多功能酶标仪中荧光检测技术介绍
酶标仪的分类
酶标仪的分类
酶标仪是一种广泛应用于生命科学、医药、环境监测、食品安全等领域的实验设备，主要用于定量和定性分析各种生物分子的含量和活性。
根据其工作原理和应用领域的不同，酶标仪可以分为以下几种类型：
1. 显色型酶标仪：显色型酶标仪可以通过酶催化作用将底物转化为显色产物，从而定量或定性分析样品中目标分子的含量和活性。
常见的显色型酶标仪有多功能酶标仪、单波长酶标仪、双波长酶标仪等。
2. 荧光型酶标仪：荧光型酶标仪可以通过荧光染料与底物结合的方式实现对样品中目标分子的检测，具有高灵敏度、高特异性等优点。
常见的荧光型酶标仪有单荧光酶标仪、双荧光酶标仪、多通道荧光酶标仪等。
3. 化学发光型酶标仪：化学发光型酶标仪可以通过底物与酶的作用发生化学反应，释放出能量，从而产生光信号，实现对样品中目标分子的检测。
常见的化学发光型酶标仪有单光子计数酶标仪、多光子计数酶标仪等。
4. 微量型酶标仪：微量型酶标仪主要用于微量样品的检测，具有高灵敏度、高分辨率等特点。
常见的微量型酶标仪有微量双波长酶标仪、微量多功能酶标仪等。
总的来说，不同类型的酶标仪都有其特点和适用范围，研究者需要根据实际需求选择合适的酶标仪进行实验分析。
酶标仪常见技术和应用
细胞活力检测
细胞活性检测 – MTT、XTT法
• MTT-黄色染料 ↓被活体细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶还原 • 形成蓝紫色结晶-甲瓒 ↓DMSO溶解 检测OD570(OD630作为背景参照） 细胞质 线粒体 细胞核 cell
©2012 For research use only. Not for use in diagnostic procedures. Trademarks mentioned herein are property of Molecular Devices, LLC or their respective owners.
光吸收的基本检测类型
• 特定波长检测: DNA、RNA及蛋白质浓度
• 比色测定: 检测反应的产物产生的颜色变化（450nm） 酶联免疫吸附试验（ELISA）
• 浊度检测: 检测样品中微颗粒产生的光的散射 细菌的生长（600nm）
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21/02/2014
Coቤተ መጻሕፍቲ ባይዱparison of Microplate Readers with Absorbance Detection
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多功能微孔板检测仪酶标仪-Tecan
使用比色皿、Cell Chips™、Roboflask®、NanoQuant Plate 和最高 1536 孔的 ANSI/SBS 标准微孔板
Tecan 微孔板为您确保生化和细胞实验的数据可靠性
• 优化的板高和制造容差，使酶标仪光学元件能尽可能靠近微孔板，避免孔间信号串扰 • 经过开发和测试，能够与 Spark 和成像算法协同工作，提供可靠的性能 • 优化的微孔板孔径，适用于 Spark 系统的明场成像模块——这对于融合度评估至关重要
03
完全的模块化和可升级性
在 Spark 平台上，所有的功能模块可以自由组合，因此研究人员可以轻松选配一个完全满足当前需求的检测系统。 Spark 仪器是可升级的，可灵活满足您未来的需求，确保您对 Spark 的投资永不过时。
