色氨酸及其主要代谢产物的分离和在生物样品中的测定
快速、灵敏检测生物样本中单胺类递质及其代谢产物的方法――反相色谱-电化学检测分析法
ｎ代表被测物质单个分子的电子得失数， 是法拉 Ｆ
弟常数，Ｖ 表 示溶液通过电极表面时速率的乘方 ａ 数，Ｃ 表示浓度。在相同色谱条件且流量 恒 定 ｂ 时，对任一被测物质来说，Ｋ ｎＦ和Ｖ 都是恒量， 、 ａ 因而Ｉ ＢＣ，即所测量的电流正比于检测池中被 Ｌ ｂ
测化合物 的浓度 ５。ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
三、分析时应注意的几个问题
实验与技术
快速、灵敏检测生物样本中单胺类递质及其代谢
产物的方法— 反相色谱－ 化学检测分析法 电
叶惟泠
中国科学院上海生理研究所， ００１ ２０３） 单胺类神经递质，多巴胺 （ ） ＤＡ 、去甲肾上腺 素（ ）肾上腺素（） － ＮＡ 、 Ａ 和５羟色胺（－ ）是哺乳 ５ＨＴ 动物和人类中枢重要的信息传递物质。检测脑和体 液中微量的单胺递质及其代谢产物对研究这类递质 的生理功能，与递质代谢异常有关的疾病的诊断和 药物及手术疗效的鉴定都有重要意 义。自 １７ ９３年 Ｒｉ ｉ ｅ ｓｎ ｒ１等用高效液相色谱 （ Ｌ ）电化学 ｓｇ ＨＰ Ｃ － 检测法（ Ｃ 分析了儿茶酚胺 Ｃ ， Ｅ Ａ 包括ＤＡ ＮＡ和 、 Ａ 以来，由于高灵敏电化学检测器与高效反相 色 表１罗列了近十年来成功地测定了生物样 本 中这 类化合物的范例。由于令人满意地解决了 同时 分 离、检测这一系列化合物的方法，因而不仅能测出 递质的更新率，还可通过分析单位时间内底物降解
用Ｅ Ｃ分析时，流动相中必须有电解质存在， 以提供合适的离子电导率和传送电荷，通常离子强 度维持在０ １ ． ｏ／ ． —０ ｍ ｌ ０ １ Ｌ水平〔 １ ２，合适的离子强 度应大 于 ０ ５ ｌ ４；其次它必须在电极表面 ． ｍｏ／ ０ Ｌ 呈电化学惰性，即低的背景电流 ２１ ， ２。常用的磷 酸缓冲液、醋酸缓冲液等都适用于这类化 合 物 的
几种中药及生物样品的液相色谱分离—电化学检测新方法
几种中药及生物样品的液相色谱分离—电化学检测新方法液相色谱-电化学联用技术(HPLC-ECD)在多组分复杂样品分析中是一个有趣的实用技术,它将高效液相色谱(HPLC)的高分离效能和电化学检测(ECD)的高灵敏性和高选择性相结合,较好的实现了高效分离和高灵敏度检测。
本论文采用HPLC-ECD及HPLC-MS联用技术,建立了几种中药和生物样品中活性成分的分析新方法；扩展了液相色谱和电分析化学的应用范围,具有较好的理论和应用价值。
具体研究内容如下: 1.采用超声提取法对中药材汉防己中的汉防己甲素和汉防己乙素进行有效提取,并应用HPLC-ECD技术对两种生物碱进行了分离检测。
该方法灵敏度高,操作简单易行,分析结果准确可靠,可应用于汉防己中防己生物碱的检测。
分析结果显示,汉防己甲素和汉防己乙素的浓度分别在1.3×10-6～1.07×10-4mol/L和1.4×10-6～1.09×10-4mol/L范围内和峰面积有良好的线性关系；二种生物碱的检测限分别达到了2.6×10-7mol/L和2.7×10-7mol/L,检测灵敏度比同等条件下紫外检测提高一个数量级；回收率均在95%-105%之间；测得汉防己中汉防己甲、乙素的百分含量分别为0.781%和0.401%。
