猪链球菌2型检验程序-中国疾病预防控制中心
DB11T 828.1-2011 实验用小型猪 第1部分：微生物学等级及监测
ICS65.020.30B 44备案号：DB11 北京市地方标准DB11/T 828.1—2011实验用小型猪第1部分：微生物学等级及监测Experimental minipigPart 1：Microbiological standards and surveillance2011-11-10发布2012-03-01实施目次前言 (II)1 范围 (1)2 规范性引用文件 (1)3 术语和定义 (2)4 微生物学等级分类 (2)5 检测要求 (2)6 检测程序 (3)7 检测方法 (4)8 检测规则 (5)9 结果判定 (6)10 判定结论 (6)附录A（资料性附录）猪圆环病毒2型ELISA抗体检测 (7)前言DB11/T 828的本部分按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。
DB11/T 828《实验用小型猪》分为六个部分：——第1部分：微生物学等级及监测；——第2部分：寄生虫学等级及监测；——第3部分：遗传质量控制；——第4部分：病理学诊断规范；——第5部分：配合饲料；——第6部分：环境及设施。
本部分为DB11/T 828的第1部分。
本部分由北京市科学技术委员会提出并归口。
本部分由北京市科学技术委员会组织实施。
本部分起草单位：中国食品药品检定研究院、中国动物疫病预防控制中心、中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心、北京实验动物研究中心。
本部分主要起草人：贺争鸣、田克恭、范薇、巩薇、遇秀玲、付瑞、卢胜明。
实验用小型猪第1部分：微生物学等级及监测1 范围DB11/T 828的本部分规定了实验用小型猪微生物学等级分类、检测要求、检测程序、检测方法、检测规则、结果判定、判定结论等。
本部分适用于实验用小型猪微生物学等级监测。
2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
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凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
(完整版)猪链球菌的检测和鉴定技术
ATCC43765
+ + + + + + + + + + 4641427 （92%）
HA9801
+ + + + + + + + + + + 4651427 (80%)
ATCC35246
+ + + + + + + + + 0461607 (99.9%)
32210 化脓链球菌
0161415 (99.9%)
读数仪
比浊仪 电子加样枪
计算机 打印机
19
试条组成
试条种类：
24h常规鉴定试条
Ref.32400，ID32 E Ref.32100，ID32 GN Ref.32500，ID32 Staph Ref.32200，ID32 C
4h快速鉴定试条
Ref.32700，rapid ID32 E Ref.32300，rapid ID32 A Ref.32600，rapid ID32 Strep
粪肠球菌
7143711 （98.7%）
猪链球菌的API鉴定结果
TRE（海藻糖）、RAF（棉子糖）等几个的试验与API 菌种库有些不符，但 都属于SS2型或1型，数值分类
相对于双歧分类的优点
ATCC43765
HA9801
ATCC35246
32210 化脓链球菌
粪肠球菌