光吸收 紫外 / 可见光 光谱仪
Spark 使用专用的高速光栅进行光吸收测量，拥有出众的波长 准确性，尤其适合核酸和蛋白定量。 • 200-1000nm 全光谱扫描小于 5 秒钟 • 优异的准确性，尤其是深紫外区域（230-260nm），为核酸
透明细胞培养板
微孔板底的光学质量对基于对比度的融合检测至关重要，因为 对比度高于背景的光学伪像或微粒会被误识别为细胞。Tecan 细胞培养板具有卓越的光学性能和极低的背景信号。
Tecan Microplate
Competitor C Microplate
多功能酶标仪
多功能酶标仪设备用途：该酶标仪具有吸光、荧光、发光、时间分辨荧光等检测功能，可进行多时间点检测和动力学研究，用于酶活测定、蛋白互作和活性分子检测等。
一、技术指标（一）吸收光检测参数：*1.光源：高能量氙闪灯2.波长选择：单色器，一次最多可进行6种波长测量3.波长范围：230-999 nm, 1 nm 步进*4.带宽：4nm (230-285nm), 8nm(>285nm)5.测量范围：0-4.0 OD6. OD 准确性：< 1% @ 2.0 OD7. OD 重复性：< 0.5% @ 2.0 OD*8. OD分辨率：0.0001 OD9.散射光：< 0.03% @ 230nm*10.检测模式：终点法，动力学法，波长扫描及孔域扫描，检测速度可调；可实现孔板内的不连续跳跃检测；可实现随时选孔随时检测，便于根据实验结果随时进行检测孔的操作和检测调整；可实现模拟检测，预先进行程序操作的模拟演练，提高检测成功率。
*11.光路径校正：专利光路径长度校正功能，可将微孔板光路径长度转化为标准的1cm光路径长度，校正误差，无须标准曲线即可准确定量12.孔板类型：兼容6、12、24、48、96、384孔标准平底、圆底及V-型底微孔板，并可进行加盖检测。
（二）荧光强度检测参数：*1.光源：高能量氙闪灯（荧光强度检测，时间分辨荧光，光谱扫描），光源能量可根据样品信号强度进行调整，有低、高两种能量强度可选；能量低检测速度更快，能量高检测更为敏感。
2.波长范围：250-700 nm3.波长选择：单色器，一次最多可进行6种不同波长的检测4.带宽：激发16nm，发射16nm；*5.顶部检测灵敏度：2.5 pM 荧光素( 0.25 fmol/孔384孔板)*6.底部检测灵敏度：4 pM 荧光素( 0.4 fmol/孔384孔板)7.检测器：PMT8.荧光光谱扫描：可进行激发光及发射光扫描，1nm步进，绘制扫描曲线，确定荧光染料光谱特性*9.检测模式：终点法，动力学法，波长扫描及孔域扫描，单孔最多可进行225次检测；检测速度可调。
美国MD-SpectraMax M5 多功能酶标仪
标题美国ＭＤ－SpectraMax M5 多功能酶标仪信息描述有效期:2011-12-22目前世界上功能最强也是精度最高的单体台式酶标仪。
并且具有SpectraMax M2的所有特性。
三模式比色皿插槽，可检测吸光度（Abs)、荧光强度(FI)、时间分辨荧光（TRF)、荧光偏振（FP)、和化学发光（Lum)。
两个单色器可使吸收度波长范围达200~1000nm,FI、TRF和Lum波长范围250~850nm和FP波长范围400~750nm,步进波长1nm。
可读取6、12、24、48、96和384孔微孔板。
提供终点检测、动力学、单孔扫描和光谱扫描四种测读模式。
