萝卜与大头菜属间杂种胚的离体培养
萝卜丝菜实验实训报告
一、实验目的1. 了解萝卜丝菜组织培养的基本原理和操作步骤。
2. 掌握无菌操作技术，提高实验操作能力。
3. 观察萝卜丝菜组织培养过程中的形态变化，分析影响培养效果的因素。
二、实验材料与设备1. 材料：萝卜、MS培养基、琼脂、蔗糖、活性炭、维生素B1、青霉素、链霉素、无菌水、无菌滤纸、手术刀、镊子、酒精灯、培养箱、无菌操作台等。
2. 设备：显微镜、天平、电子分析天平、pH计、高压灭菌器、高压蒸汽灭菌器等。
三、实验原理萝卜丝菜组织培养是利用植物组织细胞的全能性，通过离体培养的方式，使植物组织细胞在人工控制的条件下生长发育成完整的植株。
实验过程中，通过调整培养基的成分、pH值、温度等条件，优化培养效果。
四、实验步骤1. 材料预处理（1）将新鲜萝卜洗净，去皮，切成约1cm×1cm的小块。
（2）用无菌水冲洗萝卜块，去除杂质。
（3）将萝卜块放入75%酒精中浸泡30秒，再用无菌水冲洗。
（4）将萝卜块放入5%次氯酸钠溶液中浸泡10分钟，再用无菌水冲洗。
（5）将萝卜块放入无菌滤纸中吸干水分。
2. 组织培养（1）将萝卜块切成0.5cm×0.5cm的小块，作为外植体。
（2）将外植体放入MS培养基中，置于无菌操作台中。
（3）用手术刀切取外植体，将其放入含有活性炭、青霉素、链霉素的MS培养基中。
（4）将外植体放入培养皿中，放入培养箱中培养。
3. 观察与记录（1）每天观察萝卜丝菜组织培养过程中的形态变化，记录培养天数、外植体生长状况等。
（2）定期用显微镜观察外植体生长情况，记录细胞分裂、生长点形成等。
（3）分析影响培养效果的因素，如培养基成分、pH值、温度等。
4. 数据分析（1）对实验数据进行统计分析，比较不同处理条件下萝卜丝菜组织培养的效果。
（2）根据实验结果，提出优化萝卜丝菜组织培养条件的建议。
五、实验结果与分析1. 实验结果（1）在适宜的培养基、pH值、温度等条件下，萝卜丝菜外植体能成功诱导出愈伤组织。
现代生物技术在我国萝卜遗传育种中的应用与展望
现代生物技术在我国萝卜遗传育种中的应用与展望作者：熊秋芳等来源：《长江蔬菜·学术版》2012年第12期摘要：从小孢子培养、原生质体融合、理化诱变、分子标记和基因工程技术方面综述现代生物技术在我国萝卜遗传育种中的应用及展望。
关键词：现代生物技术；萝卜；遗传育种萝卜（Raphanus sativus L.）为十字花科萝卜属一年或二年生雄雌同花的异花授粉作物，在我国栽培历史悠久。
萝卜杂种优势十分明显，目前主要利用雄性不育系进行制种。
现代萝卜育种所要改良的目标性状也在不断的变化，除了对丰产、优质、抗病的要求越来越具体以外，又提出一些新的目标，如耐热、耐抽薹、早熟、晚熟、品质优、口感佳。
常规育种方法在生产上应用广泛，技术容易掌握，具有不可低估的潜力，但也往往具有局限性，如育种年限长。
现代生物技术是细胞生物学与分子生物学理论指导下发展起来的一种高新技术，从20世纪70年代开始发展，给动植物品种改良带来了一场革命。
包括基因工程技术、小孢子培养技术、原生质体融合技术、诱变技术在内的现代生物技术大大加快了蔬菜遗传改良的步伐，把育种技术从宏观水平提高到微观水平。
