8.2正文-材料与方法
青岛农业大学毕业论文格式

1.毕业论文封面2.毕业论文诚信声明和版权使用授权书3.毕业论文附件材料封面4.毕业论文立题表5.毕业论文任务书6.毕业论文开题报告7.毕业论文教师指导记录表8.毕业论文中期检查表9.毕业论文教师评阅表10.毕业论文答辩评定表11.毕业论文成绩评定及学院答辩委员会意见表12.毕业实习鉴定表13.农学、理学类专业毕业论文格式规范青岛农业大学毕业论文(小初,华文新魏)题目:(以下各项均用3号楷体,文字居于下划线中间)姓名:学院:专业:(专业必须为全称)班级:(用阿拉伯数字填写)学号:(用阿拉伯数字填写)指导教师:年月日毕业论文诚信声明本人声明:所呈交的毕业论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果,论文中引用他人的文献、数据、图表、资料均已作明确标注,论文中的结论和成果为本人独立完成,真实可靠,不包含他人成果及已获得青岛农业大学或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。
与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。
论文(设计)作者签名:日期:年月日毕业论文版权使用授权书本毕业论文作者同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。
本人授权青岛农业大学可以将本毕业论文全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本毕业论文。
本人离校后发表或使用该毕业论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时,单位署名为青岛农业大学。
论文作者签名:日期:年月日指导教师签名:日期:年月日青岛农业大学毕业论文附件材料(小初,华文新魏)题目:(以下各项均用3号楷体,文字居于下划线中间)姓名:学院:专业:(专业必须为全称)班级:(用阿拉伯数字填写)学号:(用阿拉伯数字填写)指导教师:年月日目录(4号黑体,居中)青岛农业大学毕业论文立题表…………………………………………Y 青岛农业大学毕业论文任务书……………………………………………Y 青岛农业大学毕业论文开题报告……………………………………………Y 青岛农业大学毕业论文教师指导记录表……………………………………Y 毕业论文中期检查表…………………………………………………………Y 毕业论文教师评阅表………………………………………………………………Y 毕业论文答辩评定表…………………………………………………………………Y 毕业论文成绩评定及学院答辩委员会意见表………………………………Y 毕业实习鉴定表……………………………………………………………………Y青岛农业大学毕业论文任务书论文题目要求完成时间论文(设计)内容(需明确列出研究的问题):资料、数据、技术水平等方面的要求指导教师签名:年月日青岛农业大学毕业论文开题报告(小初,华文新魏)题目:(以下各项均用3号楷体,文字居于下划线中间)姓名:学院:专业:(专业必须为全称)班级:(用阿拉伯数字填写)学号:(用阿拉伯数字填写)指导教师:年月日说明一、有关说明毕业论文题目确定后,学生应尽快征求导师意见,讨论题意与整个毕业论文的工作计划,然后根据课题要求查阅、收集有关资料并编写研究提纲,主要由以下几个部分构成:1.研究的目的与意义。
论文模板中的材料和方法的详细描述方法

论文模板中的材料和方法的详细描述方法在论文写作过程中,材料和方法部分是非常重要的,因为它提供了实验研究的重要细节,同时也能够让读者重现作者的实验过程。
为了确保这一部分的准确性和清晰度,以下是一份论文模板中材料和方法详细描述的方法:1. 实验设计在文章的开头,需要明确介绍实验设计。
例如,如果是实验研究,需要说明实验组和对照组的设置以及实验的时间和地点。
如果是问卷调查,需要说明样本的选择方法和调查问题的构成。
2. 材料描述在这一部分,需要详细描述所使用的材料和设备。
