花色苷测定
ph示差法测花色苷原理
ph示差法测花色苷原理花色苷，听名字就感觉高大上，是吧？它们就是植物中的一种天然色素，通常藏在水果和花朵里，给我们带来那些迷人的色彩。
说到测量这些花色苷，大家听过“pH示差法”吗？这可是一种挺有意思的方法，像个小魔法一样，能让我们了解这些色素的秘密。
今天就来聊聊这个方法，轻松点，咱们不用专业术语，像聊天一样。
先来点背景知识。
花色苷其实是种有趣的东西，主要存在于植物中，负责色彩的传递。
你看到那些鲜艳的蓝莓、红葡萄，这些颜色可都是它们的功劳。
好吧，别光想着吃的，咱们得说说怎么测它们。
pH示差法可真是个神奇的工具，简单又有效。
它依靠植物色素对酸碱环境的反应，来判断花色苷的含量。
听起来像在做化学实验，但其实就像是在调饮料一样，酸酸甜甜的。
这个方法怎么操作呢？想象一下，你拿着一杯饮料，慢慢加入柠檬汁，颜色会变化，对吧？花色苷也是一样，pH值不同，它们的颜色就会出现大变脸。
比如在酸性环境下，颜色可能偏红；而在碱性环境下，颜色可能变成蓝色，甚至绿色。
是不是很神奇？就像小丑变魔术，令人目不暇接。
科学家们就利用这个变化来测量花色苷的含量，简单又直接。
使用这个方法，咱们需要一些仪器和试剂，像酸碱指示剂这些小家伙。
没啥复杂的，只要把样品调和后加点指示剂，就能看到颜色变化。
然后，再用比较的方法，把结果和标准样本对比，便能得出结果。
其实整个过程就像在玩颜色游戏，轻松又有趣。
只不过，这个游戏可以帮助我们了解植物的营养成分，对农业、药学都有很大的帮助。
很多人会问，为什么选择pH示差法呢？嘿，答案简单。
这个方法不需要高深的仪器，普通的实验室就能搞定。
结果精准，误差小。
它能快速出结果，像快餐一样，省时省力。
想想看，咱们做实验时，等个几天的感觉，真是让人抓狂。
用pH示差法，立马就能看到颜色变化，心里乐开了花。
大家可能想问，这个方法有没有局限性呢？当然有！就像一把双刃剑，既有优点，也有不足。
比如，对于某些复杂的植物样品，可能会出现干扰，导致结果不那么准确。
花青素检测方法（花色素苷）
花青素检测方法（花色素苷）
A1 花青素的测定方法
A1.1 方法来源：企业内控方法
A1.2 方法原理：
A1.3 试剂：
A1.3.1 甲醇（AR）
A1.3.2 盐酸（AR）
A1.3.3 2%盐酸甲醇：盐酸：甲醇=2：100（V/V）A1.4 仪器和用具：
A1.4.1 电子天平（1/100000）
A1.4.2 玻璃仪器：容量瓶
A1.4.3 超声波清洗器
A1.4.4 紫外分光光度计
A1.4.5 比色皿（1cm）
A1.5 步骤
精密称取样品20mg，加60ml 2%盐酸甲醇超声溶解，取出冷却，定容至100ml，摇匀，过滤，待测。
A1.6 测定
用1cm 玻璃比色皿在540nm 波长下测定其吸光度A，用2％盐酸甲醇溶液作空白对照。
（吸光度应控制在0.3～0.7之间，否则应调整试样液浓度，再重新测定吸光度。
）
A1.7 计算
A × V
X = × 100%
1020 × W × 100
其中： X：花青素含量，%；
A：样品在波长为540nm处的吸光度值；
V：样品稀释体积，mL；
W：样品的称样量，g；
1020：飞燕草素的比吸光值。
总花色苷含量测定
总花色苷含量测定—分光光度法1、综合国内外资料,主要有以下几种计算吸光值A 的方法[1]:(1) 当叶绿素是该样品中主要存在的干扰色素时,需消除叶绿素吸收含量的影响;此时,计算公式为: A = (Amax - A620) - 0.1(A650 - A620)(2) 含有其它干扰物质时花色苷总量的测定:a) 直接法:在新鲜的植物提取物中,因为很少含有在花色苷的最大吸收区发生吸收的干扰物质,花色苷总量可以直接由可见区最大吸收波长处的吸光度来测定。
