细胞培养常用器材与试剂
细胞培养用的仪器
细胞培养用的仪器
细胞培养用的仪器包括细胞培养皿、细胞摇瓶、细胞计数器、离心机、PCR仪等。
这些仪器的作用分别是：
1. 细胞培养皿：用于细胞培养的实验室器具，一般由玻璃或塑料制成，形状为圆形或方形，用于观察细胞生长和繁殖的情况。
2. 细胞摇瓶：一种用于细胞培养的器具，由玻璃或塑料制成，形状为细长形，内装有细胞和培养基，通过摇晃可以使细胞得到充分的营养和氧气。
3. 细胞计数器：一种用于细胞计数的仪器，可以准确地测定细胞数量，帮助研究人员了解细胞生长和繁殖的情况。
4. 离心机：一种用于分离和纯化细胞的仪器，通过高速旋转将细胞和其他物质分离，可以用于细胞分离、洗涤和浓缩等操作。
5. PCR仪：一种用于DNA扩增的仪器，通过PCR技术可以将特定的DNA片段在短时间内大量扩增，用于基因克隆、突变分析和疾病诊断等领域。
这些仪器在细胞培养实验中是必不可少的，可以帮助研究人员更好地了解细胞生长和繁殖的情况，以及进行基因克隆和疾病诊断等研究工作。
细胞培养的四个步骤
细胞培养的四个步骤细胞是组成生物体的基本单位，生物体由各种类型的细胞组成。
在显微镜下不同的细胞有不同的形态。
利用免疫荧光、流式荧光标记、免疫组化都能进行细胞观察。
培养细胞的最终目的：拿到细胞进行后续的下游实验WB、ELISA等蛋白检测DNA、RNA等分子检测凋亡、增殖、周期等功能检测原代细胞培养、冻存等细胞实验细胞培养几乎是所有细胞生物学实验的基础，细胞养得好，实验没烦恼！原代细胞培养，细胞的传代，冻存、复苏，细胞污染的防与治，我们的经验都在这篇文章里！一、细胞培养相关设备和试剂1、细胞培养的相关设备生物安全柜的安全保护等级>超净工作台，当涉及到病毒，需要使用生物安全柜。
生物安全柜：对柜内外的安全保护超净工作台：对工作台内部的安全保护超净工作台/生物安全柜的工作流程：2、细胞培养用相关试剂①培养基作用：人工模拟细胞体内生长的营养环境，维持细胞生长的营养物质，提供细胞营养和促进细胞生长增殖的物质基础。
不完全培养基：直接购买或者配置的培养基。
完全培养基：不完全培养基+血清（提供营养物质）+双抗（保证无菌环境）+其他。
由于细胞种类和培养条件不同，适宜的合成细胞培养基也不同，在动物细胞培养中最常用基础细胞培养基有6～7种，如BME、MEM、DMEM、HAMF12、RPMI1640、199等。
②血清血清的功能：生长、分化必须的物质：生长因子、激素、基础培养基中没有的微量物质、小分子营养物转运维生素、脂类、金属离子和微量元素等；促进细胞贴壁、铺展；毒素灭活，蛋白质与有毒金属和热源物质结合；提供蛋白酶抑制剂；起酸碱度缓冲液作用。
血清的分类最常用的是胎牛血清。
胎牛还未接触外界，免疫系统激活最少，血清中所含的抗体、补体等对外来物质排斥最小，对细胞有害的成分最少。
③胰酶常用0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA胰酶：胰脏中分离，选择性的水解蛋白质中有赖氨酸或精氨酸的羧基所构成的肽链，最佳作用温度37℃，PH=8.0，常用浓度0.1%—0.25%，一般用不含Ca2+、Mg2+的平衡盐缓冲液配制（PBS或Hanks），可用含有血清培养基终止胰酶对细胞的作用（观察细胞的剥离状态确定终止时间）。
细胞培养基本实验操作一般培养试剂介绍常用培养基及基本特性 HBSS的配制和使用攻略
常用培养基及基本特性1、RPMI-1640 MediumRPMI-1640广泛应用于哺乳动物、特殊造血细胞、正常或恶性增生的白细胞，杂交瘤细胞的培养，是目前应用十分广泛的培养基。
主要用于悬浮细胞培养。
其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴细胞、T细胞淋巴瘤细胞以及HCT-15上皮细胞等均可参考使用。
