肠道病毒的分类与检测
致病性大肠埃希氏菌及其检验
致病性：（1）致 病因素
LT与ST的比较
特性
分子量 耐热性 免疫原性 B亚单位受 体
致病机理
不耐热肠毒素
耐热肠毒素
较大，73000
较小，1500-5000
不耐热
耐热
有
无
肠黏膜GM1神经节苷酯 肠黏膜GM1神经节苷酯
活化细胞腺苷酸环化酶，活化细胞鸟苷酸环化酶，
细胞内cAMP含量升高， 细胞内cGMP含量升高，
原理：伊红美蓝琼脂平板含伊红和美蓝染料，在此亦作为指示剂。 大肠菌群发酵乳糖造成酸性环境时，故可染上酸性染料伊红，又因 伊红与美兰结合（该两种染料即结合成复合物）使大肠菌群产生带 核心的、有金属光泽的深紫色的（龙胆紫的紫色）阳性菌落，从菌 落表面的反射光中还可看到绿色金属闪光。在伊红美兰平板上的典 型菌落呈紫黑色，圆形，边缘整齐，表面光滑湿润，常有金属光泽。 有的由于被检样品影响，亦呈现紫色、粉紫、中心灰紫、无黑心、 湿润等，常为大肠杆菌，均应注意挑选。
革兰氏阴性杆菌
革兰氏 阳性杆 菌
大肠杆菌扫 描电镜照片源自大肠杆菌 透射电镜 照片大肠杆菌革兰氏染色照片
大肠杆菌平 板菌落照片
一、埃希氏菌属生物学特性
生化特性
一．可发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇产酸产气，有些不典型的菌株不发酵或 迟缓发酵乳糖；
二．不同菌株对蔗糖，卫矛醇、水杨苷发酵结果不一致; 三．本菌可使赖氨酸脱鞍、不能使苯丙氨酸脱羧。 四．不产生H2S，不液化明胶，不分解尿素;
二、致病性大肠埃希氏菌的检验
（二）、分离培养
将乳糖胆盐发酵阳性管液与增菌液分别划线接种于麦 康凯或伊红美兰琼脂平板上。 2、于36±1℃培养 18—24小时观察菌落对于污染严重的食品可直接按 划线法接种，不经过增菌过程。不但要注意乳糖发酵 的菌落，同时也要注意乳糖不发酵的菌落。
肠道病毒
肠道病毒（enterovirus）1.肠道病毒：（1）属于小RNA病毒科中的肠道病毒属成员，由粪-口途径传播。
（2）虽然感染胃肠道，但却很少引起胃肠道疾病，其靶器官以神经系统、肌肉和其他系统为主，引起脊髓灰质炎、脑膜炎、脑膜脑炎、心肌炎、心周炎、手足口病等疾病。
（3）一种病毒血清型可引起几种不同的疾病综合征，而几种不同的血清型又可引起同一种疾病。
2. 肠道病毒种类与分型（1）脊髓灰质炎病毒(poliovirus)：分1、2、3三型（2）柯萨奇病毒(coxsackie virus) ：分A、B两组；（A组：包括A1~A22、A24型；B组：包括B1~B6型；）（3）埃可病毒(ECHO virus)：包括1~9、11~27、29~33型（4）新型肠道病毒：包括68、69、70、71型3. 脊髓灰质炎病毒：①是引起脊髓灰质炎的病原体；②脊髓灰质炎又称为小儿麻痹症，是一种危害中枢神经系统的传染病。
（1）临床意义：①传播途径：经粪-口途径感染，潜伏期2~10天②传染源：患者及无症状隐性感染者③临床表现：无症状感染、顿挫型脊髓灰质炎、无麻痹性脊髓灰质炎、麻痹型脊髓灰质炎1~2%（2）致病机制：（3）生物学特性：①病毒近似球形，直径27～30nm，核心为单正链RNA，约7.2～8.5kb，核衣壳呈20面体立体对称，无包膜。
②衣壳含4种蛋白（VP1～VP4），VP1、VP2和VP3暴露在病毒体表面，是抗体结合位点；VP4在核心内部与RNA结合。
