石蜡制片法
石蜡切片
石蜡切片（paraffin section）技术相关内容组织学常规制片技术中最为广泛应用的方法。
石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构，也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法，而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。
教学中，光镜下观察切片标本多数是石蜡切片法制备的。
活的细胞或组织多为无色透明，各种组织间和细胞内各种结构之间均缺乏反差，在一般光镜下不易清楚区别出；组织离开机体后很快就会死亡和产生组织***，失去原有正常结构，因此，组织要经固定、石蜡包埋、切片及染色等步骤以免细胞组织死亡，而能清晰辨认其形态结构。
石蜡切片制作基本技术石蜡切片法包括取材、固定、洗涤和脱水、透明、浸蜡、包埋、切片与粘片、脱蜡、染色、脱水、透明、封片等步骤。
一般的组织从取材固定到封片制成玻片标本需要数日，但标本可以长期保存使用，为永久性显微玻片标本。
1.取材应根据要求选取材料来源及部位。
例如植物细胞有丝分裂多选取洋葱根尖，细胞分裂快又便于切取；猪的肝小叶边界清晰明确；耳蜗以豚鼠的内耳易于定位和剥离。
材料必须新鲜，搁置时间过久则产生蛋白质分解变性，导致细胞自溶及细菌的滋生，而不能反映组织活体时的形态结构。
2.固定用适当的化学药液——固定液浸渍切成小块的新鲜材料，迅速凝固或沉淀细胞和组织中的物质成分、终止细胞的一切代谢过程、防止细胞自溶或组织变化，尽可能保持其活体时的结构。
固定能使组织硬化，有利于切片的进行，而且也有媒浸作用，有利于组织着色。
固定液的种类很多，其对组织的硬化收缩程度以及组织内蛋白质、脂肪、糖类等物质的作用各不相同。
例如纯酒精可固定肝糖而能溶解脂肪，甲醛能固定一般组织，但溶解肝糖和色素。
固定液可分为单一固定液及混合固定液。
前者有甲醛（蚁醛、福尔马林）、酒精、醋酸或冰醋酸、升汞、锇酸（四氧化锇）、重铬酸钾及苦味酸等，单一固定液不能固定细胞中的所有成分；混合固定液可以互补不足，常用的混合固定液有Bouin氏液、Zenker氏液、FAA液、Carnoy氏液、SuSa液（配方见有关技术书籍）。
石蜡制片法实验课件111
试剂的配制
(一)70％、80％、90％乙醇 )70％、80％、90％乙醇 95％以下的各级浓度乙醇是用95％乙醇加蒸馏水稀 95％以下的各级浓度乙醇是用95％乙醇加蒸馏水稀 释而成。简单的稀释方法是：所需稀释的浓度是多少， 释而成。简单的稀释方法是：所需稀释的浓度是多少， 就量取多少毫升95 ％ 的乙醇 ， 再加蒸馏水至 95 ml即 就量取多少毫升 95％ 的乙醇， 再加蒸馏水至95 ml 即 可例如，配制70％乙醇，就量取70 可例如，配制70％乙醇，就量取70 m1 95％的乙醇，然 95％的乙醇， 后加入蒸馏水至95 ml即成。 后加入蒸馏水至95 ml即成。 (二)固定剂 常用的固定剂有4％甲醛溶液、Bouin液和Zenker液 常用的固定剂有4％甲醛溶液、Bouin液和Zenker液 等。Bouin液在组织学制片技术中应用甚广，其配方如 等。Bouin液在组织学制片技术中应用甚广，其配方如 下： 苦味酸饱和水溶液 75 ml 4％甲醛溶液 25 ml 冰醋酸 5 ml
切片
（九）粘片
切下来的切片经过镜检，将符合要求的切片粘在洁 净的载玻片上。粘片时先在载玻片涂薄层粘片剂（蛋白 甘油），将其放在烤片盒中置于50℃左右恒温箱内烤 甘油），将其放在烤片盒中置于50℃左右恒温箱内烤 干 。
蜡带
粘片
（十）脱蜡、染色、脱水透明和封片