2、Minimum Essential Medium（MEM）也称最低必需培养基，它仅含有12种必需氨基酸、谷氨酰胺和8种维生素。
成分简单，可广泛适应各种已建成细胞系和不同地方的哺乳动物细胞类型的培养。
MEM-Alpha一般用于培养一些难培养细胞类型，而其它没有特殊之处的细胞株则几乎均可采用MEM来培养。
3、DMEM-高糖（标准型）是一种应用十分广泛的培养基，可用于许多哺乳动物细胞培养,更适合高密度悬浮细胞培养。
适用于附着性较差，但又不希望它脱离原来生长点的克隆培养，也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。
4、DMEM-低糖（标准型）是一种应用十分广泛的培养基，可用于许多哺乳动物细胞培养。
低糖适于依赖性贴壁细胞培养，特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养。
5、DMEM/F12DMEM/F12培养基适于克隆密度的培养。
F12培养基成分复杂，含有多种微量元素，和DMEM以1：1结合，称为DMEM/F12培养基（DME/F12medium），作为开发无血清配方的基础，以利用F12含有较丰富的成分和DMEM含有较高浓度的营养成分为优点。
该培养基适用于血清含量较低条件下哺乳动物细胞培养。
为了增强该培养基的缓冲能力，改良之一是在DMEM/F12（1：1）中加入15mM HEPES缓冲液。
6、McCoy’s 5AMcCoy’s 5A Medium 主要为肉瘤细胞的培养所设计，可支持多种（如骨髓、皮肤、肺和脾脏等）的原代移植物的生长，除适于一般的原代细胞培养外，主要用于作组织活检培养、一些淋巴细胞培养以及一些难培养细胞的生长支持。
细胞培养过程中的注意事项及试剂配制
细胞培养过程中的注意事项及试剂配制一.常用设备准备室的设备：单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜（放置未消毒物品）、储品规（放置消毒过的物品）、包装台。
配液室的设备：扭力天平和电子天平（称量药品）、PH计（测量培养用液PH值）、磁力搅拌器（配置溶液室搅拌溶液）。
培养室的设备：液氮罐、储品柜（存放杂物）、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱（-80℃）、空调、二氧化碳缸瓶、边台（书写实验记录）。
必须放在无菌间的设备：离心机（收集细胞）、超净工作台、倒置显微镜、CO孵箱（孵育培养物）、2水浴锅、三氧消毒杀菌机、4℃冰箱（放置serum和培养用液）。
二.无菌操作无菌室的灭菌：1.定期打扫无菌室：每周打扫一次，先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等，然后用3‰来苏尔或者新洁尔灭或者0.5％过氧乙酸擦拭。
2.CO孵箱（培养箱）灭菌：先用3‰新洁尔灭擦拭，然后用75％酒精擦拭或者20.5％过氧乙酸，再用紫外灯照射3.实验前灭菌：打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各20-30分钟4.实验后灭菌：用75％酒精（3‰新洁尔灭）擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台。
实验人员的无菌准备：1.肥皂洗手。
2.穿好隔离衣、带好隔离帽、口罩、放好拖鞋3.用75％酒精棉球擦净双手。
无菌操作的演示：1.凡是带入超净工作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用75％酒精擦拭瓶子的外表面2.靠近酒精灯火焰操作。
3.器皿使用前必须过火灭菌4.继续使用的器皿（如瓶盖、滴管）要放在高处，使用时仍要过火。
5.各种操作要靠近酒精灯，动作要轻、准确，不能乱碰。
如吸管不能碰到废液缸。