（4）培养特性：①细胞：人胚肾、人胚肺、猴肾细胞、Hela、HEp-2、Vero等②最适温度：36～37℃CPE：培养3～5天出现③抵抗力较强（5）微生物学检验：1.标本采集与处理标本：粪便、发病早期的咽部分泌物等2.病毒分离与鉴定：人或猴肾原代细胞、Hela、V ero等细胞24～48小时可出现典型CPE3.抗原检测：ELISA法4.核酸检测：用RT-PCR等方法5.抗体检测：单份血清检测IgM，双份血清检测抗体效价升高4倍（6）减毒活疫苗：①剂型：Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型；②用法：口服（温水）；③机理：产生分泌型IgA，阻止病毒入血；4. 柯萨奇病毒（Coxsackievirus）：柯萨奇病毒是1948年在美国纽约州柯萨奇镇，从一名疑似脊髓灰质炎患者粪便中用接种乳鼠的方法首次分离出的，因而得名。
肠道病毒的分类关系
VP1 VP2 VP3
脊髓灰质炎病毒结构模式
抵抗力
1、强、耐酸、耐脂溶剂
2、热、紫外线敏感
肠道病毒的分型
脊髓灰质炎病毒 柯萨奇病毒A组 柯萨奇病毒B组 埃可病毒 新肠道病毒 1、2、3型 1-22、24型 1-6型 1-9、11-27、29-33型 68、69、70、71、72*
* 甲型肝炎病毒
爱是什么？ 一个精灵坐在碧绿的枝叶间沉思。 风儿若有若无。 一只鸟儿飞过来，停在枝上，望着远处将要成熟的稻田。 精灵取出一束黄澄澄的稻谷问道：“你爱这稻谷吗？” “爱。” “为什么？” “它驱赶我的饥饿。” 鸟儿啄完稻谷，轻轻梳理着光润的羽毛。 “现在你爱这稻谷吗？”精灵又取出一束黄澄澄的稻谷。 鸟儿抬头望着远处的一湾泉水回答：“现在我爱那一湾泉水，我有点渴了。” 精灵摘下一片树叶，里面盛了一汪泉水。 鸟儿喝完泉水，准备振翅飞去。 “请再回答我一个问题，”精灵伸出指尖，鸟儿停在上面。 “你要去做什么更重要的事吗？我这里又稻谷也有泉水。” “我要去那片开着风信子的山谷，去看那朵风信子。” “为什么？它能驱赶你的饥饿？” “不能。” “它能滋润你的干渴？” “不能。”爱是什么？ 一个精灵坐在碧绿的枝叶间沉思。 风儿若有若无。 一只鸟儿飞过来，停在枝上，望着远处将要成熟的稻田。 精灵取出一束黄澄澄的稻谷问道：“你爱这稻谷吗？” “爱。” “为什么？” “它驱赶我的饥饿。” 鸟儿啄完稻谷，轻轻梳理着光润的羽毛。 “现在你爱这稻谷吗？”精灵又取出一束黄澄澄的稻谷。 鸟儿抬头望着远处的一湾泉水回答：“现在我爱那一湾泉水，我有点渴了。” 精灵摘下一片树叶，里面盛了一汪泉水。 鸟儿喝完泉水，准备振翅飞去。 “请再回答我一个问题，”精灵伸出指尖，鸟儿停在上面。 “你要去做什么更重要的事吗？我这里又稻谷也有泉水。” “我要去那片开着风信子的山谷，去看那朵风信子。” “为什么？它能驱赶你的饥饿？” “不能。” “它能滋润你的干渴？” “不能。”
消化道感染病毒【精选文档】
第14章消化道感染病毒学习要点一、肠道病毒1．肠道病毒的种类：主要包括脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒、人肠道致细胞病变孤儿病毒（简称埃可病毒）、新肠道病毒68～71型。
2．肠道病毒的共同特性：单正链RNA无包膜。
壳粒由VP1、VP2、VP3和VP4四种病毒多肽组成。
