大孔吸附树脂分离纯化大黄中总蒽醌苷提取物
大黄中蒽醌苷元的提取分离和鉴定
大黄中蒽醌苷元的提取分离和鉴定
1、总蒽醌苷元的提取加三氯乙烷回流
2、蒽醌苷元的分离和精制分出酸水层5%NaHCO3萃取
三氯甲烷液深褐色粉末黄色大黄酸结晶加
5%Na2CO3的氯仿层上层碱液下层三氯甲烷液调PH至2
调ph得沉淀大黄素沉淀芦荟大黄素的分层芦荟大黄素沉淀3、蒽醌类化合物的检识（1）色谱检识失败原因
：对照品滴加浓度过高，薄层板太小，对照品间隔过小换用大薄层板后，得结果为极性顺序：大黄酸＞芦荟大黄素＞大黄素＞大黄素甲醚＞大黄酚
定性反应（碱液试验）从左至右以依此加入大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚试验结果：大黄酸和大黄素甲醚遇碱液呈红色，
大黄素、芦荟大黄素、大黄酚遇碱液呈现深红色。
（醋酸镁试验）从左至右以依此加入大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚实验
结果：大黄酸和大黄素甲醚遇醋酸镁呈现橙红色，大黄素、芦荟大黄素、大黄酚遇醋酸镁呈红色。
大黄中蒽醌类成分的提取分离与鉴定
大黄中蒽醌类成分的提取分离与鉴定大黄是一种广泛应用的中药材，含多种活性成分，其中最重要的是蒽醌类化合物。
这些化合物具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤等多种生物活性，因此成为广泛应用的化合物之一。
本文将介绍大黄中蒽醌类成分的提取分离与鉴定过程。
大黄通常通过醇提、水提、超声波提取等方式提取蒽醌类成分。
醇提法是最常用的提取方法之一。
一般可以采用乙醇、甲醇或酒精等有机溶剂进行提取。
以乙醇为例，其提取过程如下：（1）将大黄切碎，加入适量的96%的乙醇。
（2）加热回流提取1小时。
（3）过滤，滤去残渣。
（4）将过滤液浓缩至干燥。
（5）得到蒽醌类化合物粗提取物。
大黄中的蒽醌类成分通常需要通过柱层析、薄层层析、高效液相色谱等多种色谱技术进行分离。
其中，高效液相色谱技术最常用。
根据不同的色谱柱填料、移相系统、检测器等条件的不同，可以对获得的粗提取物进行进一步分离。
以高效液相色谱为例，其分离过程如下：（1）将粗提取物溶于少量甲醇中。
（2）进行反相或正相高效液相色谱分离。
大黄中蒽醌类成分的鉴定主要采用紫外分光光度法、质谱分析法和红外光谱法等技术。
其中，以紫外分光光度法为例，其鉴定过程如下：（1）使用UV特征峰进行鉴定。
（2）将标准品或纯品溶于适量的甲醇中，按比例稀释。
（3）将样品溶液置于紫外分光光度计检测器中。
（4）记录在特定波长下的吸光度。
（5）通过计算溶液中所含的蒽醌类成分的浓度来鉴定蒽醌类化合物。
总之，大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定可以采用多种技术进行。
通过这些技术的应用，可以得到单纯、纯度高的化合物，为下一步的药理、毒理研究提供了保障。
大孔吸附树脂纯化大黄中5种游离蒽醌及总蒽醌的含量测定
Ｌ Ｉ Ｓ Ｈ Ｉ Ｚ Ｈ Ｅ Ｎ Ｍ Ｅ Ｄ Ｉ Ｃ Ｉ Ｎ Ｅ Ａ Ｎ Ｄ Ｍ Ａ Ｔ Ｅ Ｒ Ｉ Ａ Ｍ Ｅ Ｄ Ｉ Ｃ Ａ Ｒ Ｅ Ｓ Ｅ Ａ Ｒ Ｃ Ｈ ２ ０ １ ３ Ｖ Ｏ Ｌ ． ２ ４ Ｎ Ｏ ． ４
文献标 识码 ： Ｂ
文章编 号 ： １８ ６ ２ － ０ １
大黄为蓼科植 物大黄 Ｒ ｈ ｅ ｕ ｍ ｐ ａ ｌ ｍａ ｔ ｕ ｍ Ｌ ． ， 唐 古 特 大 黄 稀释至刻度 ， 摇匀 ， 制成每 １ ｍ ｌ 含 大黄 酚 １ ７ ． ４ ｇ ， 大黄 素 １ １ ． ３ Ｒ ｈ ｅ ｕ ｍ ｔ ａ ｎ ｇ ｕ ｔ ｉ ｅ ｕ ｍ Ｍａ ｘ ｉ ｍ． ｅ ｘ Ｂ ａ ｌ ｆ ． 或 药用大 黄 Ｒ ｈ ｅ ｕ ｍ ｏ ｆ ｉ ｆ ｃ ｉ ｎ ａ ｌ ｅ ｇ ， 大黄酸 １ １ ． ８ ｇ ， 大黄素 甲醚 １ ８ ． ３ ｇ 和芦荟 大黄素 ２ ２ ． ７ ｇ Ｂ ａ ｉ ｌ １ ． 的干燥 根和根茎 ， 为临床常用 中药 ， 其性 味苦 ， 寒， 具有泻下 的混合对照品溶液。 攻积 、 清热泻火 、 凉血解毒 、 逐瘀 通经 、 利湿退黄 之功效 …。