实验采用LC-ESI-MS 方法验证了建立的HPLC-ECD方法的准确性。
2.建立了一种稳定性好、灵敏度高的中药黄连中四种生物碱的同时检测的液相色谱-电化学检测方法,并成功应用于大鼠血浆样品中对四种生物碱的分析。
采用该方法测定四种生物碱的检测限在1.0×10-8mol/L到3.0×10-8mol/L,与文献LC-UV方法相比较,小檗碱的检测灵敏度提高了了80倍,并且克服了LC-UV方法难以对具有不同最大吸收波长的多种化合物进行同时灵敏检测的缺陷。
采用流动注射分析法,比较了小檗碱样品在电化学检测器与商品化的紫外检测器检测时在重复性方面的差异性,结果显示两种检测器无显著性差异。
发酵饲料色氨酸代谢产物测定标准
发酵饲料色氨酸代谢产物测定标准下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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色氨酸试验操作方法
色氨酸试验操作方法
色氨酸试验是一种常用的生物化学实验方法，用于检测物质中是否含有色氨酸。
操作方法如下：
1. 准备试剂和材料：色氨酸试剂盒、待检测物质溶液、显微镜片、显微镜、吸光度计等。
2. 取一定量的待检测物质溶液，加入试管中。
3. 按照试剂盒说明书的指导，添加试剂。
通常包括显色剂、显色底液等。
按照比例加入试管中。
4. 混合试管溶液，轻轻摇晃，使试剂和待检测物质充分混合。
5. 将试管放入吸光度计中，设置所需检测的波长。
吸光度计会测量溶液的吸光度。
6. 根据试剂盒说明书中的步骤，读取吸光度计的测量值。
7. 根据试剂盒说明书中提供的标准曲线或浓度计算方法，计算待检测物质中色氨酸的浓度。
8. 对于需要进一步确认的结果，可以使用显微镜观察待测物质溶液的特征，例如颜色、沉淀等。
需要注意的是，操作过程中应遵守实验室的安全操作规范，注意试剂的保存和处置。
同时，根据实验目的和样品特性，可以根据需要进行一定的实验优化和方法修改。
饲料色氨酸含量测定
测定方法：分光光度法GB/T 15400-94
分析步骤 1.工作曲线的绘制 （1）吸取色氨酸浓度为100 μ g/mL的标准溶液5.00、7.50、 10.00、12.50、15.00、17.50mL分别置于25mL棕色容量瓶中 用水定容，摇匀。溶液浓度分别为20、30、40、50、60、70 μ g/mL。 （2 ）吸取各浓度溶液1mL，分置具塞试管中，空白管加 1mL水向每支试管内加入氢氧化钾溶液1mL，混匀，将试管放 入冷水盆中，加5mL对二甲氨基苯甲醛溶液，从冷水盆中取出 试管，摇匀，在室温（20～30℃，下同）放置30min。 （3 ）向上述每支试管内加0.2mL亚硝酸钠溶液，摇匀，室 温放置25min。 （4 ）以空白管调零，在590nm波长下，以1cm光径测定各 溶液吸光度值。 （5 ）以色氨酸浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制工 作曲线，或列出回归方程式。
测定方法：分光光度法GB/T 15400-94
仪器、设备 分析天平：感量0.1mg。 分光光度计。 离心机：转速4000r/min。 实验室用粉碎机。 培养箱。 容量瓶：25mL、50mL、250mL。 10mL具塞试管。 刻度吸管：0.5mL、2mL、5mL、25mL。