计算公式为: A = Amax直接法吸收光谱测定:用××分光光度计于250 - 800nm 下全波长扫描,得到花色苷在0.1 % 盐酸—80 % 乙醇中的可见光区最大吸收波长,在此最大波长下测定各样品的吸光值A 。
b) pH 示差法:在加工或储藏过程中,会产生褐色降解物,这些降解物和花色苷具有相同的能量吸收范围。
这类花色苷总量的测定,通常用pH示差法[8] 。
计算公式为: A = (Amax - A700) pH1.0 - (Amax - A700) pH4.5 pH 示差法吸收光谱测定:先确定合适的稀释因子,使样品在λmax下的吸光度在分光光度计的线性范围内;然后制备两个样品稀释液,其中一个用氯化钾缓冲液(0.025M,pH1.0) 稀释,另一个用醋酸钠缓冲液(0.4M,pH4.5) 稀释,将稀释液平衡15min 后,用蒸馏水做空白,分别测定两种样品稀释液在λmax和700nm处的吸光值A。
2、花色苷总含量的测定[2]：通过波长扫描,确定××花色苷在可见区的最大吸收波长为λmax。
利用花色苷的结构特性,当pH为1.0时在λmax处有最大吸收峰,而当pH 为4.5时,花色苷转变为无色查尔酮形式,在λmax处无吸收峰,用示差法计算溶液中总花色苷含量。
计算公式为: C (mg/ g) = (A0 - A1) ×V ×n ×M / (ε×m )式中: A0 、A1 —分别为pH1.0、pH4.5时花色苷在λmax处的吸光值V —提取液总体积(mL )n —稀释倍数M —cy-3-glu (矢车菊- 3-葡萄糖苷)的相对分子质量(449.4)ε—cy-3-glu的消光系数( 29600)m —样品质量( g)3、花色苷含量TAcy的计算公式为(以天竺葵色素-3-葡萄糖苷计)[3] :TAcy (mg/ hg) =(A ×433 ×10 ×V）÷(22 400 ×m)×100A = (OD500nm - OD700nm) pH1.0 - (OD500nm -OD700nm) pH4.5式中: V —提取液的总体积(mL)m —取样量(g)22 400 —天竺葵色素-3-葡萄糖苷的摩尔消光系数433 —天竺葵色素-3-葡萄糖苷的摩尔分子量。
花青苷(花色苷)种类、提取及检测
花青苷种类、提取及检测一.种类花色素均具有类黄酮的基本结构，由两个苯环和一个含氧杂环组成的(C6-C3-C6)C15化合物(如图)，根据B环羟基化和甲基化位置和数目的不同而将花色素主要分为六类:天竺葵色素((Pelargonidin)、矢车菊色素((cyanidin)、芍药色素(peonidin)(3＇-甲基矢车菊色素)、飞燕草色素(delphinidin)、矮牵牛色素(petunidin)(3＇,5＇-甲基飞燕草色素)和锦葵色素(malvidin)( 3＇,5＇-二甲基飞燕草色素)。
不同植物中花色素发生糖苷化的位点(C3、C5和C7位等)和数目的差异，及酞化程度的不同使植物中存在着不同的花色素普，其结构复杂，但都以这六种花色素为基本结构(Grotewold，2006)。
二.提取国内外学者对花青苷的提取做了大量研究，提取目的及目标花青苷不同，提取方法略有差异。
花青苷易溶于水、甲醇、乙醇等极性溶液，花青苷的稳定性受酶、温度、氧气、光、pH值、金属离子等理化性质的影响，在中性和碱性条件下不稳定。
提取过程常采用酸性溶液，酸能够破坏植物细胞膜并溶解水溶性色素，甲醇溶液提取效率高于乙醇及水溶液。
花青苷一般用于食品着色，考虑到甲醇的不安全因素，一般选用体积分数为1%的乙醇溶液。