大黄 ２ ． ３ 大黄提取 液 的制备 取大 黄药 材 ， 加３ ０ ％ 乙醇加 热 回流 的主要成分为 蒽醌 类衍生物 ， 包括大黄 酸 、 大黄素 、 大黄 酚、 芦荟 提取二次 ， 每次加溶剂 １ Ｏ倍量 ， 每次提取 １ ． ５ ｈ ， 滤过 ， 合并滤液 ， 大黄素 、 大黄素 甲醚 、 番泻 苷 Ａ， Ｂ， Ｃ ， Ｄ、 大黄 酸 一８一葡萄糖 苷 、 即得 大 黄 提 取 液 。 芦荟大黄葡萄糖苷 、 大黄素葡 萄糖苷等 Ｊ 。近年来 ， 大孔 吸附树 ２ ． ４ 供试样 品的制备 脂在天然产物活性 成分分离方 面的应用 Ｌ ｔ 益广泛 ， 其具有分离纯 ２ ． ４ ． １ 未纯 化供 试 品的制备 取 “ ２ ． ３ ” 项 下 的提 取液 ， 回收 乙 化效果优 良， 可反 复再 生使用 和低 成本 的应 用特点 。本 试验 醇 ， 浓缩 ， 水浴蒸干 ， 置烘箱 中７ ０ ％干燥至恒重 ， 粉碎 ， 即得 。 在前期的研究基础上 ， 以 Ｘ一５型大孔 吸附树脂 对大黄 提取物 中 ２ ． ４ ． ２ 纯化供试 品的制备 取“ ２ ． ３ ” 项下 的提取液 ， 水浴挥 散 总蒽醌进行富集纯化 ， 采用高效液相色谱法同时测 定其 中 ５种游 至无醇味后量取一定体积（ ３ 倍 树脂体积 ） ， 加入 ３ ％ 氯化钠溶解 离蒽醌及总蒽醌（ 以大黄酚 、 大 黄素 、 大 黄酸 、 大黄素 甲醚和芦荟 后加于预先处理好 的 Ｘ一 ５型大孔 吸附树 脂上 ， 待 吸附完 全后 ， 大黄素计 ） 的含量 。 用蒸馏水 冲洗至近无色 ， 用６ ０ ％ 乙醇 （ ６倍树脂体 积 ） 洗脱， 收集 １ 仪器 与试 药 洗脱液 ， 减压回收乙醇 ， 浓缩 ， 水浴蒸 干， 置烘箱 中 ７ ０ ￣ Ｃ干燥 至恒 １ ． １ 仪器 美 国 Ａ ｇ ｉ ｌ ｅ ｎ ｔ ｌ １ ０ ０高效液相色谱仪 ， Ｇ １ ３ ７ ９ Ａ真空脱气 重 ， 粉碎 ， 即得 。 机， Ｇ１ ３ １ １ Ａ四元梯度泵 ， Ｇ １ ３ １ ３ Ａ 自动进样 器 ， Ｇ １ ３ １ ５ 柱恒温箱 ， ２ ． ５ 供试 品溶 液的制备 取纯化供试 品约 ０ ． ０ ２ ｇ （ 未纯化供试品
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定
大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离与鉴定一、实验目的1.掌握蒽醌苷元的提取方法--双相酸水减法2.掌握梯度PH萃取法提取分离大黄中各种蒽醌苷元的原理及操作方法3.掌握羟基蒽醌类化合物的颜色反应及薄层色谱鉴别方法二、实验原理1.提取原理双向酸水解法，为一相与酸水不相互溶的有机溶剂，另一相为酸水，加热回流水解的方法。
由于大黄中的羟基蒽醌类化合物多以苷的形式存在，所以首先要将苷水解成苷元，本实验选用硫酸和乙酸乙酯作为双向酸水解的溶剂，采用加热回流方法，提取大黄药材中的游离蒽醌类化合物。
根据苷元不溶于水，可溶于乙醚、乙酸乙酯等亲脂性有机溶剂的性质，即在加热回流提取过程中，稀硫酸可将蒽醌苷元水解成苷元，游离出来的蒽醌苷元随即溶于乙酸乙酯中，从而将蒽醌苷元提取出来。
2.分离原理pH梯度萃取法羟基蒽醌类化合物酸性强弱不同，用pH梯度法进行分离。
具有羧基或多个β位酚羟基的蒽醌可溶于5%碳酸氢钠溶液；具有一个β位酚羟基的蒽醌可溶于5%碳酸钠溶液；只具有α位酚羟基的蒽醌，酸性弱，只溶于氢氧化钠溶液。
以分离酸度不同的蒽醌苷元。
也可利用游离蒽醌的极性不同，采用硅胶柱色谱法进行分离。
（1）大黄中游离蒽醌的酸性强弱顺序大黄酸（-COOH）＞大黄素（β酚-OH）＞芦荟大黄素（醇-OH）＞大黄素甲醚（-OCH3）≈大黄酚（-CH3）（2）大黄中游离蒽醌的极性大小顺序大黄酸＞大黄素＞芦荟大黄素＞大黄素甲醚＞大黄酚大黄酚和大黄素甲醚酸性相近，但极性不同，可用硅胶柱色谱法进行分离。