编码 4641427（92%） 4651427(80%) 0461607(99.9%)0161415(99.9%)7143711（98.7%）
猪链球菌病的实验室鉴定及防治措施
猪链球菌病的实验室鉴定及防治措施猪链球菌病是由猪链球菌（Streptococcus suis）引起的一种传染性疾病。
以下是关于猪链球菌病的实验室鉴定及防治措施的详细介绍。
一、实验室鉴定：1. 细菌培养鉴定：猪链球菌可以在一般的细菌培养基上生长，常采用含有5%酒精血琼脂、牛血琼脂、肉汤琼脂等不同培养基进行培养。
猪链球菌在琼脂培养基上形成圆形、凹陷的菌落。
2. 生化试验：进行一系列的生化试验可进一步鉴定猪链球菌。
常用的试验包括溶血试验、半乳糖发酵试验、气体生成试验等。
3. 血清学鉴定：可通过对猪链球菌进行抗原性鉴定，如凝集试验、血清型试验等。
4. 分子生物学鉴定：使用PCR法对猪链球菌进行检测和鉴定，可以准确快速地确定猪链球菌的存在。
二、防治措施：1. 提供良好的饲养环境：猪链球菌易在拥挤、肮脏的环境中传播，因此要注意保持猪舍的通风、干燥、清洁，定期清理粪便和消毒。
2. 加强疫苗免疫：猪链球菌病的疫苗接种是有效控制传染的重要手段。
可采用灭活疫苗或活减疫苗进行预防，并按照兽医的指导进行接种。
3. 合理用药：猪链球菌病的治疗可使用青霉素、头孢菌素等抗生素，但需要按照兽医的指导进行用药，避免滥用和药物残留。
4. 引起猪链球菌病的猪只需要隔离和治疗，防止疫情扩散。
5. 食品安全措施：猪链球菌能引起人畜共患感染，因此对于猪链球菌病疫区的猪肉和猪产品，要进行严格的检验和处理，确保食品安全。
6. 定期检测和监测：定期监测猪群的健康状况，及时发现并处理患病猪只，以避免疫情扩散。
7. 做好个人防护：与猪接触的人员要做好个人防护，使用口罩、手套等防护用具，以避免感染。
猪链球菌病的实验室鉴定及防治措施对于预防和控制疾病的传播非常重要。
及时发现和治疗疫情，加强饲养管理和个人防护，有助于减少猪链球菌病的发生和传播，保障农业生产和食品安全。
猪链球菌病的屠宰检疫与防治措施
452023.11猪链球菌病的屠宰检疫与防治措施田 芬，彭郁霖*，李晓林（贵州省六盘水市动物疫病预防控制中心，贵州 六盘水 553000）猪链球菌病是由猪链球菌引起的一种急性、败血性人畜共患接触性传染病。
病猪和带菌猪是主要传染源，其次是羊、马、鸭、鸡等，主要经呼吸道、受损的皮肤及黏膜感染，一年四季均可发生。
人群普遍易感，食用病、死猪肉及被病原污染的肉类产品也可发病。
人感染后通常表现为发热、头痛，皮肤有出血点、瘀点、瘀斑。
有的患者会出现恶心、呕吐、腹泻等症状。
重者血压下降，脉压缩小，很快休克，如果诊治不及时，病死率较高，或留后遗症。
加强猪链球菌病屠宰检疫尤为重要，是保证居民的饮食安全以及肉类供应质量的重要保障。
1 宰前检疫宰前检疫检验是保证肉品安全检查的重要环节，既要查证验物，做好动物疫病的检查工作，还要检查动物有无外伤、中毒或其他普通病以及是否有瘦肉精等违禁药物残留，以此判定生猪是否健康可食以及是否适合屠宰。
1.1 败血症型勇疫链球菌、猪链球菌等多种病原均会导致败血症型病的发生，急性病例死亡率极高，且病程短，多数在发病当天或次日即会导致猪只死亡。
主要表现为血液凝固不良，胸、腹下和四肢皮肤有紫斑或出血斑；吻突、喉头及气管黏膜充血；全身淋巴结肿胀；心包积液，心冠沟和右心室内膜有出血点；肺充血肿胀；肝脏边缘钝厚，质地硬；脾脏明显肿大，出血、呈现暗红色；肾脏肿大且有血液渗出；胃、小肠黏膜、脑膜亦会出现不同程度的血液性病变；脑组织切面有点状出血；食欲衰退或废绝；体温升高至40～42℃，一般1～3天后死亡。
