凤尾草提取物体内抗肿瘤作用的研究
用及 其作用机制 尚不 清楚 。本实 验对凤 尾草提 取物在 荷瘤
小鼠体内的抗肿瘤作 用进 行 了研究 ，旨在 为其进 一步 的抗 癌治疗研 究提供依据 。
１ 材料
２ ． ２ 体 内腹水 瘤 生命 延 长率 实验
取 健康 昆 明种 系小 鼠
６ ０只 ， 雌雄各半 ， 每 鼠腹腔注射 ￥ １ ８ ０瘤液 ０ ． ２ ｍ ｌ 。２ ４小时后 按体重随机分成 ５组 ， 每组 １ ２只， 雌雄 各半。治疗组每 日予 低剂量 、 中剂量 、 高剂 量凤尾 草提取 物 ２ ０ ａ ｒ ｇ・ ｋ ｇ ～、 ５ ０ ｍ ｇ・ ｋ ｇ ～、 １ ０ ０ ｍ ｇ・ ｋ ｇ ～， 模型对照组予生 理盐水 ２ ０ ａｇ・ ｒ ｋ ｇ ～， 阳
周龄 ， ｌ ８～ ２ ２ ｇ ， 雌雄各半 ， 由哈 尔滨 医科 大学 肿瘤 医院实 验
仪检测 。治疗结束次 日， 抽 取各组 动物腹 水 ， １ ０ ０ ０ ｒ ／ ｍ ｉ ｎ离心 ５分钟 ， Ｐ Ｂ Ｓ洗 ２次 ， 加入 一抗兔 抗小 鼠单 克 隆抗体 ， ４ ￣ Ｃ孵
育４ ５分钟 ， Ｐ Ｂ Ｓ离心洗 ２次 ， 加入 二抗羊 抗兔 Ｉ ｇ Ｇ， ４ ℃孵育 ４ ５分钟 ， Ｐ Ｂ Ｓ离心洗涤 １次 ， 上机检测阳性 蛋白标记率 。 ２ ． ４ 统计 学处理
凤尾草 （Ｐ ｔ ｅ ｉ ｆ ｓ ｍｕ ｌ ｔ ｉ ｆ ￣ Ｐ ｏ ｉ ｒ ） 为风 尾属蕨 类 植物 ， 具 有 清热利湿 、 抗 菌消炎 、 消肿止 痛的作用 ， 其根茎用于治疗糖 尿 病、 肿瘤 … ， 常与其他 中草 药制成 配方 ， 治疗肝炎 和各种癌症 如食 管癌 、 直肠癌和妇 科肿瘤 等 ， 但其 单味 药的抗肿瘤 作
摘 要 目的： 研究凤尾草提 取物的体 内抗肿 瘤作 用。方 法： 采用 Ｓ １ ８ ０细胞株 接种 昆明种 小鼠 ， 建立 实
体瘤和腹水 瘤模 型， 分别灌 胃给 予凤尾 草提取 物 ２ ０ 、 ５ ０ 、 １ ０ ０ ｍ ｇ ／ ｋ ｇ ， 计 算抑瘤 率与 生命延 长率 ， 流 式细胞 仪检测 瘤细胞 Ｂ ｃ ｌ 一 ２ 、 Ｂ ａ ｘ 、 Ｐ ５ ３蛋 白表达 。结果 ： ５ ０ ｍｇ ／ ｋ ｇ 、 １ ０ ０ ｍ ｇ ／ ｋ ｇ剂量 的凤尾 草提 取物 能够抑 制 小鼠 体 内肿 瘤增 长 ， 同时明显提 高腹水瘤 小鼠半数 存 活时 间和 生命延 长 率， 增加 Ｐ ５ ３蛋 白表达 ， 增加 Ｂ ａ ｘ表
达， 减少Ｂ ｃ ｌ 一 ２表达 。结论 ： 凤尾草提取物 具有 抑制 肿瘤 Ｓ １ ８ ０生长的作 用 ， 其作 用与诱 导肿 瘤细胞 凋亡
相 关。
主题 词
肿瘤／ 中 医药疗法
凤尾草提取物／ 治疗应用 小鼠 次， 连续 １ ０天。于第 １ １ 天颈椎脱 臼处死动物 ， 剥 离瘤— Ｔ） ／ Ｃ ×】 ０ ０ ％， 其 中 Ｃ为 阴性对 照组平 均瘤重 （ ｇ ） ， Ｔ为各 用药组 平均瘤重 （ ｇ ） 。
限公司提供 。
每天灌 胃给药 １ 次， 连续 ｌ ４天。观察小 鼠的死亡情况 ， 计算
每组小 鼠的平均生存 时间 和生命 延长 率。按下 式计算 小 鼠
生命延 长 率 （ ％） ： 小 鼠生 命 延 长 率 （ ％）＝（ Ｔ ／ Ｃ一１ ）×
１ ０ ０ ％， 其 中 Ｔ为给 药组小 鼠平 均存 活天 数 ， Ｃ为 空 白对 照
中国中医药科 技 ２ ０ １ ３年 ５月第 ２ ０卷第 ３期 Ｍ ａ ｙ ２ ０ １ ３ Ｖ ｏ １ ． ２ ０ Ｎ ｏ ． ３
・２ ５ ９・
凤尾 草提 取 物体 内抗肿 瘤 作 用 的研 究
王 文芳 陈 岩 王智 勇。
（ ‘ 哈 尔滨 医科 大学附属 第一 医院 ・ 哈 尔滨 １ ５ ０ ０ ０ １ 哈 尔滨医科 大学附属 第二 医院 ・ 哈 尔滨 １ ５ ０ ０ ８ ６ ）
３ 实 验 结 果
中心提供 。小 鼠 肉瘤 细胞 株 Ｓ １ ８ ０ ： 由哈 尔滨 医科大 学肿 瘤
医院实验 动物中心。 １ ． ３ 仪器
２ 方 法
Ｂ Ｃ Ｍ 一１ ０ ０ ０型生物 洁净 工作 台 ： 苏 净集 团苏 州
安 泰空气技 术有限公 司； 流式 细胞 仪 ： 美国 Ｂ Ｄ Ｆ Ａ Ｃ Ｓ Ｃ ａ ｌ ｉ ｂ ｅ ｒ 。 ２ ． １ 体 内实体瘤抑 瘤实验 选 择接 种 Ｓ １ ８ ０细胞 ７天的
采用 Ｓ Ｐ Ｓ Ｓ １ ０ ． ０软件统计 ， 两组 之间 的样
本均数比较采用 ｔ 检验。
３ ． １ 凤尾草提取物对 ￥ １ ８ ０实体 瘤 的抑制作 用 结果 见表
１。
小鼠 ， 消毒腹部皮肤 ， 用无菌空针抽 吸腹水 ， 用生 理盐 水制备 成１ ： ３稀释瘤 液。取 健康昆明种系小鼠 ６ ０只， 雌雄各半 ， 接 种０ ． ２ ｍ ｌ 瘤液于健 康 小 鼠左前 肢腋窝 皮 下 ， ２ ４小 时后 按体 重 随机分成 ５组 ， 每组 １ ２只， 雌雄各 半 。治 疗组 每 日予 低 、
性对照组予用生 理盐水 稀释 的环磷 酰胺 （ ２ ０ ｍｇ・ ｋ ｇ ） ， 均
１ ． １ 药品及 试 剂 凤 尾草 提取 物 ： 取风 尾草 原 药材 ， 用
