细胞培养常用试剂配制
实验室常用染料性能介绍及常用药品试剂和培养基的配制
实验室常用染料性能介绍及常用药品试剂和培养基的配制一、实验室常用染料性能介绍1.苏木精：苏木精是一种常用的组织染料，其主要成分是吡啶类化合物。
苏木精具有很好的亲水性，对细胞核染色效果好，特别适用于观察细胞的核结构和形态。
2.基本蓝1：基本蓝1是一种亲水性染料，也是常用的组织染料。
它能与细胞内核酸结合，使细胞核显色。
基本蓝1在显微镜下观察时呈现出暗蓝色，有良好的穿透性，可以用来观察细胞的核仁、蛋白质沉积等。
3.伊红：伊红是一种细胞染色常用的酸碱指示剂。
它在碱性条件下呈红色，在酸性条件下呈黄色，可以用来染色观察细胞的酸性和碱性成分。
4.甲磺酸伊地洛尔：甲磺酸伊地洛尔是一种常用的荧光染料，可以与细胞膜结合，形成荧光标记的细胞，用于细胞增殖、迁移等研究。
在实验室中，还有很多常用的药品试剂和培养基需要配制。
下面介绍一些常见的配制方法：1.X溶液的配制：X溶液通常是用于细胞培养的培养基中的一种添加剂。
具体的配制方法是将X溶液的粉末称取适量加入适量的去离子水中，搅拌均匀即可。
X溶液可以用于抗菌、抗霉等作用。
2.磷酸缓冲盐水的配制：磷酸缓冲盐水经常用于细胞培养中的一种缓冲液。
配制磷酸缓冲盐水需要称取适量的氢磷酸盐和二氢磷酸盐加入适量的去离子水中，搅拌均匀并调节pH值即可。
3.阿霉素的配制：阿霉素是一种常用的抗生素，常用于细胞培养中的抗菌作用。
阿霉素的配制需要将相应的阿霉素粉末加入适量的溶剂中，搅拌均匀形成阿霉素溶液。
4.LB培养基的配制：LB培养基是著名的富含营养成分的培养基，常用于大肠杆菌等细菌的培养。
LB培养基的配制需要称取适量的草莓粉末、酵母粉末、纯化骨粉和氯化钠加入适量的去离子水中，通过高压灭菌形成LB培养基。
以上仅为常用染料性能介绍及部分常用药品试剂和培养基的配制方法，实验室中还有很多其他药品试剂和培养基需要进行配制或选购，要根据实际需要进行选择和使用。
细胞培养基本实验操作一般培养试剂介绍常用培养基及基本特性 HBSS的配制和使用攻略
常用培养基及基本特性1、RPMI-1640 MediumRPMI-1640广泛应用于哺乳动物、特殊造血细胞、正常或恶性增生的白细胞，杂交瘤细胞的培养，是目前应用十分广泛的培养基。
主要用于悬浮细胞培养。
其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴细胞、T细胞淋巴瘤细胞以及HCT-15上皮细胞等均可参考使用。
2、Minimum Essential Medium（MEM）也称最低必需培养基，它仅含有12种必需氨基酸、谷氨酰胺和8种维生素。
成分简单，可广泛适应各种已建成细胞系和不同地方的哺乳动物细胞类型的培养。
MEM-Alpha一般用于培养一些难培养细胞类型，而其它没有特殊之处的细胞株则几乎均可采用MEM来培养。
3、DMEM-高糖（标准型）是一种应用十分广泛的培养基，可用于许多哺乳动物细胞培养,更适合高密度悬浮细胞培养。
适用于附着性较差，但又不希望它脱离原来生长点的克隆培养，也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。
4、DMEM-低糖（标准型）是一种应用十分广泛的培养基，可用于许多哺乳动物细胞培养。
低糖适于依赖性贴壁细胞培养，特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养。
5、DMEM/F12DMEM/F12培养基适于克隆密度的培养。
F12培养基成分复杂，含有多种微量元素，和DMEM以1：1结合，称为DMEM/F12培养基（DME/F12medium），作为开发无血清配方的基础，以利用F12含有较丰富的成分和DMEM含有较高浓度的营养成分为优点。