1.2 脑膜炎型病初体温升高至40.5～42.5℃，不食，便秘，继而出现神经症状，如转圈，空嚼、磨牙、仰卧，继而影响运动，多利用前肢运动，部分病猪关节肿大，局部皮下水肿，30～36小时后死亡。
1.3 淋巴结脓肿型 主要由E群链球菌引起，多见于颌下淋巴结发生脓肿，并伴有全身症状。
脓肿可破溃、流脓、结疤而愈，病程3～5周。
猪链球菌病预防工作方案（3篇）
猪链球菌病预防工作方案近期，___省资阳、内江等地区发生由猪链球菌引起的人感染猪链球菌病疫情。
猪链球菌病是一种人畜共患的急性传染病，由c、d、e 及l群链球菌引起的多种疾病的总称，属于二类动物疫病。
链球菌分布广泛，常存在于健康的哺乳动物和人体内，在动物机体抵抗力降低和外部环境发生变化的诱导下，会引起动物和人发病。
猪链球菌可以通过伤口、消化道等途径传染给人。
根据___部___《___加强人感染猪链球菌病预防控制工作的紧急__》（卫发电___号）、___市卫生局《___加强对人感染猪链球菌病防治工作___》（沪卫疾控___号）文件精神，为加强我区人感染猪链球菌病预防控制工作，保障人民群众身体健康，特制订本工作预案。
一、临床症状本病潜伏期短，平均常见潜伏期2～___天，最短可数小时，最长___天。
病人感染后起病急，临床表现为畏寒、发热、头痛、头昏、全身不适、乏力、腹痛、腹泻。
外周血白细胞计数升高，中性粒细胞比例升高，严重患者发病初期白细胞可以降低或正常。
重症病例迅速进展为中毒性休克综合征，出现皮肤出血点、瘀点、瘀斑，血压下降，脉压差缩小。
可表现出凝血功能障碍、肾功能不全、肝功能不全、急性呼吸窘迫综合征、软___坏死、筋膜炎等。
少数病例在中毒性休克综合征基础上，出现化脓性脑膜炎表现。
部分病例表现为脑膜炎，恶心、呕吐（可能为喷射性呕吐），重者可出现昏迷。
脑膜刺激征阳性，脑脊液呈化脓性改变。
皮肤没有出血点、淤点、淤斑，无休克表现。
二、疫情监测（一）信息收集区疾控中心要加强信息收集工作，及时了解国内外人感染猪链球菌病疫情动态（范本），同时加强与农委、畜牧兽医部门的信息沟通，了解家畜感染猪链球菌病疫情，为预警和决策提供依据。
（二）病例监测各医疗机构的感染性疾病科、内科、儿科、急诊科等相关科室在诊疗过程中发现畏寒、高热、伴有头痛、头昏、全身不适、乏力、腹痛、腹泻、昏迷等全身中毒症状患者，应按照《人-猪链球菌病诊断标准（参考标准）》做好甄别、诊断工作，应重点询问病人发病前___天内是否有与病死猪（羊）接触史，如宰杀、洗切、销售等流行病学史。
猪链球菌病的实验室鉴定及防治措施
猪链球菌病的实验室鉴定及防治措施
猪链球菌病是由猪链球菌引起的一种疾病，其临床症状包括发热、关节炎、瘀斑、皮疹等。
为了及时发现和鉴定猪链球菌病，可采取以下实验室鉴定方法：
1. 细菌培养：从患猪的淋巴结、关节滑膜或瘀点皮肤等部位采集样本，接种于营养琼脂平板上，进行革兰氏染色，观察菌形、结构和分布等特征。
2. 生化试验：可用青霉素酶试验、氧化-发酵试验等检测菌的代谢特征，以确认其为猪链球菌。
3. 血清学检测：采集血清样本，通过血球凝集试验、乳凝试验或ELISA等方法检测抗猪链球菌抗体水平，以判断感染情况。
4. 分子生物学检测：利用PCR技术或实时荧光PCR技术，检测样本中是否存在猪链球菌的DNA，从而确诊病原体。
对于猪链球菌病的防治措施，可以采取以下措施：
1. 提高猪舍卫生：保持猪舍的清洁，定期清理猪舍内的污物，避免粪便、尿液和呕吐物等积聚，减少病原菌的传播。
2. 严格隔离：在发现猪链球菌感染的猪时，需要立即将其隔离，并密切观察其他猪的健康状况，以防止疫情扩散。
3. 注重饲养管理：加强对猪的饲养管理，提高猪的免疫力，确保其身体健康。
合理饲喂猪只，保持饮水清洁，并定期进行疫苗接种等。