现对现代生物技术在我国萝卜遗传育种中的应用加以综述，并对萝卜育种中还未涉及到的技术加以展望，以期为萝卜遗传育种及资源创新提供新的思路。
1 小孢子培养技术与萝卜遗传育种1.1 小孢子培养技术小孢子是指未成熟的单核花粉细胞。
小孢子培养技术是将小孢子从花药中分离出来，以单个小孢子作为外植体进行培养，促进其细胞分裂和单倍体胚，进而诱导发育成单倍体植株的过程。
实践证明，经小孢子培养得到的双单倍体或DH系株系间的性状变异幅度大，超亲现象和出现特殊优良性状的频率显著高于常规育种，株系内性状整齐，世代间稳定性强。
通过小孢子培养出来的自交系具有高度的纯合性，以此配制的杂交组合往往具有更强的杂种优势。
另外小孢子培养所得的胚状体可以作为理想的转基因受体，用于植物基因工程外源基因导入。
萝卜离体再生体系的建立
萝卜离体再生体系的建立作者：黄俊豪徐文玲刘贤娴刘辰王淑芬杨建平来源：《山东农业科学》2016年第04期摘要：以8种不同基因型的萝卜为试验材料进行带柄子叶离体培养，筛选诱导不定芽和不定根的最佳培养基配方。
结果表明：喜诺晓青和翠绿萝卜具有高频再生潜力，由其带柄子叶诱导不定芽的最佳培养基为：Ms培养基+30g·L-1蔗糖+0.7%琼脂+5mg·L-16-BA+0.05mg·L-1NAA，诱导不定根的最佳培养基为：Ms培养基+30g·L-1蔗糖+0.7%琼脂+5mg·L-16-BA+0.10mg·L-1NAA。
关键词：萝卜；愈伤组织；不定芽；不定根；激素中图分类号：S631.104+.3 文献标识号：A 文章编号：1001-4942（2016）04-0021-03萝卜（Raphanus sativus L.）又名莱菔，是十字花科萝卜属的二年生草本植物。
作为一种以肉质根为主要食用部位的蔬菜作物，萝卜深受广大群众喜爱，在我国南北各地普遍栽培。
随着生活水平的提高，人们对萝卜品质的要求也日益增长，这就对尽快育成优质抗病的萝卜新品种提出了迫切要求。
建立高效的离体再生体系是亲本无性快繁和基因工程育种的基础环节，然而萝卜一直以来被认为是一种再生顽拗型植物，再生难度大、广泛适应性不强。
本试验选用不同基因型萝卜为材料，从培育无菌苗到诱导愈伤组织、不定芽、不定根，再到最后炼苗移栽，拟建立起完整的具有广泛适应性的萝卜离体再生体系。
1 材料与方法1.1 试验材料潍县青、青圆脆、满堂红、沙窝青、堤东、花叶红玉春、喜诺晓青和翠绿萝卜8个萝卜品种。
1.2 试验方法1.2.1 无菌苗培育将萝卜种子于超净工作台上用75%酒精处理30s，再用4%次氯酸钠溶液灭菌3min，最后用蒸馏水冲洗3遍，接种于1/2MS培养基上，室温25℃、光照时间16h·d-1条件下培养，得到无菌苗。
本科毕业论文撰写规范 楚雄师范学院本科毕业论文撰写规范 楚雄师范学院
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1.3 摘要与关键词1.3.1 摘要摘要是对论文（设计）内容不加注释和评论的简短陈述，要求扼要说明研究工作的目的、主要材料和方法、研究结果、结论、科学意义或应用价值等，是一篇具有独立性和完整性的短文。
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萝卜与苤蓝属间杂种胚离体培养