该培养基适用于血清含量较低条件下哺乳动物细胞培养。
为了增强该培养基的缓冲能力，改良之一是在DMEM/F12（1：1）中加入15mM HEPES缓冲液。
6、McCoy’s 5AMcCoy’s 5A Medium 主要为肉瘤细胞的培养所设计，可支持多种（如骨髓、皮肤、肺和脾脏等）的原代移植物的生长，除适于一般的原代细胞培养外，主要用于作组织活检培养、一些淋巴细胞培养以及一些难培养细胞的生长支持。
常用的几种细胞培养配套试剂的配置
常用的几种细胞培养配套试剂的配置几种常用细胞培育基产品⒈ BME(basal medium eagle)基础伊格培育基⒉ MEM⒊ DMEM⒋ IMDM⒌ RPMI-1640⒍ M199⒎ Mccoys 5A⒏ F10\ F12 \DMEM混合F12几种常用细胞培育配套试剂的配置(缓冲液、平衡盐溶液等)1、无钙、镁、离子溶液(1000ml)氯化钠(NaCl)8g磷酸二氢钠、(NaH2PO4H20)0.05g、碳酸氢钠(NaHCO3)1g、柠檬酸三钠(Na3C6H5O7,H20)1g、葡萄糖1g、加去离子水或双蒸水至1000mL2、PBS(Phosphate-Buffered saline)磷酸盐缓冲液甲液:0.2mol/L磷酸氢二钠溶液、磷酸氢二钠(无水)28.4g、氯化钠8.77g加去离子水或双蒸水至1000mL乙液:0.2mol/L磷酸二氢钠溶液、磷酸二氢钠(无水)2.4g、氯化钠8.77g加去离子水或双蒸水至1000mL甲、乙液于4℃保存，使用时按表3-2所示比例，配制成所需pH 浓度，高压灭菌后室温保存。
3、Hanks液(HBSSHanks Balanced salt solution)⑴ 母液甲(20x)配法①NaCl(A.R)160g、KCl(A.R)8g、MgSO4.7H2O(A.R)2g、MgCl.6H2O(A.R)2g依次溶于800mL双蒸水中，前一物质溶后再加后一种。
②CaCl2(A.R)2.8g溶于100mL双蒸水中，溶时不断搅拌(此液应单配，单溶)。
待上述两溶液中的"溶质"全溶后，将它们混合，再用双蒸水补至1000mL，向其中加2mL作为防腐剂，置4℃保存。
⑵ 母液乙(20×)配法①Na2HPO4.12H2O(A.R)3.04g、KH2PO4(A.R)1.20g、葡萄糖(A.R)20.0g溶于800ml双蒸水中。
②0.4%酚红液0.4g酚红放在玻璃研钵后加0.01N、NaOH11.28mL，直到全部溶解，移入100mL容量瓶中，加水至100mL，过滤，pH为7.4，4℃保存。
细胞培养过程中的注意事项及试剂配制
细胞培养过程中的注意事项及试剂配制一.常用设备准备室的设备：单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜（放置未消毒物品）、储品规（放置消毒过的物品）、包装台。
配液室的设备：扭力天平和电子天平（称量药品）、PH计（测量培养用液PH值）、磁力搅拌器（配置溶液室搅拌溶液）。
培养室的设备：液氮罐、储品柜（存放杂物）、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱（-80℃）、空调、二氧化碳缸瓶、边台（书写实验记录）。
必须放在无菌间的设备：离心机（收集细胞）、超净工作台、倒置显微镜、CO孵箱（孵育培养物）、2水浴锅、三氧消毒杀菌机、4℃冰箱（放置serum和培养用液）。
二.无菌操作无菌室的灭菌：1.定期打扫无菌室：每周打扫一次，先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等，然后用3‰来苏尔或者新洁尔灭或者0.5％过氧乙酸擦拭。
