愈伤组织褐化问题
两种芍药愈伤组织的诱导及褐化抑制的研究
两种芍药愈伤组织的诱导及褐化抑制的研究摘要本文对两种不同芍药品种中愈伤组织的诱导和褐化抑制进行了研究。
以‘蔷薇芍药’和‘玉皇庙芍药’为研究目标，使用不同浓度的生长激素和抗氧化剂处理愈伤组织，分别测定其形成率和褐化率。
结果表明，在不同浓度的生长激素处理下，两种芍药品种中均可成功诱导愈伤组织的形成，但形成率随着生长激素浓度的增加而逐渐降低。
同时，抗氧化剂处理可以显著减轻愈伤组织的褐化，表明褐化过程可能与氧化反应有关。
该研究对芍药愈伤组织的诱导和褐化机制有一定的启示作用，同时也有助于芍药的良种繁殖和种质资源保护。
关键词：芍药；愈伤组织；诱导；褐化；抗氧化剂AbstractThis study investigated the induction of callus tissue and inhibition of browning in two different peony varieties. Rosa peony and Yuhuangmiao peony were used as the research targets, and different concentrations of growth hormones and antioxidants were used to treat callus tissue. The formation rate and browning rate were measured.The results showed that callus tissue could be successfully induced in both peony varieties under different concentrations of growth hormones, but the formation rate decreased gradually with the increase of growth hormone concentration. Moreover, the use of antioxidants could significantly reduce the browning of callus tissue, indicating that the browning process might be related to oxidative reactions. This study provides some insights into the induction and browning mechanisms of peony callus tissue and is helpful for the breeding of peony and the protection of germplasm resources.Keywords: peony; callus tissue; induction; browning; antioxidant一、引言芍药是中国传统的重要药材和观赏植物，具有较高的经济和文化价值。
组织培养褐化原因以及防止措施
褐化原因及防止措施褐变是指外植体在培养过程中体内的多酚氧化酶被激活，使细胞里的酚类物质氧化成棕褐色的醌类物质，这种致死性的褐化物不但向外扩散致使培养基逐渐变成褐色，而且还会抑制其他酶的活性，严重影响外植体的脱分化和器官分化，最后变褐而死亡的现象。
在组织培养中，褐变是普遍存在的，这种现象与菌类污染和玻璃化并称为植物组织培养的三大难题。
而控制褐变比控制污染和玻璃化更加困难。
因此，能否有效地控制褐变是某些植物能否组培成功的关键。
(一)褐变的原因影响褐变的因素极其复杂，随着植物种类、基因型、外植体的部位及生理状况等的不同，褐变的程度也有所不同。
1.与基因型有关不同植物与品种之间褐变现象是不同的，有人把此归结为基因型的不同。
一般来说植物材料中单宁类和多种羟酚类化合物的含量高，易引起外植体材料的严重褐化。
多数木本植物比草本植物易引起褐化，多年生草本植物比一年生草本植物易引起褐化。
2.与取样外植体的年龄有关通常幼龄部位产生褐化较轻，随着组织的老龄化含醌类物质增多而褐化加重。