萝卜与苤蓝属间杂种胚离体培养甘彩霞;何云启;崔磊;梅雪飞;梅时勇【摘要】以萝卜雄性不育系DH303A为母本,以苤蓝为父本进行属间远缘杂交,萝卜与苤蓝杂交的不亲和性发生在胚珠发育过程中,杂交荚荚长快速生长期在授粉后的第2～5天,而横径快速生长期在授粉后第2～4天.在杂种胚发育后第6天和第7天进行胚抢救,用诱导培养基:MS+2,4-D 2.0 mg/L+KT 0.5 mg/L+蔗糖3％+琼脂0.6％;继代培养基:MS+2,4-D 2.0 mg/L+KT 0.5 mg/L+蔗糖3％+琼脂0.6％；分化培养基:MS+IAA 0.5 mg/L+KT 1.5 mg/L+蔗糖3％+琼脂0.6％；生根培养基:MS+NAA 0.2 mg/L+IAA 0.5 mg/L+蔗糖3％+琼脂0.6％,能成功获得幼苗.【期刊名称】《长江蔬菜》【年(卷),期】2012(000)014【总页数】4页(P13-16)【关键词】萝卜;苤蓝;远缘杂交;胚抢救【作者】甘彩霞;何云启;崔磊;梅雪飞;梅时勇【作者单位】湖北省农科院经济作物所,武汉,430064;湖北省农科院经济作物所,武汉,430064;湖北省农科院经济作物所,武汉,430064;湖北省农科院经济作物所,武汉,430064;湖北省农科院经济作物所,武汉,430064【正文语种】中文萝卜（Raphanus sativus L.）是我国栽培的主要蔬菜作物之一，其为十字花科萝卜属一、二年生草本植物。
原产我国，各地均有栽培，品种极多，常见有白皮萝卜、红皮萝卜、青皮萝卜等。
以根供食用，鲜食生食均可，种子含油42%，可用于制肥皂或作润滑油。
种子、鲜根、叶均可入药，可下气消积。
生萝卜含淀粉酶，能助消化[1]。
苤蓝（Brassica oleracea var.carlorapa D.C.）又名球茎甘蓝，俗名擘蓝、玉蔓青，为十字花科芸薹属一、二年生草本植物。
其为甘蓝的变种，食用部分为肉质球茎，质脆嫩，可鲜食及腌制。
作物育种学总论(全)题库
名词解释：作物育种学：研究选育和繁殖作物优良品种的理论与方法的科学。
作物品种：人类在一定生态条件和经济条件下，根据自身需要所选育的某种作物群体。
该群体具有相对稳定的遗传特性（稳定性,Stability ），同时在生物学、形态学及经济性状上具有相对的一致性（一致性，Uniformity），并在这些性状上与同一作物的其他群体有所区别（特异性, Distinctness）种（species）：具有一定的自然分布区和一定的生理化、形态特征的生物群，是分类的基本单位。
种内个体具有相同的遗传性状，可以彼此交配产生后代，种间存在生殖隔离。
亚种(subspecies)：不同分布区的同一种植物，由于生境不同导致两地植物在形态结构或生理功能上存在差异。
变种(variety)：具有相同分布区的同一种植物，由于微生境不同导致植物间具有可遗传的差异。
作物品质：指作物经济器官满足人类需求的程度。
株型：指作物的茎、枝、叶等主要光和器官在植株上的着生态势。
合理的株型可使作物充分利用光能资源，提高有机物的合成，为高产打好基础。
有性繁殖(Sexually propagating)：由雌雄配子结合，经过受精过程形成种子繁衍后代的繁殖类型。
