少突胶质前体细胞缺血缺氧损伤模型的建立
脑缺氧缺血时少突胶质细胞损伤的机制
清除率是碱性尿时的!"#倍$尿流量大时对美金胺的清除率高%提示应用美金胺时$尽量避免能够改变尿液&’值的一些饮食习惯$可更好发挥其治疗效应$而减少副反应的发生()*+%综上所述$鉴于美金胺作为治疗帕金森病的首选药物已在欧洲广泛应用),余年$罕见副作用报道()-+$同时$美金胺作为低亲和力的非竞争性./01受体拮抗剂$又具有良好的神经保护作用$因此$对今后作为治疗新生儿缺氧缺血脑损伤无疑具有潜在的重要意义%但目前对美金胺的安全性和有效性的研究$仅限于成年动物实验和成人的临床实验$有关美金胺对新生动物脑缺氧缺血性损伤的保护作用及其可能的毒副作用$尚有待进一步研究%随着美金胺在新生动物脑缺氧缺血损伤方面的研究不断深入$有关美金胺用于新生儿缺氧缺血性脑损伤的临床治疗必将有所突破%(参考文献+()+122345678$9:;65<267=$/>22670$?@A B C ./0176:6&D E 7:;474:D 675F 4D 5E G 4G H I J <J G 5D 6K &76I I 5E G 5G 74D :J 2D J 76H L 6I 6G :6&;425:G 6J 7E G 6I (M +C N 7M=;47L 4:E 2$)O O O $)P Q R )S T )P )")U ,C(P +V E W 73J 2J W 1$X 5G I Y $8E <4G E 32J9$?@A B C Z 6H J :D 5E GE [6H 6L 44G H5G [47:D 5E G <\L 6L 4G D 5G 64G H /X ]#,)4[D 67[E :42:676<7425I :;6L 544G H76&67[J I 5E G5G74D (M +C 1:D 4.6J 7E :;57$P ,,,$)-P R ))S T )P #!")P O P C(U +N 76I 5G ^_$N 6G ^6Y 1$8E 226D D ‘M $?@A B C a [[6:D I E [L 6L 4G D 5G 6E G76:E L <5G 4G D74D./0176:6&D E 7I6K &76I I 6H 5G ’a X P O U :622I (M +C N 7M =;47L 4:E 2$)O O Q $))O R P S T )O *"P ,-C (-+N 24G &56H Y 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),万方数据要作用!少突胶质细胞的前体细胞主要来源于前脑脑室下区"#$%&’()!依据抗原表达*形态和功能+少突胶质细胞系可分为先祖细胞*早期少突胶质祖细胞*晚期少突胶质祖细胞*未成熟少突胶质细胞*成熟少突胶质细胞+共,个发育阶段!二*少突胶质细胞的缺氧缺血损伤(-少突胶质细胞成熟依赖的易损性.少突胶质细胞几乎和神经元一样对缺氧缺血敏感+其对缺氧缺血的易损性与细胞成熟程度有关!实验证实+晚期少突胶质祖细胞和未成熟少突胶质细胞在缺血启动后迅速死亡+平均死亡时间和死亡百分数显著高于成熟少突胶质细胞"/01-11(&+对缺血的敏感性高于以往所检测的任何中枢神经系统细胞+包括神经元’2)!晚期少突胶质祖细胞对缺氧缺血的敏感性高于未成熟少突胶质细胞!这两种对缺氧缺血最敏感的少突胶质细胞是胚胎后期少突胶质细胞系的主要组成部分!早期少突胶质祖细胞和成熟少突胶质细胞对缺氧缺血较为耐受’3)!2-少突胶质细胞缺氧缺血损伤.在大鼠缺氧缺血模型中+#$%的神经干细胞及少突胶质祖细胞死亡+造成慢性白质少突胶质细胞衰竭+髓鞘形成不良!顶叶皮层*皮质下白质*脑室周围白质*胼胝体等部位均有明显少突胶质细胞死亡+随后胼胝体变薄+脑室扩大+增生的星形胶质细胞取代脑室周围白质中少突胶质细胞’(+34,)!细胞死亡的电镜分析显示+缺氧缺血后56以坏死为主+54256脑室周围白质受损少突胶质细胞由早期坏死过渡到具有坏死*凋亡两种形态特征的混合性细胞死亡+再到经典的凋亡’5)!缺氧缺血后(26#$%中以混合性细胞死亡为主+至256发现典型的凋亡细胞’()!但有学者发现缺氧缺血后3456缺血侧#$%*胼胝体中凋亡细胞高于对侧’,)!损伤区周围有少突胶质细胞反应性增生+可能参与修复过程’3)!三*少突胶质细胞缺氧缺血损伤机制(-少突胶质细胞兴奋毒性损伤.兴奋毒性指以谷氨酸受体"789:;&为主的兴奋性神经递质受体过度活化引起的神经细胞死亡!少突胶质细胞表达的789:;主要是非<=>?@789:;"?=A?和B C D E C F G受体&!缺氧缺血时轴突和神经胶质释放谷氨酸"789&!通常认为+从神经末梢释放出789清除和失活的唯一途径是通过位于突触前膜和神经胶质细胞膜上的兴奋性氨基酸转运体"H??I&的摄取而实现的!H??I 对789的摄取顺<C J浓度梯度进行+是<C J依赖的耗能过程!缺氧缺血使能量供应受阻+加上强烈去极化反应使脑内<C J浓度急剧增高+最终可造成789顺胞内<C J逆向转运+从胞内排向胞外’2)!局部789浓度显著增加使?=A?KB C D E C F G受体过度活化介导L C2J内流+导致细胞内L C2J超载+同时消耗谷胱苷肽并活化L@M9E<@F G N O D E C8B D E C;G"M<P&*L C;Q C;G@3*钙激活蛋白酶引起少突胶质细胞死亡’R)!