耐酸，耐脂溶剂，在污水和粪便中可存活4～6个月.主要经粪-口途径传播，病毒在肠道细胞中增殖，但很少引起肠道疾病。
病毒可侵入血流产生病毒血症.不同的肠道病毒可引起相同的临床综合征。
同一种肠道病毒又可引起不同的临床综合征.3．脊髓灰质炎病毒(1）生物学性状：脊髓灰质炎病毒有3个血清型，三型之间没有交叉反应。
(2)致病性所致疾病:脊髓灰质炎,多见于儿童，故亦称小儿麻痹症。
传染源:患者或无症状带毒者传播途径：主要通过粪-口途径传播,经粪便排毒。
致病机制：病毒通过肠道、上呼吸道途径感染,先在局部淋巴组织和肠道集合淋巴结初步增殖后入血，形成第一次病毒血症，然后扩散至全身网状内皮系统进一步增殖后再次入血，形成第二次病毒血症。
主要侵犯脊髓前角运动神经细胞,导致肢体弛缓性麻痹.（3）防治原则:可用脊髓灰质炎灭活疫苗(IPV）和脊髓灰质炎减毒活疫苗（OPV)进行特异性预防。
我国使用三价混合脊髓灰质炎减毒活疫苗，口服接种后可获对三个血清型脊髓灰质炎病毒的免疫力。
4。
柯萨奇病毒和ECHO病毒有多种血清型。
可引起多种临床综合症：脑膜炎、脑炎和肌肉麻痹；上呼吸道感染、疱疹性咽峡炎、支气管炎和肺炎；病毒性心肌炎、心包炎及全心炎；手足口病；急性出血性结膜炎（红眼病）等。
二、急性胃肠炎病毒1．轮状病毒（1）生物学性状：为双链RNA病毒，无包膜。
基因组分11个节段。
根据VP6抗原性的差异,可将轮状病毒分为7个组（A～G)。
A～C组轮状病毒能引起人类和动物腹泻,D～G组只引起动物腹泻.（2）致病性与免疫性：A组轮状病毒是2岁以下婴幼儿严重腹泻最主要的病原体。
主要在秋冬季流行,故又称为婴幼儿“秋季腹泻”。
肠道微生物组检测方法
肠道微生物组检测方法
肠道微生物组的检测方法主要包括以下几种：
1. 16S扩增子测序：这个技术可以检测到细菌属的级别，评估肠道细菌的多样性，全面衡量肠道菌的相对含量，并预测基因代谢网络等。
其检测方法是测16SV4区域，测序深度号称10万。
2. QPCR（荧光定量PCR）：虽然这个技术曾是医院核酸诊断产品的主要手段，但目前逐渐被新一代测序技术所取代。
3. 宏基因组技术：这个技术可以检测出所有的微生物，包括细菌、真菌和病毒的基因组，是检测最全面的方法。
然而，由于其成本较高，所以采用的公司较少。
此外，还有大便常规、尿常规、血液常规以及脑积液检查等方法可以用来辅助诊断。
以上内容仅供参考，如需了解更多信息，建议查阅相关文献或咨询专业医生。
医学微生物学：肠道病毒
* 手足口病（hand-foot-mooth disease） 柯萨奇病毒A16、新肠道病毒71型。
所致疾病
* 流行性胸痛（pleurodynia） 柯萨奇B组病毒。
* 心肌炎(myocarditis)和心包炎(pericarditis ） 柯萨奇B组病毒。
致病特点
* 主要粪-口途径传播，也可呼吸道感染； * 病毒在肠道中增殖却很少引起肠道疾病； * 型别多，引起的疾病谱复杂；
●不同的肠道病毒可引起相同的临床综合征， ●同一种病毒也可引起几种不同的临床疾病。
* 目前尚无疫苗用于预防。
所致疾病
* 无菌性脑膜炎（aseptic meningitis） 几乎所有的肠道病毒。
➢ 肠道病毒的一般特征 ➢ 脊髓灰质炎病毒 ➢ 柯萨奇病毒、埃可病毒、新型肠道病毒
肠道病毒的共同特征