采用盐酸酸化可保持提取液pH值较低，阻止无酰基花青苷的降解。
随着盐酸被浓缩，pH 值升高，导致花青苷的降解。
为获得更接近于天然状态的花青苷，采用弱有机酸或中性溶剂做初步提取，弱有机酸多用甲酸、乙酸、丙酸、柠檬酸和酒石酸，中性溶剂一般采用丙酮作提取剂。
粗提后的花青苷提取液浓度很低，浓缩时一般不超过40℃，时间也不宜太长。
1.2.花青苷含量的测定：用0.1%的盐酸甲醇浸提叶片2 h后,测657nm、530nm处的吸光度。
3.4.5.6.7.8.9.三.检测紫外—可见光谱是花青苷结构鉴定的经典方法，其鉴定方法为：①花青苷有2个最大吸收波长,500~540nm附近及27nm附近，据此可判定是否为花青苷色素；②若B环有邻位酚羟基，则向体积分数0.01%盐酸-甲醇溶液中滴加3~5 滴AlCl3，甲醇或乙醇溶液时会出现蓝移；③糖苷位置可据花青苷吸光度比值A440/A max判定；④在波长300~330nm间有吸收峰，表明存在酰基；⑤若在波长440n处有肩峰，则5号位羟基没被取代；⑥若在紫外光下有荧光，表明在5号位有取代基。
植物花色苷含量检测试剂盒说明书 可见分光光度法
植物花色苷含量检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号：BC1380规格：50T/24S产品内容：提取液：液体30mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体30mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体30mL×1瓶，4℃保存。
产品说明：花色苷是一类可食用的易溶于水等溶剂的天然色素。
花色苷使植物呈现多彩的颜色，本身更具有多种保健作用，因而在天然食用色素、保健品和医药行业都有着广阔的应用前景。
根据花色苷在不同pH下的结构性质测定花色苷含量，在pH为1时花色苷在530nm处有最大吸收峰,而当pH 为4.5时，花色苷转变为无色查尔酮形式在530nm处无吸收峰，通过测定不同pH下的530nm和700nm处的吸光度值计算样本中花色苷的含量。
自备实验用品及仪器：可见分光光度计、离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理：按照样品质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g样品，加入1mL提取液），充分匀浆后转移到EP管中，封口膜封口防止挥发，60℃浸提30min，期间可震荡数次，提取后提取液定容至1mL。
12000rpm，常温离心10min，取上清液待测。
二、测定步骤：（1）可见分光光度计预热30min，蒸馏水调零。
（2）加样表：试剂名称（μL）测定管1测定管2样品100100试剂一900-试剂二-900充分混匀后测定测定管1和测定管2分别在530nm和700nm处的吸光度，测定管1在530nm和700nm处的吸光值记为A1、A1’，测定管2在530nm和700nm处的吸光值记为A2、A2’，计算ΔA=（A1-A1’）-（A2-A2’）。
三、花色苷含量计算：1、按样本鲜重计算：花色苷含量（μmol/g鲜重）=[ΔA÷(ε×d)×103×F]×V提取÷W=0.037×ΔA×F÷W。
液相色谱使用方法(花色苷)
一、摘要⑴、葡萄皮色素来源较为丰富。
葡萄果皮花色苷不但含量高, 而且种类多,葡萄花色苷作为一种天然食用色素, 安全、无毒，且具有降低肝脏及血清中脂肪含量、抗氧化、抗肿瘤、延迟血小板凝集等多种生理和药用活性功能对葡萄皮花色苷的提取技术及稳定性的研究具有重要意义⑵、目前为止花色苷的定量分析方法主要有直接比色法、pH示差法、亚硫酸脱色法、色谱法，本次实训我们采用液相色谱法对花色苷进行提取。