９ ５ ％ 乙醇 回流提取 ３次 ， 过滤 ， 浓缩 药液 ， 弃 去药渣 ， 药 液浓 缩成浸膏后 ， 用 乙酸 乙酯 反复进行 超声提 取 ， 得 到提 取物 的 浓缩部分 ， 备用。环磷酰胺 （ Ｃ Ｔ Ｘ） ： 由上 海华联 制药 股份 有
抗兔 抗小 鼠单克 隆抗 体 、 二抗羊 抗兔 Ｉ ｇ Ｇ： 杭州 四季 青
生物材料有 限公 司。
组 小鼠平均存活天数 。
２ ． ３ 肿 瘤细胞 Ｂ ｃ ｌ 一２ 、 Ｂ ａ ｘ 、 Ｐ ５ ３蛋 白表 达 测定 流式 细胞
１ ． ２ 动物 和细胞
实验动物选用昆明种远交系健康 小 鼠， ６
凤尾草的功效与功能主治
凤尾草的功效与功能主治1. 凤尾草的概述凤尾草（科学名称：Salvia officinalis）又称为圣女草、广葉草、葡萄花、悬钩子等，是一种常见的草本植物。
凤尾草原产于地中海沿岸地区，现在已广泛种植于世界各地。
凤尾草被人们广泛使用作为草药、烹饪调味品和观赏植物。
2. 凤尾草的功效凤尾草含有丰富的活性成分，具有多种功效，以下是凤尾草的主要功效：2.1 抗菌消炎凤尾草含有丰富的挥发油、鞣质、黄酮类化合物等活性成分，具有明显的抗菌和消炎作用。
科研研究发现，凤尾草提取物对多种细菌和真菌具有抑制作用，能有效防止感染和促进伤口愈合。
2.2 改善消化凤尾草具有促进消化的功能。
它可以刺激唾液和胃液的分泌，增加胃肠道的蠕动，帮助消化和吸收。
凤尾草还具有抗胃酸和抗胃溃疡的作用，对于胃炎、胃溃疡等消化系统疾病有一定的辅助治疗作用。
2.3 缓解焦虑和抑郁凤尾草被人们广泛用作一种天然的镇静剂和抗抑郁剂。
科学研究发现，凤尾草中的活性成分可以影响人体内的神经递质和神经受体，从而起到镇定和抗焦虑的作用。
凤尾草还可以提高情绪和改善睡眠质量。
2.4 抗氧化凤尾草富含多种抗氧化剂，例如黄酮类化合物、维生素C和β-胡萝卜素等。
这些抗氧化剂可以清除体内的自由基，保护细胞免受氧化损伤，预防慢性疾病的发生，如癌症、心脑血管疾病等。
3. 凤尾草的功能主治根据凤尾草的功效，我们可以将其应用于以下方面：3.1 呼吸系统疾病凤尾草具有抗菌消炎的作用，可以用于治疗咳嗽、喉咙痛、扁桃体炎等呼吸系统感染和炎症引起的症状。
可以饮用凤尾草泡水或使用凤尾草药膏局部涂抹。
3.2 消化系统疾病凤尾草可以刺激消化液的分泌，帮助消化和吸收，对于胃炎、胃溃疡、胃肠炎等消化系统疾病有一定的缓解作用。
可以饮用凤尾草泡水或使用凤尾草中药制剂。
3.3 心理健康问题凤尾草具有镇定和抗抑郁的作用，可用于缓解焦虑、抑郁、失眠等心理健康问题。
可以通过饮用凤尾草泡水或使用凤尾草精油进行芳香疗法。
中药凤尾草的研究进展
Ｓａ ｘ Ｃ ｌｇ ｒｄｔ ｄ ｈｎｓ ｄｃ ｅＸａｙ ｎ ，ｈｎ ｉＣ ｉａ７ ２ ４ ｈ ｎｉ ｏ ｅｅｆＴａ ｉ ｌ ｏ ｗｎ Ｃ ｉ ｅ ｅ Ｍｅｉｎ ， ｉｎａ ｇ Ｓ ａ ｘ，ｈｎ ，１０ ６ ｉ ［ ｂｔ ｃ］ Ｔ ｅｐｐ ｒｅｉｗ ｄｔｅｐｏｒ ｓ ｆ ｕｕ ｎｔｅ ｅｂｏ ｓ ｅｏ ｒ ， ｈ ｍｃｌ ｏ ｐ ｓｉ ， ｈｒ ａｏ ｇ ａ ａ－ Ａ ｓａｔ ｒ ｈ ａｅ ｖｅ ｅ ｒｇ ｓ ｇ ｅｏ ｆｒ ｈ ｒ ｎｉ ｓｕｃ ｃｅ ｉａ ｃｍ ｏｉｏ ｐ ａｍ ｃｌ ｉｌ ｃ ｒ ｈ ｅ ｏＨ ｎ ｔｒ ｅ ｔｎ ｏｃ
４ 临床应 用
《 履蛲岩本草》 载有小金星凤尾草。 所附药图即今凤尾蕨
科植物凤尾草。《 植物名实 图考 》 ： 凤 尾草生 山石及 阴湿 云 “ 处， 有绿茎、 紫茎者。一名井阑草 。 谓之 石长 生。 所 附之 图 或 ”
亦 系本 种。《 目》 草 类 所 绘 的 石 长 生 图 也 与 本 种 极 纲 石 似口 。凤尾草为凤尾蕨科植物凤尾草 的全 草或根茎 。 ］ 多分布 在 海拔 ４０— ２ ０ｍ的林 下阴湿处 或石灰岩缝 中 。 ０ ３０
烯 ， ，１ １ａ一 羟基 一（ ２ ６， ３ ５ 二 一）一 ６一 １ 贝壳 杉烯 ， 羟 基 １ ６一 贝壳杉烷 一 ２一ｐ—Ｄ一葡萄糖苷 。
２ 化学成分
４ １ 泄泻 张群 肖¨ ． 用和 中化湿 汤 （ 内含凤尾草 ） 治疗 ４ ３
例小儿慢性泄 泻患 者 ， 总有 效率 达 ８．％ 。胡 荷斌等 临 ６１ 床实践发现复方凤尾草胶囊不仅 可 以治疗 小儿腹泻 ， 而且还 可 以治疗吸收不 良综合征 、 限性 肠炎 、 局 小儿腹泻 。 效率 其显
成 阳 ７２ ４ ） １ ０ ６
凤尾草作用与功效
凤尾草作用与功效凤尾草（Cirsium japonicum）是一种常见的中药材，也被称为矢车菊、马颈草等。
它在中国的各个地区都有分布，尤其是在山地和河湖边缘的地方较为常见。
凤尾草具有多种药用功效，被人们广泛用于药用和食品添加剂。
一、药理活性与成分凤尾草富含多种生物活性化学成分，包括多种黄酮、甾醇、萜类化合物、酚类及多糖类等。
研究表明，凤尾草具有抗氧化、抗菌、抗炎、抗肿瘤、降血脂等多种药理活性。
1. 抗氧化作用：凤尾草中的黄酮类化合物具有很强的自由基清除能力，可以抑制氧化反应的发生，对抗衰老、抗炎、抗氧化等方面具有显著效果。
2. 抗菌作用：凤尾草中的甾醇类化合物具有一定的抗菌活性，特别是对一些致病菌有显著的抑制作用，能够降低细菌的生长速度，减少细菌感染的发生。
3. 抗炎作用：凤尾草中的多种生物活性成分具有一定的抗炎作用，能够抑制炎症反应、减轻炎症症状，并对关节炎、皮肤炎、肠炎等炎症疾病有一定的治疗作用。