兴奋毒性可同时引起细胞坏死和凋亡!2-氧自由基导致的少突胶质细胞损伤.脑缺血产生大量氧自由基"S T:&并造成少突胶质细胞损伤!少突胶质细胞对S T:损伤高度敏感!与星形胶质细胞和神经元相比+少突胶质细胞中含有丰富的铁和铁蛋白+而还原型谷胱苷肽含量和谷胱甘肽过氧化物酶活性低!一方面少突胶质细胞中的铁蛋白和转铁蛋白可作为铁螯合剂和抗氧化物保护细胞U另一方面+少突胶质细胞缺氧缺血+促使铁蛋白和转铁蛋白释放铁+通过V G E F W E反应和X C Y G N@ZG D;;反应产生大量S T:+引发脂质过氧化"[A S&!还原型谷胱苷肽在S T:清除中起关键性作用!过氧化物由谷胱苷肽过氧化物酶清除’\+])!由于少突胶质细胞内铁含量高+清除自由基能力弱且显著依赖于氧化磷酸化+少突胶质细胞更易受到氧化应激损伤!由此引发的链式脂质过氧化反应损伤细胞膜和线粒体膜+而产生的脂质过氧化物和细胞毒性副产品5@6^_N W‘^E W E G E C8等+对轴突和少突胶质细胞也具有毒性!X W88G E;a W N F6等认为氧化应激还可能损伤线粒体><?+从而增加L^F@b释放+激活b C;Q C;G@ c+启动凋亡反应’c)!3-线粒体损伤与少突胶质细胞损伤.缺血条件下+胞浆内L C2J浓度升高+线粒体从胞浆摄取L C2J+以避免胞浆L C2J 过高造成细胞损害!高浓度L C2J可损害线粒体功能+使氧化磷酸化效率降低+?I A合成减少+而线粒体钙释放过程是耗能过程!线粒体呼吸功能障碍和?I A耗竭加速和促进L C2J 浓度增加并活化L C2J依赖性蛋白水解酶系统如b C8Q C D E;! L C8Q C D E;可激活b C;Q C;G;+相反b C;Q C;G;可通过剪切内源性蛋白水解酶抑制剂b C8Q C;F C F D E来激活b C8Q C D E;!两类蛋白酶都能引起线粒体渗透性转运的发生并灭活L C2J顺序性运转系统+从而循环增加L C2J浓度和活化L C2J依赖性蛋白水解酶!同时+L C2J过量*氧化应激使线粒体通透性改变"A I&+发生不可逆性损伤+能量来源完全丧失+线粒体膜间腔内的多种潜在有害蛋白释放至胞浆+包括b C;Q C;G前体+b C;Q C;G激活剂L d F@b+具有裂解><?能力的凋亡诱导因子"?e T&*核酸内切酶7等+诱导细胞死亡U线粒体释放其积聚的L C2J+使脑浆L C2J剧烈升高+激活胞浆内各种蛋白水解酶和磷酯酶+促使细胞死亡’c+(1)!5-b C;Q C;G;与少突胶质细胞损伤.b C;Q C;G;是一组天门冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶+属e L H蛋白酶家族+被激活后发生连续的级朕反应+导致凋亡发生!缺氧后少突胶质细胞中有b C;Q C;G@3活化+但其活化程度低于神经元!肌动蛋白"?b F D E&是一种主要的细胞骨架蛋白+经b C;Q C;G@3介导裂解为肌动蛋白碎片"V N C b F D E&+缺氧缺血后大量固缩晚期少突胶质祖细胞有明显V N C b F D E标记+提示b C;Q C;G@3参与少突胶质细胞缺氧缺血损伤’3)!b C;Q C;G@((是b C;Q C;G@(和b C;Q C;G@3活化的一种启始因子+在少突胶质细胞缺氧缺血损伤中起着关键的作用’(()!,-小胶质细胞*巨噬细胞活化与少突胶质细胞损伤.脑缺氧缺血后+小胶质细胞*巨噬细胞被激活+它们通过释放一系列潜在的神经毒性物质和炎性因子+如S T:*789*一氧化氮"<S&*肿瘤坏死因于@f"I<T@f&等+造成少突胶质细胞损伤!同时+活化的小胶质细胞吞噬死亡神经细胞残骸和变性突触+分泌多种神经营养因子+并表达细胞调亡的负调控因子Y b(@2+发挥神经保护作用’,+(2)!脑缺血后小胶质细胞*巨噬细胞活化的确切作用尚待进一步研究!g(3]g实用儿科临床杂志2113年(1月第(]卷第(1期hi j j k l k m n/o p m q r s+t u r v w o s2113+x v k-(]yv-(1万方数据!"少突胶质细胞成熟依赖的易损性机制#前面已提到$不同发育阶段的少突胶质细胞对缺氧缺血的易损性不同%晚期少突胶质祖细胞和未成熟少突胶质细胞最为易损%这种成熟依赖的易损性机制还不太清楚%近来&’(’)*(+等研究发现$,-.,受体的/0*123/0*14亚单位表达在少突胶质祖细胞和未成熟少突胶质细胞中短暂上调可能与此有关%,-.,受体在非5-6,受体介导的兴奋毒性损伤中起主要作用%但并非所有,-.,受体均能介导7’89内流%/0*1: ;4是组成,-.,受体的4种亚单位%缺乏/0*18亚单位的,-.,受体对7’89具有通透性%/0*1:在各阶段的少突胶质细胞中表达极低</0*18表达稳定</0*12在早期少突胶质祖细胞中发达最高$随后逐渐下降</0*14在少突胶质祖细胞和未成熟少突胶质细胞中表达最高$发育为成熟少突胶质细胞后逐渐降低%离体培养的各期少突胶质细胞经/0*18抗体处理后$晚期少突胶质祖细胞和未成熟少突胶质细胞中/0*123/0*14剩余最多%如果,-.,受体的各种亚单位随机组合$在晚期少突胶质祖细胞和未成熟少突胶质细胞中形成无/0*18亚单位受体的数量最多%此外$少突胶质细胞中含有/1=.