因此，在外植体接种时常需要剥去鳞片和大叶片，尤其是以切取幼嫩的芽尖或切取顶芽分生组织(或带少量叶原基)接种更为理想。
3.与外植体取材时间有关一般在春夏季，尤其是春季采取生长旺盛的外植体产生褐化较轻，已木栓化或木质化的枝条和处于休眠状态的芽作为外植体时褐化严重。
即分生部位接种后形成醌类物质少，而分化的部位则形成醌类物质较多。
4.与培养基有关过高的无机盐浓度会引起棕榈科植物外植体酚的氧化，低盐培养基，尤其是Mn2+和 Cu2+离子浓度较低时，外植体的褐化程度较轻。
例如油棕用MS无机盐培养容易引起外植体的褐变，而用降低了无机盐浓度的改良MS培养基时则可减轻褐变，而且获得愈伤组织和胚状体。
植物生长调节物质使用不当时，材料也容易褐变，细胞分裂素BA有刺激多酚氧化酶活性提高的作用，这一现象在甘蔗的组织培养中十分明显。
培养基的PH值较低时常有利于减轻外植体的褐化。
植物组织培养中的褐变现象与防止方法
植物组织培养中的褐变现象及其防止措施摘要：细胞受损后，由于细胞区隔作用被破坏，毒性酚类或其氧化物醌类物质毒害细胞，导致组织褐变，植物组织培养过程中培养低效或失败。
目前认为组织培养中褐变程度主要受外植体材料的基因型、生理状态、种类、大小、预处理、培养条件、培养基及培养方式的影响。
在目前的研究中控制褐变的有效方法主要有低温培养、暗培养、勤转种、添加抗氧化剂、增效剂或吸附剂于培养基中等。
关键词:植物;组织培养;褐变;防治方法褐变是植物组织培养中一种普遍存在的现象，是由于组织中多酚氧化酶被激活，使细胞酚类物质被氧化而产生棕褐色醌类物质，这种褐变现象又被称为酚污染。
多酚类物质及其氧化物醌类物质会抑制其它酶的活性，从而毒害整个外植体，严重影响外植体的脱分化、再分化和生长。
褐变这种现象与菌类污染和过度含水化(即玻璃化)并称植物组织培养的3 大难题。
目前褐变已成为植物组织培养发展的一大障碍[1]。
1 褐变现象的原因1.1 非酶促褐变非酶促褐变是由于细胞受胁迫或其他不利条件影响所造成的细胞程序化死亡或自然发生的细胞死亡，即坏死形成的褐变现象，并不涉及酚类物质的产生。
诸多不利条件都可以造成细胞的程序化死亡，但这种褐变若采取适当措施或者愈伤组织适应了胁迫环境就不再发生。
1.2 酶促褐变多数认为，植物组织培养中的褐化现象主要是由酶促褐变引起的，即由多酚氧化酶( P PO ，Polyphenol Oxidase) 作用于天然底物酚类物质而引起的。
在正常条件下,细胞中的酚和醌之间保持一种动态平衡,醌类物质水平较低;而酚氧化酶及其底物分布在正常组织的不同部位，酚类物质分布在细胞的液泡内，酶则分布在各种质体或细胞质内，这种区域性分布致使底物与酶被质膜分隔开来；但当外植体或培养材料处于机械损伤等逆境，或细胞受伤或衰老时，细胞膜结构或细胞中物质区域化分布的破坏会导致酚氧化酶释放或合成，如果此时在合适的pH 和温度等条件下，酚氧化酶、酚类（底物）和氧发生酶促氧化反应，形成有毒的棕褐色醌类物质,从而使组织发生褐变。
植物组培过程中的褐化问题
组培过程中的褐化问题许多植物的组织培养中发现有褐变现象，尤以木本植物组织培养中褐变严重。
褐变主要发生在外植体、愈伤组织的继代、悬浮细胞培养、原生质体的分离与培养等。
褐变产物不仅使外植体、细胞、培养基等变褐，而且对许多酶有抑制作用，从而影响培养材料的生长与分化，严重时甚至导致死亡。
[1] 褐变的机理正常细胞内，区域性分布使底物与PPO不能接触并不发生褐变，当细胞膜的结构发生变化和破坏时，酶和底物就结合在一块，在氧的作用下，生成醌，从而引起褐变。
引起褐变的条件：氧、引起褐变的酶、底物，缺一不可。
引起褐变的酶：多酚氧化酶（PPO是主要的）、过氧化物酶（POD）、、苯丙氨酸解氨酶等。
引起褐变的酶的底物：主要是酚类化合物，可分成3类：第一类是苯基羧酸，包括邻羟基苯酚、儿茶酚、没食子酸、莽草酸等；第二类是苯丙烷衍生物，包括肉桂酸、香豆酸、咖啡酸、单宁、木质素等；第三类是黄烷衍生物，包括花青素、黄酮、芸香苷等。
[2] 影响褐变的因素因子是复杂的，随植物的种类、基因型、外植体部位及生理状态等的不同，褐变的程度也有所不同。
A.植物种类及基因型红豆杉愈伤组织的诱导及继代培养过程中，常常发生培养细胞褐变现象，轻者影响细胞生长和繁殖，重者导致细胞死亡。