三、实验方法四、 1.总蒽醌苷元的提取、分离工艺流程大黄药材（粗粉）50g乙酸乙酯提取液药渣去除下层酸水层，再用蒸馏水水洗2次（50ml/次）直至乙酸乙酯层pH值呈中性乙酸乙酯提取液碱水层乙酸乙酯层滴加浓盐酸，调节pH=2，放置 5%Na2CO3溶液萃取三次（40ml/次）沉淀物（黄色结晶或黄色絮状沉淀）碱水层沉淀过滤，冰醋酸精制滴加浓盐酸，调节溶液萃黄色结晶（大黄酸）沉淀物（橙色结晶或40ml/次）橙色絮状沉淀）沉淀过滤，碱水层丙酮精制橙色结晶（大黄素）节pH=2沉淀物（橙色絮状沉淀）黄色沉淀物乙酸乙酯层沉淀过滤，乙酸乙酯精制硅胶柱色谱黄色针晶洗脱剂为石油醚（60-90℃）（芦荟大黄素）-乙酸乙酯（15：1）大黄酚和大黄素甲醚混合物2.总蒽醌苷元的提取大黄粗粉50g，置500ml烧瓶中，加20%硫酸溶液100ml和乙酸乙酯250ml，水浴回流提取2h，放置，冷后过滤，残渣弃去，乙酸乙酯提取液置分液漏斗中，分出酸水层，乙酸乙酯提取液用蒸馏水洗2次（20ml/次），将乙酸乙酯放置在锥形瓶中，密封。
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定(实验报告)
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定一、实验目的（1）熟悉蒽醌类成分的提取分离方法（2）掌握pH梯度提取法的原理和操作技术（3）学习蒽醌类化合物鉴定方法二、实验器材材料及试剂：大黄粗粉、浓硫酸、NaHCO3、Na2CO3、NaOH、浓盐酸、乙酸乙酯、石油醚、乙醚、普通滤纸、薄层层析硅胶板（2.5 cm×10 cm）、广泛PH试纸、剪刀、铅笔、尺子、点样毛细管、样品管等。
仪器：500mL圆底烧瓶、球形冷凝管（30cm）、橡皮管、烧杯、滴管、层析缸（广口瓶）、250mL分液漏斗、布氏漏斗、抽滤瓶、水浴锅、集热式磁力搅拌器、磁子、循环水式多用真空泵、铁架台等。
三、实验原理大黄为蓼科植物,味苦,性寒,具有泻热通肠、凉血解毒、逐瘀通经等功效。
其主要成分为为蒽醌化合物，含量约为3%~5%，大部分与葡萄糖结合苷，游离苷元有大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等。
其中，大黄酸具有羧基，酸性最强；大黄素具有β-酚羟基，酸性第二；芦荟大黄素连有羟甲基，酸性第三；大黄素甲醚和和大黄酚的酸性最弱。
根据以上化合物的酸度差异，可用碱性强弱不同的溶液进行梯度萃取分离。
大黄酸R1=H R2=COOH大黄素R1=CH3R2=OH芦荟大黄素R1=CH2OH R2=H大黄素甲醚R1=CH3R2=OCH3大黄酚R1=CH3R2=H四、实验内容大黄素的提取、分离流程图大黄粗粉10g20%H2SO4 150 ml加热1h, 抽滤、干燥滤饼150ml乙醚回流提取1 h乙醚层水层（紫红色）乙醚层HCl 3大黄酸沉淀（粗品）水层（红色）乙醚层HCl 0.25% NaOH大黄素沉淀（粗品）水层（红色）芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚沉淀（混合物）具体操作步骤1. 游离蒽醌的提取（1）酸水解：称取大黄粗粉10g，加20%H2SO4水溶液150mL，在水浴上加热1小时，放冷，抽滤，滤饼用NaOH溶液洗至近中性（pH约为6），于70℃干燥后，研碎，置250mL 圆底烧瓶中，加入乙醚150mL回流提取1小时（调45℃，回流即可），得到乙醚提取液。
D101
能和 纯化 工 艺。方 法以 大黄 总蒽 醌 中的代 表 成分 大黄 素为考 浓缩液 ， 相 当于 ０ ． ２ ７ ８ ｇ ／ ｍ Ｌ的生药材 。 察指标 ， 采 用ＨＰ Ｌ Ｃ法测 定大黄 素的含 量 ， 考察 Ｄ１ ０ １ 大孔 树脂 ２ ． １ ． ２供试 品溶液 的制备 精 密 量取 大 黄提 取 液 ０ ． ６ ｍＬ ， 加入 ８ ％盐 酸 液 １ ０ ｍ Ｌ， 超 声 ２ ａｉ ｒ ｎ ， 再加入 三氯 甲烷 ｌ Ｏ ｍ Ｌ ￣ ｌ ｌ 热 回流 １ ｈ ， 放冷， 置分液漏斗 中 ， 分取三 氯 甲烷层 ， 酸液 层用三氯 甲烷萃 取 ３ 次， 每次 ｌ Ｏ ｍ Ｌ， 合并
保护 胃黏 膜 、 保 肝利胆 、 利 尿改善 肾功能 、 降血压 、 降 脂减肥 、 抗 肿瘤 等药理作 用” 。
２ ． ２含量测 定方 法
２ ． ２ ． １色 谱 条 件 色谱柱 ： Ｕ ｈ ｉ ｓ ｌ ｌ Ｘ Ｂ — Ｃ。 （ １ ０ Ｘ ２ ５ ０ ａｍ， ｒ