测定方法：分光光度法GB/T 15400-94
测定方法：分光光度法GB/T 15400-94
2.样品测定 （1）称样：按附表A建议的称样量称取脱脂试样两份，精 确至0.1mg。 （2） 水解：将试样置于50mL容量瓶中，在轻轻振摇中缓 慢加入25mL氢氧化钾溶液，使试样湿润且丌粘壁，置40±1℃ 培养箱中水解16～18h。 （3）离心：取出水解液冷却至室温后，用水定容，摇匀， 取部分水解液以4000r/min转速离心15min。 （4）显色：取2mL上清液置具塞试管中，并将试管放入冷 水盆中，加入5mL对二甲氨基苯甲醛溶液，摇匀。每个试样另 取2mL上清液于具塞试管中，加5mL硫酸溶液作为样品空白， 摇匀，室温放置30min。然后向每支试管内加入0.2mL亚硝酸钠 溶液，摇匀，室温放置25min。 （5）比色：以样品空白调零，在590nm波长处1cm光径测 定样品溶液的吸光度值。
色氨酸含量测定方法
色氨酸含量测定方法
1. 你知道高效液相色谱法吗？就像给色氨酸做一次特别的“体检”。
比如说，我们想知道牛奶里色氨酸的含量，就可以用这个方法呀！把样本放进去，仪器就像个聪明的侦探，能准确找出色氨酸的量呢！
2. 纸层析法也不错哦！这就好像给色氨酸画一张独特的“地图”。
比如检测麦粒里的色氨酸，用这种方法慢慢展开，色氨酸的位置就清晰可见啦，神奇吧！
3. 分光光度法呢，如同给色氨酸安上一个“信号灯”。
像是在研究某种保健品中色氨酸含量时，通过特定的光线照射，就能知道色氨酸有多少啦。
4. 荧光光度法呀，简直就是给色氨酸加上了一层“闪耀的外衣”。
举个例子，检测药品里的色氨酸含量，那闪烁的光芒就是色氨酸在“亮相”呢！
5. 氨基酸分析仪测定法，好像是为色氨酸准备的专属“舞台”。
想要精确知道饲料里色氨酸的量，让它在这个“舞台”上好好表现一下就知道啦。
6. 酶联免疫吸附测定法呢，就像是给色氨酸设下的一个“陷阱”。
比如在检测血液样本中的色氨酸时，它乖乖地就“落网”啦。
7. 气相色谱法也能用来测定色氨酸哦，这相当于为色氨酸造了一条特别的“跑道”。
拿植物样本来说，色氨酸就能在这条跑道上被检测到呢。
8. 微生物法呀，就如同让色氨酸去参加一场“比赛”。
好比检测食品中的色氨酸含量，它在这个“比赛”中的表现就决定了它的数量呢！我觉得呀，这些方法都各有奇妙之处，都能帮我们准确了解色氨酸的含量呢！。
色氨酸的测定
1.前言1.1测定色氨酸的意义色氨酸(Tryptophan ,Trp)β-吲哚基丙氨酸，化学式C11H12N2O2，相对分子质量204.23,为白色或微黄色结晶或结晶性粉末；无臭，味微苦。
水中微溶，在乙醇中极微溶解，在氯仿中不溶，在甲酸中易溶，在氢氧化钠试液或稀盐酸中溶解。
色氨酸是植物体内生长素生物合成重要的前体物质，其结构与IAA相似，在高等植物中普遍存在。
色氨酸是人体所需的一种重要的氨基酸，对预防糙皮病、抑郁症，改善睡眠和调节情绪，有着很重要的作用，氨基酸被广泛应用于食品、医药和饲料添加领域。
因此,研究色氨酸的分析测定在生物、医学和化学领域有重要意义。
1．2目前国内外测量色氨酸的研究现状目前测定色氨酸的方法主要有分光光度法[1]、荧光法[2]、高效液相色谱法[3]、毛细管电泳法[4]、原子吸收光谱法[5]和电化学法[6-9]等。