豆科植物和芸苔属植物原生质体培养中容易褐化也是一个普遍的问题，橡胶的花药培养中，海垦2号花药的褐变较少，因而愈伤组织的诱导容易；而有些品系花药容易褐变，因而愈伤组织的诱导困难。
在组织培养中，有些品种、品系难以成功，而有些则容易成功。
油菜叶原生质体品种373褐化比品种94591、95386严重B.外植体部位及生理状态荔枝茎的愈伤组织中度褐变，而根的愈伤组织全部褐变。
欧洲栗幼年型的材料培养时含醌类物质少，成年型材料培养时含醌类物质多，后者比前者褐变严重。
油棕幼嫩外植体（如胚）培养较少褐变，高度分化的叶片接种后则容易褐变。
C.培养基成分及培养条件硬紫草从长期继代培养且次生代谢物含量高引起培养物的褐变。
水稻愈伤组织褐化的机理及影响因素研究进展
基金项目上海市科技兴农项目（沪农科推字〔2021〕第1-3号）；安徽省科技重大专项（201903a06020011）。
作者简介吴浩然（1997—），男，安徽肥东人，助理农艺师，从事水稻遗传转化工作。
*通信作者收稿日期2022-06-09水稻愈伤组织褐化的机理及影响因素研究进展吴浩然张从合*王慧陈思黄艳玲杨力管昌红（安徽荃银高科种业股份有限公司/农业农村部杂交稻新品种创制重点实验室，安徽合肥230088）摘要在水稻愈伤诱导、愈伤继代等过程中，影响愈伤褐化因素较多，包括水稻基因型、培养条件、培养基成分以及继代时间等，且不同因素对愈伤褐化的影响程度不同。
本文简要概述了引起外植体和愈伤组织褐化的机理、褐化类型及引起褐化的因素，同时对其研究方向进行了展望，以期为植物组织培养提供参考。
关键词水稻；愈伤组织；基因型；褐化机理；抗氧化剂；多酚氧化酶中图分类号S511文献标识码A文章编号1007-5739（2023）05-0021-05DOI ：10.3969/j.issn.1007-5739.2023.05.006开放科学（资源服务）标识码（OSID ）：Research Progress on Browning Mechanism of Rice Callus and Its Affecting FactorsWU HaoranZHANG Conghe *WANG HuiCHEN SiHUANG YanlingYANG LiGUAN Changhong(Anhui Win-all Hi-tech Seed Co.,Ltd./National Key Laboratory for New Variety Development of Hybrid Rice of Ministry of Agriculture and Rural Affairs ，Hefei Anhui 230088)AbstractIn the process of rice callus induction and callus subculture,there are many factors affecting callusbrowning,including rice genotype,culture conditions,medium composition and subculture time,and different factors have different influence degrees on callus browning.In this paper,the mechanism,types and affecting factors of browning of explants and calli were briefly summarized,and the research direction was prospected,in order to providereferences for plant tissue culture.Keywordsrice;callus;genotype;browning mechanism;antioxidant;polyphenol oxidase褐化现象常见于水稻愈伤诱导和愈伤继代培养过程中，在褐化初期，愈伤组织颜色变深，呈现出棕色或黑褐色，并且会逐步扩散到周边其他愈伤，最后直至愈伤死亡。
植物组织培养中褐变机理和防治措施
植物组织培养中褐变机理和防治措施摘要：褐变现象是指组织培养诱导脱分化或再分化的过程中，外植体组织从表面向培养基释放褐色物质而使得培养基逐渐变成褐色，外植体随之褐变死亡的现象，褐变现象又称酚污染，在植物组织培养过程中经常出现。