2.CO孵箱（培养箱）灭菌：先用3‰新洁尔灭擦拭，然后用75％酒精擦拭或者20.5％过氧乙酸，再用紫外灯照射3.实验前灭菌：打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各20-30分钟4.实验后灭菌：用75％酒精（3‰新洁尔灭）擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台。
实验人员的无菌准备：1.肥皂洗手。
2.穿好隔离衣、带好隔离帽、口罩、放好拖鞋3.用75％酒精棉球擦净双手。
无菌操作的演示：1.凡是带入超净工作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用75％酒精擦拭瓶子的外表面2.靠近酒精灯火焰操作。
3.器皿使用前必须过火灭菌4.继续使用的器皿（如瓶盖、滴管）要放在高处，使用时仍要过火。
5.各种操作要靠近酒精灯，动作要轻、准确，不能乱碰。
如吸管不能碰到废液缸。
6.吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管，防止交叉污染。
三.器械的清洗和消毒玻璃器械洗消：(1)新的玻璃器皿的洗消：1.自来水刷洗，除去灰尘。
2.烘干、泡盐酸：烤箱中烘干，然后再浸入5％稀盐酸中12小时以除去脏物、铅、砷等物。
3.刷洗、烘干：12小时后立即用自来水冲洗，再用洗涤剂刷洗，自来水冲干净后用烤箱烘干。
DMEM培养基配制方法
DMEM培养基配制方法DMEM（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）是一种常用的细胞培养基，广泛应用于细胞培养、病毒繁殖和实验室研究中。
DMEM培养基含有多种必需和非必需氨基酸、糖类、维生素和盐类成分，提供了生长细胞所需的营养和环境。
以下是DMEM培养基的配制方法。
配制DMEM培养基的主要成分包括基础培养基、补充物和pH调节剂。
基础培养基：1.准备适量的无菌去离子水，用于稀释和配制DMEM培养基。
补充物：1.氨基酸：将提供的无菌氨基酸液中的每种氨基酸均匀混合，制得氨基酸混合液。
如有需要，可以根据实验需求添加特定的氨基酸。
2.糖类：将葡萄糖溶液与无菌去离子水混合，配制成葡萄糖溶液。
3.维生素：将提供的无菌维生素溶液与去离子水混合，制得维生素溶液。
4.盐类：将提供的无菌盐溶液与去离子水混合，制得盐溶液。
pH调节剂：1. 英文名Tris（Tris(hydroxymethyl)aminomethane）：是一种常用的pH缓冲剂。
取适量的Tris溶液。
2. 英文名Sodium bicarbonate：是一种重要的pH调节剂，可提供细胞培养中所需的碱性环境。
取适量的Sodium bicarbonate溶液。
先准备好所需的试剂和仪器，并保证它们是无菌的。
配制过程如下：1.取适量的基础培养基（DMEM），移至无菌培养瓶中。
2.依次向DMEM基础培养基中加入补充物。
首先加入氨基酸混合液，根据提供的比例将其加入培养基中，充分混合。
然后加入葡萄糖溶液、维生素溶液和盐溶液，依次混合均匀。
3. 加入适量的Tris溶液，用于调节pH值。
根据实验需求和DMEM配方，逐渐加入Tris溶液，同时用pH计测量pH值，直到达到所需的pH范围（通常为7.2-7.4）。
4. 加入适量的无菌Sodium bicarbonate溶液，用于调节和维持培养基的碱性环境。
根据实验需求和DMEM配方，逐渐加入Sodium bicarbonate溶液，充分混合。
细胞培养常用试剂配制
细胞培养常用试剂配制1. 水：细胞培养用水必须非常纯净，不含有离子和其他的杂质。