技术参数:光密度测读模式：波长范围 200~1000nm，精确选择波长1nm；带宽 <= 4nm；波长准确度 ±2.0nm；波长重现性 ±0.2nm；测读范围 0~4.0 OD；光分辨度：0.001 OD；测读准确度(微孔板) <±0.006 OD±1.0%,0~2.0 OD；(比色杯) <±0.005 OD±1.0%,0~2.0 OD；测读精确度 <±0.003 OD±1.0%,0~2.0 OD；杂散光 <0.05% 230nm；微孔盘测读时间 18秒；温度范围室温+4~45度。
在此的基础上增加了对时间分辨荧光（TRF)、荧光偏振（FL)、和化学发光（Lum)的测量支持。
时间分辨荧光法（TRF）：波长范围 280~850nm，单色器递增量1nm；数据采集可调；测读次数：1~100flashes，测读延迟0~600usec，读取数据积分时间50~1500usec；发射光带宽9nm，激发光带宽15nm；精确度：100fM/孔铕元素（96孔及384孔顶读模式）；读取速度：96孔板17秒，384孔48秒。
荧光偏振（FL）：光栅式连续波长，以1nm递增；波长范围400~750nm；发射光带宽9nm，激发光带宽15nm；检测灵敏度1nM荧光素/孔时，<5mp SD；读取速度96孔板42秒，384孔123秒。
多功能酶标仪
多功能酶标仪多功能酶标仪（Multifunctional Enzyme Labeling Instrument）是一种专门用于分析酶标记法的实验仪器。
酶标记法是一种常用的实验方法，它利用酶对底物进行催化反应，并通过测量酶催化底物的产物来分析样品中的目标分子。
多功能酶标仪集合了多个功能，使得实验过程更加简便、高效。
该仪器通常由主机、计算机、液晶显示屏和软件等组件组成。
首先，多功能酶标仪具有多种酶标记模式。
酶标记法有多种方法，如免疫酶标记、物质酶标记、辣根过氧化物酶标记等。
多功能酶标仪能够根据不同的实验需求选择不同的酶标记模式，以适应不同样品中目标分子的检测。
其次，多功能酶标仪具有高精度的测量能力。
仪器通过测量底物的光学信号，如吸光度、荧光强度等，来确定目标分子的含量。
仪器配备了高灵敏度的光电传感器和光学系统，能够准确地检测底物的信号，并通过算法和软件进行数据分析和处理。
另外，多功能酶标仪还具有自动化功能。
仪器可以自动进行多个步骤的操作，如样品装载、试剂添加、催化反应、信号检测等，大大提高了实验的效率。
同时，仪器还可以通过连接计算机进行数据传输和分析，实现实验结果的自动记录和存储。
多功能酶标仪的操作简便，用户只需要根据仪器的指引进行基本的参数设置和操作步骤即可。
仪器配备了直观易懂的界面和操作面板，提供了丰富的菜单选项和功能按钮，使得用户可以灵活选择实验参数和模式。
总结起来，多功能酶标仪作为一种专门用于分析酶标记方法的实验仪器，具有多种酶标记模式、高精度的测量能力、自动化功能和简便的操作等特点。
它的出现使得酶标记法的实验过程更加简单、快捷和准确，为科研工作者提供了强有力的工具和支持。
多功能酶标仪操作流程
多功能酶标仪操作流程酶标仪是一种常用的实验设备，广泛应用于生物学、医学等领域。
多功能酶标仪结合了吸光度测量、荧光测量、发光测量等多种测量模式，能够满足不同实验需求。
下面将介绍多功能酶标仪的操作流程。
一、准备工作1. 清洁酶标仪：使用干净的纸巾或者专用擦拭布轻轻擦拭仪器外壳及工作台面，确保无灰尘和杂质。
2. 开启仪器：按下电源开关，等待酶标仪启动。
启动后，系统会进行自检，确保仪器正常工作。
3. 准备实验样本：根据实验设计的需要，准备好待测样本及相应的试剂。
二、设置参数1. 选择测量模式：根据实验需求，选择合适的测量模式，如吸光度测量、荧光测量或发光测量。
2. 设置波长：根据实验所需测量的波长范围，设置合适的波长。
可通过菜单栏或者旋钮进行设置。