6.吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管，防止交叉污染。
三.器械的清洗和消毒玻璃器械洗消：(1)新的玻璃器皿的洗消：1.自来水刷洗，除去灰尘。
2.烘干、泡盐酸：烤箱中烘干，然后再浸入5％稀盐酸中12小时以除去脏物、铅、砷等物。
3.刷洗、烘干：12小时后立即用自来水冲洗，再用洗涤剂刷洗，自来水冲干净后用烤箱烘干。
细胞制备常用耗材材料
细胞制备常用耗材材料
细胞制备过程中需要使用多种耗材材料，这些材料对于细胞制备
的成功至关重要。
下面就为大家介绍常用的耗材材料及其作用。
1、细胞培养基
细胞培养基是细胞生长、分化、增殖所必须的基础。
不同类型的
细胞需要使用不同种类的培养基，例如EMEM培养基可用于培养小鼠成纤维细胞，DMEM培养基可用于培养人类细胞等。
在使用培养基时需要注意培养基的配制和储存条件，以保证细胞的健康生长。
2、细胞冻存液
细胞冻存液是将细胞保存在低温条件下的重要介质，可以延长细
胞的寿命。
细胞冻存液的配制要与细胞类型相匹配，含量的浓度、PH
值和添加物的选择具有很大关联。
一般情况下，细胞冻存液中含有10% DMSO和20%人血清可以有效保护细胞。
3、消毒液
消毒液主要用于对培养室、培养箱、培养器、试管等实验室设备
进行消毒。
为防止不同菌株的污染对细胞的影响，消毒液的选择应根
据不同细胞类型和实验要求来决定。
一般工作台、镊子、移液管、培
养板应每天进行消毒。
4、细胞培养器皿
细胞培养器皿一般包括培养瓶、培养箱、平板、离心管等。
正确
选用容器可以确保细胞生长环境卫生、稳定。
注意过期日期，选择质
量可靠的细胞培养器皿，以免对细胞生长带来影响。
细胞制备耗材材料是细胞培养的基础，要保证细胞培养以顺利的
进行，科学的选择和使用这些耗材材料具有重要意义。
选择定期更新，正确使用和保养这些耗材材料，可以更好的保证细胞培养的成功。
细胞工程实验总结
实验一、细胞培养实验器材和试剂的准备1、哪些物品适合于高压灭菌，并说明理由。
①材料：微孔滤膜(直径25 cm)：孔径为0.22μm、微孔滤膜(直径90 cm)：孔径为0.22 μm、过滤器(直径25 cm)。
②仪器和器材：眼科剪刀和镊子、长镊子、培养皿、培养瓶、试剂瓶（或盐水瓶）、移液枪、10毫升试管、10毫升离心管、巴氏吸管、5毫升（或10毫升）吸量管、不锈钢过滤器、塑料过滤器、注射器、超净工作台、干燥箱、高压灭菌锅、正压泵。
理由：适合于高压灭菌是布类、橡胶制品(如胶塞)、金属器械、玻璃器皿、某些耐高温的塑料制品以及加热后不发生沉淀的无机溶液(如Hanks液、PBS等)。
2、细胞培养常用液体如何配制和灭菌？1）PBS ：8.0g NaCl、0.2gKCl、2.2gNa2HPO4、0.12gKH2PO4溶于1000 mL双蒸水，高压灭菌，4℃保存。
（准备试剂瓶）灭菌方法：高压灭菌。
2）干粉培养基过滤除菌（先准备好不锈钢过滤器及滤膜，安装后高压灭菌，适度烘干；铝盒4个，三角瓶2个，容量瓶，不锈钢过滤器一套，酒精灯，酒精棉球3瓶，吸耳球3个，吸量管10毫升和5毫升各5根，分装用瓶，血清，超纯水，抗生素）认真阅读说明书。
说明书都注明干粉不包含的成分，常见的有NaHCO3、谷氨酰胺、丙酮酸钠、HEPES等。
这些成分有些是必须添加的，如NaHCO3、谷氨酰胺，有些根据实验需要决定。
配制方法（1L）：1）在一个尽可能接近总体积的容器中加入大约500mL双蒸水。
2）在室温（20℃到30℃）的水中加入干粉培养基。
3）水洗袋内残留培养基，全部转移到容器内，轻轻搅拌，不要加热。
4）完全溶解之后，1袋1L粉状DMEM加3.7g NaHCO3，1mmoL∕L丙酮酸钠，即0.11g/L，添加双抗。
5）用双蒸水定容到1L，搅拌溶解。
注意不要过分搅拌。