4. 抗肿瘤作用：凤尾草中的黄酮类化合物具有抗肿瘤活性，能够抑制肿瘤细胞的增殖、诱导肿瘤细胞凋亡，对一些肿瘤具有一定的治疗作用。
5. 降血脂作用：凤尾草中的多糖类化合物可以降低血清总胆固醇和三酰甘油水平，提高血清高密度脂蛋白胆固醇水平，对血脂异常的调节作用显著。
二、药用功效1. 清热解毒：凤尾草具有清热解毒的功效，对于热毒所致的疾病有较好的治疗效果。
如感冒发热、咽喉肿痛、痈肿疮疡等症状都可以使用凤尾草进行治疗。
2. 利尿通淋：凤尾草具有利尿通淋的作用，可以促进尿液排出，有助于排除体内的废物和毒素，对于水肿、膀胱炎、尿路感染等症状有一定的疗效。
3. 止血消肿：凤尾草具有止血消肿的效果，可以用于外伤出血、淤血瘀肿等症状的治疗。
研究还发现，凤尾草对于出血性红斑、肌肉损伤也具有一定的治疗作用。
4. 抗菌消炎：凤尾草具有抗菌消炎的功效，可以用于治疗多种感染性疾病，如皮肤感染、呼吸道感染、泌尿系统感染等。
5. 降血脂降压：凤尾草中的多糖类化合物可以降低血脂和血压，对于高血脂、高血压等慢性疾病有一定的调节作用。
抗癌中草药：凤尾草.docx
抗癌中草药：白英
别名：白毛藤、白草、毛千里光、毛风藤、排风藤、毛秀才、葫芦草、金线绿毛龟。
性味归经：苦，微寒。
入肝、胃经。
有小毒。
功能主治：清热解毒，利湿消肿，抗癌。
全草：用于感冒发热，乳痈、恶疮，湿热黄疸、腹水，白带，肾炎水肿;外用治痈疖肿毒。
根：风湿痹痛。
有抗肿瘤作用，并对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌有明显的抑菌作用。
药理：抗肿瘤作用蜀羊泉和红枣以1：1混合制成煎剂、糖浆剂对小白鼠艾虚腹水癌及梭形细胞肉瘤的实体型及腹水型有抑制作用[1-3]，临床上对子宫颈癌有效，但重复率低，进一步用相当生药40，80，120克/公斤天的煎剂及小剂量递增的给药方法，均无明显抗小鼠棱形细胞肉瘤实体型、艾氏腹水癌实体型及肉瘤180的作用。
但醇提取物对小鼠肉瘤则有抑制作用，其有效成分为B-苦茄碱。
临床用于：
胆管癌
白英60克，忽木90克，缓花针、小叶金钱草、凤尾草、茵陈、地耳草各15克。
水煎3次分服，每日1剂。
能使黄疸、厌食等症状缓减，肿块消除。
肺癌
白英、半枝莲各30克。
水煎服，每日1剂。
症状消失，有近期疗效。
：各种致癌物质一旦进入人体，并不是直接地或立即使机体形成癌症。
大多数情况下机体有能力将致癌物质排除至休外或将其吞噬、转化成非致癌物质……[详情请看>>>>致癌物质进入体内就会致癌吗]
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中药凤尾草的研究进展_陶玉泉
促进凤尾草的进一步研究和开发。
关键词： 凤尾草; 临床运用; 化学成分; 药理作用; 形态特征
中图分类号： R282． 71 文献标识码： A 文章编号： 1003－8450（ 2013） 01－0071－03
凤尾草系凤尾蕨科植物凤尾草（ Pteris multifida 6 个黄酮类化合物： 芹菜素（ 2） 、木犀草素（ 3） 、芹菜
［14］秦波，朱大元，蒋山好，等． 凤尾草的化学成分及其对体 ［20］吴小华，杨康治，韩必亮． 凤尾草佐治小儿菌痢 60 例分
外大鼠前列腺上皮细胞增生的抑制效应（ 英文） ［J］． 中
析［J］． 实用医学杂志，2007，23（ 4） ： 606．
国天然药物，2006，4（ 6） ： 428－431．
第 30 卷 第 1 期 2013 年 2 月
甘肃中医学院学报 J. GANSU COLLEGE OF TCM
Vol. 30 No. 1 Feb． 2013
中药凤尾草的研究进展
陶玉泉 （ 南京中医药大学基础医学院，江苏 南京 210000）
指导朱平
摘 要： 查阅文献，综述了凤尾草的本草记载、形态特征、化学成分、药理作用及临床运用的研究进展，以
材，2008，31（ 8） ： 1165． ［5］舒 积 成，潘 景 行，张 锐，等． 凤 尾 草 中 倍 半 萜 类 成 分 研
究［J］． 中成药，2011，33（ 12） ： 2104． ［6］程存 归，毛 姣 艳． 三 种 蕨 类 植 物 挥 发 油 的 化 学 成 分 研
究［J］． 林产化学与工业，2005（ 2） ： 107－111． ［7］余有贵，赵良忠，段林东，等． 凤尾草抗菌药物的提取与
罗强［16］采用退黄汤（ 内含凤尾草） 治疗急性黄 疸型肝炎 50 例，50 例全部治愈，其中 1 个疗程治愈 30 例，2 个疗程治愈 15 例，3 个疗程治愈 5 例，总有 效率 100% 。朱辰龙等［17］采用茵陈蒿 50 g、山楂根 30 g、山栀根 30 g、六月雪 30 g、虎杖根 20 g、小槐花 20 g、凤尾草 20 g、海金沙 10 g、郁金 10 g 治疗急性 黄疸型肝炎 27 例，结果显效 23 例，有效 3 例，好转 1 例，总有效率为 100% 。 4． 3 尿路感染
凤尾草抗菌药物的提取与开发研究