3. 检查校准：使用预先校准好的标准品进行波长校准和背景校准，确保准确的测量结果。
4. 设置实验参数：根据实验要求，设置吸光度、荧光或发光相关参数，如积分时间、增益等。
三、测量样本1. 样品装载：将待测样本稀释至合适浓度，并分别装入专用的石英比色皿、荧光皿或发光皿中。
2. 放置样品：将装有样品的皿放置在仪器工作台上，注意对位和固定，确保与检测光源完全接触。
3. 开始测量：按下测量按钮，酶标仪会根据设置的参数自动进行测量，待测量过程完成后，结果将显示在仪器屏幕上。
四、结果分析1. 数据记录：将测量结果记录下来，包括吸光度、荧光值或发光值等，根据实验需要可进行多次测量并取平均值。
2. 数据处理：进一步根据实验设计要求，对测量结果进行数据处理和分析，如绘制标准曲线、计算浓度等。
3. 结果解读：根据实验目的和研究问题，对结果进行解读，得出相应的结论。
五、清洁和关闭1. 清洁皿和工作台：将使用过的皿清洁干净，可使用去离子水或者适当的清洁剂清洗，并用纸巾擦拭干燥。
2. 关闭仪器：长时间不使用酶标仪时，应将仪器关闭，按下电源开关即可完成关闭流程。
本文介绍了多功能酶标仪的操作流程，包括准备工作、设置参数、测量样本、结果分析以及清洁和关闭等步骤。
酶标仪荧光强度统计方法
酶标仪荧光强度统计方法本文介绍了酶标仪荧光强度统计方法的背景、原理和具体操作步骤，以及注意事项。
下面是本店铺为大家精心编写的5篇《酶标仪荧光强度统计方法》，供大家借鉴与参考，希望对大家有所帮助。
《酶标仪荧光强度统计方法》篇1引言酶标仪是一种常用的实验室设备，用于检测生物分子的浓度和活性。
其中，荧光酶标仪是一种利用荧光物质的特性进行检测的设备。
在荧光酶标仪中，荧光物质被激发后发出荧光，通过检测荧光强度来判断生物分子的浓度和活性。
本文将介绍酶标仪荧光强度统计方法的背景、原理和具体操作步骤，以及注意事项。
原理酶标仪荧光强度统计方法的原理是基于荧光物质在被激发后发出的荧光强度与生物分子的浓度和活性之间的关系。
当荧光物质进入生物分子后，其荧光强度会发生变化，这种变化与生物分子的浓度和活性成正比。
因此，通过检测荧光强度的变化，可以判断生物分子的浓度和活性。
具体操作步骤酶标仪荧光强度统计方法的具体操作步骤如下：1. 准备样本：将待检测的生物分子加入到酶标仪中，使其与荧光物质发生反应。
2. 设置酶标仪：设置酶标仪的激发波长和发射波长，以及荧光物质的浓度和体积。
3. 测量荧光强度：将样本放入酶标仪中，测量其荧光强度。
4. 统计分析：根据测量得到的荧光强度数据，计算出生物分子的浓度和活性。
注意事项在酶标仪荧光强度统计方法中，需要注意以下几点：1. 样本的制备：样本制备的好坏直接影响到检测结果的准确性。
因此，需要严格控制样本的制备条件，如温度、pH 值等。
2. 酶标仪的设置：酶标仪的设置对检测结果也有很大的影响。
因此，需要根据实际情况合理设置酶标仪的激发波长、发射波长、荧光物质浓度和体积等参数。
3. 测量条件的控制：在测量过程中，需要控制好酶标仪的温度、pH 值和离子浓度等条件，以保证测量结果的准确性。
结论酶标仪荧光强度统计方法是一种常用的生物分子检测方法，具有灵敏度高、操作简便等优点。
《酶标仪荧光强度统计方法》篇2酶标仪荧光强度统计方法是通过酶标仪对样本进行荧光检测，然后对检测结果进行统计分析的方法。
Modulus微孔板多功能检测仪-发光检测仪-荧光酶标仪
北京原平皓生物技术有限公司
特点五. 使用方便-内置PC和触摸屏操作界面
触摸屏界面,内置PC 采用WindowsCE操作 系统
