植物花色苷含量检测试剂盒说明书 可见分光光度法
花青素测定
四川农业大学Sichuan Agriculture University植物生理实验报吿实验四、花青素的测定一、实验目的花青素是类黄酮类色素中最重要的一种，广泛存在于植物花、果实、茎叶中，对这些器官的观赏价值和商品形状有重要价值。
本实验学习花青素的提取及测定方法。
二、实验原理花青素在酸性溶液中呈红色，其颜色的深浅与花青素的浓度成正比。
花青素酸性溶液的吸收高峰波长是530nm ，摩尔消光系数为4.62×104，故可用分光光度法测定其含量。
但是一些提取液中常有叶绿素存在，干扰测定。
因此，需同时测定提取液在620nm （可溶性糖）和650nm （叶绿素的吸收值）波长下的光密度值，并用Greey 公式准确计算出花青素的光密度值，才能计算花青素的含量。
三、材料、设备及试剂1. 材料 红花檵木叶片2. 设备 分光光度计、电子天平、50ml 具塞三角瓶、25ml 容量瓶、刀片3. 试剂 0.1 mol ·L -1的盐酸乙醇溶液（8.3ml 浓盐酸用95%乙醇稀释成1L ）。
四、操作方法1. 花青素的提取 取0.100g 红花檵木，切成1cm 见方的小块,放在三角瓶中，加 0.1 mol ·L -1盐酸乙醇溶液15ml ，在60℃水浴中暗处理，把溶液倒入25ml 容量瓶中，再加5ml 提取液浸提15min, 把溶液倒入25ml 容量瓶中，再加5ml 提取液浸提15min, 把溶液倒入25ml 容量瓶中，共浸提1h ，最后定溶到25ml 。
2. 测定 以0.1 mol ·L -1的盐酸乙醇溶液做参比液，在分光光度计测定提取液在530nm 、620nm 、650nm 波长下的光密度值。
五、实验结果实验结果如下表A 530A 620A 650 0.656 0.085 0.248依据公式1． 计算花青素的光密度值OD λ=(OD 530-OD 620)-0.1(OD 650-OD 620)=（0.656-0.085）-0.1（0.248-0.085）=0.63122. 计算花青素含量=ODλε×V×1000000m花青素含量（nmol/g）=0.6312/4.62×104×25/0.1011×1000000=3378.422ODλ:花青素在530nm波长下的光密度ε：花青素摩尔消光系数4.62×106v:提取液总体积（ml）m:取样质量（g）1000000: 计算结果换算成nmol的倍数六、结果分析与讨论实验注意事项：1.本实验严格按照实验要求操作，在提取过程中谨慎小心，未造成液滴溅出的现象，且用盐酸乙醇反复清洗三角瓶并转移至容量瓶中，保证了实验的准确性。
黑果花楸与2种小浆果中黄酮类物质及多糖含量比较
黑果花楸与2种小浆果中黄酮类物质及多糖含量比较姚利阳;张宇;张立宇;李岩;刘俊希【摘要】[目的]为黑果花楸相关加工产品提供理论和含量依据.[方法]以黑果花楸、蓝莓和蓝靛果为材料,采用紫外-分光光度法测定3种小浆果多糖及总黄酮含量,pH 示差法测定花色苷含量,并进行比较分析.[结果]黑果花楸全果的花色苷、总黄酮、多糖含量均高于蓝莓和蓝靛果,在所测3种小浆果中最高,分别为0.352 0、2.636、1.764 mg/g.[结论]黑果花楸中花色苷、总黄酮、多糖含量较高,具有很高的营养价值和药用价值,有待进一步开发利用.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2016(000)001【总页数】3页(P122-124)【关键词】蓝莓;蓝靛果;黑果花楸;花色苷;多糖【作者】姚利阳;张宇;张立宇;李岩;刘俊希【作者单位】佳木斯大学药学院,黑龙江省生物药制剂重点实验室,黑龙江佳木斯154007;佳木斯大学药学院,黑龙江省生物药制剂重点实验室,黑龙江佳木斯154007;佳木斯大学药学院,黑龙江省生物药制剂重点实验室,黑龙江佳木斯154007;佳木斯大学药学院,黑龙江省生物药制剂重点实验室,黑龙江佳木斯154007;佳木斯大学药学院,黑龙江省生物药制剂重点实验室,黑龙江佳木斯154007【正文语种】中文【中图分类】S38小浆果泛指体积较小、多汁的一类果树的果实，主要包括蓝莓、蓝靛果、黑果花楸、树莓、黑加仑、蔓越橘等[1-5]，它们具有较高的营养价值和独特的口感，深受人们的喜爱。
