军犬侵袭性大肠埃希菌分离鉴定及药敏试验
宠物源性大肠杆菌耐药性调查
宠物源性大肠杆菌耐药性调查师志海;王文佳;兰亚莉;陈朝喜【摘要】To understand drug resistance of Escherichia coli isolated from pets in Guangzhou,broth microdilution method was used for antimicrobial agent susceptibility testing of 120 clinical E. coli isolates to ceftiofur, enrofloxacin and other 11 antibiotics and the experimental data were statisticized by WHONET 5. 4 software. Based on the results of drug resistance pattern analysis, it can guide the clinical use of drugs for pets and provide a theoretical basis for drug resistance surveillance.%本试验采用微量肉汤稀释法对120株宠物医院分离的大肠杆菌进行头孢噻呋、恩诺沙星等13种抗生素的最小抑菌浓度(MIC)值测定,并利用WHONET 5.4软件对数据进行处理,以了解广州市宠物源性大肠杆菌的耐药情况.通过对其耐药谱型的调查,为指导宠物临床用药和耐药性及耐药性监测提供理论依据.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2012(039)007【总页数】2页(P244-245)【关键词】微量肉汤稀释法;耐药谱型;耐药监测【作者】师志海;王文佳;兰亚莉;陈朝喜【作者单位】河南省农业科学院畜牧兽医研究所,河南郑州450002;华南农业大学兽医学院,广东广州 510642;河南省农业科学院畜牧兽医研究所,河南郑州450002;西南民族大学生命科学与技术学院,四川成都610041【正文语种】中文【中图分类】S851.4+3犬大肠杆菌病是由致病性大肠杆菌所引起的犬的急性肠道传染病，当饲养管理不当、犬舍卫生不良、气候剧变、仔犬哺乳不足及在其他某些应激因素的作用下，使仔犬体质变差、抵抗力降低时，便可引起大肠杆菌内源性感染，或经消化道或脐带感染（高文鑫等，2009）。
致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验 20140220
致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验1.材料与方法1.1实验材料1.1.1器材设备：剪刀、镊子、手术刀、接种环、接种针、涂布棒、酒精灯、载玻片、盖玻片、染色缸、染色架、革兰氏染液、光学显微镜、香柏油、恒温培养箱、游标卡尺等。
1.1.2病料采集：根据临床症状、流行病学采集疑似发病未死猪或刚死亡猪只的肝脏、脾脏、心脏、肺脏、大肠、排泄物等并冷藏运输于3h内送至实验室，待检。
1.1.3培养基与试剂：普通营养琼脂、麦康凯琼脂、伊红美蓝琼脂、微量生化反应管、药敏片、青霉素等抗生素。