５ ｕ ｎ ｒ ）； 流动相 ： 甲醇 一 ０ ． １ ％ 磷酸 水 溶 液 （ ８ ０ ： ２ ０ ） ； 检测波长 ：
１ ． ２试剂与试药
２ － ３ ． １大 孔 吸 附 树 脂 的预 处 理 用 适 量 蒸 馏 水 漂 洗 ， 再 用
大黄素对 照品 （ 中国药 品生物 制品检定所 ） ； Ｄ １ ０ １ 大孔吸附 ９ ５ ％乙醇浸 泡 ２ ４ 小时 ， 然 后用 蒸馏水 将树 脂冲洗 至无 醇味 ， 用 树脂 ； 磷酸、 乙醇 、 甲醇 、 盐酸、 三 氯 甲烷 （ 均为 分析纯 ） ， 色谱 甲 ２ 倍 于树 脂体积 的 ５ ％盐酸浸 泡 ２ 小时 ， 用 蒸馏 水 冲洗至 中性 ； 醇； 水为 娃哈哈 纯净水 ； 大黄 药材购 自西安 市万寿 路药材 市场， 再用２ 倍树脂体 积的 ５ ％氢氧化 钠浸泡 ２ 小时后用水 洗至 中性 ，
中药中蒽醌类化学成分的提取分离技术
结晶法
结晶法
通过降低中药提取液的温度或加入结晶剂，使目标成分结晶析出，从而实现分离。结晶法具有较高的选择性，能够获 得高纯度的目标成分。
总结词
结晶法适用于目标成分热稳定性较高且与杂质性质差异较大的情况。结晶法具有较高的分离效果，但操作过程较复杂 ，且对设备要求较高。
详细描述
结晶法通常在低温或减压条件下进行，通过控制温度和溶液的浓度、pH等参数，促使目标成分结晶析出。 结晶后的溶液经过过滤、洗涤、干燥等步骤，可获得高纯度的目标成分。
在充分实验验证的基础上，制定中药中蒽 醌类化学成分提取分离的标准化操作流程 ，促进研究成果的推广应用。
加强中药质量控制意识，建立完善的质量 控制体系，确保中药中蒽醌类化学成分提 取分离技术的可靠性和安全性。
THANKS
感谢观看
溶剂提取法是利用不同溶剂对不同成分溶解度的差异，选择适当的溶剂将目标 成分从中药材中提取出来。该方法操作简单，应用广泛，但使用大量有机溶剂， 容易造成环境污染。
超声提取法
总结词
高效、快速、节能。
详细描述
超声提取法是利用超声波的振动和空化作用，加速目标成分的扩散和释放，从而 提高提取效率。该方法具有高效、快速、节能等优点，但需要使用专门的超声波 提取设备。
膜分离法
膜分离法
利用半透膜使中药提取液中的不同组分进行选择性透过，从而实现分离。膜分离法具有 高效、节能、环保等优点。
总结词
膜分离法适用于目标成分与杂质性质相似的情况。膜分离法具有高选择性、低能耗和环 保等优点，但膜的制造成本较高且易污染。
详细描述
膜分离法根据半透膜的选择性透过原理，使中药提取液中的目标成分和杂质分别透过膜 或被膜截留，从而达到分离效果。常用的膜分离技术包括超滤、纳滤、反渗透等。
实验一大黄中游离蒽醌类成分提取、分离与鉴定
实验一 大黄中游离蒽醌类成分提取、分离与鉴定一、概述植物来源：大黄系蓼科植物掌叶大黄（Rheum palmatum L ）、唐古特大黄（Rheum tanguticum Maxiam.ex Balf.）或药用大黄（Rheum offcianale Baill.）的干燥根及根茎。
大黄始载于《神农本草经》，列为下品。
历代本草均有记载。
大黄性寒，味苦，具有泻下、健胃、清热解毒等功效。
自古以来，大黄在植物泻下药中占有重要位置，是一味很早就被各国药典收载的世界性药材。
功效：大黄具有多方面的生物活性，其抗菌、抗感染及抗肿瘤活性有效成分主要为蒽醌类衍生物，如大黄酸、大黄素和芦荟大黄素；止血的主要有效成分为大黄酚；泻下的有效成分是结合型的蒽苷类。
蒽醌类衍生物占大黄总化学成分的3%～5%，该类成分少部分以游离状态存在，大部分与葡萄糖结合成苷的形式存在，其中有大黄酸葡萄糖苷、大黄素葡萄糖苷、芦荟大黄素葡萄糖苷、大黄素甲醚葡萄糖苷、大黄酚双葡萄糖苷，新鲜大黄中还含双蒽酮的番泻苷A 和番泻苷B 等。
此外，大黄中还含有鞣质等多元酚类化合物，含量在10%～30%之间，具止泻作用，与蒽苷的泻下作用恰恰相反。
主要化学成分的结构和理化性质：大黄中含有多种游离的羟基蒽醌及其与糖所形成的苷类化合物，已知的游离羟基蒽醌主要有以下5种化合物。
R 1 R 2 大黄酸COOH H 大黄素 OHCH3 芦荟大黄素 CH2OHH 大黄素甲醚 OCH3CH3 大黄酚CH3 H 大黄酸,C 15H 8O 6,黄色针晶，m.p321～322℃(330℃分解)。