通过U盘传输数据Βιβλιοθήκη 兼 容Windows & Mac OS
预设了常用的实验操作Protocol ,实验数据即时显示在屏幕上
北京原平皓生物技术有限公司
使用方便内置pc和触摸屏操作界面wwwyphbiocom北京原平皓生物技术有限公司发光检测应用一生物发光检测水质检测发光细菌法二化学发光检测hrpap等标记的免疫化学发光wwwyphbiocom北京原平皓生物技术有限公司荧光检测模式wwwyphbiocom北京原平皓生物技术有限公司荧光检测模式图荧光检测探头插拔式荧光光学模块波长匹配的led光源激发光滤光片发射光滤光片反射透射棱镜pin光敏二极管positiveintrinsicnegativewwwyphbiocom北京原平皓生物技术有限公司荧光检测特点led光源辅以光电二极管滤光片棱镜整合成性能优异的荧光模块6个数量级的动力学范围wwwyphbiocom北京原平皓生物技术有限公司modulus的荧光检测应用picogreen购自mp公司嵌合dna并进行荧光检测可获得25pgmldna的检测下限wwwyphbiocom北京原平皓生物技术有限公司荧光检测的主要应用opiticalkitexcitiationwavelenghcommonlyusedfluorophoresuv3653954muhoechstdyegalnadphcaspacetmblue465485picogreenribogreenquantittmproteingfpfluoresceingreen495525rhodaminecy3rfpred620645quantittmrnacy5可定制可定制其他wwwyphbiocom北京原平皓生物技术有限公司吸光度检测模式图led光源光电二极管wwwyphbiocom北京原平皓生物技术有限公司可见光吸光度检测模块滤光盘
酶标仪
近年来，随着多功能酶标仪在国内各高校实验室逐渐推广开来，多功能酶标仪品牌和型号也逐渐多了起来，乱花渐欲迷人眼。
除了三大传统优势品牌PE、MD和TECAN，还出现了众多后来者插足此市场，如收购了芬兰雷勃的Thermo、从发光起家的Berthold、针对药筛领域的BMG以及新兴的BioTek等品牌。
各品牌都有各自的一个甚至多个系列产品线，特性各不相同，选购时各种技术参数、技术指标令人眼花缭乱。
本文尝试从用户实际使用的角度，探讨应该如何看待花样繁多的参数特性，希望能帮助大家找到真正合适自己的多功能酶标仪。
1.滤片Vs光栅多功能酶标仪的分类方法众多，但最简单的莫过于用他们的滤光方式来作分界线。
一般来说，酶标仪可以分为滤光片型和光栅型两大类。
当然也有一些型号，例如Synergy4和EnVision等在一台机器里面同时装上了滤光片和光栅。
但是滤片和光栅并不能同时完成同一个检测，还是想用光栅的时候用光栅，该用滤片的时候用滤片；还有一些实验非用其中一个不可，另一模块实现不了的。
所以这类仪器本质上还只是把滤片和光栅放在了一起，并没有使两者糅合而产生新的技术突破。
总体来说，滤片技术由于发展已久，配合二向色镜（其实也就是另一模式的滤光反光滤镜）等光路系统，可以实现大部分实验的需要。
目前常规多功能酶标仪中最高的检测灵敏度就是用滤光片型做出来的，例如TECAN Infinite F500的荧光检测的灵敏度可以达到0.04 fmol/孔（荧光素，384孔/80ul）。
但是滤光片型仪器由于受限于滤片的波长和数量限制，不可能满足日益增加的实验类型的检测需要，而且有时需要对物质的吸收、激发和发射光谱进行研究，所以后来就诞生了光栅型的仪器。
最先推出光栅的是MD公司，其光栅习惯上称为单光栅。