1.2试验方法1.2.1细菌的形态学检查：触片镜检，用镊子夹取待检病料一端，再用灭菌过的剪刀剪出一个切面，将新鲜的切面在干净的载玻片上轻触几下，载玻片自然干燥后进行瑞氏染色或美兰染色并镜检。
可初步判断待检病料中是否含有细菌。
触片也可以是排泄物悬浮液或研磨后的组织液，注意，为避免细胞碎片影响观察，涂片或触片时一定要均匀、薄。
1.2.2分离培养：将手术刀灼烧趁热在待检病料表面烫一下，以杀灭其表面杂菌；用无菌剪刀在烫面剪出一个小口，用灭菌过的接种环从其切面伸入并旋转勾取组织，用分区划线的方法接种于普通营养琼脂培养基、麦康凯培养基和伊红美蓝培养基上；或将组织研磨后用灭菌生理盐水或灭菌PBS液稀释，再用接种环勾取悬浮液使用分区划线的方法接种于普通营养琼脂培养基、麦康凯培养基和伊红美蓝培养基上，置37℃恒温箱培养18-24h后观察菌落形态。
在普通营养琼脂培养基上长出灰白色光滑圆形菌落，麦康凯培养基上长出粉红色或砖红色光滑圆形菌落，在伊红美蓝培养基上长出紫黑色并有金属光泽的光滑圆形菌落。
注：麦康凯培养基和伊红美蓝培养基为鉴别培养基。
1.2.3培养物革兰氏染色：用接种环取一滴灭菌生理盐水于载玻片上→用接种环挑去麦康凯培养基上单个中等大小的红色菌落于生理盐水中混匀→均匀涂布成直径约为1cm的薄层→那载玻片在酒精灯上方30-40cm处干燥→使用酒精灯外焰固定→滴加一滴草酸结晶紫1min→水洗→加革兰氏碘液2-3min→水洗→95%酒精脱色0.5-1min →水洗→滴加石炭酸复红0.5-1min，用滤纸吸干，油镜镜检。
大肠埃希氏菌的分离鉴定与药敏试验
大肠埃希氏菌的分离鉴定与药敏试验作者：张鑫来源：《当代畜禽养殖业》 2019年第2期张鑫浙江省湖州市安吉县天荒坪镇畜牧兽医站 313300摘要：大肠埃希氏菌通常被称作大肠杆菌，外文名称（学名）Escherichia coli。
它属于细菌界，变形菌门，V-变形菌纲，肠杆菌目，肠杆菌科，埃希氏菌属，大肠杆菌种。
大肠杆菌主要寄生于人和动物的大肠内，约占肠道菌的1%。
是一种两端钝圆、能运动、无芽孢的革兰氏阴性短杆菌。
该菌常引起动物严重腹泻和败血症。
关键词：大肠埃希氏菌；分离鉴定；药敏试验近年来随着集约化养鸡业的迅速发展，大肠杆菌病的流行日趋严重，其不仅使患病的鸡群生长发育受阻，饲料转化率下降，死淘率及屠宰废弃率增加，而且种鸡及产蛋鸡的蛋品质下降，孵化率降低，以及治疗费用增加等等，给养鸡户造成了极大的经济损失。
1 大肠埃希氏菌的主要特点大肠埃希氏菌属于原核生物，具有由肽聚糖组成的细胞壁，只含有核糖体简单的细胞器，没有细胞核，有拟核。
细胞质中的质粒常用作基因工程中的运载体。
大肠埃希氏菌属于异养兼性厌氧型。
大肠埃希氏菌和人体在不致病的情况下可认为是互利共生，在致病的情况下可认为是寄生。
大肠埃希氏菌遇到伊红美蓝，菌落呈深紫色，并有金属光泽。
2 大肠埃希氏菌导致的疾病（1）鸡大肠杆菌病引起的急性败血症。
各种日龄的鸡均可发病，病鸡腹泻或呼吸困难。
剖检心脏和肝脏，表面覆盖一层容易剥离的白色纤维素膜(肝周炎、心包炎)，肉鸡大肠杆菌病还容易继发肉鸡腹水症。
（2）雏鸡脐炎。
该病一般是由大肠杆菌和其他细菌混合感染引起，主要发生于刚出壳的雏鸡，多数在出壳后2~3日内死亡。
病雏虚弱，常堆挤在一起，水样腹泻，腹部膨大，脐孔未闭合，呈蓝黑色，有刺激性恶臭味，死亡率在l0%以上。
（3）气囊炎。
病鸡表现为咳嗽和呼吸困难，呈地方性流行，病死率5%~20%，有时可达50%。
还有鸡大肠杆菌病引起的肠炎、蛋鸡输卵管炎、卵黄性腹膜炎、脑炎和全眼球炎等。