粘片后要经过脱蜡、染色、再次脱水透明， 粘片后要经过脱蜡、染色、再次脱水透明，然后封 片永久保存。 片永久保存 。 下面以动物学中观察组织结构最常用的 HE染色法说明脱蜡、染色、脱水透明和封片的过程。 HE染色法说明脱蜡、染色、脱水透明和封片的过程。
染色
封片
实践： 学生每3 学生每3人一组，以大鼠肝脏为材料，熟 悉石蜡切片步骤。
石蜡切片的具体步骤与做法
石蜡切片的具体步骤与做法？石蜡切片法即用石蜡作为支持剂进行切片的方法。
石蜡切片法是一般组织学、病理学等常规制片方法，因此用得最多，它有很多优点：比较省时间，容易操作，可切成极薄的切片（4um以下），能制作连续切片，组织块可包埋在石蜡中永久保存。
缺点是只能用于较小的组织块，较大的组织块不易切好，容易破碎，组织在脱水透明过程中产生收缩并易变脆。
制片时间太长。
石蜡切片的制作过程（一）材料与用具1．材料：鱼皮肤、性腺、肠、肝胰脏等。
2．用具：溶蜡箱、蜡杯、不同熔点的石蜡、酒精灯等。
（二）实验内容与步骤1．取材及固定取动物体上的小块组织成为组织块。
组织块的大小以不超过0.5立方厘米为宜。
切去组织块时动作要轻，切忌用力牵引或挟持，以免组织内部发生变化。
组织块取下后，先用先用0.85％的生理盐水漂洗以戏曲血液与污渍，如果是管状组织则必须把管腔中污物洗净，可用注射器自一端向管腔中注射生理盐水数次，使其管腔冲洗干净，切忌不可用刀或其他器具刮之。
由动物身上切取的组织必须是新鲜的，材料越新鲜越好，一般不应超过死后24小时。
如果是管状器官或是其中有分泌之消化液，则死后应迅速采取，以免组织自溶或上皮剥落。
材料由动物体取下后应当迅速固定，固定的目的是尽快使固定液渗入组织内部，将组织固定，以保持其原有的结构。
不同的组织应选用适当的固定液。
固定液的用量与组织块体积之比一般在20：1。
不应使组织块贴于容器壁上，应记录固定液的名称，材料的种类，动物品种及开始固定的时间。
2．冲洗固定后的组织块在进行脱水前必须用流水洗去固定液。
组织块应用纱布包好，注名，放金属水洗网中用流水冲洗，甲醛固定液固定的组织一般水洗24小时，Bouins固定液固定的组织水洗24小时。
AFA固定液则不需要水洗。
3．脱水和硬化经过固定后的组织在水洗后要进行脱水，脱水的目的将组织内的水分用酒精或其他溶剂置换出来，使组织逐渐变硬，便于油类或其他透明及浸入，为熔化的石蜡浸渗到组织中创造条件。
石蜡切片法
包埋过程中易出现的问题及解决办法
问题：包埋后的石蜡块应为均匀半透明状，有时出现白色浑浊 结晶（像雪花一样）部分，这样在切片时就有妨碍，不易切出 薄的切片。 原因：①组织内部或石蜡中混有透明剂；②脱水不干净；③石 蜡本身品质不良；④组织块移入纸盒时动作太慢，周围的石蜡 已成凝固状态；⑤冷却用水温度不够低，石蜡凝固太慢。 解决办法：属于前三个原因者应在包埋之前就须注意；属于后 二个原因者，可将包埋块再投入Ⅲ蜡中熔化后重新包埋，但必 须注意熔化包埋过的石蜡块的时间不宜过久。
脱水（常用脱水剂：乙醇；脱水原则：低浓度到高浓度）（目的？） 脱水时间：视材料的性质、大小而定 小鼠肝脏：在各级AL中停留0.5-1h； 植物叶片：在各级AL中停留2-4h； 注意：脱水应彻底，否则与二甲苯混合后混浊，必须倒回重脱水；如需过夜， 则停留在70%酒精中。
二、实验步骤（2）
透明（置换） 常用透明剂：二甲苯； 透明原则：低浓度到高浓度 （½ 二甲苯+ ½ 100%酒精 二甲苯 二甲苯） 透明时间：小鼠肝脏每级停留0.5-1h；植物叶片每级停留1-3h。
染色原理－－化学作用
化学作用的主要理论根据是染色剂的性质可分为酸性、碱性和 中性染色剂，而动、植物的细胞内—般也可区分为酸性(阴离子) 和碱性(阳离子)部分。当碱性染色剂溶液中的有色部分成为阳 离子时，就能与细胞的阴离子(酸件部分)较牢固地结合，当酸 性染色剂溶液中的有色部分成为阴离子时，就能与细胞内的阳 离子(碱性部分)较牢固地结合。 例如，细胞核，尤其是核内的染色质，主要由核酸组成，是酸 性的组成成分．故和碱性染色剂(苏木精)的亲和力很强，易于 着色。细胞质含碱性物质，故和酸性染色剂(伊红、曙红)的亲 和力很大，易于着色。