可溶于碱水，微溶于乙醇、苯、三氯甲烷、乙醚和石油醚，不溶于水。
大黄素,C 15H 10O 5,橙黄色针晶（乙醇），m.p256～257℃。
可溶于碱水，微溶于乙醚、三氯甲烷，不溶于水。
芦荟素甲醚，橙色针晶（甲苯），m.p223～224℃。
可溶于乙醚、苯及碱水，不溶于水。
大黄素甲醚，专红色单斜针状结晶（苯），m.p205～207℃。
大黄蒽醌类物质之分离纯化
大黄蒽醌类物质之分离纯化我个人设计的分离方案比较独特的地方有（1）设想使用人们不常用的大孔树脂吸附法分离纯化大黄蒽醌类，探究提高分离效率的最佳分离条件，（2）利用用L a n g m u i r 公式和F r e u n d l i c h公式分析试验数据，确定最佳分离条件。
（3）应用设置对照实验法和控制变量法进行探究试验的规划和设计。
大黄为常用中药，具有抗菌、消炎和抗氧化的作用，应用于化妆品天然抑菌剂和抗氧化剂，大黄提取物的抑菌效果比较明显，通过实验确定大黄提取物中最佳抑菌成分为蒽醌提取物中的大黄素，而且大黄提取物具有消炎、抗氧化的功效。
它已在许多中药及制剂和保健品中广泛使用，大黄中的有效成分为蒽醌类化合物，可呈游离形式或与糖结合成甙形式存在于植物体内，其游离型蒽醌化合物有大黄酚(Chrysophanol D，大黄素(EmodinD，大黄素甲醚(PhyscionD，芦荟大黄素(Aloe-emodinD和大黄酸(RheinD等种。
目前，科学界对其有效成分蒽醌提取物分离与纯化的研究报道也有很多，但用大孔树脂吸附分离纯化的研究较少，所以可以设想将大孔树脂应用于大黄蒽醌的分离纯化，具体计划为——搜集有关大黄蒽醌类的相关资料，了解大黄蒽醌类的各种物化性质，以及了解大孔吸附树脂的相关性质和使用方法，设计一个切合实际的分离方案（在大黄蒽醌经浸提剂粗提的基础上，利用大孔树脂对大黄蒽醌类物质提取与分离，考察了大孔树脂的吸附条件，并确定其最佳吸附工艺．实验过程中选用不同树脂进行实验，筛选出最优的大孔树脂，确定适宜的大孔树脂对大黄蒽醌类物质进行吸附实验，绘制出其动态和静态吸附曲线，结合曲线和实验得出的有关数据，找出其最佳的吸附工艺条件，并结合其吸附曲线及动力学方程进行分析，检验方案的实用性）．1实验部分1 ．I实验材料及仪器大黄粉末，乙醇、盐酸、氢氧化钠均为分析纯试剂，大孔吸附树脂A B一8 、 D M一3 0 1 、D一1 0 1 一I 、D A一2 0 1 、D一1 0 1 ；电动振荡器( 自制) 、层析柱( 自制) 、7 2 2型分光光度计、R E一5 2 C型旋转蒸发器，1 ．2大黄蒽醌的分析方法采用可见吸光光度法测定，绘制大黄蒽醌提取液的标准曲线，其方程为：Y= a x一b，求出r值；其中x 吸光度；y 一大黄蒽醌的浓度．1 ．3吸附样品的制备（参考文献得出以下相关操作方法及数据）称取大黄粉末1 5 g ，7 5 ％的乙醇9 0 m L ，置于三颈烧瓶中，煎煮2 ．5 h ，提取温度为7 5℃，过滤后得大黄蒽醌提取液，抽滤蒸发浓缩得褐色浸膏干燥备用．取一定量大黄总蒽醌粗提物，用7 0 ％乙醇溶解，即得大黄总蒽醌的样品液．1 ．4 大孔吸附树脂的预处理预先准备净品树脂，树脂先用9 5 ％乙醇浸泡2 4 h ，使之充分膨胀，再用蒸馏水浸泡2 4 h ．湿法装柱J ，用9 5 ％的乙醇以每小时 2 倍树脂体积的流速通过树脂层，洗至流出液加等量水不变白色浑浊为止，用水以同样流速洗净乙醇。
大黄提取物中5种蒽醌化合物的分离纯化
大黄提取物中5种蒽醌化合物的分离纯化刘婷婷;卢春霞【摘要】为研究大孔树脂对大黄5种蒽醌的分离效果,本文采用静态吸附实验,比较6种大孔树脂(HPD-100、XDA-6、AB-8、LX-38、ADS-7和ADS-17)对5种游离蒽醌(芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚)的吸附及解吸附性能,筛选出对大黄5种蒽醌吸附率和吸附率最高的大孔树脂.然后以筛选的大孔树脂作为载体,对其动态吸附特性进行了初步研究.结果显示,HPD-100大孔树脂对大黄5种蒽醌吸附率和吸附率最高;在层析柱径高比1∶8,上样溶液5种蒽醌总浓度为3.64 mg/mL,上样体积2.0 BV,流速1.0 BV/h,85％的乙醇洗脱,洗脱体积为3.0 BV 的优化条件下,H PD-1 00对5种蒽醌的动态吸附率为86.3％,洗脱率为85.9％,5种蒽醌总含量增加了2.88倍,由原来的7.13％增加到20.5％,总回收率98.7％,提取物中残留的离子液体[bmim] Br也同时被除去,表明本实验选择的优化条件具有可行性.