小浆果富含维生素和多种生物活性物质[6-7]，在预防慢性疾病和维持人体健康方面有较好的作用。
蓝莓(Blueberry)，又称越橘、蓝浆果，杜鹃花科(Ericaceae)越橘属(Vaccinium)。
蓝莓果实中天然色素含量最高[8]，如原花青素、花色苷；除此之外，还含有糖类、有机酸、维生素C、多种微量元素和食用纤维等。
由于其含有多种生物活性物质，因此具有抗肿瘤、清除体内自由基、提高免疫力等多种生理活性功能[9-10]。
紫外分光光度法测定晋产白芍芍药苷含量
紫外分光光度法测定晋产白芍芍药苷含量温建英;李文伟;任蕾;王京康【摘要】目的:建立晋产白芍中芍药苷含量的紫外分光光度测定方法.方法:用芍药苷为对照品,以三氯甲烷-甲醇-乙酸乙酯-甲酸(40∶10∶5∶0.2)为展开剂,用5％香草醛硫酸溶液为显色剂,采用紫外分光光度法对白芍中芍药苷进行含量测定.结果:在230 nm处测得白芍中芍药苷含量为4.230％,回归方程为y=21.918x+0.059 2,芍药苷标准品在0.008 176～0.040 880 mg/mL浓度范围内与吸光度线性关系良好,加样回收率为95.42％,RSD为2.65％.结论:该方法操作简便、稳定可靠、准确度高,适用于白芍的质量控制.【期刊名称】《山西中医学院学报》【年(卷),期】2017(018)003【总页数】3页(P14-16)【关键词】白芍;芍药苷的含量测定;紫外分光光度法【作者】温建英;李文伟;任蕾;王京康【作者单位】山西中医学院,山西太原030024;山西中医学院,山西太原030024;山西中医学院,山西太原030024;山西中医学院,山西太原030024【正文语种】中文【中图分类】R285白芍（Paeonia lactiflora）是毛茛科植物芍药去了皮的干燥根。
白芍主产于浙江、安徽等地［1-2］，具有养血调经、敛阴止汗、柔肝止痛、平抑肝阳等功效，用于治疗自汗、血虚萎黄、月经不调、腹痛等［3］。
国内外对白芍的研究应用主要集中在化学成分、质量控制、药理作用、抗氧化应用等方面。
研究表明白芍主要有效成分为白芍总苷，70%以上为芍药苷（paeoniflorin），具有扩张冠状动脉、增加冠脉流量、抗急性心肌缺血、降低血压等药理作用［4-5］。
白芍的药用价值高，蕴藏着巨大的开发潜力。
近年来，人工种植白芍方法不断改进推广，在山西也成立了白芍的人工种植基地。
本文就山西本地所产白芍的指征性成分芍药苷的含量进行测定。
QE-300克粉碎机（浙江屹立工贸有限公司），JA4003精密电子天平（上海良平仪器仪表有限公司），十万分之一分析天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司，型号：FA224），HH-6数显恒温水浴锅，TU-1810紫外可见分光光度计，硅胶G 薄层板（青岛海洋化工厂分厂，规格：50 ×100 mm），定性毛细管（上海积裕实验设备有限公司，规格：0.3×100），PHS-4C+智能酸度计。
[讲解]总花色苷含量测定
![[讲解]总花色苷含量测定](https://img.taocdn.com/s3/m/b6ac393f657d27284b73f242336c1eb91a37336d.png)
总花色苷含量测定—分光光度法1、综合国内外资料,主要有以下几种计算吸光值A 的方法[1]:(1) 当叶绿素是该样品中主要存在的干扰色素时,需消除叶绿素吸收含量的影响;此时,计算公式为: A = (Amax - A620) - 0.1(A650 - A620)(2) 含有其它干扰物质时花色苷总量的测定:a) 直接法:在新鲜的植物提取物中,因为很少含有在花色苷的最大吸收区发生吸收的干扰物质,花色苷总量可以直接由可见区最大吸收波长处的吸光度来测定。
计算公式为: A = Amax直接法吸收光谱测定:用××分光光度计于250 - 800nm 下全波长扫描,得到花色苷在0.1 % 盐酸—80 % 乙醇中的可见光区最大吸收波长,在此最大波长下测定各样品的吸光值A 。
b) pH 示差法:在加工或储藏过程中,会产生褐色降解物,这些降解物和花色苷具有相同的能量吸收范围。
这类花色苷总量的测定,通常用pH示差法[8] 。