自花授粉（self-pollination ）异花授粉（cross-pollination ）常异花授粉（often-cross pollination ）无性繁殖(Asexually propagating )：不经过两性配子的受精过程繁衍后代的繁殖类型。
自花授粉同一花朵内花粉传到同一朵花的雌蕊柱头，或同一株的花粉传到同株的雌蕊柱头上的授粉方式。
异花授粉雌蕊柱头接受异株花粉受精的授粉方式常异花授粉：同时依靠自花授粉和异花授粉两种方式繁衍后代的授粉方式。
自交不亲和性：具有两性花并可形成正常雌、雄配子的某些植物，缺乏自花授粉结实能力的一种自交不育性。
自交不亲和性是一种受遗传控制的、提高植物自然异交率的特殊适应性。
萝卜离体再生影响因素初步研究
萝卜离体再生影响因素初步研究萝卜(Raphanus sativus L.,2n=2x=18),是十字花科萝卜属一、二年生草本植物,以膨大的肉质根为食用器官,营养丰富。
萝卜离体再生培养技术是种质创新和遗传转化的一种重要手段,可以在短时间内培养大量与供体相同的植株,获得符合预期性状的个体。
研究表明,萝卜是一种再生执拗型植物,但在十字花科的其他植物中,也有部分能建立高效的离体再生体系。
但目前萝卜的离体再生体系尚不完善,实际应用中还存在较多的问题,如基因型影响、激素浓度选择和配比、外源添加剂应用等。
本研究以合适的种子消毒方法为前提,从基因型、激素浓度配比、外植体类型和外源添加物筛选四个方面,研究了萝卜不定芽再生影响因素;探索了培养基中NAA浓度对再生芽生根的影响;测定了’XBC’下胚轴离体脱分化形成愈伤过程中抗氧化酶活性和可溶性蛋白含量的变化,旨在为构建萝卜离体再生体系和遗传转化奠定基础。
主要结果如下:1.通过研究萝卜3种基因型离体再生的影响因素实验,发现基因型会影响愈伤组织形成率、褐变率和不定芽再生率。
三种外植体类型切段(下胚轴、带柄子叶和叶柄)脱分化形成愈伤组织较容易,三者的愈伤诱导率均高于80%,但形成不定芽较困难。
但以带柄子叶的出愈率最高(93.33%),其次是叶柄,最差的是下胚轴。
外源添加硝酸银(5mg·L-1)和TDZ(0.7mg·L-1)能提高不定芽的再生系数,增加再生芽产生的芽点数,且两者都能有效降低褐变率,特别是硝酸银的加入,大大减少了褐变率,使褐变率保持在5%左右。
2.萝卜再生芽的生根较为容易。
随着培养基中添加的NAA浓度从0.1～1.2mg.L-1变化,生根率和平均生根条数表现为先升高后降低的趋势。
其中,在NAA浓度为0.5 mg·L-1时,生根率(再生芽的生根株数/接种的再生芽总株数的百分比)可达到76.67%,此时的平均生根数也是最高的,达到每株9.3条。
萝卜胞质大白菜雄性不育系的生化分析
（ ))FF） ， 表现雄 融合技术，获得了 DE1/, 萝卜不育胞质的雄性不育甘蓝型油菜体细胞杂种 性不育和低温不黄化。利用这种改良型 DE1/, 萝卜胞质雄性不育源， 通过连续回交， 获得了 一批萝卜胞质大白菜雄性不育系。这些雄性不育系， 植株生长正常， 克服了原萝卜胞质材料 存在的苗期黄化和蜜腺严重退化问题。雄性不育种株花瓣开放正常， 结籽数与保持系相近。 植物遗传型雄性不育性的发生是由不育基因控制 GHI) 转录、蛋白质翻译、生化反 应、形态构建的最终结果。在不育基因的表达过程中，许多生化成分参与了各种反应，对 雄性不育系及其保持系的生化成分进行比较研究，有助于了解雄性不育产生的生化过程和 发生机制。