对诱导外植体的脱分化和培再分化过程的影响非常大，甚至是影响某些植物组织培养成功与否的关键。
褐变主要发生在外植体、愈伤组织的继代、悬浮细胞培养、原生质体的分离与培养等。
褐变产物不仅使外植体、细胞、培养基等变褐，而且对许多酶有抑制作用，从而影响培养材料的生长与分化，严重时甚至导致死亡。
本文对褐变的影响因素和对策进行了研究。
关键词：组织培养，褐变，影响因素1. 影响褐变的因素因子是复杂的，随植物的种类、基因型、外植体部位及生理状态等的不同，褐变的程度也有所不同。
1.1褐变类型及基因型物种及其基因型对褐化的影响。
植物组织培养过程中外植体的褐化主要由多酚氧化酶作用于酚类物质而引起的。
不同植物品种、同种植物的不同类型因为外植体材料的基因型不同，在组织培养中褐化发生的频率和程度都存在着较大的差异[4]。
由于酚类的糖苷化合物是木质素、单宁和色素的合成前体，木本植物、单宁含量或色素含量高的植物酚类物质含量也很高，木质素、单宁或色素形成多，其组织培养就容易发生褐变。
因此，组织培养过程中，木本植物一般比草本植物易发生褐变。
目前报道发生褐变的植物中多数是木本植物[5]。
在木本植物中，核桃、板栗由于单宁含量很高，进行组织培养难度很大，不仅在接种后的初代培养期容易发生褐变，而且在形成愈伤组织以后也会因为褐变而引起死亡。
红豆杉愈伤组织的诱导及继代培养过程中，常常发生培养细胞褐变现象，轻者影响细胞生长和繁殖，重者导致细胞死亡。
豆科植物和芸苔属植物原生质体培养中容易褐化也是一个普遍的问题，橡胶的花药培养中，海垦2号花药的褐变较少，因而愈伤组织的诱导容易；而有些品系花药容易褐变，因而愈伤组织的诱导困难。
在组织培养中，有些品种、品系难以成功，而有些则容易成功。
最新-小议植物结构培养褐变产生的原因及方案 精品
小议植物结构培养褐变产生的原因及方案摘要本文针对植物组织培养中常见的褐变现象,详细地分析了其产生的机理及影响因素,并提出了相应的对策,为科研和生产提供了一定的理论和实践依据。
关键词植物组织培养，褐变，对策目前，在许多植物组织培养过程中，常遇到褐变问题。
褐变主要发生在外植体，在植物愈伤组织的继代、悬浮细胞培养以及原生质体的分离与培养中也经常发生。
褐变产物不仅使外植体、细胞、培养基等变褐，而且对许多酶有抑制作用，从而影响培养材料的生长与分化，严重时甚至导致死亡。
本文探讨植物组织培养中褐变现象的影响因素、机理及防范措施，对我们进行科学研究或工厂生产，包括植物组织的培养,原生质体、悬浮细胞和植物器官的培养都有着十分重要的现实意义。
1褐变产生的影响因素影响植物组织培养褐变的因子是复杂的，因植物的种类、基因型、外植体部位及生理状态等不同，褐变的程度也有所不同。
11植物种类及基因型不同的植物和不同的基因型决定了不同的褐化程度。
在组织培养中，品种褐化难易可能是与该品种中多酚类物质含量的多少及多酚氧化酶活性的差异有关。
12外植体部位及生理状态外植体的部位及生理状态不同其褐化程度不同，同时，不同时期和不同年龄的外植体在培养中褐变的程度也不同。
13培养基成分培养基成分中的无机盐、蔗糖浓度、激素水平等对褐变的程度的影响尤为重要。
另外，其值也与褐变程度有较大关系。
14培养条件温度过高或光照过强，均可加速被培养组织的褐变。
不利环境条件都能造成细胞的程序化死亡，温度是诱导程序化死亡的主要因素[1]。
2褐变产生的机理21非酶促褐变非酶促褐变是由于细胞受胁迫或其他不利条件影响所造成的细胞程序化死亡或自然发生的细胞死亡，即坏死形成的褐变现象，并不涉及酚类物质的产生。
徐振彪等[1]将生长正常的愈伤组织转移到含的培养基中，组织周围尤其是接触培养基部分发生褐变，但培养基中没有看到扩散的褐化物质。
当温度升高时继代保存时间过长，也会发生此类现象。
愈伤组织褐化问题
愈伤组织褐化问题：植物外植体组织在接种时的切割面会溢泌一些酚类物质，在接触空气中的氧气后其会氧化为相应的醌类物质，产生可见的茶色、褐色或黑色，此即谓“酚污染”。
根据我个人所做可能有以下原因：1，基本培养基不适合，比如盐浓度太高；2，激素浓度不适合，比太高的话容易造成愈伤组织疏松不结实，甚至水化、褐化；3、培养条件的不适合，比如关照太强，PH值不适合、硬度不够等都有可能引起。
