茶叶审评与检验Ⅱ检验部分课件实训二 茶叶中游离氨基酸的测定
茶叶中游离氨基酸的测定
茶叶中游离氨基酸的测定茶叶是一种传统的饮品，具有多种保健功效。
而茶叶中的游离氨基酸是决定茶叶品质的重要因素之一。
本文将探讨茶叶中游离氨基酸的测定方法及其意义。
一、茶叶中游离氨基酸的意义游离氨基酸是构成蛋白质的基本组成部分，也是人体所需的重要营养物质之一。
在茶叶中，游离氨基酸的含量与茶叶的品质有着密切的关系。
茶叶中游离氨基酸的含量高低直接影响着茶叶的口感和香气，也是评价茶叶质量好坏的重要指标之一。
因此，准确测定茶叶中游离氨基酸的含量对于茶叶品质的评价具有重要意义。
常用的测定茶叶中游离氨基酸含量的方法主要有色谱法、高效液相色谱法和光谱法等。
以下将分别介绍这几种方法的原理和步骤。
1. 色谱法色谱法是一种常用的游离氨基酸测定方法。
其原理是利用色谱柱将茶叶样品中的游离氨基酸分离出来，再通过检测器测定其浓度。
具体步骤如下：（1）样品制备：将茶叶样品粉碎并称取适量，加入适量溶剂提取游离氨基酸。
（2）色谱柱分离：将提取得到的茶叶样品溶液注入色谱柱进行分离，根据游离氨基酸的特性选择合适的色谱柱。
（3）浓度测定：通过色谱柱后，游离氨基酸会进入检测器，根据吸光度或荧光强度等参数测定游离氨基酸的浓度。
2. 高效液相色谱法高效液相色谱法（HPLC）是一种常用的分离和测定游离氨基酸的方法。
其原理是利用高效液相色谱仪将茶叶样品中的游离氨基酸分离出来，并通过检测器测定其浓度。
具体步骤如下：（1）样品制备：将茶叶样品粉碎并称取适量，加入适量溶剂提取游离氨基酸。
（2）色谱柱分离：将提取得到的茶叶样品溶液注入高效液相色谱仪进行分离，根据游离氨基酸的特性选择合适的色谱柱。
（3）浓度测定：通过高效液相色谱柱后，游离氨基酸会进入检测器，根据吸光度或荧光强度等参数测定游离氨基酸的浓度。
3. 光谱法光谱法是一种简单快速的游离氨基酸测定方法。
其原理是利用游离氨基酸在特定波长下的吸收特性来测定其浓度。
具体步骤如下：（1）样品制备：将茶叶样品粉碎并称取适量，加入适量溶剂提取游离氨基酸。
游离氨基酸测定（完整版）
总游离氨基酸测定（完整版）实验原理：游离氨基酸的游离氨基可与水合茚三酮作用，产生蓝紫色的化合物二酮茚－二酮茚胺，产物的颜色深浅与游离氨基酸含量成正比，用分光光度计在570nm下测其含量。
因蛋白质中的游离氨基酸也会产生同样反应，在测定前必须用蛋白质沉淀剂将其除掉.仪器与用具：100ml容量瓶；漏斗；三角瓶研钵；刻度吸管：0.1ml×1、1ml×2、2ml×2、5ml×1;沸水浴；具塞刻度试管20ml×10;分光光度计.一、试剂1.水合茚三铜：称重结晶的茚三铜0.6g,装入烧杯，加入正丙醇15ml，使其溶解加入正丁醇30 ml、乙二醇60 ml、乙酸-乙酸钠缓冲液（pH=5.4）9 ml,混匀，棕色瓶冰箱保存，10天内有效。
2.乙酸-乙酸钠缓冲液（pH5.4）：称取化学纯乙酸钠54.4g，加入无氨蒸馏水100 ml，电炉加热至沸，使其体积减半，冷却后加冰乙酸30 ml，加蒸馏水定容至100 ml。
3.氨基酸标准溶液：精确称取80℃烘干至恒重的亮氨酸0.0234g溶于10％异丙醇并定容至50ml。
取此液5ml蒸馏水稀释到50ml，即为5μg/ml氨基酸标液。
4.0.1%抗坏血酸：称取0.050g抗坏血酸，溶于50 ml蒸馏水中，即配即用。
5.10％乙酸二、标准曲线制备加塞子密封于沸水中加热15分钟，取出后用冷水迅速冷却并不时摇动使加热时形成的红色被空气逐渐氧化褪去，待呈现兰紫色时，用60％乙醇定容至20ml，摇匀于570nm波长下比色。
以吸光度为纵坐标，氨基氮ug数为横坐标，绘标准曲线三、实验步骤：1.烟末0.5g于研钵中加入5 ml10%乙酸，研磨匀浆后用蒸馏水定容100 ml，用滤纸过滤到三角瓶中备用。