电化学分析法具有灵敏度高、选择性强、准确度好、分析速度快等特点，因而利用电化学方法测定色氨酸引起了人们极大的兴趣。
作为芳香类氨基酸的一种，色氨酸具有一定电化学活性，因此，采用电分析方法直接检测色氨酸是较理想的选择。
如邹永德等人[6]研究了多壁纳米碳管修饰玻碳电极伏安法测定色氨酸，研究了色氨酸在该电极上的电化学行为并优化了测定条件.与玻碳电极相比,该修饰电极明显降低了色氨酸的氧化峰电位,提高了氧化峰电流. 在pH7. 2的磷酸盐缓冲溶液中,测定色氨酸的线性范围为2. 5～140μmol/L,检出限为0. 12μmol/L. 对10μmol/L色氨酸测定的相对标准偏差为3. 4 % ( n = 8). 一些常见物质对测定无干扰,应用于人体尿样中色氨酸的含量测定。
姚军等人[7]利用聚对苯二酚修饰电极对多巴胺和L-色氨酸的电化学进行研究。
实验发现,在pH 515 的NaH2PO4-2Na2HPO4 缓冲溶液中,可用PHQ/ GCE 测定溶液中的DA 和L2Trp ,两者氧化峰电流均与浓度在1 ×10 - 3～5 ×10 - 6 mol/L 范围内呈良好线性关系,相关系数分别为01998 3 和01996 5 ,检出限分别为1 ×10 - 6 mol/L 和5 ×10 - 7 mol/L ,该方法简便快捷。
L-色氨酸含量和纯度的测定实验指导书
L-色氨酸含量和纯度的测定 实验指导书一、实验目的1.了解对二甲氨基苯甲醛与L-色氨酸的反应机理；2.了解高效液相色谱分析的基本原理；3.掌握L-色氨酸的测定方法。
二、概述和原理L-色氨酸的分析方法主要有氨基酸自动分析仪分析法、高效液相色谱分析法、毛细管电泳法、薄层色谱法和分光光度法等。
本实验主要采用分光光度法进行L-色氨酸含量测定。
分光光度法测定L-色氨酸的基本原理为：在硫酸溶液中，L-色氨酸与对二甲氨基苯甲醛发生缩合反应，生成的希夫碱对二甲氨基苯甲醛缩色氨酸为蓝色，颜色深度在一定范围内与L-色氨酸含量成线性关系，可在分光光度计下定量测定。
高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，其系统主要由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成，由于该法具有高效、快速和灵敏等特点，不仅可用于L-色氨酸含量的测定，还可用于纯度的测定。
其工作原理为：储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相）内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。
三、实验试剂及仪器1.试剂浓硫酸；对二甲氨基苯甲醛；亚硝酸钠；L-色氨酸标准品；磷酸二氢钾；冰醋酸；甲醇（液相纯）；纯净水；乙腈（液相纯）。
2.仪器紫外可见分光光度计，Agilent 1200 Series高效液相色谱仪。
四、发酵液中L-色氨酸含量的测定1.对二甲氨基苯甲醛溶液（3 g/L）制备准确称取0.3 g对二甲氨基苯甲醛，溶于100 mL 1:1浓硫酸中。
2.亚硝酸钠溶液（2%）制备准确称取亚硝酸钠0.2 g于10 mL容量瓶中，以蒸馏水定容，新鲜配制。
3.L-色氨酸标准储备液（100 mg/L）制备准确称取25 mg L-色氨酸标准品，用纯水定容于250 mL棕色容量瓶中，制得浓度为100 mg/L的L-色氨酸标准储备液，于4 ℃冰箱保存备用。