甲醛－醋酸－酒精液(FAA) 50%或70％酒精 90ml 冰醋酸 5ml 甲醛 5ml 特点：过去称”标准固定液“或”万能固定液“；是 组织形态中常用的固定液；同时兼作保存液。是植物 制片技术中较为良好的固定液和保存液。除单细胞和 丝状藻类外，均可用此液固定．也通用于昆虫和甲壳 类的固定。
石蜡制片技术
（六）烘干
将烫好的片子自然烘干，或 45℃烤片箱干燥1~2天，注意 防尘。
（七）脱蜡、染色、脱水、 透明
将玻片标本放于100%X（15-30min)→100%X(12min)→50%X+50%A(1-2min)→100%A(12min)→95%A(1-2min)→85%A(1-2min)→番红 （85%A配制）(2-4h)→85%A(3-5s）→95%A(3-5s） →固绿（100%A配制）(30s)→95%A(12min)→100%A(1-2min)→100%A(1-2min） →50%X+50%A(1-2min)→100%X(12min)→100%X(1-2min) 注意番红染色时间要长些（至少3h以上），随后的两 次经过酒精的时间都应很短，以免洗掉染上的番红， 固绿的染色时间大约在20-30s,其他各步的时间大约1 至2分钟，均要视具体情况而定。
（二）固定和抽气
（一）将切取的植物材料放入固定液中， 使其细胞原生质在极短的时间内停止生命活 动，尽量保持细胞原有的细微结构，也可使 某些柔软的材料适当硬化，便于切片。材料 的长和宽最大不超过1cm。固定液为材料的 20倍左右。固定时间24小时，其间要放入抽 真空机中抽气15-30分钟至材料完全沉浸在固 定液下面。并用铅笔写好标签。
五、石蜡制片的操作流程
（一） 取材 （二）固定和抽气 （三）脱水、透明及渗蜡 （四） 包埋 （五）修块 、切片和烫片 （六）烘干 （七）脱蜡、染色、脱水、透明 （八）封片
（一）取材
选取经过自己设计实验的对照和处理 的材料，根据不同的要求，从植物体上 选取有代表性的器官或组织，取材力求 新鲜，以避免组织发生死后变化。取材 时要用快刀切割材料，不能挤压，所取 的材料不宜过大，在不影响观察的情况 下应尽可能小些，这样有利于药剂透入 组织和细胞中。
石蜡制片法实验报告
一、实验目的1. 了解石蜡制片的基本原理和操作步骤。
2. 掌握石蜡制片法在组织切片中的应用。
3. 提高实验操作技能，为后续病理学实验奠定基础。
二、实验原理石蜡制片法是一种常用的组织切片技术，其原理是将组织经过固定、脱水、透明、浸蜡、包埋等步骤，制成石蜡切片，便于观察和研究。
石蜡具有优良的透明性和可塑性，适用于制作较厚的切片。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜组织、固定液、70%、85%、95%、100%酒精、二甲苯、甘油蛋白、石蜡、载玻片、切片刀、切片机、烤箱、显微镜等。
2. 实验仪器：解剖针、眼科镊子、手术刀、量筒、漏斗、滴管、酒精灯、小木块、切片木框、切片盒、吸水纸、标签纸、熔蜡箱、展片台、真空泵等。
四、实验步骤1. 取材：将新鲜组织固定于4%多聚甲醛24小时以上，取出后修整平整，放入脱水盒内。
2. 脱水：将脱水盒放入吊篮，于脱水机内依次梯度酒精进行脱水。
具体步骤如下：- 75%酒精1小时- 85%酒精1小时- 90%酒精1小时- 95%酒精1小时- 无水乙醇I 30分钟- 无水乙醇II 30分钟- 醇苯5-10分钟- 二甲苯I 5-10分钟- 二甲苯II 5-10分钟- 蜡I 1小时- 蜡II 1小时- 蜡III 1小时3. 浸蜡：将浸好蜡的组织放入包埋机内进行包埋。