)*+, -./+0*12+1/,3 4050*,
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萝卜胞质大白菜雄性不育系的生化分析
孙日飞 方智远 张淑江 李 菲 钮心恪 吴飞燕
著者对中国和世界的主要蔬菜常见蔬菜和中国特有蔬菜共mm科555种的孢粉进行了深入系统研究与分析以多方位显微超显微观测拍摄了清晰的扫描电镜照片按国际公认的标准和术语对孢粉性状进行了全面研究与描述获取了大量的图像信息和数据信息绝大部分种类的研究成果在国内外尚属首次获得
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结果与分析
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萝 卜 与大头菜属 问杂种胚 的离体 培养
甘 彩 霞 ， 云 启 ， 磊 ， 雪 飞 ， 时勇 何 崔 梅 梅
（ 湖北 省农 科 院经济 作物所 ， 武汉 ，３ ０ ２ ４ ０７ ）
摘 要 ： 萝 卜雄 性 不 育 系 ＤＨ３ ３ 作 母 本 ， 大 头 莱 为 父 本 进 行 属 间 远 缘 杂 交 ， 交 后 代 的初 期 结 荚 率 为 ６ ％－ 用 ０Ａ 以 杂 ４
皮 萝 卜、 红皮 萝 卜、 皮 萝 卜 。鲜食 生 食均 可 ， 青 等 种 子 含油 ４ ％ ．可用 于 制肥 皂或 作 润滑 油 。种子 、 ２ 鲜
试 验在 湖北 省农 科 院蔬菜 科技 中心 进行 。
①播 种 大头菜和萝 卜 种子播种在试验大棚
里 ． 规 田间管 理 。 常
８ ％ ． 径 第 ７天停 止 增 加 ， 长 第 ８天停 止 生 长 ， 粉 以后 第 ７天 开 始 败 育 ， ８ 横 荚 授 而且 越 往 后 败 育得 越 快 。 杂 种 胚 发 育 在
后 ５ ８ｄ进 行 胚 抢 救 ， 生 芽培 养 基 （／ ＋ ． ｎｇ 一 ＋ ． ｍｇ Ａ ０５ ～ 用 １２ＭＳ Ｉ ｌ Ｌ６ＢＡ Ｏ２ ／ Ｎ Ａ＋ ．％活 性 炭 ） 生根 培 养 基 （／ ＋ ０ ／ Ｌ 和 １ ＭＳ ２
以萝 卜 性不 育 系 Ｄ ３ ３ 为母 本 （ｎ １ ） 雄 Ｈ ０Ａ ２＝８ ，
柱头 的 亲和性 。 统计 授粉 花朵 数 、 期结 荚数 ， 初 计算
基 金 项 目 ： 家科 技 支 撑 子 课 题 十 字 花科 及 特 种 蔬 菜 优 异 国 基 因源挖 掘 与种 质 创 新 利 用研 究 （ ０ ６ ＡＤ１ Ｂ ６－－ ２０ Ｂ ３ ０． ． ． － ４ ４）
② 套 袋 、挂牌
萝 卜 大头 菜抽 薹后 套 袋 ， 和 如
果 套袋 之 前 已有 开放 的花 ， 将 花摘 掉 。萝 卜 性 要 雄
不 育 系每 个单 株单 独 套袋 ， 牌 编号 标记 ， １ 挂 共 ０个
单株 ． 所有 的数 据 取 １ 单株 的平均 值 ； 头菜 不 ０个 大 分 单株 。 合给 萝 卜 混 授粉 。