文章编号:1009-2439(2001)03-0199-05凤尾草抗菌药物的提取与开发研究余有贵 赵良忠 段林东 李新社 舒叶平(邵阳高等专科学校生物工程系 湖南邵阳422004)摘要:采用碱液提取凤尾草中的有效成分,确定了最佳提取方法;对提取物进行细菌和真菌的抑菌作用及最低抑菌浓度的研究结果表明:该提取物对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、黑曲霉均有很强的抑菌效果,对大肠杆菌、青霉均有不同程度的抑菌效果,对黄曲霉基本上没有抑制作用.对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、黑曲霉的最低抑菌浓度(提取物g/100ml 培养基)分别为0.59,0.72,0.78;对青霉、枯草杆菌的最低抑菌浓度(提取物g/100ml 培养基)为0.98、1.05.关键词:凤尾草;碱液提取法;提取物;抑菌作用中图分类号:R282.4 文献标识码:A 收稿日期:2001-06-27凤尾草(Pteris m ultif i da Poir ),又名井栏边草、小叶凤尾草、蜈蚣蕨知,我国中草药资源丰富,并拥有上千年的应用历史.据有关资料报道,凤尾蕨等,属于凤尾蕨科.据《新药志》介绍:它具有清热利湿,消肿解毒,凉血止血,主治痢疾等功效.本研究旨在确定凤尾草中有效成分的最佳提取方法,对提取物进行抑菌效果试验,为开发天然饲用抗菌添加剂筛选原料.1 材料与方法1.1 风尾草:采自邵阳高等专科学校的周围山坡.1.2 供试菌种:(1)细菌类:大肠杆菌(Escherichia coli )、枯草杆菌(B acill us ubtcis )、金黄色葡萄球菌(S taphy lococcus aureus ;(2)真菌类:黑曲霉(Aspergill us niger )、黄曲霉(Aspergill us f lav us )、青霉(Penici ui um S p .).以上菌种均为我校生物工程系微生物实验室提供.1.3 培养基:细菌培养基:牛肉膏蛋白胨培养基;霉菌培养基:查氏培养基.1.4 主要仪器与设备:真空浓缩装置,真空干燥箱,离心机,高压蒸汽灭菌锅.1.5 试验方案1.5.1 试验步骤采凤尾草全草→清洗晒干→粗粹→提取→抽滤→滤液→测OD 值(真空浓缩→抑菌实验)↓真空浓缩→抑菌实验1.5.2 原料的处理:采集凤尾草全草去杂,洗涤干净,晒干或先在60℃下烘干,用刀或剪刀将凤尾草破碎成约1～4cm 长的碎片备用.1.5.3 抗菌物提取方法(1)用甲醇为溶剂:称取原料粗粉5g 加入40～60ml 的甲醇,进行沸水浴回流10～30min 时间以后,趁热过滤得滤液即提取物.取甲醇用量(A )和回流时间(B )两因素,其水平分别为40,50,60ml 和10,20,30min 按L 0(2)3进行正交试验;(2)用碱液提取:称取原料粗粉5g 加入10～14倍的水,煮沸,在搅拌下缓慢加入饱和的石灰乳澄清溶液调p H 8～10后,继续加热微沸30min ,趁热抽滤,滤液在60～70℃下用6mol/l HCl 调p H 至3～5,搅第14卷 第3期邵阳高等专科学校学报Vol.14.No.32001年9月Journal of Shaoyang College Sep.2001匀,静置24h ,制得样品的原液.正交实验所取因素、水平为A :加水倍数A 1=10A 2=12A 3=1;B :煮沸后的p H 值B 1=8,B 2=9,B 3=10;C :用HCl 沉淀时的p H 值:C 1=3,C 2=4,C 3=5,根据L 0(2)3正交表确定最佳提取条件.1.5.4 真空浓缩 制得样品的原液在真空度0.09MPa (60℃)下浓缩10倍1.5.5 抑菌实验(1)菌种活化:将大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、青霉、黑曲霉、黄曲霉分别进行接种扩大培养.(2)制备 6mm ～ 8mm 的含抗菌物质的滤纸片:用打孔器打好直径 6mm ～ 8mm 的滤纸片,将滤纸浸泡在A 2B 2C 1原液中浸泡4h ,然后取出滤纸放入平皿中,再放进真空干燥箱中,真空度为0.09MPa (60℃)的条件下约10min ,再干燥后盖上盖子取出,注意不要暴露于空气中,即制备好无菌干燥滤纸片备用.(3)灭菌 洗净后的培养皿用报纸包好洗净的试管分别用报纸扎好,与培养基一起放入高压蒸汽灭菌锅中121℃灭菌20min.(4)制备无菌水 将装好自来水的试管(9ml Π支)包扎好后放入高压火菌锅中121℃,灭菌15min.(5) 无菌室的经灭菌消毒处理后进入无菌室操作 用接种环刮菌种放入装有无菌水的试管中,在试管中加入无菌的玻璃珠2～4粒,振荡试管,使细菌均心分散于无菌水中,制得原菌液,再用10倍稀释法稀释菌液,每个培养皿加入菌液1ml.再倒培养基10～15ml Π皿(注意培养基的温度在45℃左右,不能过高)并使菌液为培养基混和均心,待培养基凝固后,用无菌镊子夹取无菌滤纸片(每片直径为7mm )均匀的放置在平皿中的培养基上,4～6片Π皿.再放入恒温箱中培养,温度细菌:37度,24h ;青霉32度,培养2～3d ,后测量滤纸片周围抑菌圈的大小,并根据抑菌圈的大小确定抑菌的效果.