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４ ｉ ， ｉ Ｗ Ｌ Ｘ ｔ Ｊ ｏ ａ ｇ， ９ ， Ｙ Ｙ Ｌａ Ｐ ｕ ｅａ Ｃ ｒ ｔ ｒ １９ Ｈ ｏ ， Ｆ ｌ ｈ ｍ ｏ ． ４
６ １： ４ － ４ ６ １ ３１ ８
５ 廖卫平， 陆雪芬 ． 色谱， ９， （）１８ １ １ ２１ ２： ～１９ ９ ０ １
６ ｈ ａｇ ， ａａ Ｆ Ｊ ｒｍ ｔ ｒ １９ ，３ ：３ Ｃ ｕｎ Ｃ Ｒ ｇｎ Ｚ Ａ． Ｃ ｏ ａｏ ， ９０ ５４１－ ｈ ｇ
Ｘ 故选 择紫 外波 长为 ２５ ｍ， Ａ， ４ ｎ 以利 于 Ｋ 和 Ｘ Ａ Ａ
的检测。 不少生物样品中的５ Ｔ等物质浓度很低， － Ｈ 需要电化学检测器检测， 其检测条件我们已报道 过［。－Ｋ ４ ３Ｈ Ｎ在检测电压为０４ ］ ． Ｖ以上时开始有响
应 ，． Ｖ 时响应 接近最 大 。而 Ｋ Ｘ ０７ Ｎ， Ａ和 Ｔ Ｐ在 Ｒ
样品 中 ３ Ｋ 检 獬成晌？赡 能。 流 鞫 嘀泻 ５ － 觳测 可 堋 Ｔ诹
ｍ ｏ／ ｍ ｌＬ三氯乙酸的情况下再观察ｐ Ｈ值对各物质
保 留时 间的影 响 ， 发现 其变 化 明显不 同于在 流动相
中胁不 三 含 氯乙 酸 的情 ，尤其 ｐ 那榭况 ≥ ． ５ ０ Ｔ Ｈ － 保
由于３ Ｋ － Ｎ保留时间短， Ｈ 而有的生物样品成分 复杂， 容积峰大，－Ｋ ３Ｈ Ｎ常被掩盖。Ｃ ｕｎ ６ ｈａｇ等［用 ］
研究报告
色氨酸及其主要代谢产物的分离和在生物样品中的测定＊
易咏红
提 要
廖卫平
赵绮华
广州 ５０６） １２０
陆雪芬
（ 广州医学院神经科学研 究所
建 立 以 砸酸 缓 冲 系统 和 联 用 的 高 效 液 相 色 谱 法 ， 离 和 测 定 了 色 分
μ Ｌ直接进样。 血清０５ Ｌ加３５ ｏ／ ．ｍ ．ｍｌ Ｌ过氯酸０２ ． ｍ ， Ｌ 振荡后 ４００ ｆ ０ ｇ 离心 １ ｍｉ， ０ ｎ取上清液 ５ 蘈 ０μ Ｌ
进 样 。
３Ｈ Ｎ无明显影响， －Ｋ 未用于生物样品测定。Ａ － ｓ ｍ ｓ］ ｕ［用三氯乙酸作离子对试剂以帮助分离儿茶酚 ７
胺［ ７ ］ 。 研 芯恐杏闷渥 为 胱 对 烈 加 本 究 用 作 离 佣试剂以增 ３－ ＫＮ
本研究使用的流动相在 ｐ ． 和三氯乙酸浓 Ｈ４０
Ｅ Ｄ上需要较高电压（．９Ｖ） ０９ 才有较好的响应［］ １， ０ 这不利于其它物质的测定， 故用ＵＶ检测。
度为５ ｍ ｏ／ ０ ｍｌ Ｌ时， 各物质可得到较好的分离。但 不同生物样品中Ｔ Ｐ各代谢产物浓度差别很大， Ｒ 其 来源、 意义也各不相同， 在有关研究中常根据不同目 的有所侧重， 检测条件可作一些调整。 与以往报道相似［］血标本中有一波峰出现在 １， ０ ３ Ｋ － Ｎ部位而干扰其检测， Ｈ 逐步降低电压后发现电 压在＋０５ ． Ｖ以下干扰物无响应， 故测定时可将Ｅ Ｄ 电压设在＋０５Ｖ， ． 此条件下 ５ Ｔ也有良好的响 － Ｈ 应， 但血液中许多其它物质则无响应， 从而减少干 扰。在此电压下 ５ Ｔ － Ｐ和 ５ ＩＡ无响应， Ｈ －Ａ Ｈ 但它主 要来源于中枢神经系统， 血中的检测临床意义不大。 