由于光纯度的不足，在光栅的后面又加入了一组带阻滤片，对杂光进行二次过滤，达到了5×10-4的杂光率，基本与纯粹的滤光片系统一致。
后来TECAN又发展出了双光栅技术，通过两次光栅滤光，杂光率降到了10-6。
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荧光分析技术是一种强大的分析手段，广泛地应用在临床检验、生物学研究、农业科学、食品和环境科学中，是多功能酶标仪的重要应用，如TECAN(M1000、M200等)，Thmeral(Varioskan Flash)，Bio-tek（Synergy 4等），MD（M2、M5）都可以应用于荧光检测。
1.概述
室温下，大多数分子处于基态的最低振动能级，处于基态的分子吸收能量（光能、化学能、电能或热能）后跃迁至激发态，激发态不稳定，将很快衰变到基态，以光的形式放出能量，这种现象称为“发光现象”。
分子发光包括荧光，磷光，化学发光，生物发光等。
受到光照时发光，光照切断时发光立即消失的叫荧光，光照切断时，发光逐渐变弱以致消失的叫磷光，吸收化学反应的化学能量而发光叫化学发光，由生物能转变为光辐射的称作生物发光。
由于发光物质不同荧光有分子荧光和原子荧光之分，分子荧光为带光谱，原子荧光为线光谱，通常所说的荧光为分子荧光。
通过测定所发射荧光的特性和强度，可以对物质进行定性、定量分析。
2.荧光检测技术
2.1荧光强度(FI)
荧光强度与荧光物质的浓度成正比，这是荧光分析法是量分析的依据。
在生物学上的应用非常广泛，可以进行生物大分子定量，酶活性分析，荧光免疫分析，细胞学分析（细胞增殖，细胞毒理，细胞吸附等）和分子间相互作用。
2.1.1细胞凋亡检测
Caspase家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用，其中Caspase-3为关键的执行分子，它在凋亡信号传导的许多途径中发挥功能。
Caspase-3正常以酶原（32KD）的形式存在于胞浆中，在凋亡的早期阶段，它被激活，活化的Caspase-3由两个大亚基（17KD）和两个小亚基（12KD）组成，裂解相应的胞浆胞核底物，最终导致细胞凋亡。
但在细胞凋亡的晚期和死亡细胞，caspase-3的活性明显下降。
设计出荧光物质偶联的短肽Z-DEVD-AMC。
在共价偶联时，AMC不能被激发荧光，短肽被水解后释放出AMC，自由的AMC才能被激发发射荧光（图1）。
根据释放的AMC荧光强度的大小，可以测定 caspase-3的活性，从而反映Caspase-3被活化的程度。
图1. Caspase-3水解Z-DEVD- AMC
2.1.2细胞毒性的检测
体外细胞毒性研究对于检测新的生物来源或人工合成的细胞毒素以及例行的临床相关的检测都有着重要的意义。
细胞膜非渗透性的核染料 Propidium iodide能穿透损伤的细胞膜，荧光密度越高反映出其受损细胞越多。
2.1.3钙流检测
Fura-2、indo-1、Quin-2是Ca2+荧光指示剂，可以灵敏地反映细胞内钙离子浓度的变化，当结合钙离子时，最大激发波长会发生改变，发射荧光的强度和结合的Ca2+浓度有着定量的关系。
2.2荧光偏振(FP)
1926年Perrin首先描述了荧光偏振理论，溶液中的荧光分子在受到偏振光照射时，可吸收并释放出相应的偏振荧光，如果在激发时荧光物质处于静止状态，发射光将保持原有激发光的偏振性，如果其处于运动状态，发射光电偏振偏振平面将不同于原有激发光的偏振特性，这就是荧光偏振现象，荧光分子与其它因子的相互作用，例如相互结合或排斥；其所处环境的性质，例如溶液的粘度、温度等，这些因素都有可能对这个荧光因子受激发后发出的发射光的发射平面产生影响。
