AlexaFluor系列染料
流式常用荧光染料概要

如何选择流式细胞仪测定常用的荧光染料
流式细胞仪测定常用的荧光染料有很多种,我们如何来选择流式细胞仪测定的常用荧光染料呢?
首先要考虑,他们分子结构不同,激发光谱和发射光谱也不同,选择荧光染料时,必须依据流式细胞仪所配备的激光光源的发射光波长做为重点考虑。
发射光波长,如:氩离子气体激光管,它的发射光波488nm;
氦氖离子气体激光管发射光波长633nm;
488nm激光光源常用的荧光染料有FITC(异硫氰酸荧光素);
PE(藻红蛋白)
PI(碘化丙啶)
CY5(化青素)
preCP(叶绿素蛋白)
ECD(藻红蛋白-得克萨斯红)等。
激发光和发射光波长,如下:
流式细胞仪中常用的荧光染料光学特征以及需要的激光器
流式•细胞仪交流论坛:/forum-181-1.ht ml
荧光染料谱。
关于荧光染(资料集合)

关于荧光染料(资料集合)●人肉眼对光源波长的颜色感觉红色770-622 nm橙色622~597 nm黄色597~577 nm绿色577~492 nm蓝靛色492~455nm紫色455~350nm●理想的荧光染料一般具有以下几个特点:1.具有高的光子产量,信号强度高;2.对激发光有较强的吸收,降低背景信号;3.激发光谱与发射光谱之间距离较大,减少背景信号的干扰;4.易与被标记的抗原、抗体或其他生物物质结合而不影响被标记物的特异性;5.稳定性好,不易受光、温度、PH、标本抗凝剂和固定剂的影响。
●染料在生物化学中最早的应用是直接对切片进行染色,然后进行观察。
随着生物技术、计算机技术以及荧光光谱测定技术的不断发展,许多染料尤其是荧光染料在细胞检测、肿瘤基因蛋白分析、毒物分析、临床医疗诊断等方面得到了广泛的应用。
荧光染料泛指吸收某一波长的光波后能发射出另一大于吸收光波长的光波的物质。
利用荧光染料进行抗体标记分析在现代生物免疫学领域中应用广泛,并逐步显示出明显的优越性。
下面简要介绍应用于标记抗体的荧光染料及其种类:1.荧光素类染料,包括异硫氰酸荧光素(FITC)、羟基荧光素(FAM)、四氯荧光素(TET)等及其类似物。
这是一类具有较多苯环的化合物。
应用最广泛的是FITC(如图为FITC标记的组织荧光图),在488nm 处由氩离子激光激发,发射525nm的蓝绿色荧光。
FITC能够与各种抗体蛋白结合,并在碱性溶液中稳定呈现蓝绿色荧光。
2.罗丹明类染料,包括红色罗丹明(RBITC)、四甲基罗丹明(TAMRA)、罗丹明B(TRITC)等。
TRITC在550nm处被激发可发射出570nm的黄色荧光。
3.Cy系列菁染料,菁染料通常有两个杂环体系组成,包括Cy2、Cy3、Cy3B、Cy3.5、Cy5、Cy5.5、Cy7及其类似物。
4.Alexa系列染料,它是由MolecularProbes开发的系列荧光染料。
其激发光和发射光光谱覆盖大部分可见光和部分红外线光谱区域,应用广泛。
Alexa Fluor 647 标记山羊抗小鼠 IgG (H+L)

Alexa Fluor 647标记山羊抗小鼠IgG (H+L)产品简介:本Alexa Fluor 647标记山羊抗小鼠IgG (H+L) (Alexa Fluor 647-labeled Goat Anti-Mouse IgG (H+L))为进口分装,用于免疫荧光染色。
Alexa Fluor 647是一种较常用的非常明亮的远红外荧光探针。
通常该荧光探针被激发后肉眼不能观察到激发出来的长波长荧光,但可以被很多成像系统例如激光共聚焦显微镜等所检测到。
Alexa Fluor 647的荧光光谱与Cy5比较接近。
AlexaIgG、牛IgG(bovine IgG)、兔IgG和猪IgG吸附纯化的优质二抗。
对人IgG、马IgG、牛IgG(bovine IgG)、兔IgG和猪IgG几乎没有结合能力。
特别适合于对于二抗种属特异性要求比较高的荧光染色实验。
本Alexa Fluor 647标记山羊抗小鼠IgG (H+L)用于免疫荧光染色时的推荐稀释比例为1:500。
实际实验操作过程中需根据抗原和抗体的具体情况适当调节荧光标记二抗的稀释比例,推荐的调节范围为1:200-1000。
本抗体如果用于常规的免疫染色,以每次检测需1毫升1:500稀释的荧光标记二抗计,至少可以检测50次。
如果适当重复使用已经使用过的荧光标记二抗,至少可以多检测150-250次。
保存条件:-20℃避光保存,一年有效。
注意事项:为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明:1.免疫荧光染色请参考相关实验步骤进行。
起始稀释浓度按照产品简介中推荐的稀释比例进行稀释。
2.如果希望重复使用稀释的荧光标记二抗,稀释的荧光标记二抗4℃保存。
使用本产品的文献:1. Zhao G, Zhou A, Lu G, Meng M, Sun M, Bai Y, Han Y, Wang L, Zhou H, Cong H, Zhao Q, Zhu XQ, He S.Identification and characterization of Toxoplasma gondii aspartic protease 1 as a novel vaccine candidate againsttoxoplasmosis.Parasit Vectors. 2013 Jun 14;6:175. doi: 10.1186/1756-3305-6-175.2. Ge C, Song J, Chen L, Wang L, Chen Y, Liu X, Zhang Y, Zhang L, Zhang M.Atheroprotective pulsatile flow induces ubiquitin-proteasome-mediated degradation of programmed cell death 4 in endothelial cells.PLoS One. 2014 Mar 13;9(3):e91564. doi: 10.1371/journal.pone.0091564. eCollection 2014.。
alexaflour 532分子式