需要用新鲜的双蒸水、三蒸水或纯净水.2. PBS（0.01M）：NaCl 8.0g KCl 0.2gNa2HPO4·12H2O 3.49g KH2PO4 0. 2g充分溶解后，然后把溶液倒入容量瓶中准确定容至1000ml，摇匀。
用HCl或NaOH调PH到7.4。
3. 胰蛋白酶溶液（0.25％）：胰酶 2.5g D-Hanks液 1000mLEDTA 0.1g NaHCO3调PH值 7.2～7.4用注射滤器抽滤消毒：配好的胰酶溶液要在超净台内用注射滤器（0. 22微米微孔滤膜）抽滤除菌。
然后分装成小瓶于-20℃保存以备使用。
4. 青、链霉素溶液：所用纯净水（双蒸水）需要15磅高压20分钟灭菌。
具体操作均在超净台内完成。
青霉素是80万单位/瓶，用注射器加4ml灭菌双蒸水。
链霉素是100万单位/瓶，加5ml灭菌双蒸水，即每毫升各为20万单位。
分装于－20℃保存。
使用时溶入培养液中，使青链霉素的浓度最终为100单位/ml（每升溶液中加入0.5mL）。
5. RPMI1640：1640(GIBICO, 1L/袋) 1袋双蒸水 1000mlHEPES(sigma,99.5％) 5g NaHCO3 3g青链霉素各0.5ml使用前向100ml培养液中加入1ml谷氨酰胺溶液（4℃时两周有效）。
6.谷氨酰胺：合成培养基中都含有较大量的谷氨酰胺，其作用非常重要，细胞需要谷氨酰胺合成核酸和蛋白质，谷氨酰胺缺乏要导致细胞生长不良甚至死亡。
在配制各种培养液中都应该补加一定量的谷氨酰胺。
由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定，4℃下放置1周可分解50％，故应单独配制，置于-20℃冰箱中保存，用前加入培养液。
加有谷氨酰胺的培养液在4℃冰箱中储存2周以上时，应重新加入原来的谷氨酰胺。
一般培养液中谷氨酰胺的含量为1～4mmol/L。
可以配制200mmo l/L谷氨酰胺液贮存，用时加入培养液。
细胞培养所需耗材有哪些
细胞培养的路上，有多虐心就有多少需要值得注意的地方。
小小的平皿之中，细胞点点，引无数英雄竞挂东南枝。
正所谓“万事开头难”，即便是细胞复苏与保存这两件看似简单的事情，也能造成实验汪内心无比巨大的阴影面积。
下面就给各位实验室新手介绍一下细胞培养具体需要哪些耗材。
一、细胞培养基础试剂1、培养基：一般是用不完全培养基+10% FBS（胎牛血清）自己配的，有时也添加双抗预防细胞感染。
具体培养基类型根据你养的细胞类型去选择。
2、胰蛋白酶：简称是胰酶，消化细胞用的。
一般消化1-2 min，时间太短，细胞消化不完全，时间太长，会消化过度损伤细胞。
3、常用试剂：酒精，PBS 缓冲液。
二、细胞培养基础耗材1、细胞培养容器。
（1）培养瓶：如果你们是实验室小规模一般选50ML 100ML 250ML。
（2）玻璃瓶：培养基可以买胰酶的配置需要的成本很低所以准备两三个150ML的瓶子自己配就行了。
配置胰酶需要购买一种过滤器。
（3）细胞4102培养1653板（我们自己常用的有96空、24孔、6孔，当然还有其他的规格，可以根据需回要选择）。
（4）培养基：如果自己配置的话要买一些蓝盖的瓶子，一般规格会有1000ml、500ml、250ml、100ml的，也要买一些装血清的血清瓶，10ml的玻璃试管也要买一些。
2、耗材。
吸管、移液管、各种枪和枪头、离心管、封口膜等。
（1）玻璃吸管：长25-30CM 玻璃器2113皿总是摔5261断所以稍稍长一点比较好。
（2）EP管：4ML的塑料管、冻存管、这些塑料的管子是必须的。
（3）移液枪：（各种型号都要一把吧）这个不算是耗材但是枪头是耗材。
三、细胞冻存试剂和耗材1、冻存液：一般用10% DMSO+FBS+培养基组成，FBS 和培养基的比例依细胞类型决定，比较珍贵的细胞一般用90% FBS，一般的细胞可以用50% FBS+40% 培养基来配制。