$帮助/0*18和/0*12在,-.,受体中组装%因此$/0*14对于7’89通透的,-.,受体可能更为重要%实验发现$早期少突胶质祖细胞,-.,受体的7’89电导高于晚期少突胶质祖细胞和未成熟少突胶质细胞$但由于后者浆膜表面积约为前者8倍$通过,-.,受体的总7’89流明显高于前者%由于,-.,受体的/0*123/0*14亚单位表达短暂上调和较高的总7’89流$晚期少突胶质祖细胞和未成熟少突胶质细胞对缺氧缺血更具易损性%而先祖细胞的,-.,受体几乎均表达/0*18亚单位$对7’89不通透%与少突胶质祖细胞和未成熟少突胶质细胞相比$成熟少突胶质细胞中/0*123/0*14表达下降$,-.,受体7’89电导明显降低$所以对缺氧缺血更为耐受>:2?%此外$离体实验证实$少突胶质细胞对氧化应激的易损性也是成熟依赖的>:4?%总之$缺氧缺血后通过兴奋毒性3氧化应激及一系列级联反应造成少突胶质细胞死亡%阐明脑缺氧缺血后少突胶质细胞损伤机制将为脑缺氧缺血相关疾病的治疗提供新思路%四3药物治疗脑缺氧缺血实验显示$非@5-6,受体拮抗剂75A B或5C A B3谷氨酸逆向转运抑制剂6D,3钙离子拮抗剂3自由基清除剂3E’F G’F H@2抑制剂6I J6@7K L3E’0G’+M抑制剂.6:N O!O!等可明显减轻脑缺氧缺血后少突胶质细胞的损伤$离体实验显示去铁敏可减轻过氧化氢引起的少突胶质细胞损伤>8$!$:N?%>参考文献?>:?P H Q+F R M S T$1R U V F U H+M1.$1R W’M(R-X$Y Z[\"K)G R]+’^+F E V H W+’_H G0H U H FU V H‘’UG H‘+M’U’0F*a Q H M U‘+E*0’‘b R M H R cR0+d R_H M_‘R E)U HG‘R d H M+U R‘F’M_M H*‘’0F U H W E H00F>X?"6H Q5H*‘R F E+$8O O:$82e2f#824;84g">8?h H‘M1$-R i00H‘&"1’G+_+F E V H W+EE H00_H’U V+M+W W’U*‘H R0+d R_H M_‘R E)U H F#’c’U’0d0*U’W’U H‘H0H’F H c H H_a’E(0R R G>X?"X5H*‘R F E+$8O O O$8O e:f#24;48">2?C’E(S,$K’MC K$P*R5P$Y Z[\"S H0H E U+Q H Q*0M H‘’a+0+U)R c0’U H R0+d R_H M_‘R E)U H G‘R d H M+U R‘F U R V)G R]+’@+F E V H W+’>X?"X5H*‘R F E+$8O O8$88e8f#4N N;4!2">4?5H F F X D$1R W’M(R-X$1R U V F U H+M1.$Y Z[\".H‘+M’U’0V)G R]+’@ +F E V H W+’+M_*E H F’G R G U R U+E’M_H]E+U R U R]+E_H’U V R cG H‘+Q H M U‘+E*0’‘j V+U H W’U U H‘R0+d R_H M_‘R E)U H G‘R d H M+U R‘F>X?"6H Q5H*‘R F E+$8O O:$82e2f#8O2;8O k">N?7’+l$.’M dm$B+’Rh$Y Z[\"7V‘R M+E+F E V H W+’G‘H c H‘H M U+’00) E’*F 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PEDIATRICS年，卷(期)：2003,18(10)被引用次数：10次参考文献(14条)1.Levison SW;Rothstein RP;Romanko MJ Hypoxia/ischemia depletes the rat perinatal subventricular zone of oligodendrocyte progenitors and neural stem cells[外文期刊] 2001(03)2.Fern R;Mller T Rapid ischemic cell death in immature oligodendrocytes:a fatal glutamate release feedback loop 2000(01)3.Back SA;Han BH;Luo NL Selective vulnerability of late oligodendrocyte progenitors to hypoxia-ischemia 2002(02)4.Ness JK;Romanko MJ;Rothstein RP Perinatal hypoxia-ischemia induces apoptotic and excitotoxic death of periventricular white matter oligodendrocyte progenitors[外文期刊] 2001(03)5.Cai Z;Pang Y;Xiao F Chronic ischemia preferentially causes white matter injury in neonatal rat brain[外文期刊] 2001(01)6.Liu HN;Giasson BI;Mushynski WE AMPA receptor-mediated toxicity in oligodendrocyte progenitors