愈伤褐化问题是比较常见的，一般是新接种的比较轻，随着培养时间的延长，在愈伤表面形成较为分散的褐化愈伤，主要是因为随着营养元素和激素消耗分配的前后差异，造成表层细胞生理活性降低所致，当然这个与物种的差异也比较大。
一般解决的办法有：1、冷器械切割接种2、缩短转接时间3、生长素交替使用4、低糖培养5、降低光照强度和时间。
褐变是指外植体在培养过程中体内的多酚氧化酶被激活，使细胞里的酚类物质氧化成棕褐色的醌类物质，这种致死性的褐化物不但向外扩散致使培养基逐渐变成褐色，而且还会抑制其他酶的活性，严重影响外植体的脱分化和器官分化，最后变褐而死亡的现象。
在组织培养中，褐变是普遍存在的，这种现象与菌类污染和玻璃化并称为植物组织培养的三大难题。
而控制褐变比控制污染和玻璃化更加困难。
因此，能否有效地控制褐变是某些植物能否组培成功的关键。
(一)褐变的原因影响褐变的因素极其复杂，随着植物种类、基因型、外植体的部位及生理状况等的不同，褐变的程度也有所不同。
1.与基因型有关不同植物与品种之间褐变现象是不同的，有人把此归结为基因型的不同。
一般来说植物材料中单宁类和多种羟酚类化合物的含量高，易引起外植体材料的严重褐化。
多数木本植物比草本植物易引起褐化，多年生草本植物比一年生草本植物易引起褐化。
2.与取样外植体的年龄有关通常幼龄部位产生褐化较轻，随着组织的老龄化含醌类物质增多而褐化加重。
因此，在外植体接种时常需要剥去鳞片和大叶片，尤其是以切取幼嫩的芽尖或切取顶芽分生组织(或带少量叶原基)接种更为理想。
植物组织培养中的褐化现象及解决途径_郭艳
植物组织培养中的褐化现象及解决途径郭艳1，杨海玲2（1.山西林业职业技术学院园艺系，山西太原030009；2.唐山职业技术学院，河北唐山063000）摘要：外植体褐化是植物组织培养过程中经常遇到的问题，这已成为影响组培成功的主要障碍。
结合近几年的研究，对导致植物组织培养中外植体发生褐化的形式和发生机理、影响褐化的内外因素以及防止和减少褐化的基本途径等进行了阐述，并对解决组织培养中褐化这一难题提出了展望。
关键词：植物；组织培养；褐化；解决途径中图分类号：S311文献标识码：A文章编号：1002-2481（2009）07-0014-03Advances in Studies on Browning in Plant Tissue CultureGUO Yan 1，YANG Hai-ling 2（1.Department of Horticulture ，Shanxi Forestry Vacational College ，Taiyuan 030009，China ；2.Tangshan College of Vacational Technology ，Tangshan 063000，China ）Abstract ：M aterial browning is a problem in plant tissue culture and is a very important factor that can influence the success of plant bined with the recent years ’research,the purpose of this article is to summarize several aspects such as the theories of browning in plant tissue culture,the factors on browning,the countermeasures against browning in practice,and to discuss the possible solutions to the browning.Key words ：Plant;Tissue culture;Browning;Preventing methods收稿日期：2009-05-18作者简介：郭艳（1978-），女，山西和顺人，助教，硕士，主要从事植物与植物生理和果树栽培教学与研究工作。
马尾树愈伤组织的诱导与褐化控制研究