０ ｇ － Ａ Ｉ ｇＬＮ Ａ ０５ ． ｍ ／ ６ － ＋ ． ｍ ／ Ａ ＋ ． ２ Ｌ Ｂ ０ ％活 性 炭 ） 行 离体 培 养 ， 成 功 获 得 幼 苗 。 进 能
关 键 词 ： ｌ； 头 菜 ； 缘 杂 交 ； 抢 救 ； 萝 、大 远 胚 离体 培 养
萝 卜（ ａ ｈ ｎ ｓ ３ ｖｓＬ） 我 国栽 材 料 与 方 法
１１ 试 验 材 料 ．
肖成 汉 『 ３ １ 的重 复 授 粉 法 ， 在 第 １次授 粉 后 的第 ２ 即
天 上午 再授 粉 １ ）对 克 服属 间杂 交 不 亲和 ， 高 次 ． 提 结 籽率 效果较 好 。 按 以上 方法 连续 授粉 ７ｄ ，并 注 意观 察花 粉 与
根、 叶均 可入 药 ， 下气 消 积 ， 萝 卜 淀 粉 酶 ， 可 生 含 能
助消化Ｉ 】 Ｊ ０大 头 菜 （ ｒｓｉ ｎ ｅ ｏｓ ｖｔ 仃 ｐ— Ｂ ａｓ ａ ｍ ｃ ａＣ ｓ． ａ． ａ ｊ ｃ ｆ ｍ ， ａ ｅ． ｏ ） 芥 菜 的 一 个 变 种 ， ｏ ｍｉ Ｐ ｌ ｔ Ｂ ｌ 是 ｒ ￣ ｓ 为根 用 芥 菜 ， 十字 花科 芸薹 属二 年 生草 本植 物 。其 产 品器 是 官 为 肉质 根 ， 地 紧 密 、 分 少 、 维 多 ， 质 水 纤 肉质 根 锥
Ｊ Ｕ Ｎ ＬＯ Ｈ Ｎ Ｊ Ｎ Ｅ Ｅ Ａ Ｌ Ｓ Ｏ Ｒ Ａ ＦＣ Ａ Ｇ Ｉ １ Ｖ Ｇ Ｔ Ｂ Ｅ Ａ１ ３
畏 益 象 （术 学 版）
一１ 一 ８
Ｄ Ｉ ０３ ６ ／ｉ ｎ１ ０ － ５ ７２ １ ． ． ６ Ｏ ： ．８ ５ ．ｓ ． １ ３ ４ ． ０ ０ １ ｊｓ ０ ０１８ ０
③授粉
套 袋 以后 ，萝 卜 大头 菜 开花 时 ， 与 进
行 人工 授粉 。授 粉一 般在 早上 １ ：０和下午 １ ：０ ００ ５ ０
进 行 。 粉 的方 法 ：． 粉之 前 首先用 水将 手洗 干 授 ａ 在授
净， 然后 再用 酒精 消 毒 。ｂ打 开纱 网袋 ， 下 已经 盛 ． 摘 开 的大 头菜 的花 朵 ， 完 以后立 即将 纱袋 封好 。． 摘 ｃ再 打 开萝 卜 株 的纱 网袋 ， 大 头菜 的花 粉 授到 萝 卜 植 将 的柱头 上 为 了增 加花 粉 与柱 头 的亲 和性 ， 验 采 试
大头 菜 作 为 父 本 （ｎ １ ） 试 验 材料 种 植 于湖 北 省 ２＝８ ，
农 业科 学 院蔬 菜科 技研究 中心 的试 验 基地 。
１ ． 试 验 方 法 ２
蔬 菜作 物之 一 ， 十字 花科 萝 卜 ， 、 年 生草 本植 属 一 二 物 。原 产我 国 ， 各地 均有 栽 培 ， 品种 极 多 ， 常见 有 白
形 ， 白色 ， 肉 肉质坚 实 ， 强烈 的芥 辣 味 ， 有 宜 肺 有 具 豁痰 、 胃理 气 的作 用 。芥菜 含有 丰 富 的维 生 素 和 开 大量 的微 量 元素 、 类 、 白质等 ， 食部 分 为 肥大 糖 蛋 供
的肉质根［ 萝 卜 ２ １ 。 和大 头菜 均为 根用蔬 菜 ， 但二 者 的 风 味不 同 。到 目前 为止 ， 没有关 于 二 者远 缘 杂交 还 研究 方 面的报 道 。为 此 ． 本试 验将 两 种材 料进 行 属 问杂 交 ， 步 研 究 杂 交 亲 和性 的表 现 ， 初 以及 对 杂 种 胚 抢救 培养 方法 进行 探讨 。