involves free radical generation and activation of JNK,calpain and caspase 3[外文期刊] 2002(02)7.Juurlink BH Response of glial cells to ischemia:roles of reactive.oxygen species and glutathione [外文期刊] 1997(02)8.Juurlink BH;Thorbume SK;Hertz L Peroxide-scavenging deficit underlies oligodendrocyte susceptibility to oxidative stress[外文期刊] 1998(04)9.Hollensworth SB;Shen C;Sim JE Glial cell type-specific responses to menadione-induced oxidative stress[外文期刊] 2000(08)10.Ravagnan L;Roumier T;Kroemer G Mitochondria,the killer organelles and their weapons[外文期刊] 2002(02)11.Shibata M;Hisahara S;Hara H Caspases determine the vulnerability of oligodendrocytes in the ischemic brain[外文期刊] 2000(05)12.Jamin N;Junier MP;Grannec G Two temporal stages of oligodendrogliaI response to excitotoxic lesion in the gray matter of the adult rat brain[外文期刊] 2001(1)13.Itoh T;Beesley J;Itoh A AMPA glutamate receptor-mediated calcium signaling is transiently enhanced during development of oligodendrocytes[外文期刊] 2002(02)14.Back SA;Gan X;Li Y Maturation-dependent vulnerability of oligodendrocytes to oxidative stress-induced death caused by glutathione depletion 1998(16)本文读者也读过(10条)1.王梅.王友群缺血引发的脑损伤发病学机理[期刊论文]-中国实用医药2008,3(25)2.卓名.陈鸿莲.蔡娜丽.张振英.叶国杰.ZHUO Ming.CHEN Hong-lian.CAI Na-li.ZHANG Zhen-ying.YE Guo-jie 黄芪注射液对新生儿缺氧缺血性脑病的临床与免疫学机制研究[期刊论文]-中国中西医结合急救杂志2008,15(1)3.孙莉.张昱.邹昕颖.金涛.吴江.姚丽芬慢性前脑缺血致痴呆大鼠皮质及皮质下白质区病理学变化的对比研究[期刊论文]-中风与神经疾病杂志2004,21(5)4.陈春富.郭述苏脑缺血缺氧后少突胶质细胞损伤[期刊论文]-国外医学(脑血管疾病分册)2002,10(2)5.王斌.李敏.侯建平.张恩户基于多靶标调控策略的中医药防治脑缺血炎性损伤机制研究[会议论文]-20096.汪长胜.霍正禄.杨瑞和脑白质选择性缺血损伤的机制[期刊论文]-国外医学(脑血管疾病分册)2001,9(6)7.赵金辉.赵娟.刘敬.贺继雯.王琪.ZHAO Jin-hui.ZHAO Juan.LIU Jing.HE Ji-wen.WANG Qi血浆渗透压、血气、血糖变化与早产儿脑室周围-脑室内出血的相关性[期刊论文]-实用儿科临床杂志2005,20(2)8.汪长胜.霍正禄.杨瑞和脑缺血后白质保护的研究进展[期刊论文]-国外医学(脑血管疾病分册)2002,10(1)9.唐康.张均田脑缺血损伤机制和治疗策略研究进展[期刊论文]-中国新药杂志2000,9(12)10.常明则.王新来.吴海琴.赵英贤慢性脑缺血痴呆大鼠额叶细胞凋亡的研究[期刊论文]-疑难病杂志2008,7(11)引证文献(10条)1.马金凤.林宏华.刘维民.吴成.阮珊三早产儿脑室周围-脑室内出血的临床相关因素分析[期刊论文]-安徽医科大学学报 2009(5)2.徐翠琼.张奇.邵红.费世暖.黄佩脑活素及血活素治疗新生儿缺氧缺血性脑病的临床观察[期刊论文]-时珍国医国药 2004(9)3.黄金芳.梁凤华.彭间英早产儿脑室内出血原因分析及护理[期刊论文]-中国保健营养（中旬刊） 2012(6)4.闫晋.贾雁平.陈欣早产儿脑室内出血相关因素分析及护理[期刊论文]-中国实用护理杂志 2009(24)5.潘广赉.杨明.莫坤梅.李文仲床旁彩超对早产儿脑室内出血的诊断价值[期刊论文]-齐齐哈尔医学院学报2009(10)6.卢昌福早产儿室内出血的临床分析及防治[期刊论文]-中国医药导报 2008(20)7.李晋辉.母得志.李德渊.夏斌.熊英早产儿脑室内出血的相关因素[期刊论文]-实用儿科临床杂志 2007(2)8.谢学军.杨红.何宇.王毅.肖丹补肾活血中药对糖尿病大鼠视路胶质纤维酸性蛋白和髓鞘碱性蛋白表达的影响[期刊论文]-中国中医眼科杂志 2007(5)9.杨友.陈惠金.钱龙华.蒋明华.陈冠仪血糖水平对缺氧缺血新生大鼠脑内葡萄糖转运蛋白1合成的影响[期刊论文]-实用儿科临床杂志 2004(2)10.彭小明.高喜容.孙正香.胡月圆.张榕早产儿重度脑室周围-脑室内出血临床高危因素分析[期刊论文]-中国新生儿科杂志 2011(6)引用本文格式：王丽雁.赵聪敏脑缺氧缺血时少突胶质细胞损伤的机制[期刊论文]-实用儿科临床杂志 2003(10)。
