ($! (> $"/ $> 0"% $> /"1 %> &#$ &> !0" (> &10 0> 0%! (> 0%$ (> #$/ &> (%" !> $#" 0> 1!/ &> 1/0 &> "/$
且大孔树脂成本低， 效率高， 稳定性好， 容易再 $’ #&) ， 生， 因而是较好的供选树脂。 %’ & 洗脱剂浓度对树脂精制银杏酚酸的影响 提取液经浓缩后上大孔吸附树脂进行洗脱，所 用的洗脱剂为乙醇 * 水溶液。用不同浓度乙醇和不 同方式洗脱，收集与 ") 三氯化铁溶液反应呈阳性 的洗 脱液 （紫外扫描 监控） ，浓 缩干燥 后用 +,-.
银杏外种皮提取物对霉菌的抑制作用
银杏外种皮提取物对霉菌的抑制作用
姜晓明, 赵献军*
( 西北农林科技大学动物科技学院 , 陕西杨凌 712100)
*
摘
要 : 研究银杏外种皮粗提物对霉菌的抑制作用 , 为银杏外种皮的开发利用提供依据。用不 同浓度的 乙醇
Abstract: F or pro viding w it h basis in developing Ginkg o biloba sarco test a , f unct ion of repr ession of crude ex t ract of Ginkgo on f ungi w as st udied. T he crude ex tr act w as obt ained by diff er ent density et h anol f or ref lux ex t ract ion to ex opleura. . Aft er m easured crude ext ract 10mL o ff exact ly , t orref ied, dissolved by same v olume of m et hano l and dilut ed 1000 t imes, ginkg olic acid is quant it at ive assaied by 721 - spect ropho to metr y w it h 310mm W/ L to kno w t he densit y o f alcohol w hich GA is max imal in the crude ex t ract in , and 100 gram Ginkgo biloba sarcot est a is abst ract ed using t his densit y, adopt ing the colo nies gro w th diamet er measurem ent met ho d t o mensurat e 14 kinds fungis o f f unct ion of repression. T he result sho w ed t hat t he ef fect t hat dist il ling Ginkg o testa t hrough using 80% et hanol is t he best w ay , t he cr ude ext ract of Ginkgo biloba sar cot est a have visible f unct ion of repressio n t o A . f um igatus, P. p i ceum , A . am stel odami , P . tard um A . v ersi col or , A . ochraceus, F. monil if orme var . subgl utinans, F . moni li f orm e- judg em ent st andard is 80% , f unct ion of repression t o R . Std onf er - judge m ent st andard is 60% and < 80% . Key words: Ginkgo biloba sarcot est a; Ginkgo lic acid; Middew ; Ant if ung al act ivit y 银杏为银杏科银杏属多年生落叶乔木 , 又名 白果、 公孙树, 是我国特有的树种。银杏外种皮是 种子硬壳外面的肉质部分 , 是良好的杀虫植物资 源, 对多种害虫和病菌有抑制作用。近年来, 随着 银杏种植面积的扩大 , 银杏外种皮数量也急剧增 加, 新鲜银杏外种皮被视为废物丢弃, 造成环境污 染。因此 , 深入开展银杏外种皮的研究 , 不但可做 到废物利用, 变废为宝, 而且还可防止环境污染,
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比色法测定银杏酚酸的含量
1.实验材料
1.1仪器
电子分析天平；紫外分光光度仪；恒温干燥箱
1.2药品
银杏酚酸的标准对照品；晒干、密封的银杏外种皮；无水甲醇；三氯化铁-铁氢化钾试剂
2.实验方法
2.2.1 制备银杏酚酸样品溶液
取晒干、密封保存的银杏外种皮适量洗净，置于70℃恒温干燥箱下干燥24h后研成粉末状，取该样品5.0g,200ml80%乙醇80℃加热回流10h过滤。
滤液浓缩至干，甲醇溶解定容至10ml,即为银杏酚酸样品。
2.2.2检测波长的确定
精密称量银杏酚酸标准品1.0mg，加入无水甲醇溶解并定容至10ml。
取适量该溶液于1cm比色皿中，以甲醇为参照系，进行紫外光谱扫描。
以光谱图上的特征吸收峰（310nm）为检测波长。
2.2.3 比色测定
取上述标准品溶液0，0.2，0.5.1，2，5ml,加入甲醇定容至10ml,分别编号为1，2，3，4，5，再吸取各标准液2ml,加入三氯化铁-铁氢化钾试剂显色10min,在310nm条件下紫外测定。
以吸光度为纵坐标，溶液浓度为横坐标，绘制出标准曲线。
2.2.4 精密度测定
吸取上述标准品溶液的4号溶液2ml ,同标准曲线的制作方法，加入显色剂进行比色测定,重复6次,测出吸光值,计算RSD。
2.2.5稳定性测定
吸取银杏酚酸样品溶液2ml ,同标准曲线的制作方法加入显色剂,比色测定,重复6次,测出吸光值,计算RSD。
2.2.6加样回收率试验
取经测定已知浓度为x的药材提取液6 份,每份10ml ,分别加入丹酚酸B标准品2.0 , 2.0 , 2.5 , 2.5 , 3.0 ,3.0mg ,吸取2ml ,同标准曲线的制作方法加入显色剂,比色测定,测定结果,算出平均回收率。