(6) 青霉素的对照实验将青霉素80×104(μmol Πmin )依次配制成10000,1000,800,500,200μmol Πmin 6个浓度,在系列浓度的青霉素液中分别浸泡7mm 滤纸片,代替样品浸泡后的滤纸片做成抑菌试验,测抑菌圈的大小.图1 风尾草碱液提取物的透光度1.6 检测方法:(1)凤尾草提取物中黄酮类物质的定性测定 根据凤尾草的化学成分,用甲酸回流一段时间以后,趁热过滤,取滤液1ml ,加HCl 4～5滴及镁粉少量,溶液呈橙红色,说明有黄酮类物质存在.(2)凤尾草提取物在浸提效果测定 用7520型分光光度计测定提取物的最大吸收峰,然后在最大吸收峰的波长处测定斜值.(3)凤尾草提取物抑菌效果的测定 通过测量抑菌圈的直径确定,抑菌圈越大者效果越好.(4)凤尾草提取物最低抑菌浓度的测定 将配制好的细菌或真菌培养基按每管8ml 分别装入100支试管中取0.1ml 大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、青霉、黑曲霉分别装入上述100支试管中,重复2次,放入32℃中恒温箱中培养36h 后,用目测法观察混浊程度,混浊程度越低者效果越好.2 实验结果与分析2.1 凤尾草提取物中黄酮类物质的定性检测在甲醇回流提取物中,取滤液1ml ,加HCl4～5滴及镁粉少量,结果溶液呈橙红色,说明有黄酮类物质存在,所以提取方法可行.2.2 物最大吸收波长测定2.2.1 先取甲醇提取滤液1ml 稀释100倍,用7520型分光光度计扫描凤尾草提取液的最大吸收波长,结200 邵阳高等专科学校学报第14卷果见表1,从表中数据看出,最大吸收波长为266nm.以此波长测定凤尾草提取物浸提效果的依据.表1 凤尾草提取液扫描波长,nm240245250260261266267268270290300320340T0.30.50.60.60.630.620.610.60.570.50.450.40.42.2.2 取碱提原液1ml 稀释100倍,用分光光度计扫描出凤尾草提取液的最大吸收波长,结果见图1,从图中曲线看出,最大吸收波长为266nm.以此波长测定凤尾草提取物浸提效果的依据.2.3 最佳提取工艺条件的确定2.3.1 甲醇提取法 按L 9(2)3正交实验的结果见表2,表2最佳提取条件的正交实验结果(L 9(2)3).表2 最佳提取条件的正交实验结果(L 9(2)3)试验号甲酸用量回流时间滤液体积T A 140102520.20.695250103823.00.639360104426.40.580440203922.50.649550204015.160.811640302017.80.756740302017.80.756850303824.80.606960304019.20.720Ⅰ水平一数值之和Ⅱ水平二数值之和 2.12.05 1.9142.07Ⅲ水平三数值之和1.912.082极差N 0.190.168效率N Π30.0630.036 由表2分析得最佳提取方案为A 2B 3即5g 原料用50ml 甲醇,回流时间为30min.经济效益分析:甲酸价格贵,且有毒,一般不用此法提取.2.3.2 采用碱液提取法提取黄酮甙类虽有一定极性,可溶于水但却难溶于酸性水,易溶于碱性水,故可用碱性水提取,再在碱性水中提取液中加入酸,黄酮甙类沉淀出,获得提取物.由资料表明用碱酸提取时,要注意用碱浓度不宜过高,以免在强碱性下,尤其加热时破坏黄酮母核,在加酸酸化酸性也不宜过强,以免生成锌盐,致使祈出的黄酮类化合物又重新溶解,以使上需含镁粉的杂质生成钙盐沉淀,不致溶出,这将有利于黄酮类化合物的纯化处理[3].按L 9(3)3正交表结果见表2.从表中数据表明:效应值最大因素为B 即煮沸后p H 值,其次是A ,最后是C.由表格数据分析得最佳提取方案为:B 9A 2C 1.即加水倍数12,煮沸后p H 值为9,用HCl 的沉淀的p H 值为3.2.3.3 凤尾草碱法提取粗制品的提取率称取原料190g ,加水2280ml 煮沸在搅拌下缓慢加入石乳调p H 值至9,在此条件下煮沸30min ,乘热抽滤得滤液2800ml.用6mol Πl 的HCl 调p H 值至3,静置24h ,用离心机离心(转速30000r Πmin )得沉淀物,将沉淀物在真空干燥箱中干燥(真空度为0.09～0.1MPa 、温度60℃)干燥得粗粉20g ,提取充为:(20Π190)×100%=10.5%第3期余有贵等:凤尾草抗菌药物的提取与开发研究201 表3 碱液提取法的正交表试验号1列2列3列加水倍数煮沸后p H 值用HCl 沉淀A T 11130.39839.822110.85214.133120.91612.041220.63523.15223 1.0508.763210.82015.171310.63321.682320.85115.493330.25056.2Ⅰ三次水平一的数值之和 1.695 1.41 2.335Ⅱ三次水平二的数值之和 1.986 1.728 1.68Ⅲ三次水平三的数值之和 1.067 1.0970.725极差效率值0.3500.3660.240 注:极差:指三次水平数值之和的最大值与三次水平数值之和的最小值之差效应值:指极差除以3所得的数值.2.4 凤尾草碱法提取物抑菌效果2.4.1 所得的实验数据如下表4.