2.1ml滤液加入到20ml 干燥试管中，加1 ml蒸馏水，水合茚三铜3ml, 0.1%抗坏血酸0.1ml, 加塞子密封于沸水中加热15分钟，取出后用冷水迅速冷却并不时摇动使加热时形成的红色被空气逐渐氧化褪去，待呈现兰紫色时，用60％乙醇定容至20ml，摇匀于570nm波长下比色。
2.茶叶审评与检验Ⅱ检验部分第二章 茶叶检验标准
3、国家质量监督检验检疫总局发布实施，在标准编号上有 的以“检”开头，如检 48 号-60《茶叶》和检 48 号-55 《茶叶》，也有不是以“检”开头的，如商检输出 11-52 《茶叶类》和 CTS 输出 7-50《茶叶类》；
企业标准是由企事业单位自 行制定发布的标准，也是 “对企业范围内需要协调， 统一的技术要求，管理要求 和工作要求”所制定的标准。 企业标准以“Q”为标志。
据不完全统计， 我国目前 的茶叶企业标准共有 10000 余项，已有约 60％以上的 茶叶企业根据企业自身的实 际情况制定了本企业的产品 标准。
标准类别:农业 标准代号:NY 批准发布部门:农业部 标准组织制定部门:农业部 出版单位:中国农业出版社
茶叶行业标准分类
按照相关标准管理及制定的部门，主要有以下几个部门制 定：
1、农业部发布实施的农业行业标准，这类标准是目前茶叶 行业标准中数量最多的标准，编号上以 NY 开头， 如 NY ／T1713-2009 《绿色食品茶饮料》、NY5244-2004《无公 害食品茶叶》；
茶叶行业标准分类
4、中国机械工业联合会发布的，在编号上以 NJ 和 JB 开 头，如 JB／T10748-2007《扁形茶炒制机》、NJ 359-85 《茶叶烘干机技术条件》，这类标准主要和茶叶机械相关， 目前共有 22 项；
5、国家质量监督检验检疫总局发布实施的， 编号上以 SN 开头， 如 SN／T 0914-200《进出口茶叶粉末和碎茶含量 测定方法》，这类标准主要是以出口茶为对象，有 SN／T 0797-1999《出口保健茶检验通则》、SN／T 1852-2006 《出口茶皂素中皂甙含量的测定》、SN／T 0914-2000《进 出口茶叶粉末和碎茶含量测定方法》、SN／T 0923-2000 《进出口茶叶酸不溶灰分测定方法》；
测定茶叶中游离氨基酸总量研究
测定茶叶中游离氨基酸总量研究采用茚三酮比色法测定茶叶中游离氨基酸总量。
确定采用沸水萃取，以0.2mg/ml的谷氨酸标准溶液在吸取系列工作液后不加水，加入0.5ml的PH8.0的磷酸盐缓冲液和0.5ml2%茚三酮溶液，采用数显电热恒温水浴锅沸水浴15min加热，冷却后蒸馏水定容至25ml，在570nm处测定吸光度。
所得线性方程A=4.312X-0.017，相关系数r=0.99955，回收率达到92.2%左右，精确度为0.8%，试验操作简单，重复性和稳定性良好。
茶叶游离氨基酸茚三酮比色法茶叶中游离氨基酸含量是用来描述茶叶鲜爽程度的一个重要品质指标，还是人体所必需的营养物质，同事对人体疾病的康复和预防起着极重要的保健作用。
测定茶叶中游离氨基酸含量对茶叶的开发利用具有一定的指导意义。
以谷氨酸为标准品，采用分光光度计为测定仪器，探索一种适合于茶叶游离氨基酸含量的分析方法。
本试验对该方法的主要影响因素，精密度和回收率等进行研究，确定了茶叶中游离氨基酸总量的测定方法。
1材料与方法1.1仪器和用具数显电热恒温水浴锅，型号电子分析天平：感量为0.0001g，型号紫外可见分光光度计。
可调式电炉。
1.2试剂和溶液所用试剂应为分析纯（AR），水为蒸馏水。
PH8.0磷酸盐缓冲液：1/15mol/L磷酸氢二钠溶液95ml和1/15mol/L磷酸二氢钾溶液5ml，混匀。
2%茚三酮溶液：称取水合茚三酮（纯度不低于99%）2g，加50ml水和80mg氯化亚锡搅拌均匀。
分次加少量水溶解，放在暗处，静置一昼夜，过滤后加水定容至100ml。
1.3试验方法1.3.1标准贮备液及标准溶液的配制准确称取100mg谷氨酸（纯度不低于99%）溶于100ml水，定容作为母液。
（1ml含谷氨酸1mg）。
