HP1100高效液相色谱仪验证方案

一．验证方案起草说明

高效液相色谱是当今应用最为普遍的分析技术，HPLC系统通过可重现的溶剂输送、进样、高灵敏度检测及工作站的数据分析，可得到优异的定性和定量分析结果。为此，本化验室采用高效液相色谱法，对产品进行纯度检测、分析。整个检测过程从溶剂输送、检测到结果分析，全部由电脑控制，自动完成，溶剂脱气采用超声波脱气、进样由手动进样器完成。

二．验证方案简述

高效液相色谱法是用高压输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，经进样阀注入供试品，由流动相带入柱内，在柱内各成分被分离后，依次进入检测器，色谱信号由记录仪或积分仪记录。我们根据高效液相仪的使用要求,参考HP之OQ/PV以及实际需要对仪器以下关键参数进行测试，以确认HP1100系列高效液相色谱仪是符合设计要求的：1. 波长准确度测试2．氧化钬测试．3.检测器线性测试4．杂讯测试5.柱温箱温度准确性测试．6.流量准确性测试．7.手动进样器精确度与交叉污染测试．三．验证报告的编写和批准签名．

1．验证小组成员

四．验证目的：

确认HP1100高效液相色谱仪符合设计要求，能为中间产品检测提供准确的分析数据。五．验证范围：

1．通过波长准确度测试,氧化钬测试，确认UV检测器的波长准确度。

2.通过检测器线性测试，确认检测器在操作吸收度范围内（最大到2AU）有线性应答关系。

3.通过杂讯测试，确认检测器及单元泵系统之系统杂讯操作在可接受的规范。

4.通过柱温箱温度准确性测试, 确认柱温箱的温度在合格规范内是准确的.

5.通过流量准确性测试/精确度测试，确认泵系统所输送的溶剂体积在可接受规范值内，且

无大的流量误差。

6．通过进样器精确度与交叉污染测试，确认手动进样器的精确度在可接受的标准范围内，各次注射间样品的交叉污染（前次注射所造成的样品污染）在可接受范围之内。

六．名词解释

RSD% 相对标准偏差，本方案中主要是计算标准A前5针的相对标准偏差。

RSD%≤2.0%。

D% 相对偏差的绝对值,本方案中D是标准A5针校正因子的平均值A与标准B3针校正

因子平均值B的相对偏差的绝对值，D%＜2.0%。

检测限（LOD）试样中被测物能被检测的最低量，以信噪比为2：1时，相应浓度确定检测限。定量限（LOQ）试样中被测和能被定量测定的最低量，以信噪比为10：1时，相应浓度确定量限。

W/W 用已确定的检测限或定量限与样品检测时的浓度（250.0mg/ul）比较，得到的比值。

分离度R 谱图中相邻两峰的分离度。

七.相关文件

文件名称存放位置

八．验证具体步骤

8．1．验证用仪器、设备的校正

HP1100高效液相色谱仪，包括：

单元泵：手动进样器：柱温箱: VWD多波长检测器：8.1.1仪器情况

填表人/日期：

8.1.2验证用仪器校正情况和结果

填表人/日期：

8.2验证用试剂的准备

部门：填表人/日期：

8．3验证步骤

8.3．1验证的准备工作

（1）将限流毛细管（HP物料编号5022-2159 ）安装到装色谱柱位置。

（2）开始OQ/PV程序前24小时打开检测器灯管，达到最佳的检测器稳定性的状态。

（3）将管道A注入纯水。

（4）打开分析管柱温控箱的开关，将两个热交换器的温度设定在40℃。

（5）把温度表探头安装在柱温箱的热交换器上。

（6）打开清洗阀，以5ml/min流速将A管道至少清洗10分钟以上。

（7）关闭泵与清洗阀。

（8）调节流量1.0ml/min的纯水（100%）通过检验器，继续其他安装程序待系统达到平衡。

（9）将OQ/PV咖啡因标准品依照表1的位置装到手动进样器旁边。

8．3．2 波长准确度测试

原理

波长的准确度可利用测定一已知其光谱的化合物来加以得知。在特定的波长下，光谱内某一特定波段一定会出现，此一波段与特定波长的偏差则可视为检测器的不确度。本测试所用的标准品为浓度25ug/ml的咖啡因溶液。咖啡因在272 nm波长时有最大吸收，而在244 nm有最小吸收，这两个波长即用以验证UV检测器的波长准确度。

可变波长检测器（VWD）：

先在水流过检测器、流动池时作一空白扫描，然后以自动进样方式将咖啡因注入流动池中。

作波长扫描，空白光谱会自动扣除。

设备

HP1100系列的单元泵，手动进样器，配有温度控制之可变波长检测器。

测试条件

方法：HP OQ/PV之波长准确性测试

.流动相A：纯水。流量1.0 ml/min。

. 柱温箱温度：40℃。

.限流毛细管2M*0.12mm i.d.

. 标准品#3（25ug/ml）咖啡因，用注射器按编号注射到手动进样器里。

.运行方法，其结果自动记录并显示测试结果。

测试评估

所测得最大/最小波长与预期的最大/最小波长之间的偏差会自动计算，测得结果列入OQ/PV报告中。

认可标准及结果

签名/日期：复核/日期：

8. 3. 3 Holmium Oxide 氧化钬测试(检测器)

原理

检测器波长校正准确度可以借助测量一已知化合物的光谱来加以求取，在特定波长下，光谱应该显示特定的波段，此一波段与给定波长间的差值，即可视为检测器的不准确度，内建具有最大特性吸收的氧化钬滤光器则可用于决定波长准确度。

可变波长检测器（VWD）：VWD利用下列氧化钬的三个最大波长来测定波长准确度：. 360.8nm

. 418.5nm

. 536.4nm

氧化钬测试会进行内建氧化钬滤光器的扫描,求取最大吸收波长与期望波长之差值, 为了避免吸收溶剂的效应，此一测试是在流动池充满水的情况下进行。

设备

HP1100系列的单元泵，手动进样器，配置Chemstation 控制的可变波长VWD检测器认可标准

波长准确性≤2.0nm

测试条件

方法：HP OQ/PV之氧化钬测试.

. 纯水置于管线A中

. 100% A，流量1ml/min

. 限流毛细管2M*0.12mm i.d.

. 柱温箱之温度：40℃。

测试评估

准确度可由最大吸收时的测量波长与理论波长的偏差来检定。在特定波长范围内, 测出最小及最大光源强度，并自动与合格规范值作比较，结果将列验证报告中。