ｔｅｅ３ａ ｔ－ｒｗｎｎ ｇｎｓ ｓ ｓｄ ｏｌ ｈ ｆ ｃ ｏ ａ ｉｎｆ ａｔ ｎ ａ ｆ ｎ ａｓＯ ｅｅｎ ｔ ｉｎｆ ａ ｔＯ ｌ ｅｃ ｌ ｒ ｈ ｓ ｎｉｂｏ ｉｇａ ｅ ｔｗａ ｅ ， ｎｙｔｅｅｆ ｔ ｆ ｕ ｅ ＡＣｗ ｓｓ ｉｃｎ ｄｔ ｔ ａ ｄＮ ２２３ ｒ ｏ ｇ ｉｃｎ． ｎｙｉ ｔ ｕｔ ｅ ｇ ｉ ａ ｈ ｏ Ｖｃ ｗ ｓ ｉ ｎｈ ｕ
关键 词 马尾树 ； 化控 制 ； 伤组 织诱 导 褐 愈 中 图分类 号 ￥ ３ 文 献标 识码 Ａ ３６ 文 章编 号
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愈伤组织褐化问题：
植物外植体组织在接种时的切割面会溢泌一些酚类物质，在接触空气中的氧气后其会氧化为相应的醌类物质，产生可见的茶色、褐色或黑色，此即谓“酚污染”。
根据我个人所做可能有以下原因：1，基本培养基不适合，比如盐浓度太高；2，激素浓度不适合，比太高的话容易造成愈伤组织疏松不结实，甚至水化、褐化；3、培养条件的不适合，比如关照太强，PH值不适合、硬度不够等都有可能引起。
愈伤褐化问题是比较常见的，一般是新接种的比较轻，随着培养时间的延长，在愈伤表面形成较为分散的褐化愈伤，主要是因为随着营养元素和激素消耗分配的前后差异，造成表层细胞生理活性降低所致，当然这个与物种的差异也比较大。
一般解决的办法有：1、冷器械切割接种2、缩短转接时间3、生长素交替使用4、低糖培养5、降低光照强度和时间。
褐变是指外植体在培养过程中体内的多酚氧化酶被激活，使细胞里的酚类物质氧化成棕褐色的醌类物质，这种致死性的褐化物不但向外扩散致使培养基逐渐变成褐色，而且还会抑制其他酶的活性，严重影响外植体的脱分化和器官分化，最后变褐而死亡的现象。
在组织培养中，褐变是普遍存在的，这种现象与菌类污染和玻璃化并称为植物组织培养的三大难题。
而控制褐变比控制污染和玻璃化更加困难。
因此，能否有效地控制褐变是某些植物能否组培成功的关键。
(一)褐变的原因
影响褐变的因素极其复杂，随着植物种类、基因型、外植体的部位及生理状况等的不同，褐变的程度也有所不同。
1.与基因型有关
不同植物与品种之间褐变现象是不同的，有人把此归结为基因型的不同。
一般来说植物材料中单宁类和多种羟酚类化合物的含量高，易引起外植体材料的严重褐化。
多数木本植物比草本植物易引起褐化，多年生草本植物比一年生草本植物易引起褐化。
2.与取样外植体的年龄有关
通常幼龄部位产生褐化较轻，随着组织的老龄化含醌类物质增多而褐化加重。
因此，在外植体接种时常需要剥去鳞片和大叶片，尤其是以切取幼嫩的芽尖或切取顶芽分生组织(或带少量叶原基)接种更为理想。
3.与外植体取材时间有关
一般在春夏季，尤其是春季采取生长旺盛的外植体产生褐化较轻，已木栓化或木质化的枝条和处于休眠状态的芽作为外植体时褐化严重。
即分生部位接种后形成醌类物质少，而分化的部位则形成醌类物质较多。
4.与培养基有关
例如油棕用MS无机盐培养容易引起外植体的褐变，而用降低了无机
盐浓度的改良MS培养基时则可减轻褐变，而且获得愈伤组织和胚状体。
中十分明显。
培养基和半固体培养基上褐化程度比在固体培养基上轻。
5.培养条件不适宜，
现象。
6.材料转移时间
时间过长也会引起材料的褐变，以致全部死亡。
（二）褐变的防止措施
1.选择适宜的外植体及最佳培养基
许多成功的经验表明，选择适当的外植体并建立最佳的培养条件是防止外植体褐变最主要的手段。
外植体材料应有较强的分生能力，在最适宜的细胞脱分化与再分化的培养条件下，使外植体处于旺盛的生长状态，便可大大减轻褐变。
在培养条件的许多因子中，较为重要的是适宜的无机盐成分、适宜的蔗糖浓度及激素水平。
适宜的温度及在黑暗条件下进行培养也可显著减少材料的褐变。
如能在初始培养的1—6周内用暗培养，或在150lx左右的光强下进行光培养，可抑制酚
类物质氧化。
2.连续转移
对于易褐变的材料进行连续转移可以减轻醌类物质对培养物的毒害作用。
在无刺黑莓的茎尖培养中，接种后1—2d就转入新鲜培养基；在山月桂树的茎尖培养中，接种12—24h便转入液体培养基，然后继续每天转移1次，连续7天，褐化便得到了完全控制。
3.加抗氧化剂
在培养基中加入抗氧化剂，或用抗氧化剂进行材料的预处理或预
比在固体培养基中加入抗氧化剂，效果要明显得多。
在倒挂金钟茎尖培养中加入0.01％PVP便对褐变有抑制作用。
4.加活性炭
带树木的组织培养中均曾观察到活性炭防止外植体褐变的明显效果。