⑶、用于液相色谱法提取葡萄酒中的花色苷前要进行样品的预处理，再测定其中的花色苷来判断葡萄酒或者葡萄皮中的花色苷，标定是否合格以及是否符合国家标准。
二、关键词⑴花色苷⑵液相色谱⑶分光光度计三、正文引言花色苷的提取方法有溶剂浸提法、微波辅助萃取法、酶解法超高压辅助提取法、本次我们是利用微波萃取，微波是一种频率300～300 000 MHz的电磁波。
在微波场中吸收微波能力的差异使得基体物质的某些区域或萃取体系中的某些组分被选择性加热，从而使得被萃取物质从基体或体系中分离，进入到介电常数较小、微波吸收能力相对较弱的萃取剂中。
由于传统提取过程中能量累积和渗透过程以无规则的方式发生，萃取的选择性较差，只能通过改变溶剂性质或延长溶剂萃取时间来获得，同时又受限于溶解能力和扩散系数，效果不够理想；微波因其能对萃取体系中不同组分进行选择加热，因而能使目标组分直接从基体分离萃取。
微波萃取受溶剂亲和力的限制较小，可供选择的溶剂较多。
另外，微波加热则利用分子极化或离子导电效应直接对物质进行加热，避免了传统加热过程因热传导、热辐射造成的热量损失，加热效率高、升温快速均匀，缩短了萃取时间。
具有设备简单、适用范围广、重现性好、萃取效率高、萃取时间短、能耗低、污染轻等特点。
用液相色谱法来检测葡萄酒及葡萄皮中的花色苷，用等度及梯度检测花色苷的存在来判断其营养成分。
⑴、材料及方法①仪器及试剂材料：葡萄皮仪器：超声波提取器、紫外-可见分光光度计、安捷伦-高效液相色谱仪试剂：甲醇、甲酸、水②实验方法葡萄皮花色苷提取液的制备干葡萄皮→粉碎→加入提取液→超声波辅助提取→花色苷提取液称取 1g 粉碎过的干葡萄皮，按 1:40（g/mL）的料液比加入酸性乙醇提取液，用超声波清洗器辅助提取。
实验四 葡萄果实中花色苷提取与测定
实验四葡萄果实中花色苷提取与测定一、实验目的1、了解并掌握葡萄果皮中花色苷提取的原理和操作；2、掌握葡萄果皮重花色苷含量的测定方法和步骤。
二、实验原理花色苷是红色葡萄果实中一类非常重要的呈色物质，并且多数情况下主要存在于果皮当中，只有极少数染色品种的果肉中存在花色苷。
花色苷主要有花色素（包括花翠素、花青素、甲基花青素、甲基花翠素及二甲花翠素）经过羟基化后以单体糖苷的形式存在。
三、实验材料红色葡萄果实、吸水纸、研钵、研杵、液氮、分光光度计等四、主要项目和方法1、果皮花色苷提取把每个样本（20粒）的葡萄果皮取下，然后用蒸馏水冲洗果皮，除去果皮粘连的部分果肉与糖分等并用吸水纸吸干，进行称重（M），然后再液氮中将果皮研磨成粉末，准确称取3.0000g粉末放入50ml离心管中，加入30ml酸化甲醇溶液（1mol/L HCl/MOH/水，1/80/19，v/v/v），在100%功率条件下超声辅助提取30min，温度控制在25摄氏度，然后将其只置于低温离心机中离心（8000r/min）15min，收集上清液。
向残渣中继续加入30ml酸化甲醇溶液，在此按照上述步骤进行提取，重复4次，合并所有上清液（120ml）于细口瓶中，-20摄氏度避光保存。
2、花色苷含量测定和计算采用pH示差法，提取液分别用pH值为1.0盐酸-氯化钠缓冲液稀释20倍。
然后分别在510nm与700nm下测定两种稀释液的吸光度。