主题:alexaflour 532分子式解析1. 介绍alexaflour 532的基本信息alexaflour 532是一种荧光染料,通常用于生物医学研究和生物标记。
它具有光稳定性和较高的荧光效率,被广泛应用于细胞成像和蛋白质定位等领域。
2. 分子式的组成及化学结构alexaflour 532的分子式为C38H46ClN3O6S2,它是一种有机化合物。
该分子由38个碳原子、46个氢原子、3个氮原子、6个氧原子和2个硫原子组成。
在分子结构上,alexaflour 532具有苯环和氨基等基团,这些基团赋予了它荧光性质。
3. 荧光性质alexaflour 532在适当的激发光下,会发出绿色荧光,具有较高的荧光量子产率和光稳定性。
这使得它成为细胞成像和荧光标记的理想选择。
4. 应用领域alexaflour 532广泛应用于生物医学领域,包括细胞成像、蛋白质定位、细胞分析等。
由于其稳定的荧光特性,可以在活细胞中长时间追踪目标分子的位置和分布,为生命科学研究提供了重要工具。
5. 实验方法使用alexaflour 532进行细胞成像实验时,通常需要将其与待研究的生物分子标记结合,然后通过激发光源激发,并观察其发出的荧光信号。
还需要注意控制实验条件,以确保荧光信号的稳定性和准确性。
6. 总结alexaflour 532作为一种优秀的荧光染料,在生物医学研究领域发挥着重要作用。
它的分子式C38H46ClN3O6S2揭示了其化学组成和结构特点,其荧光性质和广泛的应用领域使它成为研究人员青睐的选择。
通过合理的实验方法和技术手段,能更好地发挥其在生物标记和成像中的作用,为科学研究提供更加丰富的信息和数据。
7. alexaflour532的荧光机制alexaflour 532的荧光性质主要源自于其特定的化学结构和分子组成。
当alexaflour 532受到激发光源的激发后,其中的某些电子被激发到一个较高能级的轨道上,形成激发态。
荧光染料

AlexaFluor 荧光素是市场上效果最好的荧光素,比较传统荧光素,它具有以下优点:·多色彩选择的灵活性- 染料颜色区广,从蓝色到远红外;·更亮- 荧光强度明显高于近似波长的对应染料,可高达20 倍,镜下可持续3 分钟;·更不容易光淬灭;·对PH 变化极不敏感,可耐受PH2.5-10 广泛的PH 环境;·仪器适配性佳- 荧光显微镜、流式细胞仪等。
AlexaFluor 488 和FITC 的荧光强度对比AlexaFluor488 的荧光强度随时间降低的速度要远小于FITCAlexaFluor 488 的荧光强度几乎不随pH 变化,而FITC 变化显著麦生物™ AlexaFluor 荧光标记抗体实验推荐稀释浓度:使用前先离心,只使用上清,这样能避免保存过程中可能出现的任何微小的蛋白沉淀带来的背景染色。
染色步骤根据应用不同而有差异,所以抗体稀释精确倍数也需要摸索。
一般来说,可使用下表的荧光二抗浓度来进行初始实验:流式细胞术0.06-1.0 ug/106细胞免疫荧光1-10 ug/ml您需根据不同实验需要滴定抗体的最适稀释比例,即最佳工作浓度。
用PBS 进行稀释。
普通荧光素和Alexa Fluor® 替换对应表(括弧中为激发/ 发射波长最值)如果您使用... 那么您可以尝试...AMCA, coumarin (350/445) A lexa Fluor® 350 (346/442)Cascade Blue® (4000/423)Alexa Fluor® 405 (402/421) Alexa Fluor® 430 (434/539)Cy®2, FITC (488/519)Alexa Fluor® 488 (495/519) Alexa Fluor® 532 (531/554)PE, TRITC, TAMRA(547/572)Alexa Fluor® 546 (556/573) Cy®3 (550/570)Alexa Fluor® 555 (555/565) Rhodamine Red (570/576) Alexa Fluor® 568 (578/603)Texas Red® (589/615)Alexa Fluor® 594 (590/617) Alexa Fluor® 633 (632/647)Cy®5, APC (650/670,660)Alexa Fluor® 647 (650/668) Alexa Fluor® 660 (663/690)Cy®5.5 (675/694)Alexa Fluor® 680 (679/702) Alexa Fluor® 700 (696/719)Cy®7 (743/767) Alexa Fluor® 750 (752/779)。
AlexaFluor488抗体标记试剂盒