新生大鼠大脑皮层少突胶质前体细胞的培养分离及鉴定
新生大鼠大脑皮层少突胶质前体细胞的培养分离及鉴定【摘要】［目的］探讨新生（spraguedaley,SD）大鼠大脑皮层少突胶质前体细胞在体外条件下的生长情况及培养分离，以获得纯化的少突胶质前体细胞，为今后细胞移植治疗研究提供良好的种子细胞。
［方法］出生48hSD大鼠取大脑皮层进行混合胶质细胞的体外培养，原代培养第9～10d时采用水平振荡、差速贴壁的方法分离、纯化少突胶质前体细胞，继续用定向培养基传代培养。
相差显微镜观察少突胶质前体细胞在体外条件下的生长情况，免疫细胞化学技术进行细胞鉴定。
［结果］混合胶质细胞原代培养第9～10d时出现明显的细胞分层，少突胶质前体细胞散布于单层的星形胶质细胞表面，胞体呈椭圆形或圆形，具有典型的双极突起，少数呈三极突起。
经振荡分离后少突胶质前体细胞纯度达95％，少突胶质细胞特异性标记lig2反应阳性，胶质纤维酸性蛋白抗体反应阴性。
［结论］新生SD大鼠大脑皮层原代培养中少突胶质前体细胞能够维持在未成熟阶段，细胞分层后通过振荡法及差速贴壁法可以获得较高纯度的少突胶质前体细胞。
【关键词】少突胶质前体细胞;细胞培养；脱髓鞘化；脊髓损伤Keyrds：ligdendrytepreursrell;ellulture;deyelinatin;spinalrdinjury脊髓损伤是一种常见的中枢神经系统损伤，可以造成患者严重的神经功能损害。
目前，临床上尚无有效办法治疗脊髓损伤。
随着研究深入，人们对于脊髓损伤的病理过程有了更进一步的认识。
脊髓损伤不仅导致神经元丢失，同时还造成大量少突胶质细胞的死亡，从而引起残留神经轴突的脱髓鞘改变，进一步影响了脊髓神经功能的恢复。
近来不少研究显示通过髓鞘形成细胞移植治疗脊髓损伤，有利于脱髓鞘轴突的再髓鞘化，促进损伤脊髓的神经功能恢复［1,2］。
研究表明，少突胶质细胞不仅形成髓鞘包绕轴突，同时它还起着为其他神经细胞提供营养因子、促进轴突生长等作用［3］。
此外，少突胶质前体细胞是处于分化早期阶段的未成熟细胞，既能够定向分化为成熟少突胶质细胞，同时又具有一定的增殖与迁移能力［4］，更加适合于细胞移植治疗。
抗氧化系统发育与少突胶质细胞损伤作用的研究进展
而 导致 Ｏ Ｌ受 损 ， 引起 各 种 神 经 发 育类 疾 病 的 发 生 。
为 了更好 地认 识该 类疾 病 的发 病 机制 ， 研究 Ｏ Ｌ的损 伤 机制 就具 有极其 重要 的意 义 。
一
ｉ ｍ ｍａ ｔ ｕ ｒ ｅ Ｏ Ｌ重 叠分 布于脑 室周 围 区域 ， 因此 ， 该 时 期
负责 清除 Ｈ Ｏ ： ， Ｇ Ｓ Ｈ —Ｐ ｘ同 时 清 除 Ｈ Ｏ ：和过 氧化
Ｏ Ｌ起 源 于胚胎 神 经 管 的 神 经上 皮 细 胞 ， 主要 功
能是 在 中枢 神经 系统 中包绕 轴 突 、 形成 绝缘 的髓 鞘结 构、 协 助神 经 电信 号 的跳 跃 式快 速 传 递 ， 维 持 和保 护
突 胶质 细胞 （ ｉ ｍ ｍａ ｔ ｕ ｒ ｅ Ｏ Ｌ ） 、 成 熟 少 突胶 质 细 胞 （ ｍａ —
ｔ ｕ ｒ ｅ Ｏ Ｌ ） 这 ４个 发 育 阶段 。 然 而 不 同 发 育 阶 段 抗
氧 化能力 差别 很大 ， 通过 对 不 同发 育 阶段 Ｏ Ｌ的特 异 性 细胞表 面抗 原进行 分析 ， 发 现晚期 少 突胶质前 体 细 胞或 ｐ ｒ ｅ—Ｏ Ｌ是 打 破 抗 氧 化 系 统 平 衡 的 主 要 靶 细
体外少突胶质细胞培养的新方法
体外少突胶质细胞培养的新方法翁超;丁曼;樊尚华;董红娟;卢祖能【摘要】目的探讨小鼠鼠婴大脑皮质体外少突胶质细胞培养的新方法.方法取C57/BL6新生小鼠P0～P2(出生后0～2天)的大脑皮质,accummax室温消化10min,然后用含10％ FBS的DMEM/F-12高糖培养基体外培养,培养至第7天时,运用巴氏管吹打,从混合培养的细胞中分离纯化少突胶质前体细胞,然后加入促分化培养基促使少突胶质前体细胞分化发育成熟,行细胞免疫荧光进行鉴定.结果少突胶质前体细胞纯度较高,达到93.3％左右.加入促分化培养基后,少突胶质前体细胞可快速分化发育成熟.结论该体外少突胶质细胞培养方法较简单,细胞纯度及产量高,对临床脱髓鞘疾病的研究具有很大的应用价值.