4. 使用抗生素：对于已经感染猪链球菌的猪只，可以使用适当的抗生素进行治疗，以缓解症状并减少病原菌的数量。
5. 加强疫苗接种：对于猪链球菌病的疫苗，可根据兽医的建议进行接种，以提高猪只对该疾病的免疫力，减少感染的风险。
及时进行实验室鉴定和采取正确的防治措施，可以有效控制猪链球菌病的传播，保障猪只的健康和养殖业的稳定发展。
人感染猪链球菌病应急处理预案
吉安县人感染猪链球菌病应急处理预案人感染猪链球菌病是由猪链球菌（主要是猪链球菌2型）引起一种较重的人畜共患病。
该病主要临床表现为急性起病、高热、伴有头痛等全身中毒症状，重者出现中毒性休克综合征和脑膜刺激征。
为了防止该疫情传入我县，提高我县卫生系统对该病突发疫情的预防、预警反应和应急处理能力，保障广大群众的身体健康与生命安全，维护社会稳定，促进经济发展，制定本预案。
一、总则（一）、目的有效预防和及时控制人感染猪链球菌病突发疫情，规范和指导突发疫情应急处理工作，最大限度地减少突发疫情造成的危害，保障人民身体健康和生命安全。
（二）、工作原则人感染猪链球菌病突发疫情的应急处理工作贯彻预防为主、常备不懈的方针，坚持统一指挥、分级负责、快速反应、依靠科学、依法管理的原则。
（三）、编制依据本预案依据《中华人民共和国传染病防治法》、《突发公共卫生事件应急条例》、《突发公共卫生事件与传染病疫情监测信息报告管理方法》制定。
（四）、适用范围全县卫生系统所有工作人员在我县范围内应对人感染猪链球菌病突发疫情的应急处理工作适用本方案。
二、组织机构与职责（一）、县卫生系统应急组织机构与职责1、应急领导小组县卫生局设立人感染猪链球菌病疫情应急领导小组，统一组织领导疫情的应急处置工作。
2、专家指导组成立人感染猪链球菌病疫情专家指导组，其主要职责是：对人感染猪链球菌病疫情级别的判定及采取的应急措施提出建议，并对应急处置工作进行技术指导，对病人的救治进行技术指导，对应急反应的终止提出意见，对处置成效进行评估。
3、现场处理组现场处理组下设3个专业组，负责指导疫情流行学调查、现场消毒处置及检验检测工作。
其中流行病专业组负责指导全县卫生系统做好疫情监测，指导并参与疫情的流行病学调查，提出并实施现场控制、处理措施；消毒杀虫组负责指导并参与疫情现场消毒处理措施；检验专业组负责指导全县卫生系统进行标本采集、开展病原学或血清学检测，并承担疑难病例的鉴定检测工作。
微生物检验危急值报告程序
微生物检验危急值报告程序
1 目的
对于在血、骨髓、脑脊液等标本中（涂片或培养）发现细菌或真菌，以及发现疑似高致病性病原微生物或国家规定立即上报的法定传染病，第一时间报告给临床医生及医院相关部门，为诊断治疗或隔离防疫赢得时间。
2 适用范围
适用于临床微生物检验的所有血培养、骨髓培养、脑脊液涂片或培养标本，以及可能发现疑似高致病性病原微生物或国家规定立即上报的法定传染病病原体的所有标本。
3 职责
实验室所有经授权工作人员均应执行本程序。
4 程序内容
4.1 微生物检验危急值：
4.1.1 血液、骨髓或脑脊液检出（涂片或培养）病原微生物。
4.1.2 O1群霍乱弧菌、O139群霍乱弧菌、鼠疫杆菌、炭疽杆菌、肠出血大肠埃希菌 O157：H7、伤寒沙门菌、痢疾志贺菌、猪链球菌、结核杆菌（或抗酸染色阳性）、生殖道淋病奈瑟菌、布鲁菌、脑膜炎奈瑟菌等传染性较强的微生物及其他国家规定立即上报的法定传染病病原体。
4.2 微生物危急值报告方式和处理。
4.2.1 血培养、骨髓培养、脑脊液培养的危急值报告方式按《微生物检验结果》中的分级报告程序进行，电话通知相应临床科室并及时填写《检验科危急值报告登记表》。
4.2.2 脑脊液涂片发现细菌或真菌，应立即审发涂片结果，电话通知临床并及时填写《检验科危急值报告登记表》。