➢ 大小：28-30 nm； ➢ 核酸：单股正链RNA； ➢ 无包膜，衣壳20面体对称。
➢ 结构蛋白： VP1、VP2、VP3：暴露在病毒表面，具有粘附作用； VP4：在核心内部，与RNA结合，维持病毒构型。
*脊髓灰质炎（poliomyelitis） 的病原体。 侵犯脊髓前角运动神经细胞 导致弛缓性肢体麻痹
（小儿麻痹症）。
生物学性状
➢ 形态结构：典型肠道病毒特征； ➢ 分型：根据中和试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型； ➢ 抵抗力：较强：粪便及污水---存活数周
酸性环境---稳定
致病性与免疫性
脊髓灰质炎病毒
隐性感染 （约90％）
肠道病毒的共同特征
* 多能在易感 细胞中增殖 产生CPE。
肠道病毒的共同特征
* 对理化因素的抵抗力较强； * 主要经粪—口途径传播； * 病毒在肠道中增殖，却引起多种肠道外
肠道病毒
2.核酸:单股正链RNA,有感染性,进入细胞后可直接起mRNA的作用。 3.增殖:在宿主细胞浆内复制,有较强的杀细胞作用。除柯萨奇A组的
某些血清型外,均可在易感细胞中增殖,引起典型的CPE。
4.抵抗力:强 5.临床表现:多样化,经过消化道侵入机体,先在肠道细胞内增殖,但
三、微生物学检验
1.分离鉴定 接种原代/传代猴肾细胞或人源细胞系,病毒增殖后观察 CPE情况,收集病毒培养液利用中和试验、补体结合试验、血凝抑制试 验等鉴定并分型。 2. 免疫学检测 用ELISA等检测病人血清中的IgG和IgM抗体。免疫印 迹试验(Wethern Blot)是诊断病毒感染的确证试验。
所致疾病多在肠道外,包括中枢神经、心肌损害及皮疹等。
4
第二节 脊髓灰质炎病毒
polioviruses,Polio
1.形态结构
一、病毒特性
具有典型的肠道病毒的特性。病毒球形, 单股正链RNA 无包膜,衣壳呈二十面体立体对称。
5
三、微生物学检验
1.标本采集 发病1周内采集咽拭子或咽漱液,1周后采集粪便。疑似
柯萨奇病毒(coxsackie viruses)是1948年首先从两名纽约柯萨奇镇 的麻痹型脊髓灰质炎儿童的粪便中分离出的。
埃 可 病 毒 (echovirus) 又 称 肠 道 致 细 胞 病 变 孤 儿 病 毒 ” (enteric cytopathogenic human orphan virus),简称ECHO病毒。
该病死亡的尸体标本可可采集中枢神经系统和降结肠标本。
2.分离培养 接种人胚肾、人羊膜、猴肾细胞、HeLa、Vero等易感细
胞中,增殖后观察CPE,做中和试验等进行鉴定。
胃肠道感染病原菌及其检测方法
改良Skirrow琼脂或在Karmail弯曲菌培养基 上3-5天。
氧化酶+，触酶阳性，不发酵葡萄糖，尿素 酶强阳性。
胃肠道感染病原菌及其检测方法
胃粘膜溃疡病理切片革兰染色
胃肠道感染病原菌及其检测方法
胃肠炎，感染性和中毒性腹泻
病原因子（细菌性） 诊断方法
动力
H2S
产酸
志贺菌
+
-
宋内0%+ -
-
福氏42%+
痢疾40%+
鲍氏37%+
沙门菌
+
-
-
+
+/d
胃肠道感染病原菌及其检测方法
志贺菌的血清分型
A群痢疾志贺菌 1、2、3、4、5、6、7、8、 9、10、11、12、13、14、15
B群福氏志贺菌 1a,1b,2a,2b,3a,3b,4a,4b,4c,5a,5b,6Boyd88,6 孟城型，6新城型，X,Y