对于实验所用的材料,需要包括名称、商标、型号和来源等详细信息。
对于设备,需要描述设备的型号、制造商和所在地。
此外,还可以提供一些关于材料和设备的特性和性能的信息,如尺寸、质量和参数。
3. 实验步骤在描述实验步骤时,需要按照时间顺序和逻辑顺序进行详细描述。
确保每一步骤都清晰易懂,并且使用恰当的术语。
此外,还可以使用有序列表或流程图来更好地展示实验步骤。
需要注意的是,每一步骤都需要写得具体明确,以便读者能够完全理解实验的过程。
4. 数据收集和处理描述实验数据的收集和处理方法时,需要详细说明使用的仪器和技术。
如果有标准的数据收集表格或公式,也可以在这里提供。
同时,还需要清楚地描述数据的处理过程,如统计方法、计算公式和软件包的使用等。
确保读者能够准确理解数据的分析步骤,并能够进行类似的数据处理。
5. 实验的伦理考虑如果研究涉及人类或动物,需要在材料和方法中说明实验的伦理考虑。
描述实验前获得的伦理审批、知情同意和保护动物权益等措施,以确保实验过程符合伦理规范。
6. 数据统计分析在这一部分,需要详细介绍使用的统计方法和软件包。
描述统计方法时,可以包括参数的选择、假设检验和置信区间等内容。
同时,如果使用了特定的统计软件包,也需要提供软件包的名称、版本和计算公式的对应命令。
7. 结果的报道和解读材料和方法部分最后一部分是相关结果的报道和解读。
在这里,需要根据实验结果提供清晰的文字描述和图表,以便读者能够理解结果和分析。
246-电子教材-8-2电子教材

3.2陶瓷的物理性能3.2.1陶瓷材料的硬度硬度是材料的一种重要的力学性能,但在实际应用中由于测量方法不同,测得的硬度所代表的材料性能也各异。
例如金属材料常用的硬度测量方法是在静载荷下将一种硬的物体压入材料,这样测得的硬度主要反映材料抵抗塑性形变的能力,而陶瓷、矿物材料使用的划痕硬度却反映材料抵抗破坏的能力。
所以硬度没有统一的定义,各种硬度单位也不同,彼此之间没有固定的换算关系。
陶瓷及矿物材料常用的划痕硬度叫做莫氏硬度,它只表示硬度由小到大的顺序,不代表硬度的程度,后面的矿物可以划破前面的矿物表面。
一般莫氏硬度分为10级,后来因为有一些工人合成的硬度较大的材料出现,又将莫氏硬度分为15级以便比较,表3-3莫氏硬度两种分级的顺序。
表3-3 莫氏硬度顺序用静载压入的硬度实验种类很多,常用布氏硬度、维氏硬度及洛氏硬度,这些方法的原理都是将一硬的物体在静载下压入被测物体表面,表面上被压入一凹面,以凹面单位面积上的载荷表示被测物体的硬度。
布氏硬度法主要用来测定金属材料、较软及中等硬度的材料,很少用于陶瓷;维氏硬度法及洛氏硬度法都适于较硬的材料,也用于测量陶瓷的硬度;洛氏硬度法测量的范围较广采用不同的压头和负荷可以得到15种标准洛氏硬度,此外还有15种表面洛氏硬度,其中HRA、HRC都能用来测量陶瓷的硬度。
陶瓷材料也常用纤维硬度法来测量,其原理和维氏硬度法一样,但是把硬度实验的对象缩小到纤维尺度以内,它能测定在纤维观察时所评定的某一组织组成物或某一组成相的强度。
纤维硬度实验常用金刚石正四棱锥为压头,并在显微镜下测其强度,实验所用公式和维氏硬度所用的相同,即:PH M=1.8542d但这里负荷P以克为单位;d以微米为单位。
仪器有效负荷为2~200克(约0.02~2牛顿)。
纤维硬度实验法比较适于测量硬而脆的材料的硬度,所以也适于用于测量陶瓷材料的硬度。
一些材料的硬度值列于表3-4。
矿物、晶体和陶瓷材料的硬度取决于其组成和结构。
论文的方法和材料部分

论文的方法和材料部分方法和材料部分是论文中的重要组成部分,主要介绍研究方法和所使用的材料。
本文将详细讨论方法和材料部分的写作要点,帮助读者准确理解该部分的内容。
一、方法部分在方法部分,需要明确研究所采用的方法、步骤和实验设计,以确保研究的准确性和可重复性。
以下是常用的方法描述要点:1. 研究设计:描述研究的设计类型,如实验研究、调查研究、文献综述等。
并解释为什么选择该研究设计进行研究。
2. 受试者招募与样本特征:说明受试者的招募方式,包括招募标准和排除标准。
描述样本特征,如样本规模、年龄、性别、健康状况等,以确保研究的代表性和可靠性。