计算公式为: A = (Amax - A700) pH1.0 - (Amax - A700) pH4.5pH 示差法吸收光谱测定:先确定合适的稀释因子,使样品在λmax下的吸光度在分光光度计的线性范围内;然后制备两个样品稀释液,其中一个用氯化钾缓冲液(0.025M,pH1.0) 稀释,另一个用醋酸钠缓冲液(0.4M,pH4.5) 稀释,将稀释液平衡15min 后,用蒸馏水做空白,分别测定两种样品稀释液在λmax和700nm处的吸光值A。
2、花色苷总含量的测定[2]：通过波长扫描,确定××花色苷在可见区的最大吸收波长为λmax。
利用花色苷的结构特性,当pH为1.0时在λmax处有最大吸收峰,而当pH 为4.5时,花色苷转变为无色查尔酮形式,在λmax处无吸收峰,用示差法计算溶液中总花色苷含量。
计算公式为: C (mg/ g) = (A0 - A1) ×V ×n ×M / (ε×m )式中: A0 、A1 —分别为pH1.0、pH4.5时花色苷在λmax处的吸光值V —提取液总体积(mL )n —稀释倍数M —cy-3-glu (矢车菊- 3-葡萄糖苷)的相对分子质量(449.4)ε—cy-3-glu的消光系数( 29600)m —样品质量( g)3、花色苷含量TAcy的计算公式为(以天竺葵色素-3-葡萄糖苷计)[3] :TAcy (mg/ hg) =(A ×433 ×10 ×V）÷(22 400 ×m)×100A = (OD500nm - OD700nm) pH1.0 - (OD500nm -OD700nm) pH4.5式中: V —提取液的总体积(mL)m —取样量(g)22 400 —天竺葵色素-3-葡萄糖苷的摩尔消光系数433 —天竺葵色素-3-葡萄糖苷的摩尔分子量。
花青苷(花色苷)种类、提取及检测
花青苷种类、提取及检测一.种类花色素均具有类黄酮的基本结构，由两个苯环和一个含氧杂环组成的(C6-C3-C6)C15化合物(如图)，根据B环羟基化和甲基化位置和数目的不同而将花色素主要分为六类:天竺葵色素((Pelargonidin)、矢车菊色素((cyanidin)、芍药色素(peonidin)(3＇-甲基矢车菊色素)、飞燕草色素(delphinidin)、矮牵牛色素(petunidin)(3＇,5＇-甲基飞燕草色素)和锦葵色素(malvidin)( 3＇,5＇-二甲基飞燕草色素)。
不同植物中花色素发生糖苷化的位点(C3、C5和C7位等)和数目的差异，及酞化程度的不同使植物中存在着不同的花色素普，其结构复杂，但都以这六种花色素为基本结构(Grotewold，2006)。
二.提取国内外学者对花青苷的提取做了大量研究，提取目的及目标花青苷不同，提取方法略有差异。
花青苷易溶于水、甲醇、乙醇等极性溶液，花青苷的稳定性受酶、温度、氧气、光、pH值、金属离子等理化性质的影响，在中性和碱性条件下不稳定。
提取过程常采用酸性溶液，酸能够破坏植物细胞膜并溶解水溶性色素，甲醇溶液提取效率高于乙醇及水溶液。
花青苷一般用于食品着色，考虑到甲醇的不安全因素，一般选用体积分数为1%的乙醇溶液。
采用盐酸酸化可保持提取液pH值较低，阻止无酰基花青苷的降解。
随着盐酸被浓缩，pH 值升高，导致花青苷的降解。
为获得更接近于天然状态的花青苷，采用弱有机酸或中性溶剂做初步提取，弱有机酸多用甲酸、乙酸、丙酸、柠檬酸和酒石酸，中性溶剂一般采用丙酮作提取剂。
粗提后的花青苷提取液浓度很低，浓缩时一般不超过40℃，时间也不宜太长。
1.2.花青苷含量的测定：用0.1%的盐酸甲醇浸提叶片2 h后,测657nm、530nm处的吸光度。
3.4.5.6.7.8.9.三.检测紫外—可见光谱是花青苷结构鉴定的经典方法，其鉴定方法为：①花青苷有2个最大吸收波长,500~540nm附近及27nm附近，据此可判定是否为花青苷色素；②若B环有邻位酚羟基，则向体积分数0.01%盐酸-甲醇溶液中滴加3~5 滴AlCl3，甲醇或乙醇溶液时会出现蓝移；③糖苷位置可据花青苷吸光度比值A440/A max判定；④在波长300~330nm间有吸收峰，表明存在酰基；⑤若在波长440n处有肩峰，则5号位羟基没被取代；⑥若在紫外光下有荧光，表明在5号位有取代基。
植物钙离子浓度荧光定量检测试剂盒产品说明书中文版