胃肠道感染的病原 菌及其检测方法
胃肠道感染病原菌及其检测方法
主要内容
食管炎的病原菌 胃炎主要的病原菌 急性胃肠炎的病原菌
细菌性 寄生虫 病毒
胃肠道感染病原菌及其检测方法
食管炎
最常见原因是非感染性的，如胃食管反流 性疾病
感染见于免疫功能受损患者
胃肠道感染病原菌及其检测方法
食管炎的实验室诊断
最优标本
沙门菌，志贺菌，弯曲 常规粪便细菌培养 菌
粪便
EHEC,包括O157：H7和 其他产志贺毒素的大肠 埃希菌
培养O157：H7 志贺毒素免疫学检查 NAAT测志贺毒素基因
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肠道病毒的分类与检测摘要肠道病毒可引发多种感染，并且发病以综合症出现，一种综合症可有不同病毒所引起，同一种病毒可以导致不同综合症是肠道病毒感染的普遍现象。
目前除脊髓灰质炎外，尚无疫苗可供预防，是当前严重影响人类健康的重要病原之一。
肠道病毒主要经粪一口或呼吸道传播，所以对肠道病毒感染作出准确、及时的诊断是非常必要的。
肠道病毒（Enterovirus）是小RNA病毒科，有67个血清型。
人类肠道病毒包括：脊髓灰质炎病毒（Poliovirus）、柯萨奇病毒（Coxsackievirus）、埃可病毒（Echo）、甲型肝炎病毒以及新型病毒。
目前常用的检测肠道病毒的方法有病毒分离培养、血清学鉴定、分子生物学方法，近年来，一些新型方法也使得肠道病毒的检测快速化与准确化。
关键词肠道病毒/诊断/分类1 肠道病毒形态特点肠道病毒是球形、无包膜、核衣壳20面体立体对称。
肠病毒属病毒粒子在酸性pH下稳定，在病毒制品中可观察到空衣壳，有时可观察到少量（1%）的重颗粒。
基因组编码单一的VPg蛋白，但不编码L蛋白。
不同肠道病毒及肠道病毒与鼻病毒间整个核苷酸序列一致性大于50%，一种肠道病毒不同株之间整个核苷酸序列的一致性大于75%。
病毒主要在肠道细胞中复制，也能在神经、肌肉和其它一些组织中复制。
大多数病毒感染无明显症状，病毒感染的临床症状包括轻微脑膜炎、脑炎、肌炎、心肌炎和结缔组织炎。
耐酸和脂溶剂，不易被胃酸和胆汁灭活，在污水和粪便中活数月。
2肠道病毒的分类2.1脊髓灰质炎病毒此病症的典型临床经过六个阶段（潜伏期、前驱期、瘫痪前期、瘫痪期、恢复期和残留麻痹）。
感染期间患者表现为低热及咽痛、咳嗽、腹泻、不安、嗜睡、多汗、脑膜刺激症、肌肉疼痛、皮肤感觉过敏，突发急性弛缓性麻痹等症状，最后多遗留下终生残疾。
脊髓灰质炎病毒通过患者的粪便或口腔分泌物传染。
人类是脊髓灰质炎病毒的唯一宿主，长期携带病毒的情况（例如无症状，但仍持续排出病毒长达6个月以上）很罕见。
服用脊髓灰质炎疫苗（现在我国使用I、II、III型混合糖丸疫苗，是由减毒的脊髓灰质炎病毒制成的）是预防本病的主要措施。
消灭脊髓灰质炎最根本的手段是提高人群免疫水平，断绝脊髓灰质炎野毒株在人群中的传播。
脊髓灰质炎病毒分为三个血清型；两种不同抗原：D抗原和C抗原。
D（dense，致密）抗原：具有病毒RNA，为完整的病毒颗粒，又称N（native）抗原；C（coreless，无核心）抗原：不含RNA，是D颗粒经56 ℃灭活，RNA释放后形成的无核酸空心衣壳，故又称H（heated）抗原；不同型别病毒C抗原可发生交叉反应，但D抗原无交叉反应；传播方式主要是粪-口传播，所致疾病是脊髓灰质炎。