3. 工具和资料:介绍研究所使用的工具、设备和材料,如问卷调查、实验设备、软件等。
并附上它们的具体来源和使用方法。
4. 数据采集:详细阐述数据采集的方法,包括实验操作、观察记录、调查问卷等。
揭示数据采集的过程和步骤,确保数据的可靠性和有效性。
5. 数据分析:说明研究数据的分析方法和统计学方法。
包括使用的软件、变量之间的分析关系、假设检验等。
确保数据分析的科学性和可信度。
二、材料部分材料部分主要介绍研究所使用的主要材料,如样本、药物、设备等。
以下是常用的材料描述要点:1. 样本:说明样本的来源、招募方式和招募标准。
若有人类样本,请明确受试者的知情同意和道德审查。
对于动物样本,请注明其品种、数量和动物伦理审查。
2. 药物和试剂:详细列出所使用的药物和试剂的名称、生产商和批号。
对于新开发的药物或试剂,请提供详细的合成或制备方法。
3. 设备和仪器:描述所使用的设备和仪器的名称、型号和生产商。
若为自己设计或改装的设备,请提供详细的制造过程和结构图纸。
4. 仿真模型和计算机程序:说明所使用的仿真模型和计算机程序的来源和开发环境。
若为自己开发的程序,请提供相关的代码和算法说明。
5. 数据库和文献:列出所使用的数据库和文献资源的名称、网址或出版社。
确保数据的来源可靠,文献的引用规范。
初中物理初中八年级上册第二章《四新材料及其应用》课件

2.硅光电池:
把晶_硅_几__种小_能材直料接的转硅换光轻为电_池__。能多,且次无_____。有_____、多晶小和非
3.氢燃料电池:
使用化学元素___制造成的储存能量的电池,具有_______、
____太__阳_、高效率的优点。 电
污染
单晶
氢 无噪声
无污染
三、记忆合金
1.主要成分: ___和___。 2.特点: 当而镍温导度致达__钛到__某_的一变数化值。时,材料内部的_________会发生变化,从
四 新材料及其应用
【体验】生活中的新材料 活动1:到商场实际查看有自洁功能的衣服,或者从网络上查找一些有自洁功能衣 服的资料。 活动2:从网络上查找一些“绿色”能源、记忆合金的资料。
1.纳米是什么单位?这个单位大小如何? 2.纳米材料有什么特点? 3.常见“绿色”能源有哪些?它们各有什么特点? 4.记忆合金的主要成分是什么?记忆合金有什么特点?
2.关于纳米技术,下列说法错误的是 ( ) A.纳米是一个长度单位,符号是nm B.所有的高科技产品都与纳米技术有关 C.纳米技术是现代科学技术的前沿,我国在这方面的研究具有世界先进水平 D.人们在纳米尺度内发现很多新的现象,给技术带来很多新进展
【解析】选B。纳米是一个长度单位,符号是nm,自从发明了扫描隧道显微镜 后,世界上便诞生了一门以1~100nm这样的尺度为研究对象的新学科,这就是 纳米科技。纳米技术是现代科学技术的前沿,对我们认识和改造世界带来了新 的现象,但并非所有的高科技产品都与纳米技术有关。
探究 纳米材料 新材料及其应用
结合“体验”,思考下列问题:
1.纳米材料的界定范围是
,1nm=
m。
提示:纳米材料指制成材料的基本单元大小限制在1~100nm范围内的材料,这大
调研报告材料文档模板(3篇)

一、封面```调研报告------------------------报告名称:[具体调研主题]报告日期:[填写日期]报告单位:[填写单位名称]报告编号:[填写编号]```二、目录```一、调研背景与目的二、调研对象与方法三、调研内容与分析1. [具体调研内容一]2. [具体调研内容二]3. [具体调研内容三]4. [具体调研内容四]四、调研结果与结论五、政策建议六、附录```一、调研背景与目的1.1 调研背景[简要介绍本次调研的背景,包括政策背景、行业背景、市场需求等]1.2 调研目的[明确本次调研的目的,例如:了解市场现状、分析竞争格局、寻找发展机会等]二、调研对象与方法2.1 调研对象[详细列出本次调研的对象,如:企业、消费者、政府部门等]2.2 调研方法[介绍本次调研所采用的方法,如:问卷调查、访谈、实地考察、数据分析等]三、调研内容与分析3.1 [具体调研内容一][对第一部分调研内容进行详细描述,包括数据、图表、案例分析等]3.2 [具体调研内容二][对第二部分调研内容进行详细描述,包括数据、图表、案例分析等]3.3 [具体调研内容三][对第三部分调研内容进行详细描述,包括数据、图表、案例分析等]3.4 [具体调研内容四][对第四部分调研内容进行详细描述,包括数据、图表、案例分析等]四、调研结果与结论4.1 调研结果概述[总结本次调研的主要发现和结论][根据调研结果,提出明确的结论,为后续工作提供依据]五、政策建议5.1 针对性建议[根据调研结果,提出针对性的政策建议,以促进相关领域的发展]5.2 长期发展建议[从长远角度出发,提出有利于行业发展的建议]六、附录[附录部分可包含以下内容:]- 调研问卷- 访谈记录- 数据来源- 相关政策文件- 参考文献四、结语[总结全文,再次强调本次调研的重要性和价值]---注意:以上模板仅供参考,具体内容需根据实际调研情况进行调整。
在撰写调研报告时,应确保数据的准确性和分析的科学性,以增强报告的可信度和实用性。
如何撰写和发表科学论文 罗伯特[1].A.戴
![如何撰写和发表科学论文 罗伯特[1].A.戴](https://img.taocdn.com/s3/m/936a51294b35eefdc8d333cd.png)
如何撰写和发表科学论文罗伯特.A.戴11.什么是科学论文1.1 科学论文的定义1.1.1发表原始研究结果1.1.2以作者同行们能够重复试验并检验其结论的方式发表1.1.3要发表在能容易地为科学界所获得的杂志或其他原始文献上1.1.4“论文的内容应该是崭新的、真实的、重要的和易于理解的”1.1.5"要有严密的思维特性、逻辑性、清晰性和准确性" 1.2 科学论文的组织1.2.1引言Introduction:问题是什么1.2.2材料和方法Materials and methods:你如何研究这个问题1.2.3结果和讨论Results and discussion:你发现什么、这些发现有什么意义1.2.4结论Conclusion1.2.5“写科学论文并不是为了读,而是为了发表”,所以必须以易接受、规定的格式来写1.2.6写科学论文首先是要组织构思1.2.7“写论文不能用文学的手法,比如夸张”1.3 科学论文的语言1.3.1最好使用数量最少、最简短的词语把意思表达清楚1.3.2“如能写出一般的、朴实无华的语言编辑们就欣慰了”1.4 其他定义1.4.1如果在会议文章中提出了原始数据,这些数据可以,并且应该发表在原始期刊上1.4.2“任何药物只要将它注射到实验老鼠体内,就能得出一篇科学论文”22.如何撰写文章题目2.1 题目的重要性2.1.1大多数读者只看文章标题,so,对题目每一个词都应进行仔细的推敲2.1.2题目应该用尽可能少的词,而又能充分表达文章的内容2.2 题目的长短2.2.1避免多余的词“”关于...的研究、关于...的调查“2.3 确切2.3.1使用确切、大家熟悉和简短的词2.3.2“A对B生长的抑制作用”2.3.3A对B的作用2.4 句法的重要性2.4.1大多数语法错误都是由于词的排列错误引起2.5 题目是文章的标记2.5.1作者应自问“我应如何在索引中找到这份资料”2.5.2它并不一定要具有主语、动词和宾语2.5.3题目用词应限于容易理解,便于检索,并能使文章的重要内容突出的那些词2.5.4题目通常不使用缩写词、化学分子式、专用名词和行话2.5.5不用主-副标题2.5.6题目最好尽可能多的包含关键词33.如何列出作者3.1 按思想的重要性3.2 第一作者应该是地位较高的作者,并认为他参与了大部分或全部研究工作(哪怕他是学生)3.3 列出的作者应该而且只应包括积极参与整个设计和进行试验的人44.如何列出作者地址4.155.如何写提要5.1 内容5.1.11.阐明该项研究工作的基本目的和范围5.1.22.描述所使用方法5.1.33.总结研究成果5.1.44.阐明基本结论(提三次)提要引言讨论5.2 用词要精练5.2.1要包含重要内容,但不要无关紧要的细节5.2.2如果你的提要没有清晰、简练而又不能引起审稿人的兴趣,那你很可能不能发表5.2.3仔细考虑每一个词,能用100字就不要写200字66.如何写引言6.1 引言的目的:为了引出文章6.2 规则6.2.11.首先应尽可能清楚地提出所研究问题的性质和范围6.2.22.为了适应读者的需要,应对有关文献进行评述6.2.33.应阐述研究方法。