6）通过缓慢搅拌加入1N NaOH 或1N HCL调节pH值培养基在过滤前要保持密封。
生物实验室器材清单表
生物实验室器材清单表一、基本实验器材•称量仪器：电子天平、分析天平、移液器等。
•容器：试管、烧杯、量筒、离心管、培养皿等。
•温度控制设备：恒温水浴锅、恒温培养箱、恒温恶冷冻箱等。
•搅拌设备：磁力搅拌器、振荡器等。
•过滤设备：滤纸、滤液漏斗、滤膜、滤芯等。
•离心设备：高速离心机、台式离心机等。
•加热设备：电热板、电炉、燃气灶等。
•p H计：用于测量溶液的酸碱度。
•光学设备：显微镜、反射显微镜等。
二、分子生物学实验器材•离心管架：用于离心管的固定和摇晃。
•冻存管和冻存管盒：用于样品的长期保存和冷冻。
•培养皿和培养瓶：用于生物样品的培养和生长。
•PCR试管和PCR板：用于聚合酶链式反应(PCR)实验。
•电泳仪和电泳槽：用于DNA或蛋白质的分离和检测。
•转印设备：用于将DNA或蛋白质转移到膜上。
•半自动和全自动PCR仪：用于PCR反应的自动化控制。
•基因测序仪：用于测定DNA序列。
•真空泵和真空过滤器：用于快速过滤和生物样品的处理。
•超低温冰箱：用于存放生物样品和试剂。
三、细胞生物学实验器材•细胞培养器：细胞培养瓶、细胞培养皿等。
•色素和荧光标记试剂：用于细胞成像和染色。
•显微镜和显微摄像系统：用于观察和记录细胞结构和功能。
•细胞计数仪：用于计算细胞数量和密度。
•酶消解试剂：用于细胞的消化和分离。
•均质机和超声波颚化器：用于细胞的破碎和分散。
•细胞培养水浴锅和细胞培养箱：用于细胞培养的温度控制。
•细胞冻存液和细胞恢复液：用于细胞冻存和解冻。
四、免疫学实验器材•免疫试剂盒：用于免疫检测和定量。
•过滤膜和孔板：用于免疫试剂的过滤和固定。
•孵育箱和孵育器：用于免疫试剂的孵育和反应。
•光谱仪和荧光仪：用于测量光信号和荧光强度。
•干燥器和浓缩器：用于免疫样品的脱水和浓缩。
•凝胶电泳仪和蛋白质标记试剂：用于免疫印迹和蛋白质定量。
•细胞悬液和抗体标记试剂：用于免疫细胞的染色和标记。
五、遗传学实验器材•DNA提取试剂盒和RNA提取试剂盒：用于提取DNA和RNA。
细胞培养所需耗材有哪些
细胞培养的路上，有多虐心就有多少需要值得注意的地方。
小小的平皿之中，细胞点点，引无数英雄竞挂东南枝。
正所谓“万事开头难”，即便是细胞复苏与保存这两件看似简单的事情，也能造成实验汪内心无比巨大的阴影面积。
下面就给各位实验室新手介绍一下细胞培养具体需要哪些耗材。
一、细胞培养基础试剂1、培养基：一般是用不完全培养基+10% FBS（胎牛血清）自己配的，有时也添加双抗预防细胞感染。
具体培养基类型根据你养的细胞类型去选择。
2、胰蛋白酶：简称是胰酶，消化细胞用的。
一般消化1-2 min，时间太短，细胞消化不完全，时间太长，会消化过度损伤细胞。
3、常用试剂：酒精，PBS 缓冲液。
二、细胞培养基础耗材1、细胞培养容器。
（1）培养瓶：如果你们是实验室小规模一般选50ML 100ML 250ML。
（2）玻璃瓶：培养基可以买胰酶的配置需要的成本很低所以准备两三个150ML的瓶子自己配就行了。
配置胰酶需要购买一种过滤器。
（3）细胞4102培养1653板（我们自己常用的有96空、24孔、6孔，当然还有其他的规格，可以根据需回要选择）。
（4）培养基：如果自己配置的话要买一些蓝盖的瓶子，一般规格会有1000ml、500ml、250ml、100ml的，也要买一些装血清的血清瓶，10ml的玻璃试管也要买一些。
2、耗材。
吸管、移液管、各种枪和枪头、离心管、封口膜等。
（1）玻璃吸管：长25-30CM 玻璃器2113皿总是摔5261断所以稍稍长一点比较好。
（2）EP管：4ML的塑料管、冻存管、这些塑料的管子是必须的。
（3）移液枪：（各种型号都要一把吧）这个不算是耗材但是枪头是耗材。