因此以荧光偏振为基础发展的技术可用来研究生命科学中分子之间的相互作用，如受体配体结合分析，DNA－蛋白质结合分析，SNP分析，酶活性分析。
荧光偏振分析所需的样品量少，灵敏度高，可达亚纳摩尔级范围，重复性好，操作简便，也更为安全可靠，不会在实验过程中生成有害的放射性废物，此外荧光偏振是真正均相的，允许实时检测（动力学检测），对于浓度变化不敏感，是均相检测形式（中间不含洗涤步骤）的最佳解决方案。
目前市场上多款酶标仪都可以用来做荧光偏振检测，Invitrogene公司专门利用Predictor™ hERG对多款酶标仪进行荧光偏振测试分析（表1）。
2.3时间分辨荧光(TRF)
在做荧光测定的时候，由于背景荧光信号干扰，使用传统的发色团进而进行荧光检测的灵敏度就会严重下降。
大部分背景荧光信号是短时存在的，因此使用长衰减寿命的标记物就可以使瞬时荧光干扰减到最小化。
时间分辨荧光是用稀土元素作为标记物，稀土三价离子的电子云的结构会一定程度上限制了电子的迁移，导致这类元素发生的荧光的衰减周期通常是很长的，从而消除背景荧光的干扰大大提高检测的灵敏度（表2）。
应用稀土元素作标记物的另一个好处是激发光与发射光峰值Stoke 位移大。
这就可消除激发光和散射光的干扰，同时, 被激发的荧光光带极窄, 荧光的发射峰非常尖锐, 可使仪器调整在极窄的波长范围内测定, 极大地降低了来自背景的各种干扰。
荧光团荧光寿命（ns）
非特异荧光背景1～10
人血清白蛋白 4.1
球蛋白 3.0
细胞色素C 3.5
异硫氰酸荧光素(FITC) 4.5
丹磺酰氯14
稀土螯合物103～106
表2.常见荧光团队荧光寿命
时间分辨荧光灵敏度高、特异性强、稳定性好、标记物制备简便、检测重复性好、操作流程短，适用于生物学、医学上的超微量分析，像激素检测，病毒性肝炎标志物检测，靶向细胞的标记检测以及药物筛选等方面。
2.4荧光共振能量传递（FRET）
荧光共振能量传递现象是Perrin在20世纪初首先发现的，1948年，Foster创立了理论原理，指荧光能量供体与受体间通过偶极－偶极耦合作用转移能量的过程，这种能量的转移是非放射性的，产生FRET的条件主要有三个：（1）供体与受体间足够靠近（1～10 nm）；（2）供体的发射光谱与受体的激发光谱有一定的重叠；（3）给体与受体的偶极具一定的空间取向，这是偶极－偶极耦合作用的条件。
荧光共振能量传递因为要考虑到供体和受体之间的距离，所以经常用来研究分子间的相互作用，像蛋白质的相互作用，抗原抗体结合，受体与配体的结合，另外在膜反应、离子通道等方面的研究也有相应应用。
将FRET荧光探针标记的肽链，加入到固体表面的双层膜中，通过荧光漂白恢复（FRAP）成像技术检测，为研究跨膜螺旋二聚作用提供一个新的方法。
用FRET标记细胞质，应用时间分辨技术，检测其对P2X离子通道的门控作用。
利用Eu等长效荧光物质作为供体，来进行荧光共振能量传递，在激发光熄灭后受体仍能较长的能量衰减时间，能量传递效率更高，可检测的相互作用距离更长，可达到100-200nm，时间延迟检测，降低了背景噪音，提高了灵敏度
3.总结
荧光法灵敏、准确、兼容性强、可以利用荧光分子对目标物质进行特异性标记大大减少杂质的信号干扰，荧光特性参数多，动态线性范围宽、可以活细胞活活体检测，灵敏度比分光光度法高2～4个数量级，对微量和痕量药物进行灵敏准确的检测具有较大的优越性。
总之荧光法作为一种高灵敏的分析手段，与其它技术相结合，有着更广阔的发展前景。