科技论文写作——11如何撰写材料与方法部分

描述不准确或不完整
详细描述
材料与方法部分应准确描述实验材料、实验步骤和实验方法,但有时可能存在描述不准 确或不完整的情况。
解决方法
在撰写材料与方法部分时,应仔细核对实验材料、实验步骤和实验方法,确保描述准确 完整。同时,可以参考相关文献或咨询专业人士进行核对。
材料与方法部分与其他部分内容不匹配或矛盾
05
优秀材料与方法部分的案例分 析
案例一:简洁明了,突出重点的案例
总结词:简洁明了
详细描述:该案例在撰写材料与方法部分时,采用了简洁明了的语言,突出了研究的主要内容和重点 。作者首先简要介绍了研究背景和目的,然后详细描述了所使用的材料和实验方法,最后总结了实验 结果。整个部分内容紧凑,重点突出,易于读者理解。
03
实验步骤
按照逻辑顺序,详细列出实验的每一步操作过程 。
确保实验步骤的描述清晰、准确,并注意使用专 业术语。
对于关键步骤,需提供必要的插图或示意图以帮 助理解。
实验结果
01
简要描述实验结果,包括主要数据和结论。
02 提供必要的数据分析和解释,以支持实验结果。
03 对于重要的实验结果,需提供必要的图表、表格 或照片等可视化数据。
科技论文写作——11如何撰 写材料与方法部分
汇报人:文小库 2023-12-13
目录
• 材料与方法部分的重要性 • 材料与方法部分的构成要素 • 材料与方法部分的写作技巧 • 材料与方法部分的常见问题及
解决方法 • 优秀材料与方法部分的案例分
析
01
材料与方法部分的重要性
定义与作用
01
材料与方法部分是科技论文的重 要组成部分,主要描述研究中所 使用的材料、方法、实验设计、 数据分析等方面的内容。
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1.材料和方法1.1实验材料1.1.1菌株、质粒和试剂:含人幽门螺杆菌(H pylori, Hp)过氧化氢酶( catalase, KatA)编码基因的重组质粒(Catalase/pGEX-4T-1):由李妍老师构建,本室保存;菌种E.coli BL21:由本室保存;胰蛋白胨(Tryptone):英国OXOID公司;酵母提取物(Yast extract):英国OXOID公司;琼脂粉(Agar):广州鼎国生物技术有限公司;质粒提取试剂盒:天根生化科技(北京)有限公司;氨苄青霉素(Ampicillin):广州鼎国生物技术有限公司进口Sigma分装;IPTG: 广州鼎国生物技术有限公司进口Genview分装;溶菌酶(lysozyme):广州鼎国生物技术有限公司进口Genview分装;蛋白分子量标准(低):TaKaRa公司;考马斯亮蓝R-250:广州鼎国生物技术有限公司 USBTris:广州鼎国生物技术有限公司进口Genview分装;SDS:博科公司(BIOBASE)进口Amresco分装;Glycine:广州鼎国生物技术有限公司;丙烯酰胺(Acrylamide):广州斯佳生物科技有限公司进口Amresco分装;甲叉双丙烯酰胺(Bis-acrylamide):美国Biosharp 公司;TEMED:广州斯佳生物科技有限公司;2×上样BUFFER:广州达晖生物技术有限公司;谷胱甘肽耦合填料(Glutathione Sepharose 4B):美国GE Healthcare 公司;还原性谷胱甘肽(GSH):广州鼎国生物技术有限公司进口Roche分装;盐酸胍(Guanidine Hyiochloride):美国BG公司;1.1.2 主要仪器:高压灭菌仪:HVE-50 日本HIRAY AMA;磁力搅拌器:DJ-1A江苏省金坛市汉康电子有限公司;超低温冰箱:日本三洋小型高速离心机:5418 德国Eppendorf 公司低温高速离心机:GL-21M 长沙湘仪离心机仪器有限公司超净工作台:SW-C1-1FD 苏州安泰空气技术有限公司恒温摇床:上海智城分析仪器制造有限公司电热恒温培养箱:DHP型江苏金坛市万华实验仪器厂智能三孔三温水浴锅: HW.SY1-P3S北京东方精瑞科技发展有限公司分析天平:CA V264C进口电子分析天平美国奥豪斯电泳设备:垂直电泳仪及BG-power300 型基本电泳仪电源BAYGENE/百晶生物公司JY92-Ⅱ超声波细胞粉碎机:宁波新芝科器研究所脱色摇床:DY-B2型江苏省兴化市分析仪器厂层析柱:广州鼎国生物技术有限公司;BioLogic LP 低压层析系统:美国Bio-Rad公司;凝胶影像分析系统: GEL DOC2000 美国Bio-Rad公司。