Ｔ ＰＫ Ｘ Ｒ ，Ｎ，Ａ在Ｕ Ｖ波长２５ｎ ４ ｍ时可检测，Ａ在 Ｋ 生理状态下由于浓度低未能测到， Ｒ 但Ｔ Ｐ在负荷试 验时可测得。 以往我们已成功地应用乙酸缓冲系统和甲醇流 动相， Ｄ电压为 ０６Ｖ的条件下检测脑脊液中 在Ｅ ． Ｔ Ｐ及其经 ５ Ｔ途径的代谢物， Ｒ － Ｈ 本研究在此基础 上应用三氯乙酸使 ３ Ｋ － Ｎ保留时间延长而被检测。 Ｈ Ｋ Ｘ Ｎ，Ａ和Ｋ Ａ由于浓度太低未能测得，ａ等［在 Ｃｌ １ ］ 脑组织标本中可测到。 尿液是不少代谢物的最后排泄途径， 在一定程 度上能反映Ｔ Ｐ总的代谢情况， Ｒ 已有不少文献报 道［。 ８ 尿中Ｔ Ｐ， Ｈ Ｋ Ｋ ５ＨＡ ］ Ｒ ５ Ｔ，Ｎ，Ａ， ＩＡ等浓度不 － －
低 ， 方法可用 于尿 液检测 。 本
参
考
文
献
１ ｌ Ｍ ，Ｓ ｅｍａ Ａ Ｃａ Ｅ ｈ ｒ ｎ Ｄ．Ｊ ｕ ｏｈ ｍ，１ ７ ， ０ ６ ７ Ｎｅ ｒｃｅ ９ ８ ３ ：０ －
６３ １
２ ａｉ Ｉ Ｎ ｕｏｈｍａｏ， ９２２ ：２ ７１３ Ｌ ｐ Ｐ ｅｒｐ ａ ｃｌ １８ ，１１２－２３ ｎ ． ３ ｏｔ Ａ ，Ｖ ｚ ｎ Ａ，Ｆｅｃ Ｅ Ｓｈ ａｃ Ｒ Ｆ ｓｅ ｒ Ｃ ｅｚ ｉ ｒｎｈ Ｄ， ｃｗ ｒｚ ａ ． Ｎ ｕｏｃＬ ｔ， ９４４ ：７－７ ｅｒｓ ｅｔ １８ ，８１３１８ ｉ
情 见 况 图 。
３３ 各物质检测条件的分析 ． Ｔ Ｐ及其许多代谢产物在ＵＶ波长为 ２４ｎ Ｒ ５ ｍ 时均有一定的响应， 可用于其浓度较高的样品如尿 液中有关物质检测。Ｔ Ｐ在波长增加时响应有改 Ｒ
善， 故有的研究中使用波长为 ２０ ｍ８ ２０ ６ ｎ ［和 ８ ］
ｎ ９ ｍ［。本研究对紫外检测器波长分别为 ２０２５ ］ ４，４， ２４２０ ８ ｍ时各物质吸收情况进行了研究。 ５，６ 和２０ｎ 发现 Ｔ Ｐ在 ２０ｎ Ｒ ６ ｍ和 ２０ｎ ８ ｍ时有较好的响应。 Ｋ Ｎ在上述波长范围内变化不大， Ａ和Ｘ 但Ｋ Ａ的响 应却随着波长的增加而明显的降低， ２５ ｍ处响 在 ４ｎ 应最好。 生物样品中Ｔ Ｒ浓度一般明显高于Ｋ Ｐ Ａ和
条件进行 了讨论 。
关键词 高效 液相色 谱法， 色氨酸， 羟色 ， ５ － 胺 犬尿酸原， 犬尿酸， 羟犬尿酸原， ３ － 黄尿酸
分类号 Ｏ６８Ｑ５ ５／ １
１ 前言 色氨酸（Ｒ ） Ｔ Ｐ 为人体必需氨基酸之一， 其许多 代谢产物有重要生理功能。 在脑Ｔ Ｐ主要通过色氨 Ｒ 酸羟化酶的作用生成５羟色氨酸（－Ｔ ）再脱羧 － ５Ｈ Ｐ ，
３ Ｋ ５Ｈ Ｐ ５ Ｔ，－ Ｉ Ａ 等 ， 测 电压 ０ ４ － Ｎ， Ｔ ，－ ５ Ａ Ｈ － Ｈ Ｈ 检 ．～
０８ Ｖ。 ．５
表明该途径也存在于中枢神经系统。 Ｎ，－Ｋ Ｋ ３ Ｎ和 Ｈ
Ｑ Ｉ 等 有 经 性１，Ａ 有保 作 ［， ＵＮ 具 神 毒 ［］ 则 护 用３故 ，Ｋ ２ ］
Ｔ Ｐ及其上述产物分离与测定在神经科学研究中 Ｒ 十分重要， 以往已有不少报道［ １。 ４０ 但由于生物样品 ～］
３ 结果和讨论
３ １ 流 动 相 ｐ 值 对 各 物 质 保 留 羰 间的影 响 Ｈ
保留时间。以乙酸缓冲系统ｐ ． 为基础， Ｈ４０ 观察不
同三氯 乙酸 浓度对 各物 质保 留时 间的影 响， 结果 如
图 １ ａ 尽 Ｔ尤 黾 氯 纫宜酸 除Ａ Ｘ 留时 缩 齂 保 奔渌