4.2.3 检出 O1 群霍乱弧菌、O139 群霍乱弧菌、鼠疫杆菌、炭疽杆菌、肠出血大肠埃希菌 O157：H7、伤寒沙门菌、痢疾志贺菌、猪链球菌、结核杆菌（或抗酸染色阳性）、生殖道淋病奈瑟菌、布鲁菌、脑膜炎奈瑟菌等传染性较强的微生
物或国家规定立即上报的法定传染病病原体，按《疑似高致病性病原微生物标本管理程序》处理。
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3、 检测溶菌酶释放相关蛋白编码基因片段 （mrp） 上游引物： ggtatacctt gctggtaccg ttc 下游引物：agtctctaca gctgtagctg g
二、 血清学检测
1．用兰氏分型乳胶凝集链球菌试剂盒进行分群 2．用猪链球菌 1-34 个型血清进行分型 取一滴猪链球菌诊断血清悬滴于载玻片上，与一滴菌悬液充分混合，或 用接种环（牙签也可）刮取单个菌落直接与血清混合，观察是否出现凝 集反应，同时用生理盐水做对照。
三、 生化反应
可用 API 生化鉴定系统的 api-strep 手工鉴定条进行鉴定，该方法可 直接鉴定到种。普通实验室可以重点做 VP ,七叶苷水解试验，6.5%的氯化 钠生长试验，45 度﹑10 度生长试验，胆汁耐受（麦康凯培养基）。结果依 次为阴性，阳性，阴性，阴性，阴性，阴性，可初步认为猪链球菌。可送 交到有条件的单位做进一步鉴定。
猪链球菌 2 型检验程序
病人检样（脑脊液，关节液，血液）
增菌培养 （脑心肉汤）
革兰氏染色 （有 G+成对球菌、短链球菌）
羊血琼脂平板 （37℃，5%CO2，24h）
α溶血
β溶血
γ溶血
PCR 检测
血清学检测
生化鉴定
一、 分离步骤和程序
1．可采集病人的血，腹水，脑脊液或者是尸检标本；病、死猪的肝脏、 脾脏、腹水、心血。4℃保存。
2．制作肝脏、脾脏的触片，或用腹水、血液、脑脊液涂片，火焰固定后 进行革兰氏染色，油镜下观是否有成对或短链状革兰氏阳性球菌。
3．取有成对或短链状革兰氏阳性球菌的标本接种选择增菌培养液（含 15 微克/毫升多粘菌素 B，30 微克/毫升萘啶酮酸的脑心培养基），或 直接划线接种含两种抗生素的羊血琼脂平板培养基，在蜡烛缸或 CO2 培养箱中培养。
4、PCR 反应的条件： 94℃预变性 5 分钟;94℃、30 秒，60℃、30 秒，72℃、30 秒，25 个循环，最
后延伸 72℃、5 分钟。取 5 微升扩增产物在 1.2℅的琼脂糖凝胶中进行电泳。 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所 国家传染病预防控制重点实验室 2005 年 7 月 25 日
阿拉伯糖 ARA — 松三糖
melezitose —
核糖 RBS — 马尿酸盐 hippurate —
四、 基因鉴定， 包括使用 PCR 技术和对 PCR 产物进行序列 分析
可挑取分纯的菌落或在选择平板上湿润的可疑菌落，直接进行 PCR 检测。
1、 检测猪链球菌种特异性 16S rRNA。 上游引物：cagtatttaccgcatggtagatat 下游引物：gtaagataccgtcaagtgagaa
具有参考价值的生化反应项目有：
3.1 生长特性
10℃ 不生长
45℃ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ不生长
6.5%NaCl 不生长
PH9.6 不生长
麦康凯培养基 （胆汁耐受） 不生长
3.2 发酵试验 棉子糖 RAF + 葡糖 INU +
乳糖 LAC
+ 甘露醇 MAN
—
甘露糖 MNS
— 丙酮酸
PRV —
山梨醇 SOR — 甘油
Glycerol —