表4 凤尾草碱法提取物抑菌效果抑菌滤纸片片数抑菌圈平均值平均直径培养器编号1 2 3 4 5 6123456原液(1,2,3)浓缩液(4,5,6)培养杆菌3 4 5 5 5 6101212.515161511.515.3枯草杆菌4 4 6 4 6 612141416171813.317金黄色葡萄球6 6 6 6 6 614161618201915.319青霉4 5 5 5 6 614101011151611.314黄曲霉0 0 0 0 0 00000000 0黑曲霉4 4 6 6 6 510141416161511.315.6 由表4数据分析可得:提取物对金黄色葡萄球菌、黑曲霉、枯草杆菌,均有很强的抑菌效果,对大肠杆菌、青霉有较强的抑制作用,对黄曲霉几乎没有抑制作用.2.4.2 青霉素的对照实验将青霉素80×104μmol Πmin 依次配制成10000,1000,800,500,200μmol Πmin 6个浓度,在系列浓度的青霉素液中分别浸泡7mm 滤纸片,代替样品浸泡后的滤纸惩做成抑菌试验测得抑菌圈的大小见表5.表5 不同浓度的青霉素的抑菌效果表青霉素浓度μmol Πmin100001000800500200100直径(mm )完全抑制2218171412 由表格数据分析比较得:凤尾草原液相当于200μmol Πmin 青霉素,浓缩液相当于800μmol Πmin 青霉素.2.5 最低抑菌浓度测定2000年6月4日,观察提取物对5种供试菌种抑菌度试验结果见表6.表6 提取物抑菌浓度试验结果抑菌浓度系列供试菌种90%80%70%65%60%55%50%45%40%大肠杆菌++++++++-----枯草杆菌++--------金黄色葡萄球菌++++++++++++++---青霉+++--------黑曲霉++++++++----- 注:“+”表示抑菌效果明显,“+”越多就越明显.“-”表示抑菌效果不明显.202 邵阳高等专科学校学报第14卷3 结论与展望3.1 试验结果表明:凤尾草碱液提取法提取的提取物对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、黑曲霉均有很强的抑菌效果、对大肠杆菌、青霉、均有不同程度的抑菌效果,对黄曲霉基本上没有抑制作用.对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、黑曲霉的最低抑菌浓度分别为提取物0.59g Π100ml 培养基、提取物0.72g Π100ml 培养基、提取物0.78g Π100ml 培养基;对青霉、枯草杆菌的最低抑菌浓度为提取物0.98g Π100ml 培养基、提取物1.05g Π100ml 培养基.3.2 抑菌试验证明对大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、黑曲霉等均有较强的抑菌作用.尤其是对黑曲霉有较强的抑菌作用,是本研究的新发现.参考文献[1] 国家医药管理局《中华本草》编委会.中华本草(上册)[M ].上海:上海科学技术出版社1996.[2] (日本)村上孝夫等,药学杂志[J ].1985,105(7):640.[3] 王宪楷.天然药物化学[M ].北京:人民卫生出版社,1988.[4] 中国科学院植物研究所.中国植物志(第48卷)[M ].北京:科学出版社,1988.[5] The Antihiotic Parados :How Miracle Drugs are Destroyingthe Mcstroying the Miraclc.s.B.Lcvy.plenum publishcrs.1992Study pteris multif ida poir actionand antimicroblal effectZHAI Liang-zhong YU Y ou-gui DUAN Lin-dong L I Xin-shen SHU Y e-pin (Depart ment of M athem atics ,hangyang Teachers College ,S haoyang 422004)Abstract :Adhibil lye distill efffectiv component of the pteris multifida poir.make sure best distill method The inverstgate reault make know this distill substance have very strong antibacterial effect to staphy locoeeus aureus 、bacillus bulcis 、As pergillus niter ;to Escherichis coli 、peniciuium sp.have antibacterial effect ,best of low antibacterial concentration (g distill substance Π100ml culture me 2dium )to staphy lococcus aureus 、bacillus ubleis 、Aspcrgillus nigcr is 0.59,0.72,0.78,to Escherichia coli 、peniciuium sp is 0.98,1.05.K ey w ords :Petris multifida poir ,lye distil method ,distillsubstance antibacterial effect.(责任编辑 钱关民)第3期余有贵等:凤尾草抗菌药物的提取与开发研究203 。