植物钙离子浓度荧光定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途植物钙离子浓度荧光定量检测试剂是一种旨在通过钙离子特异性荧光探针Fluo-4，与钙离子结合后，其荧光强度显著增强，在荧光分光光度仪下观察相对荧光峰值的变化，来测定植物组织裂解悬液中总钙离子浓度的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心研制、成功实验证明的。
其适合于各种植物组织，包括种子（seed）、叶片（leaf）、根（root）、胚胎叶（cotyledon）、上胚轴（epicotyl）等裂解萃取样品中总钙离子的浓度检测。
产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，检测敏感。
技术背景钙是人体中的一种重要电介质和矿物质，占1150克。
其中99％的钙以氟磷灰石钙（calcium fluorophosphate apatite）形式存在于骨组织中。
非骨组织钙成分主要存在于细胞内。
钙具有两种主要形式：一种是非弥散型蛋白结合钙，其构成约40％至50％的血清中的总钙含量；另一种为弥散型游离钙，其进一步分成具有活性的复合钙（complexed calcium）和离子钙（ionized calcium）。
钙对神经肌肉兴奋性（neuromuscular excitability）、血液凝固、酶的激活、离子跨膜运输、释放神经传导介质、信使传导等方面起着重要作用。
钙的检测包括沉淀法、EDTA鳌合滴定法、火焰光度法（flame photometry）、原子吸收分光光度法等技术，但容易受到钠、钾、磷酸盐、硫酸盐的干扰，或者受限于仪器的特殊的要求。
Fluo-4，一种与钙离子结合，其荧光强度迅速增强100倍的荧光探针，可以敏感测定微量游离钙离子水平。
在荧光分光光度仪下，激发波长485nm，散发波长520nm，来定量测定植物组织细胞的钙浓度。
产品内容清理液（Reagent A）60毫升裂解液（Reagent B）20毫升反应液（Reagent C）6毫升饱和液（Reagent D）2毫升阴性液（Reagent E）2毫升产品说明书1份保存方式保存清理液（Reagent A）在4℃冰箱里；其余的保存在－20℃冰箱里；反应液（Reagent C）避免光照；有效保证6月用户自备1.5毫升离心管：用于样品操作的容器15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器DOUNCE匀浆器：用于组织匀化微型台式离心机：用于样品沉淀培养箱：用于反应物孵育黑色96孔板：用于样品荧光测定的容器荧光酶标仪：用于样品荧光分析实验步骤一、样品准备1．准备好新鲜的植物组织（叶片、谷粒、种子等），并秤重以确定1克组织重量2．（选择步骤）放进预冷的15毫升锥形离心管3．（选择步骤）加入3毫升清理液（Reagent A）清洗1次4．即刻用刀片切碎组织5．放进一个预冷的15毫升锥形离心管6．加入预冷的1毫升裂解液（Reagent B）7．涡旋震荡5秒，充分混匀8．即刻放进预冷的DOUNCE匀浆器，在冰槽里用匀浆棒匀化组织（约80下）9．将所有组织匀浆物移入1.5毫升离心管，放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为5000g（或7500RPM，例如eppendorf 5415）10．小心移出上清液（注意：不要触碰沉淀物）到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管11．（选择步骤）如果上清液含有肉眼可见的残渣，重复离心5分钟一次，速度为5000g（或7500RPM，例如eppendorf 5415）12．即刻移入到1.5毫升离心管13．移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－GMS30030.1）14．放进－70℃的冰箱里保存或置于冰槽里备用二、测定准备1．准备好上述制备的待测样品，置于冰槽里备用2．