成都地区犬大肠杆菌的分离鉴定及药物敏感性试验
易产生耐药性，使得临床工作者对 这类疾病的防治越来越难。本试验 通过对成都市宠物医院和宠物市场 采 集 的 犬 粪 便 样 品 做 分 离、 培 养、 纯 化、 生 化 鉴 定 大 肠 杆 菌， 并 进 行 药敏试验研究，为临床选择抗菌药 物治疗犬大肠杆菌病和耐药性监测 提供有力依据。
一、材料和方法
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兽医实验室 2017 年第 8 期
细 菌 生 化 编 码 微 量 鉴 定 管 中， 氨 基 酸和氨基酸对照滴加石蜡 1 ～ 2 滴， 37℃培养 24 h 后，对菌株的生化结 果 进 行 判 断 并 编 码， 按 编 码 值 检 索 肠杆菌科细菌生化编码表进行细菌 鉴定。
2017 年第 8 期 兽医实验室
成都地区犬大肠杆菌的分离鉴定及
药物敏感性试验
孙艳 安扎拉 / 四川省凉山州畜牧兽医科学研究所 陈朝喜 / 西南民族大学生命科学与技术学院
大肠杆菌是人类和动物常见的 肠 道 微 生 物， 在 维 持 肠 道 正 常 生 理 机 能 上 起 重 要 作 用， 也 是 引 起 多 种 疾 病 的 病 原 体， 包 括 胃 肠、 泌 尿 道 的 感 染 和 败 血 症， 给 人 和 动 物 的 生 命 带 来 威 胁。 在 物 质 生 活 极 丰 富 的 现 今 社 会， 随 着 生 活 结 构 的 转 变， 越来越多的人将情感寄托在宠物身 上， 他 们 已 经 把 宠 物 作 为 家 庭 的 一 员， 而 宠 物 中 尤 以 犬 最 多。 犬 大 肠 杆 菌 病 的 治 疗 方 法 很 多， 关 键 是 要 早 发 现、 早 治 疗， 治 疗 常 用 抗 生 素 和磺胺类以及其它消炎止泻的药物。 近 年 来， 抗 菌 药 物 的 广 泛 使 用 和 运 用 不 当 或 者 是 滥 用 的 情 况， 引 起 大 肠 杆 菌 的 耐 药 菌 株 越 来 越 多， 因 为 大肠杆菌对药物的选择压力很敏感，
大肠杆菌分离鉴定及药敏实验方案
鸡致病性大肠杆菌的分离培养及药敏实验实验基本步骤：样品→肝、脾触片革兰氏染色镜检→普通琼脂平板、麦康凯琼脂平板分离培养→革兰氏染色镜检、生化实验鉴定→普通肉汤培养基增殖培养→药敏实验。
1 病料采集1.1 准备材料：试管、载玻片、手术刀、手术剪、结扎绳、记号笔、冰块、泡沫箱、口罩、手套（该灭菌的都进行高压蒸汽灭菌）、冰箱。
1.2 取材部位：血液、肝脏、脾脏、肠内容物，若有鸡胚感染则去鸡胚及卵黄物。
1.3 操作方法：将病死鸡浸泡在消毒剂溶液中，打开腹腔，无菌采集肝脏、脾脏放于事先准备好的灭菌试管内，将带有肠内容物的肠管两端结扎放于灭菌是试管内。
将有明显病变的脏器入肝、脾进行触片，做好标记。
都贴上标签，标示采集样品，来源地，采集时间，采集人。
将装有病料的试管放在放有冰袋的泡沫箱中，及时返回实验室，置于4℃冰箱待检。
2 菌的分离培养及鉴定2.1 准备材料：光学显微镜、革兰氏染色液、载玻片、手术刀、接种环、平皿、恒温箱、高压锅、摇床、酒精灯、葡萄糖、甘露醇、乳糖、蔗糖等微量生化发酵管，蛋白胨水（蛋白胨(或胰蛋白胨)20g、氯化钠5g、蒸馏水1000mL pH7.4），葡萄糖蛋白胨水溶液（每100 mL蛋白胨水中加入葡萄糖1g）、甲基红试剂、吲哚试剂、乙醚、VP指示剂、超净台。