%Objective To explore a new method for oligodendrocyte cell culture from neonatal mouse cerebral cortex in vitro.Methods We selected P0-P2 (0-2 days after birth) cerebral cortex from C57/BL6 neonatal mice,and digested the tissue at room temperature for 10 minutes through accummax,then used DMEM/F-12 medium with high glucose containing 10％ FBS to culture the mixed cells in vitro.After the celles being cultured for 7 days,we used pap tube for pipetting,and purified oligodendrocyte precursor cell (OPCs) from mixed cultured cells.Finally,with oligodendrocyte differentiation medium to promote oligodendrocyte differentiation and maturation,cell lines were identified by immunofluorescence.Results Our approach produced a high yield of purified OPCs,which was about 93.3％.The oligodendrocyte differentiation medium promoted oligodendrocyte differentiation and maturation quickly,when it was added.Conclusion The new method foroligodendrocyte cell culture in vitro is relatively simple with high purity and can produce a high yield of OPCs,which is of great value for clinical demyelinated diseases.【期刊名称】《医学研究杂志》【年(卷),期】2017(046)004【总页数】4页(P48-51)【关键词】少突胶质细胞前体细胞;纯化;增殖;分化【作者】翁超;丁曼;樊尚华;董红娟;卢祖能【作者单位】430060 武汉大学人民医院神经内科;430060 武汉大学人民医院神经内科;430060 武汉大学人民医院神经内科;430060 武汉大学人民医院神经内科;430060 武汉大学人民医院神经内科【正文语种】中文【中图分类】R74;R3少突胶质细胞(oligodendrocyte, OL)是中枢神经系统(central nervous system, CNS)髓鞘形成细胞。
细胞缺氧复氧模型的建立方法与应用
3、统计分析
3、统计分析
运用统计分析方法对实验结果进行处理，可以得出更准确的结论。例如，可 以通过t检验或方差分析等方法，比较各组之间的差异。同时，可以通过相关分 析和回归分析等手段，探讨缺氧复氧模型中各因素之间的相互关系和影响程度。
三、应用领域
1、神经科学
1、神经科学
细胞缺氧复氧模型在神经科学领域具有广泛的应用价值。例如，可以用于研 究脑缺血和脑梗塞等疾病的发生机制和治疗方法。通过模拟缺氧和再灌注过程， 探讨神经细胞的损伤和修复机制，为临床治疗提供理论依据。
四、未来展望
在此基础上，推进细胞缺氧复氧模型在药物研发、疾病治疗等方面的应用， 为人类健康事业做出更大的贡献。
参考内容
摘要
摘要
细胞缺氧复氧模型是一种用于研究细胞在缺氧条件下代谢和功能变化的实验 模型。近年来，该模型在多个领域如医学、工业和基础研究中得到了广泛应用。 本次演示将综述细胞缺氧复氧模型建立方法的最新研究进展，包括模型建立、应 用、存在的问题和未来发展方向。
四、未来展望
四、未来展望
随着科技的不断进步，细胞缺氧复氧模型将在更多领域得到应用，同时也会 面临一些挑战。未来，需要进一步探索细胞缺氧复氧模型的分子机制，深入研究 不同因素对细胞的影响，以便更好地应用于临床实践。此外，需要加强跨学科合 作，综合运用多学科知识，提高模型的可重复性和可靠性。应注重动物实验和临 床试验的研究设计，确保实验结果的准确性和可靠性。
一、建立细胞缺氧复氧模型
1、细胞培养
1、细胞培养
细胞缺氧复氧模型可以通过细胞培养的方法建立。首先，选取适当的细胞类 型进行培养，例如神经细胞、肿瘤细胞等。在培养过程中，通过控制培养条件的 氧气浓度和温度等因素，模拟缺氧环境。细胞在缺氧环境下生存一定时间后，再 恢复正常的氧供应，观察细胞的变化。
槲皮素保护少突胶质前体细胞缺氧低糖损伤的体外研究
３ ８・ ３
中国药理 学通报
Ｃ ｉ ｓ Ｐ ａｍ ｃｌ ｉ ｌ ｕｌｉ ０ １Ｍａ；７ ３ ：３ ４ ｈｎ ｅ ｈ ｒ ａｏ ｇｃ ｌｔ ２ １ ｒ２ （ ）３ ８— １ ｅ ｏ ａ Ｂ ｅｎ
槲皮素保护少突胶质前体细胞缺氧低糖损伤的体外研究
王 兴启 ， 刘 轩 ， 丽华 ， 红丽 ， 杨 于 翟 ， 刘 静， 姚瑞 芹
化 病 。 （ ｅｉｅｔｃ ｌ ｕ ｏ ｌｃ ， Ｖ ） Ｐ ｓ 。 ｐ ｒ ｎｒ ｕａ ｌ ｋｍａ ｉ Ｐ Ｌ 。Ｏ Ｃ ｖ ｉ ｒｅ ａａ
受 损和 神 经纤 维 脱 髓 鞘 是 Ｐ Ｌ的最 大特 征 。 中枢 Ｖ 神 经 系统能 够通过 诱 导 Ｏ Ｃ 分 化 为成 熟 的 少 突胶 Ｐｓ 质细胞 进 行 髓 鞘 再 生 。 因此 ， 护 和 减 少 Ｏ Ｃ 损 保 Ｐｓ