配制成0.1mg/ml，0.2mg/ml，0.3mg/ml，0.4mg/ml，0.5mg/ml浓度的标准溶液。
采用GB/T8314-2002中茶游离氨基酸的测定方法进行测定。
游离氨基酸测定（完整版）
游离氨基酸测定（完整版）总游离氨基酸测定（完整版）实验原理：游离氨基酸的游离氨基可与⽔合茚三酮作⽤，产⽣蓝紫⾊的化合物⼆酮茚－⼆酮茚胺，产物的颜⾊深浅与游离氨基酸含量成正⽐，⽤分光光度计在570nm下测其含量。
因蛋⽩质中的游离氨基酸也会产⽣同样反应，在测定前必须⽤蛋⽩质沉淀剂将其除掉.仪器与⽤具：100ml容量瓶；漏⽃；三⾓瓶研钵；刻度吸管：0.1ml×1、1ml×2、2ml×2、5ml×1;沸⽔浴；具塞刻度试管20ml×10;分光光度计.⼀、试剂1.⽔合茚三铜：称重结晶的茚三铜0.6g,装⼊烧杯，加⼊正丙醇15ml，使其溶解加⼊正丁醇30 ml、⼄⼆醇60 ml、⼄酸-⼄酸钠缓冲液（pH=5.4）9 ml,混匀，棕⾊瓶冰箱保存，10天内有效。
2.⼄酸-⼄酸钠缓冲液（pH5.4）：称取化学纯⼄酸钠54.4g，加⼊⽆氨蒸馏⽔100 ml，电炉加热⾄沸，使其体积减半，冷却后加冰⼄酸30 ml，加蒸馏⽔定容⾄100 ml。
3.氨基酸标准溶液：精确称取80℃烘⼲⾄恒重的亮氨酸0.0234g溶于10％异丙醇并定容⾄50ml。
取此液5ml蒸馏⽔稀释到50ml，即为5µg/ml氨基酸标液。
4.0.1%抗坏⾎酸：称取0.050g抗坏⾎酸，溶于50 ml蒸馏⽔中，即配即⽤。
5.10％⼄酸⼆、标准曲线制备加塞⼦密封于沸⽔中加热15分钟，取出后⽤冷⽔迅速冷却并不时摇动使加热时形成的红⾊被空⽓逐渐氧化褪去，待呈现兰紫⾊时，⽤60％⼄醇定容⾄20ml，摇匀于570nm波长下⽐⾊。
以吸光度为纵坐标，氨基氮ug数为横坐标，绘标准曲线三、实验步骤：1.烟末0.5g于研钵中加⼊5 ml10%⼄酸，研磨匀浆后⽤蒸馏⽔定容100 ml，⽤滤纸过滤到三⾓瓶中备⽤。
2.1ml滤液加⼊到20ml ⼲燥试管中，加1 ml蒸馏⽔，⽔合茚三铜3ml, 0.1%抗坏⾎酸0.1ml, 加塞⼦密封于沸⽔中加热15分钟，取出后⽤冷⽔迅速冷却并不时摇动使加热时形成的红⾊被空⽓逐渐氧化褪去，待呈现兰紫⾊时，⽤60％⼄醇定容⾄20ml，摇匀于570nm波长下⽐⾊。
茶叶中氨基酸含量的测定
茶叶中氨基酸含量的测定实验三茶叶中氨基酸含量的测定一、分析意义氨基酸，是生物合成蛋白质的基本单位又是蛋白质分解的产物，在生物体内是重要的生物活性物质。
氨基酸是可溶于水的含氮化合物，对茶叶品质有重要的影响，是公认的茶叶呈味物质，也是构成茶叶色香味的重要化学因子。
二、方法原理氨基酸在pH8.04条件下与茚三酮共热，α－氨基酸能与茚三酮反应产生兰紫色缩合物，其反应过程按如下步骤进行：三、样品、试剂与仪器设备1、样品：不同等级绿茶。
2、pH8.04磷酸缓冲液：先配制1/15M磷酸氢二钠和1/15磷酸二氢钾溶液(配制方法同实验二)。
用时取1/15M的KH2PO4溶液5ml、1/15M的Na2HPO4溶液95ml混匀，即为pH8.04磷酸缓冲液。
3、2％茚三酮溶液：称取2g水合茚三酮加50毫升蒸馏水，加氯化亚锡80毫克(SnCl 2·2H2O)(AR级)，搅拌均匀后，逐渐加水溶解，分次过滤，滤液在暗处放置一昼夜，加水定容至100ml 。
4、主要仪器：分光光度计四、测定步骤1、供试液制备(同实验二)2、定量吸取供试液1ml ，注入25ml 容量瓶中，加0.5mlpH8.04的磷酸缓冲液，和0.5ml 的2％茚三酮溶液，置于沸水浴中加热15min ，待冷却后加水定容至25ml ，10min 后于570nm 波长处，0.5cm 比色杯测定吸光度A 值。
3、计算：注：“0.57”——用已知的不同浓度配制的茶氨酸，按上述操作程序测定吸光度，作标准曲线，当吸光度等于1.00时，每1ml 供试液中含茶氨酸0.57mg 。