【期刊名称】《食品工业科技》【年(卷),期】2018(039)015【总页数】5页(P55-59)【关键词】大黄;蒽醌化合物;离子液体;大孔树脂;分离;纯化【作者】刘婷婷;卢春霞【作者单位】新疆石河子职业技术学院,新疆石河子832000;长江师范学院生命科学与技术学院,重庆408100【正文语种】中文【中图分类】TS201.1大黄为蓼科(Polygonaceae)大黄属(Rheum)多年生草本,可分为掌叶大黄(R. palmatum L)、唐古特大黄(R. palmatum Maxim.ex Balf.)和药用大黄(R. officinale Baill),以根及根状茎入药,其性味苦、寒,具有泻下清热、凉血解毒、活血祛瘀等功效[1]。
现代中药化学研究证明,大黄主要含有蒽醌衍生物、苷类化合物、鞣质类、有机酸、花青素类、多糖等化学成分,其中,蒽醌衍生物(大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等)被认为是主要的活性成分,具有抗菌抗病毒[2]、抗氧化[3]、抗炎[4]、保肝[5]、抗肿瘤[6]等药理作用。
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大孔吸附树脂分离纯化大黄中总蒽醌苷提取物焦飞（陇东学院生命科学与技术学院甘肃庆阳 745000）摘要：比较6种不同类型和型号的大孔吸附树脂：AB-8、D-301、X-5、D-140、S-8和D-101对大黄水提物中总蒽醌苷的吸附性能，对大孔树脂的类型和吸附纯化条件进行了优化。
实验结果为，X-5型树脂对大黄总蒽醌苷静态吸附率和动态吸附率均最高。
X-5型树脂对大黄总蒽醌苷最适宜交换吸附条件为：pH=9，流速为 1 mL/min，洗脱剂为5％氢氧化钠和75％乙醇混合液。
X-5型大孔树脂交换吸附大黄总蒽醌苷的纯化方法可取，具有良好的应用前景。
关键词：大孔吸附树脂；大黄；分离纯化；总蒽醌苷Macroporous adsorption resin purification anthraquinoneextraction from rhubarbJIAO Fei(Life science and technology of Long Dong university Gan Su Qing Yang 745000 ) Abstract:Compared with five kinds of macroporous resin X-5, D-301 and D-301, S-8 and D101 adsorption performance of rhubarb total anthracene quinone, macroporous resin adsorption and purification condition for the filter. Experiment, X-5 resin of rhubarb anthraquinone always both static and dynamic adsorption rate is higher, X-5 resin of rhubarb anthraquinone always appropriate exchange adsorption conditions for: pH=9, flow rate of 1 mL/min, 5% NaOH and 75% ethanol elution agent mixture, desorption effect is better.X-5 type macroporous resin exchange adsorption purification method of rhubarb anthraquinone always desirable, has a good application prospect. Key words：macroporous resin；Radix Et Rhizoma Rhei；purification；total anthraquinones大黄[1]是我国传统中药，为蓼科植物大黄属掌叶组掌叶大黄、唐古特大黄、药用大黄的干燥根茎。