中毒机理：粪－口途径传播为主—上呼吸道，咽喉，肠道为侵入门户—先在局部粘膜和淋巴结中增殖—入血，形成第一次病毒血症—带有受体的靶组织（脊髓前角细胞、背根神经节细胞、运动神经细胞等）—在靶细胞中再次增殖后形成第二次病毒血症及临床症状。
检测方法第一是微生物学检查，检测方法：病毒分离检查：取咽漱液、粪便等样本，细胞培养出现CPE；血清学诊断：中和试验；病毒核酸测定。
第二是防治:口服减毒活疫苗或者注射灭活疫苗.2.2 柯萨奇病毒柯萨奇病毒[2]对乳鼠的敏感性很高，根据它们感染乳鼠产生的病灶，柯萨奇病毒可以分为a、b两组。
a组有23型病毒，b组有6型病毒。
A组病毒：诱发新生乳鼠弥漫性骨胳肌炎，导致驰缓性麻痹。
B组病毒：诱发新生乳鼠局灶性骨胳肌炎，导致痉挛性麻痹。
通过型特异性抗原，经中和试验。
Elisa方法等可以对各型进行鉴定。
所有的b组及a组的第9型有共同的组特异性抗原，在b组内病毒之间有交叉反应，但是a组病毒没有共同的组特异性抗原。
a组某些型别的型特异性抗原可在37℃引起人类O型红细胞凝集反应。
柯萨奇病毒A型感染潜伏期1-3天，上呼吸道感染，起病急，流涕、咳嗽、咽痛、发烧，全身不适。
典型症状为疱疹性咽峡炎，即在鼻咽部、会厌、舌和软腭部出现小疱疹，粘膜红肿，淋巴滤泡增生、渗出，扁桃体肿大，伴吞咽困难，食欲下降。
据调查（R0binson，1958）伴有口咽部疱疹和皮疹的急性热病中，79%为柯萨克A型病毒所致。
检测方法：1.病人体液（脑脊液、疱疹液、心包液、胸水等）分离出病毒即可确诊。
）2．恢复期血清出现抗体，或双份血清抗体效价增高4倍以上。
2.3 埃可病毒埃可病毒(ECHO)（ECHO-viruses）病毒即肠性细胞致病性人类孤独型病毒（enteric cytopatho-genic human orphan virus）。
只对人类有感染性，多发于夏、秋季，绝大多数是隐性感染。
ECHO病毒分为30多个型（1-34型，其中8、10、28、34型已归入其他病毒）。
各型致病力和致病类型也不同，如ECHO6、19型致病力较强，它类似于柯萨奇病毒B型引起急性胸痛和心肌病。
主要经口-粪途径传播，也可通过咽喉分泌物排除病毒经呼吸道传播。
病毒进入人体在咽部机肠粘膜细胞增殖后，侵入血流，形成病毒血症。
ECHO病毒感染的临床表现类似于风疹，第一孕季感染虽可累及胎儿，但很少引起畸形。
发病年龄2.5～33岁，常见的症状为上呼吸道感染、发烧、非化脓性脑膜炎和皮疹。
皮疹为斑丘疹或麻疹样皮疹，持续1～3天自然消退。
可从大便、咽分泌物和脑脊液中分离出病毒。
防治：埃可病毒疹尚无特殊疗法。
皮疹对症处理。
对易感的婴幼儿可注射丙球蛋白3～6ml，脊髓灰质炎减毒疫苗可干扰本病毒的感染。
ECHO-3，4，6，9，11型减毒活疫苗正在研制中。
目前尚未有特效治疗，主要采用对症和支持疗法。
静脉注射人血丙种球蛋白对新生儿严重感染可能有效，婴幼儿腹泻也有导致脱水及酸中毒的可能，须酌情给予输液治疗。
2.4 甲型肝炎病毒临床上表现为急性起病，主要表现为乏力、食欲减退、及肝功能异常，部分病例可出现黄疸。
甲型肝炎病毒主要通过粪口途径传播，传染源多为病人。
甲型肝炎的潜伏期为15-45天，病毒常在患者转氨酸升高前的5-6天就存在与患者的血液和粪便中。