吸光度A为：A=(A510nm-A700nm)pH1.0 - (A510nm-A700nm)pH4.5花色苷含量用矢车菊素-3葡萄糖苷（R CGE , mg/g）表示，即R CGE=（A × MW × DF × Ve × 1000）/（ε× 1 × M）式中 MW-矢车菊素-3葡萄糖苷相对分子量，取449DF-稀释倍数Ve-提取液总体积M-葡萄皮质量ε–摩尔吸光系数，取29600五、实验结果A=0.9007-0.0087-(0.0813-0.0065)=0.8172nmR CGE=因此该葡萄果实中，花色苷含量为 mg/g。
紫甘蓝花色苷分离、鉴定及性质研究
紫甘蓝花色苷分离、鉴定及性质研究紫甘蓝花色苷分离、鉴定及性质研究植物中存在着各种具有天然活性的化合物，包括表皮色素、花青素和花色素等。
花青素是一类具有广泛生物活性的天然色素，广泛存在于植物中，具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤和降低心血管疾病风险等多种生理作用。
紫甘蓝（Brassica oleracea var.purpurea）是一种地中海产的野生植物，其花朵中含有丰富的花青素。
本研究旨在分离、鉴定和研究紫甘蓝花色苷的性质。
首先，我们以新鲜紫甘蓝花朵为材料，采用乙酸乙酯为提取溶剂，经过超声波提取，得到花色苷的提取物。
然后，利用聚苯乙烯D101树脂进行吸附分离，再通过醇洗和醋酸乙酯洗脱，得到主要的花色苷分离物。
经过硅胶层析、高效液相色谱等多种方法对分离物进行进一步纯化、分离和鉴定。
经过鉴定，我们成功分离并鉴定了紫甘蓝花朵中的花色苷。
通过高效液相色谱仪测定，分离物的保留时间和紫外-可见吸收光谱与标准品进行对比，得到了紫甘蓝花朵中最主要的花色苷成分。
同时，通过质谱仪测定，确定了分离物的分子质量和分子式。
根据质谱数据和核磁共振波谱等技术，还鉴定了分离物的结构和化学式。
在性质方面，我们对分离物进行了初步的理化性质研究。
首先，测定了分离物的溶解度，发现其可溶于乙酸乙酯、乙醇和水等多种溶剂中。
接着，我们研究了分离物的熔点和沸点。
结果显示，分离物具有高熔点和沸点，说明其在高温环境下相对稳定。
此外，我们还测定了分离物在不同pH值下的稳定性。
结果发现，在中性和弱酸性条件下，分离物相对稳定，但在碱性条件下容易降解。
最后，我们对紫甘蓝花色苷的生物活性进行了初步的研究。
通过体外抗氧化实验，发现紫甘蓝花色苷具有较强的抗氧化活性，可以对清除自由基起到一定的保护作用。
此外，我们还进行了细胞毒性实验，发现花色苷对某些肿瘤细胞具有一定的抑制作用。
综上所述，本研究成功分离、鉴定了紫甘蓝花朵中的花色苷，并初步研究了其性质和生物活性。
这些研究结果对于深入理解紫甘蓝花色苷的生物活性和应用潜力具有重要的意义。
食品中花色苷物质的提取与评价分析方法研究
食品中花色苷物质的提取与评价分析方法研究食品是人类生活中不可或缺的重要组成部分，而食品的质量与营养价值与我们的健康息息相关。
其中，花色苷作为一类重要的生物活性物质，在食品中的含量和质量评价上具有重要意义。
本文将探讨食品中花色苷物质的提取与评价分析方法的研究进展。
首先，花色苷是一类在植物中广泛存在的化合物，其具有抗氧化、抗炎、抗癌等多种生物活性。
因此，研究食品中花色苷的含量和活性对于评估食品的营养价值和功能性具有重要意义。
目前，常用的花色苷提取方法主要包括传统浸提法、超声波浸提法、微波辅助浸提法等。
这些方法均能有效提取食品中的花色苷物质，但其提取效率和稳定性仍然是需要改进的方面。
其次，针对花色苷物质的评价分析方法也日益多样化。
最常见的评价方法是高效液相色谱法（HPLC），该方法通过对待测样品进行分离和检测，能够准确测定花色苷的含量，并且具有灵敏度高、分辨率好等优点。
此外，近年来还涌现出一些新的评价方法，如基于荧光、红外光谱等技术的分析方法。