注意事项1、比色液在1小时内吸光度较稳定，比色须在该时间内完成，不及放置过久；2、沸水浴中加热15min 时容量瓶一定要浸没浴沸水浴中，且打开瓶塞。
氨基酸％＝×100。
茶叶审评与检验Ⅱ检验部分第二章 茶叶检验标准培训讲解
六、茶叶标准的制定
制订茶叶产品标准的程序 茶叶标准的制订程序,大致分为四个阶段(这里主要讲名优 茶企业标准的制定)。 准备阶段→标准起草→上报审定→审批
四、国外茶叶标准现状
国际组织标准 与茶叶有关的国际标准主要有国际标准化组织(ISO)、国 际食品法典委员会(CAC)(见表1)和联合国粮农组织(FAO) 标准。 FAO对茶叶中的农药残留限量标准主要有10项(见表2)。 ISO涉及茶叶产品标准有ISO3720一1986《红茶——定义 和基本要求》,标准对红茶中化学成分作了要求(见表3), 全世界共有30多个国家采用这一标准。
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茶叶单审击评此与检处验编Ⅱ辑（检母验版部标分）题样式
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一、茶叶标准的基本理论和发展历史
《辞海》对标准下的定义是：衡量事物的准则，榜样、规 范。 标准是指在一定范围内获得最佳秩序，以科学技术和实践 经验的综合成果为基础，经有关方面协商一致，由法定部 门批准，以特定形式发布的特殊技术文件，是有关各方共 同遵守的准则和依据。
1、茶叶出口国国家标准 茶叶出口国家制定国家检验标准的有肯尼亚、印度、斯里 兰卡、日本、土耳其、孟加拉和毛里求斯等国。
2、茶叶进口国国家标准 有美国、澳大利亚、埃及、巴基斯坦、英国、法国、德国 等国。
国外茶叶标准分为国际茶叶标准、出口国茶叶标准和进口 国茶叶标准。
五、茶叶标准样
茶叶实物标准样是产销双方共同制订遵守的标准 依据。目前，我国执行的茶叶实物标准样有毛茶 标准样(6级12等、逢双等设样)、加工标准样(分 级不分等)、贸易标准样三种类型，分别供工厂收 购初制茶、产销双方、市场贸易计价使用，其中 毛茶标准样需要每年更换一次，加工标准样可以 隔几年更换一次。
茶叶审评与检验ppt课件
茶多酚 7.54
5分钟
10分钟
相对（%）含量（%）相对（%）含量（%）相对（%）
74.60 17.15 85.39 20.20 100 77.66 1.74 88.32 1.97 100 70.07 8.98 83.46 10.76 100
评价
过淡
合理
浓暗
三、泡茶时间
• 随着冲泡时间的延长，浸出量增加，滋味 浓强度增加；10分钟后，有效成分几乎全部 浸出。
第一节 评茶设备、用具和要求
3、湿度：评茶室要干燥（相对湿度＜75%）， 如太潮湿安装除湿机，忌潮。 4、安静：评茶室要安静。审评茶叶是一种脑 力劳动，依靠大脑思维，评定结果，环境切 忌嘈杂、喧哗以免影响评定结果。 5、整洁：评茶室内物品摆放整齐，保持清洁。
第一节 评茶设备和要求
二、评茶人员要求 1、具备基本的茶叶知识和评茶技能 2、在评茶之前，评茶人员不得抽烟、食用 辛辣、有刺激性气味的食物； 3、评茶人员不得施脂粉，用香水，以免影 响评茶的准确性； 4、评茶人员应保持个人和评茶室环境的整 洁。
第一节 评茶设备和要求
3、样茶柜和样茶架：用来盛放和摆放茶叶样 品，通常摆放在靠墙一边，切记不能遮住光线。 4、冷藏柜：用来存放茶叶样品，相对低温有 利于茶叶的保存。 5、消毒柜：主要是用来对审评杯、碗、茶匙 和品茗杯等进行消毒。
第一节 评茶设备和要求
（二）评茶用具
1、样茶盘：用于放置待审评的茶叶，评定外形。有正方 形和长方形两种，规格为边长23cm，高为3cm；长25cm， 宽16cm，高3cm。左上方有一缺口，便于倾倒茶叶，一般 木制，漆成白色为好。（毛茶，直径50cm，高4cm竹篾圆 匾）
4、生茶和科学研究角度：样茶是反映茶叶生茶 水平和指导生茶技术改进，正确反映科研成 果大的依据；