先将融化的蜡放入包埋框，待蜡凝固之前将组织从脱水盒内取出，按照包埋面的要求放入包埋框并贴上标签。
于-20℃冻台冷却，蜡凝固后将蜡块从包埋框中取出并修整蜡块。
4. 切片：将修整好的蜡块置于石蜡切片机上切片，片厚约4微米。
切片漂浮于摊片机40℃温水上将组织展平，用载玻片将组织捞起，并放进60℃烤箱内烤片。
待水烤干蜡烤化后取出常温保存备用。
5. 染色：将石蜡切片依次放入二甲苯、无水乙醇、95%酒精、90%酒精、80%酒精、70%酒精中脱蜡至水，然后进行HE染色。
6. 洗片：将染色后的切片放入清水中洗去浮色。
7. 晾干：将切片放入干燥箱中晾干。
石蜡制片技术
石蜡制片技术［自己整理］石蜡制片又叫永久制片，是观察植物组织构造常用的制片方法之一。
其优点主要是适合各种植物组织的制片，切片的厚薄易于控制（最薄可达0.5微米），清晰度很好，亦适合作细胞学研究，并能够制成连续切片，制片易于长久保存，易于交流等。
但制片周期较长，易受条件限制，制片中使用化学试剂较多，对人有一定毒害，易使材料变脆、变硬或变形，某些内含物易于消失，常使组织变小，甚至使组织扭转变形，细胞所含物质缩小而折光性增强，影响观察正确性，且制片成本较高等。
虽然这样，但是石蜡制片仍不失为一种很好的制片方法，被人们常采用。
现将主要的基础理论和技术方法介绍如下：首先要明确,在这种条件下,植物的组织或部位不能直接用来切片,首先要按照该方法的要求,将材料进行程序化处理,终究要让所起填充作用的石蜡进入到材料的细胞中,然后带石蜡在切片机上进行切片,再染色、封藏。
这样的程序中，中间过程是十分复杂的，往往随材料的不同，而方法有所不同，在实际工作中要不断地摸索,不断地总结,只有这样,才有可能做出好的片子。
选择切片材料是全部切片工作的第一步，如果选择的材料不适当或有错误，以后的工作将是没有意义的。
选择材料时要注意具有代表性,植物的器官或器官的某一部位,其组织构造往往能够代表整个器官的基本情况,但不同部位,即便是同一器官,其组织构造,亦有一定的过渡差异,通常在选择材料时,要注意选择器官靠中间的部位作为试验材料,当然如果是作生长发育观察,则另当别论。
因此选好试验材料，对于整个实验至关重要。
当选择好材料后，实验的主要过程有以下步骤：材料的固定或软化——冲洗——脱水——透明——浸蜡——包埋——切片——贴片——烘片——脱蜡——二重染色——封片⒉制片程序简介：1)材料的固定或软化：最好用新鲜的固定材料（新鲜材料要迅速杀死植物细胞，最大程度保持组织和细胞的自然状态，这就是所说的杀死和固定）。
干材料可先行软化（常用温水浸泡，勤换水，勿使材料腐烂）。
植物石蜡切片法显微制片技术
取材
用锋利的刀片切取新鲜的植物材料，选定适宜的材料，立即固定。 取材的注意事项如下： （1）取材料要新鲜。动作要迅速，以免挤压损坏组织；取病理材料时，应设置
对照材料。 （2）所取材料大小要适当：根和茎一般直径≤5mm，切取成5-10mm小段；叶
片一般取过中脉处，切成2-5mm宽、5-8mm长。在切材料时，必须注意 刀片与中轴成直角，两切面平行，否则制成的切片细胞是斜的。 雌、雄 蕊一般不需分割。 （3）取材时间可根据切片要求有所区别。如：在进行植物发育的研究过程时， 需要找到细胞分裂相，一般在晴天的早晨9：00-10：00时取材，此时植 物细胞分裂活动较明显。 （4）取材不易过老，否则制片有难度（过老的材料须在滑走切片机上进行）； 对纵切的材料适当多取材，如根尖、茎尖等，因为切到材料正中的概率 较低。
（五）脱水
• 材料经洗涤后含有部分水分，会使材料分 解。而且透明剂与水是不相混合的，不利 于材料的透明和包埋等后期处理。因此需 用脱水剂逐渐除去材料中的水分，以便让 石蜡渗透进细胞。所以，脱水是制片的关 键环节。脱水剂要求能与水混合，而且能 与其他有机溶剂互相替代。