这些新方法能够提高测定效率，减少样品前处理步骤，并且能够对多个成分进行同时测定，从而更好地满足食品分析的需求。
另外，花色苷的评价分析方法也面临一些挑战和问题。
首先，不同食品样品中花色苷的组成和含量可能存在较大差异，因此，开发适用于不同食品的标准分析方法是亟待解决的问题。
其次，一些食品中的花色苷物质含量较低，对于灵敏度要求较高的分析方法仍然有待改进。
此外，花色苷物质的结构多样化，导致不同花色苷物质之间的相互转化和互相影响，使得分析方法的选择和分析结果的解释变得更加复杂。
综上所述，食品中花色苷物质的提取与评价分析方法的研究是一个具有挑战性和重要意义的课题。
当前，虽然已经有许多方法被提出和应用于花色苷的提取和评价，但仍然需要进一步完善和改进。
相信随着科学技术的不断发展和进步，我们能够找到更加高效、灵敏和准确的方法，为评估食品的营养价值和功能性提供更有力的支持。
食品科学领域的专家和研究者们将继续努力，推动食品分析方法的创新和改进，为人类提供更加健康和有益的食品。
植物花色苷检测
迪信泰检测平台
植物花色苷检测
花色苷（Anthocyanin）是广泛存在于植物根、茎、叶、果实等器官的细胞液中的黄酮类化合物，由花色素与糖以糖苷键结合而成的，可使植物呈现由红、紫红到兰等不同颜色。
作为一种天然色素，具有抗氧化、抗衰老、抗癌、抑菌、抗病毒及预防心脑血管疾病等多种生物学功能，因此在食品、化妆品、医药领域具有重要的开发利用价值和应用前景。
迪信泰检测平台采用生化法，可高效、精准的检测植物花色苷的含量。
此外，我们还提供其他氧化应激类检测服务，以满足您的不同需求。
生化法测定植物花色苷样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。
周期：2~3周。
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）。
2. 相关参数（中英文）。
3. 图片。
4. 原始数据。
5. 植物花色苷含量/活性信息。
迪信泰检测平台可根据需求定制其他物质测定方案，具体可免费咨询技术支持。
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3.3.1 花色苷含量的测定
（1）缓冲液的制备：
pH1.0缓冲液：使用电子分析天平准确称量1.86g氯化钾，加蒸馏水约980ml，用盐酸和酸度计调至pH1.0，再用蒸馏水定容至1000ml。
pH4.5缓冲液：使用电子分析天平准确称量32.81g无水醋酸钠，加蒸馏水约980ml，用盐酸和酸度计调至pH4.5，再用蒸馏水定容至1000ml。
（2）花色苷含量的测定：
采用pH示差法[33]：用pH1.0、pH4.5的缓冲液，将样液稀释到适当的倍数,放在暗处，平衡15min。
用光路直径为1cm的比色皿在可见分光光度计的510nm 和700nm处，分别测定吸光度，以蒸馏水做空白对照。
按下式计算花色苷的含量。
A=[ ( A510 - A700 ) pH1.0 - ( A510 - A700) pH4.5]
花色苷浓度C ( mg/L) = A×MW×DF×1000 /(ε×l)
两式中：
( A510 - A700 ) pH1.0—加pH1.0缓冲液的样液在510 nm和700 nm波长下的吸光值之差；
( A510 - A700) pH4.5—加pH4.5缓冲液的样液在510 nm和700 nm波长下的吸光值之差；
MW=449.2（矢车菊—3—葡萄糖苷的分子量，mg/mol）；
DF=样液稀释的倍数；
ε=26900（矢车菊—3—葡萄糖苷的摩尔消光系数，mol-1）；
l=比色皿的光路直径，为1cm。