三、细胞冻存试剂和耗材1、冻存液：一般用10% DMSO+FBS+培养基组成，FBS 和培养基的比例依细胞类型决定，比较珍贵的细胞一般用90% FBS，一般的细胞可以用50% FBS+40% 培养基来配制。
2、胰蛋白酶等用于细胞培养的一般试剂。
3、冻存管、离心管、离心机、吸管、枪头、显微镜、冻存盒、冰箱、液氮罐等。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
器材与试剂干粉型培养基、胰蛋白酶，青霉素、链霉素. 纯净水系统、电子天平、PH计、磁力搅拌器等具体步骤1. 水：细胞培养用水必须非常纯净，不含有离子和其他的杂质。
需要用新鲜的双蒸水、三蒸水或纯净水.2. PBS (也可用于其它BSS，如：Hanks，D-Hanks液的配制)：主要用于免疫组化染色时组织或细胞的漂洗溶解定容：将药品（NaCl 8.0g，KCl 0.2g，Na2HPO4·H2O 1.56g，KH2PO4 0. 2g ）倒入盛有双蒸水的烧杯中，玻璃棒搅动，充分溶解，然后把溶液倒入容量瓶中准确定容至1000ml，摇匀即成新配制的PBS溶液。
用HCl或NaOH调PH到7.4。
移入溶液瓶内待消毒：将PBS倒入溶液瓶（大的吊针瓶）内，盖上胶帽，并插上针头放入高压锅内8磅消毒20分钟。
注意高压消毒后要用灭菌蒸馏水补充蒸发掉的水份。
3. 胰蛋白酶溶液：胰蛋白酶的作用是使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散。
不同的组织或者细胞对胰酶的作用反应不一样。
胰酶分散细胞的活性还与其浓度、温度和作用时间有关，在pH为8.0、温度为37℃时，胰酶溶液的作用能力最强。
使用胰酶时，应把握好浓度、温度和时间，以免消化过度造成细胞损伤。
因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白质克降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液时应选用不含Ca2+、Mg2+的BSS，如：D-Hanks液。
终止消化时，可用含有血清培养液或者胰酶抑制剂终止胰酶对细胞的作用。
称取胰蛋白酶：按胰蛋白酶液浓度为0.25％，用电子天平准确称取粉剂溶入小烧杯中的双蒸水（若用双蒸水需要调PH到7.2左右）或PBS（D-hanks）液中。
搅拌混匀，置于4℃内过夜。
用注射滤器抽滤消毒：配好的胰酶溶液要在超净台内用注射滤器（0.22微米微孔滤膜）抽滤除菌。
然后分装成小瓶于-20℃保存以备使用。
4. 0.05％胰蛋白酶－0.02%EDTA溶液称取胰蛋白酶粉末（1：250）0.05g，EDTA 0.02g，加入PBSA 100ml，0.22um微孔滤膜过滤除菌，分装，于－20℃保存。
5. 青、链霉素溶液：所用纯净水（双蒸水）需要15磅高压20分钟灭菌。
具体操作均在超净台内完成。
青霉素是80万单位/瓶，用注射器加4ml灭菌双蒸水。
链霉素是100万单位/瓶，加5ml灭菌双蒸水，即每毫升各为20万单位。
分装于－20℃保存。
使用时溶入培养液中，使青链霉素的浓度最终为100单位/ml。
6. RPMI1640：溶解、调PH值、定容：先将培养基粉剂加入培养液体积2/3的双蒸水中,并用双蒸水冲洗包装袋2-3次(冲洗液一并加入培养基中),充分搅拌至粉剂全部溶解,并按照包装说明添加一定的药品.然后用注射器向培养基中加入配制好的青链霉素液各0.5ml, 使青链霉素的浓度最终各为100单位/ml。
然后用二氧化碳或碳酸氢钠调PH到7.2左右。
最后定容至1000ml，摇匀。
安装蔡式滤器：安装时先装好支架，按规定放好滤膜，用螺丝将不锈钢滤器和支架连接好。
然后卸下支架腿分别用布包好待消毒。
抽滤：配制好的培养液通常用滤器过滤除菌。
通常用蔡式滤器在超净工作台内过滤。
分装：将过滤好的培养液分装入小瓶内置于4℃冰箱内待用。