• 脱水必须在有盖的玻璃器皿中进行，防止 吸收空气中的水分；在更换高一级的脱水 剂时，最好不要移动材料，以免损坏材料。
• 浸蜡是一个渐进的过程，常用的正丁醇。
• 每次浸蜡的时间，视材料大小而调节。
（八）包埋
• 材料经过足够时间的浸蜡后，需包入蜡 块，以备切片。
• 操作方法：根据切片材料大小，确定所 需纸盒的尺寸，用表面光滑的磅纸预先 叠好纸盒。
（九）切片
• 即（二）固定
• 将已切好的材料尽快地浸入相当于材料10-15倍体积的固 定液中。借助固定液的作用，使细胞的新陈代谢瞬时停止， 并保持细胞或组织的形态构造及其内含物的状态不发生变 化。从而达到使组织变硬从而便于切片、增强内含物的折 光度、令细胞易于着色的目的，同时具有防腐作用。以新 鲜配制固定液效果较好。固定的时间依材料的种类、性质、 大小等而定。材料固定完毕，保存于加盖的容器内，贴上 标签。
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石蜡制片法（用于免疫组织化学，HE染色）
发布日期:2008-10-27 热门指数:6172 收藏
石蜡制片法是将材料经固定、脱水、透明、浸蜡后包埋在石蜡里面进行切片的方法。
此法适用范围，制片手段完备，能将材料切成极薄的片子（可切至2-8微米左右），并能制成连续的片子，这是其它制片法难以达到的，因此在光学显微镜的制片技术上它是最常用的一种方法。
除了一些经不住石蜡切片法中所应用的各种药剂处理的材料不能应用石蜡切片以外，一般的材料都可以用此法制片，但有制作时间较长，操作过程复杂以及材料易发硬或发脆等缺点。
该法多采用旋转式切片机进行切片。
石蜡制片操作程序如下：
（一）材料的采集与分割
采集材料应根据制片的目的和要求而定，材料要有代表性，无病虫害或其它损伤，如要观察病理解剖，则要取病斑、病症部位。
采下的材料应立即放在标本箱或湿布包起来带回实验室进行分割固定（如有条件也可在试验地采集后进行分割固定）。
为使固定液能迅速的渗透材料，材料要进行分割。
分割时动作要迅速，以防材料萎蔫。
分割块的大小，宜小不宜大，一般不超过1cm3，分割后立即杀死固定。
（二）杀死与固定
利用药剂迅速把细胞杀死，以保持材料本来的状态和结构。
常用的固定有F.A.A固定液、卡诺固定液等。
将固定液放在具塞小瓶中，投入材料，盖好瓶盖。
用F.A.A 固定液固定，时间至少24小时。
F.A.A固定液既是良好的固定剂，也是保存剂，因此材料可长期保存在固定液中备用。
卡诺固定液穿透力强，固定较小材料一般1~6小时即可，最多不超过24小时。
因卡诺固定液不能做保存剂，所以固定后要用95%、85%酒精浸洗，每级约20min.，然后保存在70%的酒精中备用。
（三）脱水
脱水的目的是除去组织中的水分，便于透明、浸蜡、包埋等步骤的进行，因为这些程序中所用的药品都不能与水混合，所以必须脱水。
常用的脱水剂为酒精。
脱水过程应缓慢进行，不能操之过急或时间过长，以免组织变硬变脆或发生收缩现象。
脱水采用等级脱水（系列脱水），即从较低浓度酒精开始，逐渐替换到高浓度酒精。
一般为：50%→70%→80%→95%（此时可加少许番红，使组织着色便于包埋时定位）→无水酒精（两次），每级停留时间2~4小时或更长（无水酒精中时间宜短）。
用95%酒精配制各浓度酒精的方法：设原有酒精浓度为A，所需配制酒精浓度为B，则取Bml原有酒精，加上A-Bml蒸馏水，即可获得Aml的B%的究竟。
例如：95%酒精配成70%的酒精，则取70ml的95%酒精，加上25ml蒸馏水，则配成了95ml的70%的酒精。
（四）透明
透明的目的是将脱水剂从材料中除去，使材料透明，增记折光系数；同时便于下步的浸蜡和包埋等程序（因
为究竟不能溶解石蜡）。