发病2-3周后，随着血清中特异性抗体的产生，血液和粪便的传染性也随之消失。
从感染者的粪便中排出，通过不同的途径污染了食物和用具，又经过口侵入人体。
这就是甲肝病毒的传播方式。
2.5 新型病毒新型病毒指在1969年以后鉴定的除脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒、埃可病毒以外的几种小RNA病毒，主要包括68-71共四个血清型。
其中68型分离自下呼吸道感染者，69型分离自健康人肛门拭子，70型分离自急性出血性结膜炎患者，71型分离自无菌性脑膜炎患者的粪便和脑脊液。
EV70主要引起流行性出血性结膜炎；EV71感染主要引起手足口病，还可引起中枢神经系统和脊髓灰质炎样麻痹等多种神经系统疾病。
3 检测方法3.1 病毒分离培养利用组织培养技术从感染部位或传染源分离出病毒并鉴定其特异性血清型是病毒性疾病诊断的标准。
病人标本是最常采集的标本。
病毒培养对缩短抗生素治疗和住院期有积极作用，但是病毒的分离鉴定繁琐、费力、耗时，一般一周才能观察到细胞病理反应，而且许多肠道病毒不能进行细胞培养，或者可以培养但不出现细胞病理效应。
3.2 血清学鉴定[2]分离病毒和利用组合血清中和试验是对病毒定型的重要方法。
肠道病毒的血清学鉴定中，多选用组合血清。
此方法检测中不适用于早期诊断，可作为回顾性诊断；且由于肠道病毒血清型众多，临床使用检测价值有限，而多为流行病学采用。
3.3 分子生物学诊断3.3.1 PCR技术由于各型病毒具有共同基因组序列，也可检出几乎所有血清型。
PCR检测材料用量少、快速、灵敏度高且具有特异性，并可通过设计不同的引物进行病毒分型，用于检测相当宽的肠道病毒血清型。
卢亦愚[3]等人发明了用肠道病毒核酸荧光定量RT-PCR检测试剂盒及检测方法，灵敏度高，非常适用于如手足口病等有肠道病毒感染引起突发疫情的实验室早期诊断，该方法具有高特异性。
3.3.2 核酸杂交技术[4]由于EV各型间存在序列高度保守区，利用针对此保守区的通用互补脱氧核糖核酸(cDNA)核酸探针可进行大范围的EV诊断。
3.3 其他新型方法2000年，Notomi 等开发了一种新颖的恒温核酸扩增方法，即所谓环介导等温扩增法。
[5]该方法利用一种链置换DNA 聚合(BstDNApolymerase)和两对特殊的引物，特异地识别靶序列上的6 个独立区域，使反应在模板两端引物结合处循环出现环状单链结构，从而保证引物可以在等温条件下(65℃左右)与模板结合并进行链置换扩增反应。
RT-LAMP 检测方法在满足特异性同时，灵敏度可达到普通RT-PCR 法的10-100 倍，或荧光RT-PCR 法的1/10 或与之在同一水平。
优点：（1）高特异性（2）高灵敏度（3）鉴定简便（4）操作简单（5）快速、高效：整个扩增反应只需1-1.5小时[5]。
参考文献[1]腾峥，张曦上海市疾病预防控制中心微生物检验室肠道病毒的检测方法及评价[2]张素兰，张霞平柯萨奇病毒感染临床表现的多样性中国医学文摘[3]卢亦愚，严菊英，徐昌平浙江省疾病预防控制中心肠道病毒核酸荧光定量RT-PCR检测试剂盒及检测方法[4]杨秀惠，严延生肠道病毒诊断与分类[5]何雅青深圳市疾病预防控制中心 RT_LAMP技术在肠道病毒检测中的应用[6]赵化冰，尹光雅，赵宏中国人民武警警察部队医学院用环介导恒温扩增技术检测肠道病毒的引物组及检测体系。