使用前要向100ml培养液中加入1ml谷氨酰胺溶液（4℃时两周有效）。
7. 血清的灭活：细胞培养常用的是小牛血清，新买来的血清要在56℃水浴中灭活30分钟后，再经过抽滤方可加入培养基中使用。
8. HEPES溶液：HEPES的化学全称位羟乙基呱嗪乙硫磺酸（N’-a-hydroxythylpiperazine-N’- ethanesulfanic acid ）。
对细胞无毒性作用。
它是一种氢离子缓冲剂，能较长时间控制恒定的pH 范围。
使用终浓度为10-50mmol/L，一般培养液内含20mmol/LHEPES即可达到缓冲能力。
1mol/L HEPE缓冲液配制方法如下：准确称取HEPTS 238.3g，加入新鲜三蒸水定容至1L。
0.22um微孔滤膜过滤除菌，分装后4℃保存。
注意：因为现在市售HEPES为约10g包装的小瓶，所以可根据实际情况灵活配制，但是要保证培养液内HEPES的终浓度仍然为20m mol/L 。
如：称取4.766克HEPES溶于20ml三蒸水中，过滤除菌后可完全（20ml）加入1L培养液中，或者每100ml培养液中加入2ml即可。
9. 谷氨酰胺：合成培养基中都含有较大量的谷氨酰胺，其作用非常重要，细胞需要谷氨酰胺合成核酸和蛋白质，谷氨酰胺缺乏要导致细胞生长不良甚至死亡。
在配制各种培养液中都应该补加一定量的谷氨酰胺。
由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定，4℃下放置1周可分解50％，故应单独配制，置于-20℃冰箱中保存，用前加入培养液。
加有谷氨酰胺的培养液在4℃冰箱中储存2周以上时，应重新加入原来的谷氨酰胺。
一般培养液中谷氨酰胺的含量为1～4mmol/L。
可以配制200mmol/L谷氨酰胺液贮存，用时加入培养液。
配制方法为，谷氨酰胺2.922g溶于三蒸水加至100ml即配成200mmol/L的溶液，充分搅拌溶解后，过滤除菌，分装小瓶，-20℃保存，使用时可向100ml培养液中加入1ml谷氨酰胺溶液。
10. 肝素溶液的配制：含有肝素的培养液可以使内皮细胞纯度提高，肝素加入全培养液中最终浓度为50ug/ml。
因为现在市售的多为肝素钠，包装为约为0.56克/瓶，配制时，可将其溶于100ml三蒸水中，定容，过夜，然后过滤除菌，分装小瓶，保存温度为??℃。
使用时，向100ml培养液中加入1ml（精确可加入0.9ml）即可。
11. Ⅰ型胶原酶：0.1％Ⅰ型胶原酶溶液同胰蛋白酶一样配制和消毒灭菌。
注意：因为Ⅰ型胶原酶分子颗粒比胰酶大，不容易过滤，因此可以用蔡式滤器过滤除菌。
分装入10ml小瓶-20℃保存。
12. 明胶溶液：因为明胶难于过滤，所以配制0.1％明胶溶液必须用无菌的PBS配制。
所以制备过程中必须要注意无菌操作。
首要的问题是如何无菌准确称量0.1克（配成100ml溶液）—即解决无菌分装药品的问题。
其次要注意即使是01.的溶液，明胶也难溶，因此要充分摇匀，过夜放置，然后无菌操作分装入50ml 小瓶中，4℃保存。
13. Hanks液：称取KH2PO4 0.06g ，Nacl 8.0g ，NaHCO3 0.35g ，KCl 0.4g ，葡萄糖 1.0g ，Na2HPO4.H2O 0.06g ，加H2O 至 1000ml注：Hanks 液可以高压灭菌。
分装于4℃下保存。
14. D-hanks 液：1液：NaCL:8.00g/L ，KCL : 0.04g/L ，Na2HPO4.2H2O:0.06g/L ，KH2PO4:0.06g/L ，配500毫升；2液：NaHCO3：0.35g/L ，配100毫升；3液：酚红：0.02g ，用数滴NaHCO3溶解酚红将2，3液移入1液中。
定容到1000毫升 PH 值是7.4左右。
分装于4℃下保存。
15. Giemsa 染液：称Giemsa 粉末0.5克，加几滴甘油研磨，再加入甘油（使加入的甘油总量为33ml ）。