透明剂是一种既能与脱水剂混合，又能与包埋剂混合的药剂。
常用的透明剂为二甲苯和氯仿，适用原则也是逐级进行，可减少材料收缩。
一般步骤是：2/3纯酒精+1/3二甲苯→1/2纯酒精+1/2二甲苯→1/3纯酒精+2/3二甲苯→二甲苯（两次），每级停留时间0.5~2小时或更长些。
二甲苯穿透能力强，但又宜使材料收缩变脆，使用时不能在其中停留时间过长。
若材料放入二甲苯中时有白色混浊现象发生，说明材料脱水不彻底，应把材料退回至纯酒精中再行脱水。
（五）浸蜡
浸蜡的目的是逐渐除去透明剂,并为包埋剂所代替。
常用的包埋剂是石蜡。
浸蜡过程是使石蜡慢慢溶于浸有材料的透明剂中，溶解在透明剂中的石蜡渐渐深入到材料的细胞中去，最后使透明剂完全被石蜡取代，以便切片。
一般所用的石蜡分软蜡（熔点40℃以下）和硬蜡（熔点40℃以上）。
浸蜡过程一般是从低温到高温、从低熔点到高熔点逐渐进行，这一过程不能操之过急，否则浸蜡不彻底影响切片。
此外，软材料可用熔点较低石蜡，较硬的材料可用熔点较高的石蜡；冬季可用熔点较低的石蜡，夏季可用熔点较高的石蜡。
石蜡必须纯净，不含杂质。
整个浸蜡过程需在恒温箱内进行（按需要调整温度）。
材料最后一次二甲苯透明后即可浸蜡，浸蜡过程中逐渐使二甲苯挥发，并不断加入纯石蜡，直至石蜡饱和为止。
浸蜡时间大约1~2天。
（六）包埋（埋蜡、沉床）
材料浸蜡后再换两次已熔融的纯蜡，然后将材料和石蜡一起倒入提前叠好的包埋纸盒中，用加热的镊子迅速将材料按一定的间隔和所需的切面摆放整齐，同时用加热的镊子赶走材料周围的气泡，待纸盒表面的石蜡凝固后将纸盒平放入冷水中，使石蜡迅速凝固。
最后从纸盒中取出蜡块，以便保存。
注意将样品编号封于蜡块上，以免样品混淆。
（七）修块
将已包埋好的蜡块切成小块，每一小块包含一块材料。
然后按照所需的切面，用单面刀片将小蜡块切成梯形，并可粗视到材料切面。
然后用烧红的蜡铲把蜡块底部牢固的粘接在载蜡器上。
（八）切片
用切片机（如旋转切片机）将蜡块切成连续的蜡带。
切片时先把切片刀夹在刀架上，再把载蜡器夹在固定装置上（注意安装切刀的角度，刀口运行方向与材料切面平行），然后调整好所需厚度，一般可在7~14微米，视材料和所需观察对象而定，一般叶片、芽可厚些，胚囊和花粉粒可薄些，转动切片机切片。
（九）粘片
切下来的切片经过镜检（根据情况也可不检），将符合要求的切片粘在洁净的载玻片上。
粘片时先在载玻片上滴上一小滴粘片剂（可用蛋青和甘油各50ml，加1g水杨酸混合而成），加几滴蒸馏水，然后用镊子小心把切片放在水上，在35-40℃下，用拨针将切片伸直、展平，倾斜载片，使水流去并烘干。
（十）脱蜡、染色、脱水透明和封片
粘片后要经过脱蜡、染色、再次脱水透明，然后封片永久保存。
下面以植物生物学中观察组织结构最常用的番红-固绿染色法说明脱蜡、染色、脱水透明和封片的过程：
二甲苯→二甲苯（每次均10~15min.）→1/3纯酒精+2/3二甲苯（1~2min.）→1/2纯酒精+1/2二甲苯（1~2min.）→2/3纯酒精+1/3二甲苯（1~2min.）→纯酒精两次（每次1~2min.）→95%、85%、70%、50%梯度酒精复水（每级1~2min.或更长）→用1%番红配50%酒精染色1小时→50%、70%、85%、95%梯度酒精脱水（每级1~2min.或更长）→用0.1%固绿配95%酒精复染2~5秒→95%酒精脱水1~2分钟→纯酒精两次（每次1~2min.）→2/3
纯酒精+1/3二甲苯透明（1~2min.）→1/2纯酒精+1/2二甲苯透明（1~2min.）→1/3纯酒精+2/3二甲苯透明
（1~2min.）→二甲苯→二甲苯（每次均10~15min.）→加拿大树胶封片→贴标签镜检及保存。
以上是石蜡制片的一般步骤；为了获得良好的制片效果，需要制片者的大量实践并在实践中不断摸索、积累经验方可。