1.1.3 主要溶液配制(1)LB 液体培养基:酵母提取物 5g胰蛋白栋 10gNaCl 10g加蒸馏水至1000ml,高压灭菌,4℃保存备用。
(2)LB 固体培养基:酵母提取物 5g胰蛋白栋 10gNaCl 10g琼脂粉 15g加蒸馏水至1000ml,高压灭菌,4℃保存备用。
溶液:(3)0.1M CaCl2取11.1g无水CaCl溶解于100ml去离子水中,高压灭菌后4℃保存。
2(4)IPTG(1M):1mol IPTG =238.3g用8ml蒸馏水溶解2g IPTG用蒸馏水定容至10ml,0.22μm过滤器过滤除菌,分装,贮存于-20℃。
使用时1:1000加入培养基中即终浓度为1mmol/ml。
(5)氨苄青霉素Amp:(100mg/ml)用40ml去离子水溶解5g Amp ,再加去离子水定容至50ml,0.22μm过滤器过滤除菌,分装,贮存于-20℃。
使用时1:1000加入培养基中即终浓度为100μg/ml。
(6)1M Tris-HCl (pH6.8)1mol Tris = 121.1g用800ml 去离子水溶解121.1g Tris 碱,用浓盐酸调节pH值至6.8,再加去离子水定容至1L,高温高压灭菌,室温保存。
(7)1.5M Tris-HCl(pH8.8)1.5M Tris = 181.7g用800ml 去离子水溶解181.7g Tris 碱,用浓盐酸调节pH值至8.8,再加去离子水定容至1L,高温高压灭菌,室温保存。
(8)10%SDS(W/V)用80ml去离子水溶解10g SDS,68℃加热溶解,调节pH值至7.2,再加去离子水定容至定容至100ml,室温保存。
(9)30%(W/V)Acrylamide丙烯酰胺Acrylamide = 290gBIS = 10g将以上物质用去离子水溶解定容至1L,0,45μm过滤器过滤除菌,棕瓶4℃保存。
(10)10%(W/V)Aps (过硫酸铵)用10ml高压水水溶解1g过硫酸铵,4℃保存2周。
(11)1M Tris-HCl (pH8.0)1mol Tris = 121.1g用800ml 去离子水溶解121.1g Tris 碱,用浓盐酸调节pH值至8.0,再加去离子水定容至1L,高温高压灭菌,室温保存。
(12)5×SDS电泳缓冲液(储存液):Tris 15.1g甘氨酸 72.0gSDS 5.0g加去离子水溶解以上物质再定容至1L,室温保存。
使用时稀释至1×浓度。
(13)考马斯亮蓝染色液:甲醇500ml冰乙酸100ml考马斯亮蓝R-250 2.5g在以上物质混合溶液中加去离子水定容至1L,滤纸过滤以去除颗粒状物质,室温保存。
(14)脱色液乙醇 500ml冰醋酸 100ml在以上混合液中加去离子水定容至1L,室温保存。
(15)10×PBS(储存液)NaCl 80.0gNa2HPO4·12H2O 28.8gKH2PO42.4gKCl 20g用800ml ddH2O溶解以上物质,调节pH值至7.4,再定容至1L,高温高压灭菌,室温保存。
使用时稀释十倍即1×PBS(pH7.3)(16)Elution buffer :50ml还原性谷胱甘肽 10mM ~reduced glutathione 0.1537g1M Tris-HCl (pH8.0) 50mM ~1M Tris-HCl 2.5ml用去离子水定容至50ml,避光,现配现用。
(17)6M 盐酸胍6mol/L盐酸胍=573.18g/L用去离子水溶解57.32g盐酸胍,在定容至100ml,室温保存。