设定好荧光酶标仪（22℃）：激发波长485nm，散发波长520nm三、荧光测定1．准备1个黑色96孔板，标记为：样品孔、空白对照孔、最大对照空2．移取100微升（20微克蛋白）上述制备的样品到样品孔里3．移取100微升饱和液（Reagent D）到最大对照空里4．移取100微升阴性液（Reagent E）到空白对照空5．分别加入100微升反应液（Reagent C）到所有孔里6．轻轻摇动黑色96孔板，混匀7．室温下（22℃），孵育30分钟，避免光照8．即刻放进荧光酶标仪测读：获得相对荧光单位（relative fluorescence unit；RFU）9．计算样品钙离子浓度：纳摩尔（注意：不要遗忘乘上稀释倍数）【（样品RFU－空白对照孔RFU）÷（最大对照空RFU－样品RFU）】X 345 （纳摩尔；解离常数）注意事项1．本产品为20次操作2．操作时，须戴手套3．避免使用EDTA等处理样品4．孵育反应完成后即刻进行荧光测定5．如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度6．检测敏感度可达纳摩尔级钙浓度范围7．样品浓度可以按照蛋白量或组织量定义8．本公司提供系列钙生化检测试剂产品质量标准1．本产品经鉴定性能稳定2．本产品经鉴定检测敏感。
实验四 葡萄果实中花色苷提取与测定
实验四葡萄果实中花色苷提取与测定一、实验目的1、了解并掌握葡萄果皮中花色苷提取的原理和操作；2、掌握葡萄果皮重花色苷含量的测定方法和步骤。
二、实验原理花色苷是红色葡萄果实中一类非常重要的呈色物质，并且多数情况下主要存在于果皮当中，只有极少数染色品种的果肉中存在花色苷。
花色苷主要有花色素（包括花翠素、花青素、甲基花青素、甲基花翠素及二甲花翠素）经过羟基化后以单体糖苷的形式存在。
三、实验材料红色葡萄果实、吸水纸、研钵、研杵、液氮、分光光度计等四、主要项目和方法1、果皮花色苷提取把每个样本（20粒）的葡萄果皮取下，然后用蒸馏水冲洗果皮，除去果皮粘连的部分果肉与糖分等并用吸水纸吸干，进行称重（M），然后再液氮中将果皮研磨成粉末，准确称取3.0000g粉末放入50ml离心管中，加入30ml酸化甲醇溶液（1mol/L HCl/MOH/水，1/80/19，v/v/v），在100%功率条件下超声辅助提取30min，温度控制在25摄氏度，然后将其只置于低温离心机中离心（8000r/min）15min，收集上清液。
向残渣中继续加入30ml酸化甲醇溶液，在此按照上述步骤进行提取，重复4次，合并所有上清液（120ml）于细口瓶中，-20摄氏度避光保存。
2、花色苷含量测定和计算采用pH示差法，提取液分别用pH值为1.0盐酸-氯化钠缓冲液稀释20倍。
然后分别在510nm与700nm下测定两种稀释液的吸光度。
吸光度A为：A=(A510nm-A700nm)pH1.0 - (A510nm-A700nm)pH4.5花色苷含量用矢车菊素-3葡萄糖苷（R CGE , mg/g）表示，即R CGE=（A × MW × DF × Ve × 1000）/（ε× 1 × M）式中 MW-矢车菊素-3葡萄糖苷相对分子量，取449DF-稀释倍数Ve-提取液总体积M-葡萄皮质量ε–摩尔吸光系数，取29600五、实验结果A=0.9007-0.0087-(0.0813-0.0065)=0.8172nmR CGE=因此该葡萄果实中，花色苷含量为 mg/g。
紫外分光光度法测定单宁含量检测试剂盒说明书
单宁含量检测试剂盒说明书紫外分光光度法货号：BC1390规格：50T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体75mL×2瓶2-8℃保存试剂一粉剂×1瓶常温保存标准品粉剂×1支2-8℃保存溶液的配制：1、标准品：10mg 单宁酸。
临用前加入1.175mL 提取液溶解为5000nmol/mL 的标准液，2-8℃保存两周。
产品说明：单宁又称植物多酚，是一类广泛存在于植物体内的多元酚化合物。
单宁可作为潜在的生物标记物；与蛋白质结合的能力又称为收敛性或涩性。
其收敛性是多种生理活性的基础，如止血、抗肿瘤、抗衰老等生理活性，也是影响产品口感的因素之一。
根据光谱特性，单宁在275nm 下有较强的紫外吸收，通过利用活性炭能够特异吸附单宁的性质来检测单宁含量。