凤尾草不同溶媒提取功能成分的抗菌效果比较
Ｂｏ．ＺＨＵ Ｄａ－Ｙｕａｎｊ Ｉ ＡＮＧ Ｓｈａｎ—Ｈａｏ，ｅｌ ａｌ，
试 验
研
Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｎｓ｜ｉｔｕｅｎｔｓ ｏｆ Ｐｔｅｒｉｓｍｕｈｉｆｉｄａ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｉｎｈｉｂｉｔ０２ｒｙ Ｅｆｆｅｃｔｓ ＣｅＵｓ ｉｎ
ｏｎ
Ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ Ｒａｔ Ｐｒ ｏｓｌａｌｉｃ Ｅｐ ｉｔｈｅｌｉａｌ ｏｆ Ｎａ｜ｕｒａｌＭｅｄｉｃｉｎｅｓ．
万方数据
兽磊茗袭谑
０．４４２
ｇ生药／ｍｌ的凤尾草水煎液。
将以上三份提取液分别用细菌过滤器过滤 后将滤液置于４。Ｃ冰箱保存备用，使用期限为一
周。
２．２受试菌菌液的制备 将金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、沙门 氏菌、嗜水气单胞菌、大肠杆菌的新鲜培养物 接种于普通琼脂培养基，置于３７℃生化培养箱 中培养１６～１８ｈ，次日挑选单个菌落ｌ一２个接 种于２ｍｌ普通肉汤培养基中，置于３７℃恒温箱 １６～１８ｈ培养后取出。用平皿法狈４定细菌浓度。 临用前将菌液用肉汤培养基稀释成菌液浓度为 １０５ＣＦＵ／ｍｌ，备用。
本文链接：/Periodical_zsyxzz201303002.aspx
蕃２．１．３凤尾草水煎液的制备精密称取凤尾草干
寅燥粉末５９，加蒸馏水浸泡２０ｍｉｎ后，以料水比 １：３０，水煎３次，每次ｌｈ，过滤，合并水煎液， 用旋转蒸发仪在６０ ｏＣ下蒸发浓缩获得浓度为
表１
本实验所选用水煎煮和用乙醇、丙酮回流
凤尾草提取液最低抑菌浓度结果（ｍｇ生药／ｍＩ）
提取所得的提取液，对临床分离的金黄色葡萄 球菌、枯草芽孢杆菌、沙门氏菌、嗜水气单胞 菌、大肠杆菌的体外抑菌结果的ＭＩＣ见表ｌ。 由表１可知，三种提取液对革兰氏阴性、 阳性菌均有抑制作用，但抑制效果不同。丙酮 万方数据
凤尾草化学成分和药理作用的研究进展_姜坤
韦金育等［３３］实验发现凤尾草煎剂 １：１００ 对肝癌 细胞的有抑制作用，其抑制率为 ３０％．伍朝霞［３４］运 用 化 痰 消 症 汤 治 疗 卵 巢 囊 肿 ７２ 例 ， 有 效 率 达 ９７．２％．赵树廷等［４３］用乳康 Ｉ 方配合 ＣＭＦ 方案化疗 抑制乳癌转移进行临床观察，发现治疗组的 ＶＥＧＦ 阳性表达率为 ３７．７％、ｎｍ２３ 基因的阳性表达率为 ５５．７４％．
国内外学者对凤尾草的化学成分进行了一系 列研究，已经发现的化学成分主要包括苯丙素类、 黄酮类和萜类，其次还有挥发油、甾体类等成分，其 中萜类化合物是近年来的研究热点． １．１ 黄酮类化合物
Ｘｉｎ Ｇｅ 等［３］发现木犀草素（１）．Ｍｕｒａｋａｍｉ Ｔ 等［４］ 发现芹菜素（２），木犀草素 －３′－Ｏ－β－Ｄ－ 葡萄糖 苷（３），芹菜素 －７－Ｏ－β－Ｄ－ 葡萄糖苷（４），木犀草素 －７－Ｏ－β－Ｄ－ 葡萄糖苷（５）．Ｈｕ Ｈａｏ Ｂｉｎ 等［５］发现木 香 素 Ⅲ （６），槲 皮 素 （７），ｄｉｈｙｄｒｏｅｃｈｉｏｉｄｉｎｉｎ （８），ｌｉｃｏａ－ ｇｒｏｃｈａｌｃｏｎｅ Ｄ （９）．Ｐａｎ ＹＸ 等 ［６］ 发 现 芹 菜 素 －７－ Ｏ－β－Ｄ－ 葡萄糖 －４′－Ｏ－α－Ｌ－ 鼠李糖苷（１０），芹 菜素 －４′－Ｏ－α－Ｌ－ 鼠李糖苷（１１）．欧阳丹薇等［７］发
新的化合物． １．３ 甾醇类化合物
吴久鸿等［１５］发现 β－ 谷甾醇（３１）．Ｌｉｖａ Ｈａｒｉｎａｎ－ ｔｅｎａｉｎａ 等［１６］发现 β－ 谷甾醇 －β－Ｄ－ 葡萄糖苷（３２） ．Ｍｕｒａｋａｍｉ Ｔ 等［４］发现扶桑甾醇（β－ｒｏｓａｔｅｒｏｌ） （３３）． １．４ 苯丙素类化合物
凤尾草总黄酮对荷瘤小鼠的抑瘤作用及对免疫功能的影响
凤尾草总黄酮对荷瘤小鼠的抑瘤作用及对免疫功能的影响摘要】目的：研究凤尾草总黄酮对宫颈癌小鼠的抑瘤作用及对荷瘤小鼠免疫功能的调节作用。
方法：在体外利用MTT法检测凤尾草总黄酮对U14细胞增殖的影响，建立U14宫颈癌腹水瘤小鼠的模型，考察凤尾草总黄酮对肿瘤的抑制作用和对小鼠存活时间的影响，利用试剂盒测定荷瘤小鼠血清中的IL-4和IFN-γ的水平。
结果：凤尾草总黄酮在体外和体内均有显著的抑瘤作用，抑制宫颈癌U14细胞的生长，提高荷瘤小鼠血清IFN-γ和降低IL-4的水平。
结论：凤尾草总黄酮能够抑制U14细胞的生长，其抗肿瘤作用可能是通过提高机体免疫功能，发挥抗肿瘤的作用。