２ １０ ） ２ ０ ２ （ 州医学院神经 生物 学教研 室， 徐 江苏 徐 州
中 国 图书 分 类 号 ： 一 ２ １ ８． ； ３２８ ；３ ９２ ； ７３ ３ Ｒ３ ；２ ４ １Ｒ ２． １Ｒ ２ ．４ Ｒ ４ ．１ ３ １
护效 果 。
文献标识码 ： 文章编号 ：０ １ ９ ８ ２ １ ）３— ３ ８一 ４ Ａ １０ —１７ （０ １０ ０ ３ Ｏ 摘要 ： 目的 观 察槲 皮 素 （ ｕｒｅ ｎ Ｑ Ｅ） Ｎ ：： 联合 ｑｅｃｔ ， Ｕ 对 ａＳ Ｏ ｉ
长 因子 和重组 人 血小 板 衍 化 生长 因子 均 购 于 Ｇｂ ｏ ｉｃ
槲皮素对 Ｏ Ｃ 缺氧低糖并 Ｕ
育 和预孵育对 Ｏ Ｃ 的保护效 果。结果 随 Ｏ Ｃ 损伤时 间 Ｐｓ Ｐｓ
延长细胞 凋亡数 量增多 ， Ｑ Ｅ能提 高 Ｏ Ｃ 相 对存 活率 、 而 Ｕ Ｐｓ 降低 Ｌ Ｈ漏 出率并改善 其形 态学变 化 ， Ｄ 其神经 保护作 用有
少突胶质前体细胞的培养、鉴定及巨噬细胞移动抑制因子对其促增殖作用
少突胶质细胞是中枢神经系统的髓鞘形成细胞，它的主要功能是产生髓鞘包绕神经轴突，维持神经冲动沿轴突跳跃性传导；另外它还分泌多种神经营养因子，支持神经元的生长与存活[1]。
少突胶质前体细胞（oligodendrocyte pre-cursor cells，OPCs）是处于分化早期阶段的未成熟细胞，具有良好的增殖能力，能在体内增殖、迁移，最后分化为成熟少突胶质细胞并为髓鞘形成发挥重要作用。
高纯度OPCs 的制备、培养是一切研究工作的基础，目前，国内外对大鼠OPCs的培养报道很多，有关小鼠OPCs的培养方法及研究报道还比较少，本文参照国内外文献报道的新生大鼠OPCs的培养方法[2-3]，探索小鼠OPCs的培养及鉴定，并研究重组巨噬细胞移动抑制因子（rMIF）对其增殖活性的影响，为进一步深入研究其发育、分化以及移植治疗脊髓损伤等奠定基础。
少突胶质前体细胞的培养、鉴定及巨噬细胞移动抑制因子对其促增殖作用研究段朝霞1，2张洁元1，2陈魁君1，2王建民1、2李兵仓1，21.创伤、烧伤、复合伤国家重点实验室，重庆400042；2.第三军医大学野战外科研究所六室，重庆400042[摘要]目的少突胶质细胞是中枢神经系统的重要组成部分。
本文探讨获取小鼠高纯度少突胶质前体细胞系的培养及鉴定方法，以及巨噬细胞移动抑制因子（MIF）对其增殖活性的调节。
方法取新生（0~2d）C57B6小鼠的大脑皮层进行混合胶质细胞培养，在9~10d时采用振荡、差速贴壁的方法分离、纯化少突胶质前体细胞，然后用添加了神经营养因子（N2）、血小板衍生生长因子-AA（PDGF-AA）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的无血清培养基培养。
倒置显微镜下每天观察细胞的生长情况，免疫荧光法对表面抗原进行细胞鉴定。
然后按104个细胞/孔加入96孔板培养，细胞70%~80%融合时用不同浓度MIF处理细胞，48h后用甲基噻唑基四唑（MTT）检测细胞增殖程度。
结果获得纯度90%以上少突胶质前体细胞（OPCs），少突胶质前体细胞NG2及血小板衍生生长因子受体（PDGFR）抗体阳性；胶质细丝酸性蛋白（GFAP）及髓鞘碱性蛋白（MBP）均为阴性。
缺血性脑损伤中的线粒体质量控制
张巧巧 范荣珍 河北科技大学化学与制药工程学院，【摘要】缺血性脑损伤是世界范围内引起高致死率、I/R）损伤是由于缺血缺氧区域的血流再灌注引起一系列级联反应。
线粒体功能障碍一直被认为是缺血再灌注诱导的神经元死亡的标志之一。
脑缺血后线粒体从星形胶质细胞向受损伤的神经元转移会启动内源性神经保护机制，从而为神经元提供能量的支持。
本文分析讨论了线粒体在缺血性脑损伤的病理状态下的研究进展，损伤对线粒体自噬和线粒体动力学的影响，的作用以及线粒体在细胞间转移途径和机制，【关键词】缺血性脑损伤；【中图分类号】缺血性脑损伤是一种严重的神经内科系统疾病，在我国致死率是第二位的，致残率是第一位的［1］。
缺血性脑损伤的发病机制非常复杂，血管堵塞会引起细胞或者分子的损伤并伴随大量兴奋性谷氨酸的释放、钙离子的超载，造成神经炎症、神经再生和血管的重构。
美国FDA批准的药物溶栓剂阿替普酶溶栓治疗使大脑恢复血供或再灌注是治疗脑缺血最有效的方法，虽然恢复血流（再灌注）对于挽救缺血组织至关重要，但会加剧缺血区神经元结构和功能的损伤，造成缺血再灌注损伤［2］。
其它针对不同靶点的神经保护剂在临床试验阶段的失败也归因于缺血性脑损伤疾病机制的复杂和矛盾性，故寻找更好的治疗方法仍然是我们要努力的目标［3］。
线粒体最重要的功能之一是参与能量代谢［4］。
因此，线粒体提供足够的能量对于细胞的兴奋和存活至关重要。
脑缺血会引起线粒体的结构和功能损害，表现为线粒体肿胀、膜电位下降、能量合成障碍以及线粒体凋亡途径激活等，最终对细胞造成不可逆转的伤害并导致神经细胞死亡［5］。
除了基本的能量供应，线粒体还在动力学和线粒体自噬等质量控制方面起着重要作用。
线粒体功能障碍被认为是缺血再灌注损伤诱导神经元死亡的标志之一。
近年来，不同细胞类型间的细胞间线粒体转移已被广泛研究，并被认为是一种潜在的治疗方法［6］。
在这篇综述中，我们将讨论目前关于线粒体在脑缺血中治疗的进展，强调关于线粒体质量控制的关键内容以及最近关于急性缺血性脑损伤线粒体转移的途径和机制。