采用乙酸缓冲流动相，Ｈ值对各物质保留时间 ｐ 的影响见图１ Ｔ Ｐ及 ５ Ｔ ， Ｈ ，－Ｉ Ａ的保 。Ｒ － Ｐ５ Ｔ ５ＨＡ Ｈ － 留时间改变已经报道［，－Ｋ Ｋ Ｘ ４ ３ Ｎ，Ｎ，Ａ及 Ｋ ］ Ｈ Ａ的 保留时间在ｐ ．～６０ Ｈ３０ ． 之间随ｐ Ｈ值升高而延 长。 如图１ 所示， Ｈ４０ ． 时可使Ｔ Ｐ各 － ａ 在ｐ ． 或５０ Ｒ
要通过肝 内色氨酸吡咯酶催化 ， 经犬尿 酸原 （ Ｎ） Ｋ 代
谢为犬尿酸（Ａ） ３羟犬尿酸原（－Ｋ ， Ｋ 或 － ３ Ｎ）后者 Ｈ 再继续代谢为黄尿酸（Ａ） Ｘ 或喹啉酸（ＵＩ 等。既 Ｑ Ｎ）
往 已发现 许多疾病该 代谢 途径 异常 ， 近年 来有研 究
控制器和 ２０ １ 型进样阀组成，ｌａｐｅ －Ｍ Ｄ Ｕｔ ｓｈｒ Ｔ Ｏ Ｓ ｒ ｅ 反相色谱柱（． ｍ ｉ ． ５ ｍ， μ 连接 １３ ４６ ｍ ｄ×２ ｃ ５ ｍ） ． ６ 型可变波长紫外检测器及Ｌ －Ｃ型电化学检测器 Ｃ４ （Ａ ＩＣ ， Ｓ 氧化型） Ｂ Ｓ ． Ｕ Ａ， Ｎ 。后者以玻璃碳电极为 工作电极，ｇＡ Ｃ 电极为参考电极。紫外检测器 Ａ ／ｇ ｌ 用于Ｔ ＰＫ Ｘ Ｋ Ｒ ，Ｎ，Ａ，Ａ等测定， 电化学检测器测定
三 乙胺作 为一种离子对试剂成功地 使某些洗 脱较快
的 色 氨彼 酸岽 ò 代 谢 晃 物 锉保 留 Ａ 时 奔 间 溲 延 长 而 有欣 于 利 分 离 耄 但 对 ǘ
留时间明显延长（ － 考虑各物质的最佳保留时 图１ ｃ。 间和分离效果， 一般情况下可选流动相ｐ ．、 Ｈ４０三 氯乙酸浓度 ５ ｍ ｏ／ ， ０ ｍ ｌ 在此条件下各物质的分离 Ｌ
氨酸 经 ５羟色胺和犬尿酸原两条主要代谢途径 的 ８ － 种代谢物 。使用三氯 乙酸作离子对试剂 以延长 ３羟犬尿酸 －
原的 保留时间， 分析了 流动相 ｐ Ｈ值和三氯乙酸浓度对各物质分离的 影响 及检测条件。 结果表明， ｐ Ｈ值及三氯 乙酸浓 度对各 物质保留 时间 有明显影响， 可作为控制分离的主要因素。 此外， 对生物样品中 各物质分离和检测
７ ｍｌ ５ｍ ｏ／ Ｌ三氯 乙酸 ， 后 用冰 乙酸调 ｐ 值 至所 然 Ｈ
需值。用前减压抽气５ ｎ流速１０ ／ ｉ。 ｍｉ， ． ｍＬｍｎ ２４ 标本处理方法 ．
脑 脊液 （ Ｓ ） ０２μ 的微滤器过 滤后取 ５ Ｃ Ｆ用 ． ｍ ０
Ｘ Ａ等 ８ 种物质的分离和测定方法。
＊ 家 自 国 然科学基金项目 ３３０４）广州市科委课题（７ － － ） （９００５， ９－ ０ Ｏ Ｋ ５１ 本文收稿 日 １９ ０ ２， 期：９８ ５ ５修回日 １９－ －５ －－ 期： ８ ９２ ９ ０
物 Ｔ Ｐ ５ Ｔ ，－ Ｔ，－ Ｉ Ａ，－ Ｋ Ｋ Ｋ Ｒ ，－ Ｐ ５Ｈ ５ Ａ ３ Ｎ， Ｎ， Ａ， Ｈ Ｈ Ｈ
标准品均为Ｓｇ 公司产品， ｉ ｍａ 甲醇为北京化工 厂产品， 其余为国产分析纯试剂。 标准品贮备液浓度 为１ ｍｌ ， ｍｎ ／ 工作液由流动相稀释。 ｏＬ ２３ 流动相 ． 流动相为含０１ ｍ ｌ Ｎ ２Ｄ Ａ的０１ ｏ／ ． ｍ ｏ／ ａＥ Ｔ Ｌ ．ｍ ｌ Ｌ乙酸钠溶液与甲醇按体积比９ ５ ５： 混合， ０ 或加 ～
Ａｃｓ ９ ０ １２ ２ ７２ １ ｔ ，１８ ，０ ： ４－ ５
９ ｉ ａ ｓ ．Ｊ ｒｍａ ｇ ， ９９１５２３２９ Ｒｃ ｒ Ｄ Ｃ ｏ ｔ ｒ １７ ，７ ：９－９ ｈｄ Ａ ｈ ｏ