2、胰蛋白酶等用于细胞培养的一般试剂。
3、冻存管、离心管、离心机、吸管、枪头、显微镜、冻存盒、冰箱、液氮罐等。
培养用液的配制
实验一培养用液的配制、除菌与分装【实验目的】1. 掌握常见培养用液的配制方法。
2. 掌握常用的灭菌方法。
3. 了解每种培养用液的作用。
【实验原理】常用细胞培养用液包括磷酸盐平衡盐溶液（Phosphate Buffered Saline，PBS）、液体培养基、胰蛋白酶（Trypsin）和EDTA溶液。
PBS用于清洗细胞、配制胰蛋白酶和EDTA。
培养基含有细胞生长需要的各种营养元素，使用时通常还需填加血清和抗生素。
鱼类细胞培养的培养基常用种类是MEM 和L-15；用于动物的一般是DMEM和RPMI-1640。
胰蛋白酶可将贴壁的细胞从培养瓶壁上消化下来，通常使用浓度为0.25%或0.125%。
EDTA 用于清洗细胞表面，螯合Ca2+等二价离子，使细胞易于为胰蛋白酶消化。
细胞培养用的试剂必需是无菌的，PBS 和EDTA 可以采用高压灭菌，而培养基和胰蛋白酶溶液含生物活性物质，配制好后通过过滤除菌。
【试剂、材料与仪器】试剂：NaCl ；KCl；Na2HPO4；KH2PO4；EDTA；胰蛋白酶；HEPES；碳酸氢钠；MEM或PRMI-1640 培养基干粉；GPS材料：三蒸水，蒸馏水瓶，精密天平，药匙，称量纸，烧杯（250 mL、1000 mL），玻棒，精密pH 试纸（6.8-8.0），容量瓶（250 mL、1000 mL），一次性注射器，一次性过滤器，普镊，酒精灯，打火机，医用酒精，消毒纱布，酒精喷壶，已高压灭菌试剂瓶（500 mL、250 mL、100 mL），记号笔，标签纸，橡胶手套，移液管（5 mL、10 mL），封口膜仪器：超净工作台，加液枪，4℃冰箱【实验分组】实验分组进行，每组4人，每班20人，共分5组。
第1组配制PBS并高压灭菌，第2组配制胰蛋白酶溶液并过滤除菌和分装，第3组配制EDTA溶液并分装高压灭菌，第4组配制培养基，第5组过滤除菌培养基并分装。
每个实验小组需准备试剂有：胰酶50 mL；EDTA 50 mL；培养基90 mL（使用前加入10 mL血清）。
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常用试剂配制
PBS溶液配制：用电子天平准确称取NaCl 8.0 g，KCl 0.2 g，KH2P04 0.29 g，Na2HP04—12H20 1.42 g溶于800 mL的超纯水中，用磁场搅拌器搅拌至溶解后调节pH值为7.2～7.4，然后定容至1L。
置于高压灭菌锅中灭菌30min，冷却到室温后分装，于4℃冰箱冷藏备用。
DMEM／12高糖培养液：将袋装的DMEM／12粉末溶于800ml的超纯水中，同时加入3.79碳酸氢钠，66mg青霉素钠和100mg的硫酸链霉素，用磁力搅拌器充分混匀，调节pH值为7.2-7.4，然后定容至1L。
用孔径为0.229μm的滤膜过滤除菌，分装后置于4℃冰箱冷藏备用。
用于培养细胞的培养液为上述DMEM／12高糖溶液中加入10％-20％(体积比)的胎牛血清。
0.25％胰蛋白酶一0.02％EDTA消化液：准确称取0.25g的Trypsin和0.02g的EDTA，用PBS在容量瓶中定容至100ml，调节pH值为7.2-7.4，用孔径为0.22μm的滤膜过滤除菌，用2mL的离心管分装，冻存于-20℃冰箱备用。
双抗：80mL的超纯水中加入80万u的青霉素钠和100万u的硫酸链霉素，0．22μm的滤膜过滤除菌后，用2mL的离心管分装，冻存于-20℃冰箱备用。
二甲亚砜(dimethylsulfoxide，DMSO)冻存液：将DMSO、FBS和DMEM／12按1：3：6的比例混匀，现配现用。