培养基：A. 普通琼脂培养基（牛肉粉 3g、蛋白胨 10g、氯化钠 5g、琼脂 20g、蒸馏水1000ml，ph7.3±0.1），B. 麦康凯琼脂培养基（蛋白胨20g、牛胆盐5g、氯化钠5g、琼脂15g，乳糖10g、结晶紫0.001g、中性红0.025g，ph7.2±0.2。
），C. 营养肉汤培养基（牛肉粉 3g、蛋白胨 10g、氯化钠 5g、蒸馏水1000ml，ph7.2±0.2）。
2．2 样品触片镜检涂片镜检：取触片,进行革兰氏染色镜检。
2.2.1在玻片上滴加草酸铵结晶紫染色液，作用1min，水洗。
2.2.2 加革兰氏碘液于玻片上媒染，作用1min，水洗。
犬皮肤真菌病病原分离鉴定与药敏试验
822020年第3期 吉林畜牧兽医·畜牧科学·XuMu KeXue犬皮肤真菌病病原分离鉴定与药敏试验黄浩轩上海八公叔叔网络科技有限公司，上海 200000摘 要：本文选取了58个犬皮肤真菌病的病灶样本，结合伍德氏灯检查、皮肤样品接种与培养、形态学鉴定、PCR 鉴定纸片扩散法展开犬类真菌性皮肤病的病原分离鉴定与药敏试验。
结果显示：犬小孢子菌在14 d 时基本成熟；链格孢霉在第7天基本成熟；犬小孢子菌、链格孢霉对NYS 最敏感，产生的抑菌圈最大。
关键词：犬类真菌性皮肤病；病原分离鉴定；药敏试验为了对犬皮肤真菌病的主要病原进行深入了解，落实真菌分离培养、鉴定极为必要。
同时，要保证使用抗真菌药物的合理性，就有必要展开药敏试验。
依托这样的鉴定与试验，能够筛选出适合犬皮肤真菌病治疗的药物。
1 试验准备1.1 试验菌株随机采集了58个犬皮肤真菌病的病灶样本，进行真菌分离培养。
1.2 仪器与设备本次试验使用的仪器设备包括伍德氏灯、培养皿、电泳仪、压力蒸汽灭菌器、基因扩增仪、低温离心机、霉菌培养箱、分析天平、工作台、紫外凝胶成像系统。
使用的主要试剂与药品包括制霉菌素标准品、伊曲康唑标准品、酮康唑标准品、制霉菌素药敏纸片、伊曲康唑药敏纸片、西班牙琼脂糖凝胶、真菌DNA 提取液等。
2 试验方法2.1 伍德氏灯检查将病犬带入暗室内进行伍德氏灯检查。
将伍德氏灯预热5 min，使其距离病犬皮肤5～10 cm，进行照射，记录患处的荧光反应。
2.2 皮肤样品接种与培养提取病犬毛发，将其移入沙氏培养基中接种；使用封口膜对平板进行密封倒置，标注编号、日期等基本信息；放入28 ℃的恒温培养皿中。
2.3 病原真菌的形态学鉴定对确认为真菌的菌株进行多次的纯化处理，获取稳定菌落。
每间隔1 d 观察、记录真菌的生长状态、镜检结果等。
2.4 病原真菌的PCR 鉴定提取真菌的DNA，进行PCR 反应与琼脂糖凝胶电泳，对扩增产物送检测序[1]。
临床分离大肠埃希菌对常用抗菌药物的敏感性分析
临床分离大肠埃希菌对常用抗菌药物的敏感性分析摘要：目的：分析2015-2021年期间本院住院患者临床分离大肠埃希菌对常用抗生素的敏感性。
方法：获取并回顾性分析2015-2021年期间临床分离的585份大肠埃希菌标本，对其来源、分布情况及抗菌药物敏感性进行分析。
结果：2015-2021年期间，本院共分离致病菌4007株，其中大肠埃希菌585株，分离率为14.60%（585/4007），整体检出率呈现先升高后降低趋势，2017年和2020年检出率较高为21.6%和20.8%。
大肠埃希菌主要来源于穿刺液、分泌物、尿液、脓液、血液和痰液，尿液中检出率最高（184株，31.45%）。