(18)3M NaOH用去离子水溶解30g NaOH,粉末,定容至250ml,室温保存。
(19)0.5M NaOH取30ml 3M NaOH 溶液,定容至180ml,室温保存。
(20)20%乙醇,70%乙醇1.2实验方法1.2.1 Catalase重组蛋白的诱导表达1.2.1.1 CaCl2法制备E.coli BL-21感受态:1)从平板上挑取宿主菌单菌落,接种于5ml LB培养液中,37℃,220rpm培养;2)将上述菌液1:30接种于50ml LB培养基中,37℃,220rpm培养;3)将上述培养液转入离心管中,冰上放置10min;4℃,5000rpm,离心10min;4)弃上清收集菌体,加入预冷的0.1M CaCl2溶液5ml悬浮细菌(每100ml初始培养物加0.1M CaCl2 10ml);冰浴40min,4℃,5000rpm,离心10min;5)弃上清收集菌体,并重悬于1.25ml冰预冷的含20%甘油的0.1M CaCl2溶液中;6)混匀后分装至1.5mlEp管中,100μl/管,4℃预冷1h后,,-70℃保存备用。
1.2.1.2 重组质粒Catalase/pGEX-4T-1在E.coli BL-21中表达1)事先将恒温水浴箱的温度调至箱42℃,并准备好冰块;2)从-70℃取1支感受态菌(E.coli BL-21),立即冰浴5-10min;3)加入0.5-1ul质粒,震荡后冰上放置30-40min;4)轻轻摇匀后插入42℃水浴箱中,热休克90s后迅速放回冰中,静置2min;5)在超净台中向上述各管中分别加入500μl预热的LB(无抗性),轻轻混匀后固定在摇床中,37℃,220rpm,培养1h;6)取上述混合液,100-300μl,分别滴到含氨苄抗生素的LB固体培养基上,涂布均匀;7)标记Catalase/pGEX-4T-1,至于37℃恒温培养箱中30-60min,直到液体渗透到培养基后,再倒置,37℃,过夜;8)次日挑取新鲜培养的单克隆菌落,接种于5ml Amp+ LB培养基中,37℃,220rpm,培养过夜;9)次日,1:1000活化,37℃,220rpm 培养3.5h,取样后加入IPTG(1M)至终浓度为1mM (1:1000),37℃ 220rpm 诱导表达5h,再次取样。
10)通过抗生素氨苄抗性筛选,和诱导表达前后样品的SDS-PAGE电泳鉴定,确认重组质粒Catalase/pGEX-4T-1成功转入E.coli BL-21中并可诱导其表达。
11)在1.5mlEp管中按1:1加入转化成功的Catalase/pGEX-4T-1菌液和80%甘油(终浓度为40%),4℃预冷1h后,, -70℃保存菌种。
1.2.1.3 Catalase/pGEX-4T-1.重组基因工程菌的诱导表达1).在的100ml LB Amp+培养基中按1:1000接菌,30℃,220rpm,摇菌12h(过夜)。
2).次日将过夜菌按1:100接入800ml LB Amp+培养基中,30℃,220rpm,培养 3.5h(OD600≈0.6)。
3).按1:1000加入诱导剂IPTG,30℃,220rpm,培养5h。
4).收菌,离心去上清4℃ 5000rpm 30min,称重。
5).诱导前后,各取200ul,离心去上清,用1×PBS重悬菌体。
1:1加2*loading buffer,沸水浴5min,离心12000rpm 1min ,SDS-PAGE电泳。
1.2.2 SDS-PAGE鉴定GST- Catalase融合蛋白1)按如下体积配置聚丙烯酰胺凝胶12%分离胶(15ml) 5%浓缩胶(8ml)高压水 4.9ml 高压水 5.5ml30%Acrylamide 6.0ml 30%Acrylamide 1.3ml1.5M Tris-HCl(pH 8.8) 3.8ml 1.0M Tris-HCl(pH 6.8) 1.0ml10%SDS 0.15ml 10%SDS 0.08ml10%过硫酸铵 0.15ml 10%过硫酸铵 0.08mlTEMED 0.006ml TEMED 0.008ml加入下胶后(分离胶),水封,于37℃,凝胶约30min,分界线清晰可见即可。
倒出水,用滤纸吸干,加入上胶(浓缩胶),插梳子。