大黄具有泻下清热、凉血解毒的功效，现代药理学研究表明具有广谱抗菌、抗病毒、抗肿瘤等功效[2]。
近期大量试验发现大黄还具有保护大脑皮层神经元的作用[3]，尤其对治疗肝性脑病具有显著疗效 [4]。
大黄中的化学成分包括糖苷类、有机酸类、鞣质类、挥发油类物质等。
大黄中蒽醌类为其主要药效成分（大黄素、大黄酸、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚及其苷类等），游离蒽醌是大黄具有泻下作用和抗病毒的主要化合物。
目前,大黄制剂的种类繁多，包括口服液、片剂、丸剂、注射剂、颗粒剂、膜剂等等[5]。
大黄传统的制剂方法为煎煮法或者醇提法，得到大黄浸膏后，进一步干燥得到干膏或干粉。
这样的制备方法使得膏体中有效成分含量较低，无效成分和杂质含量较高，大大限制了大黄在注射剂和杂质要求严格的制剂中的应用。
现代中药制剂要求，对大黄中的有效成分进行提取和精制，以减少使用量，保证药效。
目前，对大黄中游离蒽醌的提取和分离纯化工艺的研究已成为大黄制剂研究的重点。
本文中以鲜大黄进行磨浆处理，充分酶解并过滤，直接用大孔吸附树脂柱分离，得到大黄蒽醌苷，再进行酸解得到游离蒽醌。
大孔吸附树脂是一类具有大孔立体网状结构和较大比表面积进而产生吸附作用的高分子吸附树脂[6]。
树脂表面不含交换基团，可以通过吸附－解吸作用从溶液中选择性地吸附各类化合物。
近年来，大孔吸附树脂在传统中药有效成分提取纯化方面有着广泛的应用，受到广大药学研究者的关注[7]。
本试验采用磨浆过滤后的大黄液直接用大孔吸附树脂分离的方法，操作简单、节约资源，并可较大幅度提升提取效率。
本试验旨在改进大黄总蒽醌的提取纯化工艺，获得较高纯度的产品，从而为大黄中蒽醌类有效物质的提取和纯化提供参考。
1 材料与仪器1.1 材料大黄药材于2011年10月采自甘肃省子午岭正宁县地段，由郭小强(植物学)副教授、胥国斌（中药学）副教授鉴定为蓼科植物掌叶大黄（Rheum palmatum L.）的干燥根和根茎；大黄素对照品(供含量测定用，批号：110756-200110, 中国药品生物制品检定所提供)；AB-8、D-301、X-5、D-140、S-8、D-101树脂(天津海光化工有限公司)。
1.2 试剂超纯水(自制)；甲醇；醋酸镁-甲醇；乙醇；去离子水；氯仿；硫酸；NaOH。
1.3仪器755B型紫外可见分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）；BS223S型精密电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司）；DHG-9070A型电热恒温鼓风干燥箱（上海一恒科学仪器有限公司）；TDZ5-WS型台式低速离心机（长沙湘仪离心机仪器有限公司）；SK250H超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公司）；DM-Z125AⅢ自分渣磨浆机（河北铁狮磨浆机械有限公司）。
2方法2.1 大黄药材的预处理将拣选后的鲜大黄切去根头及毛根置合适的容器内，用适量水清洗干净。
将清洗干净的大黄鲜根切成0.5cm3小块。
2.2 大黄总蒽醌苷提取液的制备称取大黄100 g，加入200 mL蒸馏水，用磨浆机磨浆3 min。
将滤液合并，密封、低温、避光收储 [8]。
2.3大黄总蒽醌苷含量的测定2.3.1标准曲线的绘制精密称取用P2O5干燥至恒重的大黄素10 mg，甲醇定容于25 mL容量瓶，分别吸取20、40、80、160、200、300、400μL大黄素甲醇溶液于10 mL容量瓶中，用0.6％的醋酸镁-甲醇溶液定容至10 mL。
以0.6％的醋酸镁-甲醇溶液为参比，共7个样品，紫外分光光度计在400-7O0 nm波长处进行扫描，确定510 nm处为最大吸收波长，测定吸光度[9,10]。