本院抗生素使用量前五位为头孢唑林、头孢他啶、哌拉西林他唑巴坦、左氧氟沙星和头孢曲松。
2015-2021年期间，大肠埃希菌对头孢他啶、哌拉西林他唑巴坦的敏感性呈现上升趋势（P＜0.05），对头孢曲松敏感性呈现先下降后上升的趋势（P＞0.05），对左氧氟沙星和头孢唑林的敏感性基本保持稳定（P＞0.05）。
结论：近些年来，大肠埃希菌的检出率呈现先升高后降低的趋势，且对部分抗生素的药物敏感性降低，需结合药敏试验合理选择抗生素改善临床治疗效果。
关键词：大肠埃希菌；抗生素；敏感性大肠埃希菌是院内感染的常见致病菌，可通过侵袭操作设备或医护人员引发院内感染，给医疗机构院感防控带来巨大挑战。
随着侵袭性手术和广谱抗生素的使用量增加，大肠埃希菌的检出率逐年攀升，不仅增加了患者住院时间和医疗费用支出，也降低了患者预后预期水平[1]。
及时了解大肠埃希菌的耐药性水平和临床抗菌药物应用效果，采取及时有效的措施预防细菌耐药对提高临床诊疗效果改善患者预后有积极作用[2]。
故此，本文对2015-2021年期间主要抗菌药物使用情况及大肠埃希菌分布情况及其对常用药物药敏感性进行了回顾性分析，期望为有效控制细菌耐药提供参考。
1.资料与方法1.1资料来源获取并回顾性分析2015-2021年期间临床分离的585份大肠埃希菌标本，对其来源、分布情况及抗菌药物敏感性进行分析，同一患者同一部位同一种菌只记第一株。
宠物犬源致病性大肠杆菌鉴定与药敏试验
宠物犬源致病性大肠杆菌鉴定与药敏试验作者：郭世栋胡元春来源：《世界家苑·学术》2017年第08期摘要：某宠物医院，就诊的一例泰迪犬，泰迪犬早上吃了狗粮，无明显症状，下午出现严重的腹泻，精神沉郁。
为了确定引起泰迪犬的严重腹泻病原菌，对就诊的泰迪犬无菌采集肛拭子进行细菌的分离鉴定，并得到了一株病原菌。
对分离的病原菌进行培养特性、形态学观察、生化试验、动物致病性试验的方法进行鉴定，结果显示，从严重的腹泻泰迪犬体内分离的一株病原菌被鉴定为致病性大肠杆菌，致病性大肠杆菌对小鼠具有很强的致病性。
对从严重的腹泻泰迪犬体内分离致病性大肠杆菌进行药敏试验，结果显示，头孢曲松、头孢克肟，氟苯尼考、氧氟沙星4种药物敏感；对大观霉素、美洛培南、丁胺卡娜霉素、头孢他啶4种中度敏感，对氨苄西林、林可霉素、强力霉素、阿莫西林4种药物耐药。
关键词：泰迪犬：致病性大肠杆菌；药敏试验；随着人们现在生活水平的提高，农村及城市中的家庭中的泰迪犬养殖数量越来越多，泰迪犬成为人们生活中重要伴侣动物，泰迪犬健康状态越来越受到人们的关注。
致病性大肠杆菌是引起宠物犬腹泻主要的病原菌，当犬感染了大肠杆菌后出现严重的腹泻，严重着可导致败血症，出现突然死亡。
一、发病情况。
某宠物医院，就诊的一例泰迪犬，泰迪犬1岁，泰迪犬早上吃了狗粮，无明显症状，下午出现严重的腹泻，精神沉郁。
通过询问，泰迪犬已经做过了五连疫苗。
二、病毒性疾病的检测。
宠物医院的医护人员对送诊的宠物犬前腿臂静脉采血1mL，用离心机分离血清，按照说明用胶体金试纸条，对分离的血清进行检测犬瘟热、细小病毒、冠状病毒、腺病毒抗原检测，结果显示，检测的犬瘟热、细小病毒、冠状病毒、腺病毒抗原为阴性。
排除了犬瘟熱、细小病毒、冠状病毒、腺病毒的感染。
三、细菌的分离鉴定与镜检。
对送诊的泰迪犬无菌采集的肛拭子，放入加入0.85%无菌的生理盐水，轻轻摇晃后接种于麦康凯培养基上，37℃培养12-18h，选取单个优势菌落接种于伊红美蓝培养基养基上，37℃培养12h。