技术指标：最低检出限：0.385nmol/mL 线性范围：0.39-18nmol/mL注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：紫外分光光度计、1mL 石英比色皿、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、30-50目筛、蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）将样本烘干至恒重，粉碎，过30-50目筛之后，称取约0.1g ，加入2mL 提取液（封口膜封口防止液体溅出），于70℃水浴，准确提取30min ，期间可摇晃数次。
12000rpm，25℃，离心10min ，取上清，用提取液定容至2mL ，待测。
二、测定步骤1.紫外分光光度计预热30min ，波长调至275nm ，提取液调零。
Beijing Solarbio Science &Technology Co.,LtdTel:400-968-6088Fax:************2.标准液的稀释：将标准液用提取液稀释为25、12.5、6.25、3.125、1.5625、0.78125nmol/mL标准溶液。
花色苷的测定
4.1.4 材料处理
4.1.4.1 草莓果实中花色苷的提取
按照Orak（2007）的方法，并略作修改，选取多个具有代表性的草莓果实，在液氮保护下迅速研成粉状，从中准确称取1.00g转入10mL离心管，加入5mL甲醇-HCl（95:5）提取剂，超声30min (功率为100w，温度为30℃)，静置30min，12000g离心10min，倾上清液留存，同上再加入5mL提取液，超声30min，静置，离心，倾上清液留存，最后用提取剂再洗涤残渣2次，离心，最后将提取液合并定容至25mL。
提取液于-20℃冰箱中保存待液相分析用，液相测定前提取液样品经0.45μm微孔滤膜过滤。
4.1.5 HPLC色谱条件
LiChrospher 100RP-18e 色谱柱（250×4.0 mm I.D.，5 μm，Merck），保护柱为RP-18（10 mm×4mm，Merck），紫外检测波长为520 nm，柱温40℃，进样量为20 μl。
根据保留时间（RT）及吸收光谱与标准品对照定性，以峰面积外标法定量。
流动相A：水—甲酸，体积比100:1.5；
流动相B：水—甲醇体积比25:75，然后用甲酸调整pH值到2.35
把流动相按照比例配好，配好之后过流动相滤膜，然后超声20分钟。
洗脱程序：
0min:90%A，10%B；
0min-10min：90%A，10%B；
10-50min：90%A-40%A；10%B-60%B；
50-55min：40%A-10%A；60%B-90%B；
55-60min：10%A-90%A；90%B-10%B
天竺葵素-3-葡萄糖苷标准曲线。
植物含量测定实验报告
一、实验目的1. 掌握植物全氮、全磷、全钾含量的测定方法。
2. 了解植物叶绿素含量的测定原理和方法。
3. 掌握植物可溶性蛋白质和糖含量的测定方法。
二、实验原理1. 植物全氮、全磷、全钾含量的测定：采用H2SO4-H2O2消煮法，将植物样品消煮后，分别测定氮、磷、钾含量。
2. 植物叶绿素含量的测定：根据朗伯-比尔定律，利用分光光度计测定叶绿素在特定波长下的吸光度，从而计算叶绿素含量。
3. 植物可溶性蛋白质和糖含量的测定：采用考马斯亮蓝法和蒽酮法分别测定植物组织中可溶性蛋白质和糖含量。
三、实验材料与试剂1. 植物材料：生菜、苹果等。
2. 试剂：H2SO4、H2O2、靛酚蓝、苯酚、次氯酸盐、碳酸钙粉、石英砂、95%乙醇、80%丙酮、考马斯亮蓝G-250、蒽酮、氢氧化钠、草酸等。
3. 仪器：分光光度计、电子天平、研钵、试管、小漏斗、滤纸、吸水纸、移液管、量筒、剪刀等。
四、实验步骤1. 植物全氮、全磷、全钾含量的测定（1）将植物样品烘干、磨碎，过筛。
（2）准确称取0.2g样品，置于消煮管中。
（3）加入10mL浓H2SO4，小火加热消煮至样品完全消解。
（4）加入5mL H2O2，继续加热消煮至溶液澄清。
（5）冷却后，用蒸馏水定容至50mL。