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少突胶质前体细胞缺血缺氧损伤模型的建立
目的：建立少突胶质前体细胞缺血缺氧脑白质损伤模型。
方法：将大鼠少突胶质前体细胞分为正常对照组和缺氧缺糖组，正常对照组细胞用DMEM-F12培养基培养，不做缺氧缺糖处理，缺氧缺糖组细胞用无糖DMEM和Na2S2O4处理，Na2S2O4终浓度为10mmol/L。
取处理后10min、30min、60min和90min 为观察点，进行形态学观察和MTT测定。
结果：与对照组相比，缺氧缺糖组OPCs 形态随缺氧缺糖时间的延长而发生明显改变，细胞存活率降低。
讨论：联合应用无糖培养基和连二亚硫酸钠可以在常氧培养条件下建立少突胶质前体细胞缺氧缺糖模型。
标签：少突胶质前体细胞缺血缺氧模型建立
目前，脑白质损伤已成为早产儿脑损伤的重要形式。
研究表明，缺氧缺血（HI）、感染和免疫损伤等多种因素均可以导致新生儿脑白质损伤的发生[1]。
尤其是缺氧缺血，这与脑白质的主要细胞成分-少突胶质细胞有关[3]。
不同发育阶段的少突胶质细胞对缺氧缺血的耐受性不同，晚期少突胶质祖细胞和未成熟少突胶质细胞最为易损，成熟少突胶质细胞最为耐受。
由于神经胶质中少突胶质细胞发育最晚，在胎龄24周左右才逐渐由其前体细胞向成熟少突胶质细胞转化，因此，早产儿的胎龄越小，其脑白质中少突胶质的前体细胞含量越多，就越容易发生脑白质损伤。
而目前对新生儿缺血缺氧性脑病（hypoxic-ischemic encephalopathy，HIE）的治疗仅局限于支持疗法，尚无促进神经再生的手段[7]。
探讨缺血缺氧脑白质损伤发生的特点和机制己成为迫切的需要，寻求简单可行的方法建立缺血缺氧脑白质损伤模型，则有助于深入了解缺血缺氧引起少突胶质前体细胞损伤的机制，同时也能够为探寻有效的干预、治疗措施提供平台。
1 OPCs的培养
按照本实验室牛建钦的“少突胶质前体细胞的分离纯化方法”[12]培养OPCs。
2 少突胶质前体细胞缺氧缺糖离体模型的建立
取纯化培养2天，经鉴定为PDGFαR阳性的大鼠少突胶质前体细胞制作缺氧缺糖模型。
将大鼠少突胶质前体细胞分为正常对照组和缺氧缺糖组，正常对照组细胞用DMEM-F12培养基培养，不做缺氧缺糖处理，缺氧缺糖组细胞用无糖DMEM和Na2S2O4处理，Na2S2O4终浓度为10mmol/L。
取处理后10min、30min、60min和90min为观察点。
进行形态学观察和MTT的测定。
3 结果
3.1 倒置相差显微镜下观察少突胶质前体细胞的形态变化
缺氧缺糖组OPCs形态随缺氧缺糖时间的延长而发生明显改变。
缺氧缺糖10
分钟时，细胞仍贴壁生长，细胞折光性无明显改变，部分突起出现轻度肿胀，呈节段样或“串珠样”改变，胞体肿胀尚不明显。
缺氧缺糖30分钟，少量细胞不能贴壁而开始漂浮，贴壁细胞折光性减弱，胞体轻度肿胀，细胞突起节段样或“串珠样”改变更加明显，部分突起回缩。
缺氧缺糖60分钟，漂浮细胞增加，贴壁细胞明显肿胀、胞体混浊，细胞突起多数节段性肿胀明显，可见较多突起断裂。
缺氧缺糖90分钟，大部分细胞漂浮，剩余细胞多数胞体极度肿胀，胞质内可见大小不等的空泡，细胞核不清，突起断裂，可见较多细胞已经崩解。
3.2 MTT法（四哇氮盐比色实验）测定少突胶质前体细胞存活率
结果显示，在缺氧缺糖早期，缺氧缺糖组细胞存活率较正常对照组已有降低，但尚无统计学意义（P>0.05）；随着缺氧缺糖时间的延长，细胞存活率逐渐降低，60min时，细胞存活率已降到接近50%，到90min时，已剩下不到一半细胞存活，与对照组相比，差异均有显著性（P＜0.05）（表1）
4 讨论
本实验中，在缺氧缺糖后开始后，细胞很快就出现形态学上面的改变，随着缺氧缺糖时间的延长，细胞开始出现水肿、细胞活力明显减退，细胞突起水肿、断裂，直至最后多数细胞漂浮，细胞极度肿胀乃至崩解。
MTT法检测也提示细胞存活率随着时间的延长逐渐降低，至60分钟时已降至正常的一半左右，90分钟时则已降至正常的一半以下，说明连二亚硫酸钠和无糖培养基的联合应用使少突胶质细胞在较短的时间内即出现了缺氧性损伤和丢失，可以模拟严重脑白质损伤的细胞改变情形。
但由于缺氧缺糖至90分钟时，大部分细胞己经死亡和丢失，不利于后续的实验研究，故选用存活细胞大约有50%的60分钟来作为终止缺氧缺糖的时间。
参考文献
[1]Michael V，Johnston，William H，et al. Neurobiology of Hypoxic-Ischemic Injury in the Developing Brain. Pediatric Research，2001，49（6）：735-741.
[2]V olpe JJ. Hypoxic-ischemic encephalopathy. Neurology of the Newborn，4th edi. Philadelphia：W.B. Saunders company，2001，217.
[3]Snyder EY，Wolfe JH. Central nervouse system cell tansplantation：a novel therapy for storage diseases？Curr Opin Neurol，1996，9（2）：126-136.
[4]牛建钦，肖岚.P.少突胶质前体细胞的分离纯化方法.2011，7.。