2.3.2颜色稳定性试验取2.3.1项下6号试样，分别在0，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 h时测定其吸光度，其结果分别为0.688，0.688，0.687，0.687，0.671，0.664，0.636，结果表明显色在2h内较稳定，2h以后吸光度逐渐变小，故最佳测定时间范围为2h内。
2.2.5精密度试验取同一份供试品溶液，以0.5％Mg(Ac)2甲醇溶液作为空白对照，在510nm处连续测定吸光度6次，结果RSD：0.2％，表明此方法精密度良好.2.4大孔树脂吸附特性2.4.1 大孔树脂的预处理大孔树脂用95％乙醇浸泡24 h，装色谱柱。
然后分别用10％，30％，50％，75％，95％的乙醇为洗脱剂按5 mL/min的流速进行洗脱至洗脱液加水不出现白色混浊，接着用去离子水洗至洗脱液无醇味[11]。
2.4.2大孔树脂静态吸附量和吸附率的测定6种型号的大孔吸附树脂用滤纸吸干其表面水分，准确称取8.0 g，分别装入150 mL三角瓶中，加入上述大黄浆各50 mL，置于20℃的恒温水浴箱中，每间隔30min 以60次／min 的频率振荡l min ，12 h 后抽滤。
分别吸取滤液0.5ml ，在510 nm 处测定滤液的吸光度，并根据标准曲线方程计算总蒽醌苷成分的质量浓度。
每种大孔树脂重复操作3次，取平均值。
吸附量和吸附率计算公式为[12]：干溶液滤液）（吸附量m V 0⨯-=ρρ ，）（吸附率干滤液%1000⨯-=m ρρ 其中：0ρ为母液的质量浓度，滤液ρ为滤液的质量浓度，V 溶液为溶液体积，干m 为干树脂重量。
2.4.3大孔树脂静态解吸量和解吸率的测定将静态吸附已达到饱和的6种大孔树脂用去离子水洗后，加入95％乙醇40 mL 解吸附，置于20℃的恒温水浴箱中，每间隔30 min 以60次／min 的频率振荡l min ，12 h 后抽滤。
分别吸取滤液0.5ml ，在510 nm 处测定滤液的吸光度，并根据标准曲线方程计算总蒽醌成分的质量浓度。
每种大孔树脂重复操作3次，取平均值。
解吸量和解吸率计算公式为：干溶液解吸解吸量m V ⨯=ρ %1000⨯-=滤液解吸解吸率ρρρ其中：0ρ为母液的质量浓度，滤液ρ为滤液的质量浓度，V 溶液为溶液体积，干m 为干树脂量，解吸ρ为解吸质量浓度。
2.4.4 pH 对大孔树脂吸附总蒽酯苷的影响由于金汝城等[13]研究发现，随着树脂表面pH 的升高，其吸附能力相应地增强，但过高的pH 值会破坏大黄蒽醌类成分的性质，因而本实验选pH=9时进行对照实验。
分别取出12支试管，洗干净贴上标签（AB-8；AB-8，pH=9；D-301；D-301，pH=9；X-5；X-5，pH=9；D-140；D-140，pH=9；S-8；S-8，pH=9；D-101；D-101，pH=9），分别称取6种树脂各2.0 g ，加入到对应标号的试管中，12支试管分别加入10 mL 大黄总蒽醌苷提取液，用1M 的NaOH 溶液调节标有pH=9的6支试管的pH 值，将这12支试管放入恒温水浴箱中，20℃，每间隔30min 以60次／min 的频率振荡1 min ， 12 h 后抽滤。
然后取12只干净三角瓶，贴上对应的标签（AB-8；AB-8，pH=9；D-301；D-301，pH=9；X-5；X-5，pH=9；D-140；D-140，pH=9；S-8；S-8，pH=9；D-101；D-101，pH=9），再将试管中的试样过滤到上面的三角瓶中，将滤液放入到恒温箱中烘干，取出烘干的12只三角瓶，毎瓶各加入20 mL浓度为20%的H 2SO 4溶液，用保鲜膜封口，放入80℃恒温箱中2h 。
取出后依次加入10 mL 氯仿进行萃取，重复萃取三次。
将萃取液用超纯水调节pH 至7.0后，取萃取液放入温度为50℃恒温箱中烘干，用少量甲醇溶解，加入醋酸镁-乙醇定容至10 mL ，静置3～5min 后测定吸光度。
2.4.5大孔树脂动态吸附量的测定[14]6种树脂中蒽醌成分静态吸附量和解吸量最大的均为X-5型树脂，称取擦干表面水分的X-5型树脂80.0 g 装柱，将大黄液缓慢加入树脂柱中，控制体积流速为1 mL ／min ，用三角瓶每20 mL 收集1瓶，共收集14瓶，依次标为1～14号，放入80℃恒温箱中将水分烘干，然后各加入20 mL20％的硫酸溶液，用保鲜膜封口，放入80℃恒温箱中静置2h 酸解。