【关键词】凤尾草总黄酮抗肿瘤细胞因子【中图分类号】R965 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085（2014）12-0019-02【Abstract】 Objectives: The objective of this paper was to investigate the effectsof extracting total flavonoids from pteris multifida on the antitumor action and immune function in a sample of tumor bearing mice.Methods: The MTT methods were used to investigate the impact of extracting total flavonoids from pteris multifida onU14 cell proliferation, antitumor action and immune function in a sample of U14A tumor bearing mice, the ELISA Kit was used to test the level of serum IL-4 and IFN-γ.Results: The extracting total flavonoids from pteris multifida has been proved to have great effects on the reduction U14 cell proliferation, increasing the level of serum IFN-γ and decreasing the level of serum IL-4.Conclusions: The extracting total flavonoids from pteris multifida can compress U14 cell proliferation, probably the antitumor effects were as a result of enhancing the system immune function.【Key words】total flavonoids from pteris multifida antitumor cytokine凤尾草（Pteris multifida Poir）为凤蕨科（Pteridaceae）凤尾蕨属植物干燥全草，主产于贵州、浙江、江苏、湖南、陕西等地，具有清热利湿、止泻止带、通淋退黄作用，用于治疗菌痢，吐血，衄血，便血，尿血，黄疸型肝炎，扁桃体炎等[1]，凤尾草全草含有黄酮类、萜类、甾醇、苯丙素类、挥发油类以及氨基酸等化学成分[2]，其已知的化学成分有木犀草素-7-O-葡萄糖苷[3]，16-羟基-贝壳杉烷-2-β-D-葡萄糖苷[4]，木犀草素、棕榈酸和芹菜素4-'O-α-L-鼠李糖苷[5]等，黄酮类化合物为其主要化学成分且含量高达3.2%[6]。
凤尾草提取物的抗肿瘤活性的研究
Ａｂ ｔａ ｔＴｏ ｓｕ ｙｔ ｅａ ｔ ｔ ｍｏ ｃｉｉｙ ｏ ｈ ｘ ｒｃ ｉｅｆｏ Ｐｔｒｓｍｕ ｔｆｉ ａ Ｐｏ ｒ ｎ ２ ｓｒ ｃ ： ｔ ｄ ｈ ｎ ｉ ｕ ｒａ ｔ ｔ ｆｔ ｅ ｅ ｔａ ｔｖ ｒ ｍ ｅ ｉ ｌｉ ｄ ｉ ．Ｓ ８ ａ ｄ Ｈ２ — ｖ Ｌ ｏ
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凤尾 草 （ ｅｉ ，ｕｔｆｄ ｏｒ 为 凤 尾属 蕨 Ｐｔｒ 门 ｌ ｉ ａ Ｐ ｉ ） ｓ ｉ 类 植物 ， 现代药理研 究表 明凤 尾草具 有清 热利湿 、
１ 材 料 与 方 法
（） １ 凤尾 草 ： 自河 北 中医学 院 ， 由河北 化 购 经 药学 院 中药 教研室鉴 定确认 。
ｗｅ ｅ ｔｅ ｔ ｄ ｉ ｉ ｏ ｏ ｒ ｒ ａ ｅ ｎ ｖ ｖ ｎ ＫＭ ｃ ｙ ｔ ｘ ｒ ｃ ｉ ｅ ｆ ｒ ｔ ｎ ｄａ ｓ Ｔｈ ｃ ｉｉｙ ｏ ｃ ｐｌｅ ｅｌ ｍｉｅ ｂ ｈｅ ｅ ｔ ａ ｔｖ ｏ ｅ ｙ ． ｅ ａ ｔｖ ｔ ｆ ｍｉｅ ｓ ｅ ｎ ｃ ｌｓ ｏｆ ｐ ｏ ｉｅ ａ ｉ ｎ ｗａ ｅ ｅ ｔ ｄ ｂ ＴＴ ｔ ｄ ｒ ｌｆ ｒ ｔｏ ｓ ｄ ｔ ｃ ｅ ｙ Ｍ ｍｅ ｈｏ ．Ｔｈ ｅ ｕｌ ｈ ｅ ｒ ｓ ｔ ｏｗｅ ｈ ｔ ｔ ｅ ｅ ｔａ ｔｖ ａ ｖ ｏ ｎ ｉ ｓ ｄ ｔ ａ ｈ ｘ ｒ ｃ ｉ ｅ ｈ ｄ ｏｂ ｉ ｕｓ ａ ｔ— ｔ ｕｍｏ ｃ ｉ ｉｙ ｏｎ ＫＭ ｃ ８ ａ ２，ｍ ｅ ｎｗｈｉｅｃ ｕｌ ｒ ｅ ｌ ｔｍ ｕ ａ ｅ ｍｉｅｓ ｌ ｎｏ ｙｔ ｒ ｌｆ ｒ ｒａ ｔｖ ｔ ｍｉｅＳｌｏ ｎｄ Ｈ２ ａ ｌ ｏ ｄ ｍａ ｋ ｄ ｙ ｓ ｉ ｌ ｔ ｃ ｐ ｅ ｃ ｅ ｐ ｏ ｉｅ — ａ ｉ ｎ ａ ｈ ｄ ｓｇ ｆｃ ｎ ｄｏ ｅ ｄｅ ｎｄ ｎ ｒ ｌ ｔｏｎ ｈ ｐ． Ｏｕｒ ｒ ｓ ｔ ｎｄ ｃ ｔ ｔ ｔ ｔ ｅ ｅ ｒ ｃ ｉ ｅ ｆｏｍ ｔｏ ｎｄ ａ ｉ ｎｉｉａ ｔ ｓ — ｐｅ ｅ ｔ ｅａ ｉ ｓ ｉ ｅ ｕｌｓ ｉ ｉａ ｅ ｈａ ｈ ｘｔａ ｔｖ ｒ