（6）采用靛酚蓝比色法测定氮含量。
（7）采用钼锑抗比色法测定磷含量。
（8）采用火焰光度法测定钾含量。
2. 植物叶绿素含量的测定（1）准确称取0.1g新鲜植物叶片，加入少量石英砂和碳酸钙粉，用95%乙醇提取。
（2）过滤，收集滤液。
（3）在分光光度计下，分别测定叶绿素在波长652nm、663nm、645nm处的吸光度。
（4）根据吸光度计算叶绿素含量。
3. 植物可溶性蛋白质和糖含量的测定（1）采用考马斯亮蓝G-250法测定可溶性蛋白质含量。
（2）采用蒽酮法测定可溶性糖含量。
五、实验结果与分析1. 植物全氮、全磷、全钾含量根据实验结果，生菜全氮含量为2.5%，全磷含量为0.5%，全钾含量为1.5%；苹果全氮含量为1.2%，全磷含量为0.3%，全钾含量为0.8%。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
植物花色苷含量检测试剂盒说明书可见分光光度法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号：BC1380
规格：50T/24S
产品内容：
提取液：液体30mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体30mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体30mL×1瓶，4℃保存。
产品说明：
花色苷是一类可食用的易溶于水等溶剂的天然色素。
花色苷使植物呈现多彩的颜色，本身更具有多种保健作用，因而在天然食用色素、保健品和医药行业都有着广阔的应用前景。
根据花色苷在不同pH下的结构性质测定花色苷含量，在pH为1时花色苷在530nm处有最大吸收峰,而当pH 为4.5时，花色苷转变为无色查尔酮形式在530nm处无吸收峰，通过测定不同pH下的530nm和700nm处的吸光度值计算样本中花色苷的含量。
自备实验用品及仪器：
可见分光光度计、离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理：
按照样品质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g样品，加入1mL提取液），充分匀浆后转移到EP管中，封口膜封口防止挥发，60℃浸提30min，期间可震荡数次，提取后提取液定容至1mL。
12000rpm，常温离心10min，取上清液待测。
二、测定步骤：
（1）可见分光光度计预热30min，蒸馏水调零。
（2）加样表：
试剂名称（μL）测定管1测定管2
样品100100
试剂一900-
试剂二-900充分混匀后测定测定管1和测定管2分别在530nm和700nm处的吸光度，测定管1在530nm和700nm处的吸光值记为A1、A1’，测定管2在530nm和700nm处的吸光值记为A2、A2’，计算ΔA=（A1-A1’）-（A2-A2’）。
三、花色苷含量计算：
1、按样本鲜重计算：
花色苷含量（μmol/g鲜重）=[ΔA÷(ε×d)×103×F]×V提取÷W=0.037×ΔA×F÷W。
2、按样本蛋白浓度计算：
花色苷含量（μmol/mg prot）=[ΔA÷(ε×d)×103×F]×V提取÷（Cpr×V提取）=0.037×ΔA×F ÷Cpr。
F：稀释倍数，该反应体系下为10；d：比色皿光径，1cm；
W：样品质量，g；ε：花色苷的摩尔消光系数，2.69×104mL/mmol/cm；
V提取：提取液总体积，1mL；103：单位换算系数，1mmol=103μmol；
Cpr：样品蛋白浓度，mg/mL（蛋白浓度需用PBS单独提取后自行测定）。
注意事项：
1、如果A1大于1，可以适当加大稀释倍数，保证总体积1mL不变，如50μL上清液和950μL试剂一（相当于
稀释20倍）；如果A1小于0.1，可以适当缩小稀释倍数，保证总体积不变，如500μL上清液和500μL试剂一（相当于稀释2倍），使A1保持在0.1~1范围内，可提高检测灵敏度；注意应同样调整上清液和试剂二体积比例；计算时以实际稀释倍数代入下述公式中。
2、因提取液会使蛋白变性，若使用蛋白浓度计算需用PBS单独提取后自行测定。