56℃中保温90~120分钟。
加入33ml 甲醇，置棕色瓶中保存，此为Giemsa 原液。
使用时按要求用PBS 稀释。
一般稀释10倍。
器材与试剂 干粉型培养基、胰蛋白酶，青霉素、链霉素. 纯净水系统、电子天平、PH 计、磁力搅拌器等具体步骤1. 水：细胞培养用水必须非常纯净，不含有离子和其他的杂质。
需要用新鲜的双蒸水、三蒸水或纯净水.2. PBS (也可用于其它BSS ，如：Hanks ，D-Hanks 液的配制)：主要用于免疫组化染色时组织或细胞的漂洗溶解定容：将药品（NaCl 8.0g ，KCl 0.2g ，Na2HPO4·H2O 1.56g ，KH2PO4 0. 2g ）倒入盛有双蒸水的烧杯中，玻璃棒搅动，充分溶解，然后把溶液倒入容量瓶中准确定容至1000ml ，摇匀即成新配制的PBS 溶液。
用HCl 或NaOH 调PH 到7.4。
移入溶液瓶内待消毒：将PBS 倒入溶液瓶（大的吊针瓶）内，盖上胶帽，并插上针头放入高压锅内8磅消毒20分钟。
注意高压消毒后要用灭菌蒸馏水补充蒸发掉的水份。
3. 胰蛋白酶溶液：胰蛋白酶的作用是使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散。
不同的组织或者细胞对胰酶的作用反应不一样。
胰酶分散细胞的活性还与其浓度、温度和作用时间有关，在pH 为8.0、温度为37℃时，胰酶溶液的作用能力最强。
使用胰酶时，应把握好浓度、温度和时间，以免消化过度造成细胞损伤。
因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白质克降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液时应选用不含Ca2+、Mg2+的BSS ，如：D-Hanks 液。
终止消化时，可用含有血清培养液或者胰酶抑制剂终止胰酶对细胞的作用。
称取胰蛋白酶：按胰蛋白酶液浓度为0.25％，用电子天平准确称取粉剂溶入小烧杯中的双蒸水（若用双蒸水需要调PH 到7.2左右）或PBS （D-hanks ）液中。
搅拌混匀，置于4℃内过夜。
用注射滤器抽滤消毒：配好的胰酶溶液要在超净台内用注射滤器（0.22微米微孔滤膜）抽滤除菌。
然后分装成小瓶于-20℃保存以备使用。
4. 0.05％胰蛋白酶－0.02%EDTA 溶液称取胰蛋白酶粉末（1：250）0.05g，EDTA 0.02g，加入PBSA 100ml，0.22um微孔滤膜过滤除菌，分装，于－20℃保存。
5. 青、链霉素溶液：所用纯净水（双蒸水）需要15磅高压20分钟灭菌。
具体操作均在超净台内完成。
青霉素是80万单位/瓶，用注射器加4ml灭菌双蒸水。
链霉素是100万单位/瓶，加5ml灭菌双蒸水，即每毫升各为20万单位。
分装于－20℃保存。
使用时溶入培养液中，使青链霉素的浓度最终为100单位/ml。
6. RPMI1640：溶解、调PH值、定容：先将培养基粉剂加入培养液体积2/3的双蒸水中,并用双蒸水冲洗包装袋2-3次(冲洗液一并加入培养基中),充分搅拌至粉剂全部溶解,并按照包装说明添加一定的药品.然后用注射器向培养基中加入配制好的青链霉素液各0.5ml, 使青链霉素的浓度最终各为100单位/ml。
然后用二氧化碳或碳酸氢钠调PH到7.2左右。
最后定容至1000ml，摇匀。
安装蔡式滤器：安装时先装好支架，按规定放好滤膜，用螺丝将不锈钢滤器和支架连接好。
然后卸下支架腿分别用布包好待消毒。
抽滤：配制好的培养液通常用滤器过滤除菌。
通常用蔡式滤器在超净工作台内过滤。
分装：将过滤好的培养液分装入小瓶内置于4℃冰箱内待用。
使用前要向100ml培养液中加入1ml谷氨酰胺溶液（4℃时两周有效）。
7. 血清的灭活：细胞培养常用的是小牛血清，新买来的血清要在56℃水浴中灭活30分钟后，再经过抽滤方可加入培养基中使用。