Alexa Fluor 488抗体标记试剂盒试剂盒组分:A.AF488活性染料5瓶B.碳酸氢钠~84mgC.纯化树脂~10mlD.空柱5个E.收集管5个注意:纯化的蛋白buffer中不得含有铵离子或伯铵,因为它们会与蛋白质竞争结合活性染料。
不纯的抗体或者含BSA或明胶的抗体标记效果不好。
低浓度的叠氮钠(小于3mM)或thimerosal(小于1mM)不影响偶联效果。
一、实验步骤:1.标记蛋白1.1将1ml去离子水加入B组分瓶中,配成1M的碳酸氢钠溶液。
振荡或吹打至完全溶解。
该溶液pH约8.3,2~6度保存可用2星期;1.2若抗体是溶液,将抗体稀释至1mg/ml,再加入1/10体积的上述碳酸氢钠溶液;若抗体是冻干粉,将1M碳酸氢钠溶液用10倍去离子水稀释成0.1M后,用其将抗体溶成1mg/ml的溶液;1.3将上一步的蛋白溶液100μl加入活性染料瓶中。
盖上盖子轻轻翻动一会儿至染料完全溶解。
剧烈震动可能会导致蛋白降解(可将瓶上的标签撕掉后观察溶解情况);1.4室温孵育溶液1小时,每10~15min轻轻翻动瓶子使两种反应物混合均匀(孵育期间进行2.1~2.4步准备树脂柱,这个过程需要大约15min)。
2.纯化标记上的蛋白2.1 将树脂柱放入一个13×100mm的玻璃管中;2.2 搅动纯化树脂(组分C),加入1.0ml悬浮液至空柱中静置;2.3 继续加入树脂至床体积为~1.5ml;2.4将树脂柱放入一个收集管中,用垂直转子1100g离心3min,rpm与相对离心力g的换算公式如下:相对离心力g=(1.12×10-5)(rpm)2(半径cm);离心后静置待缓冲液全部流出,弃去缓冲液,保留收集管(若没有垂直转子,角转子也可);2.5 将1.4步的反应液100μl逐滴加入树脂柱的中心部位,使溶液被吸入胶床中;2.6 将树脂柱放入空的收集管中,1100g离心5min;2.7 离心后,收集管内是标记好的蛋白,溶在100μlPBS中,pH7.2,包括2mM的叠氮钠。
Alexa Fluor 染料

无论你的实验需要标记的一抗,的键,但是四氟苯酯更不容易在结合反应中自发水解。
Alexa Fluor 488四氟苯酯也可以单独提供(表3)。
通过标记的二抗增强信号如果所制备的标记一抗是不实用的,或者无法提供足够的灵敏度,那就需要高质量的二抗来解决问题。
尽管来自于一抗和二抗的非特异性结合可以提高背景水平,选择一个较好的标记了的二抗,通常可以通过显著性的信号扩增来克服升高了的荧光背景。
当然,不是每一个商业上可以提供的二抗都是完全被纯化或优化标记的(图3)。
Molecular Probes提供了在任何地方均可获得的可以进行最大选择的荧光二抗。
(全部目录详见在线手册的第7章,网址是/handbook)。
图3. Molecular Probes的Alexa Fluor 647山羊抗鼠IgG 抗体与可购买到的其它公司提供的Cy5 山羊抗鼠IgG抗体亮度的比较这些包括具有强烈荧光的Alexa Fluor抗体耦合物,在各个光谱都胜过大多数常规使用的荧光二抗。
在制备每个二抗耦合物时,我们采用了质量最高的蛋白,然后优化标记,以形成最亮的的耦合物,最后使用细胞样品进行严格的测试,以确保低非特异性结合和高特异性染色。
Alexa Fluor二抗正快速成为所有基于荧光免疫测定的首选的二级试剂。
在我们新的Image-iT 试剂盒中还将包含几个Alexa Fluor 抗体耦合物—-每个Image-iT试剂盒都含一个明亮的并且光稳定的Alexa Fluor耦合物和所有用来优化固定细胞和组织成像的试剂。
通过酪胺信号放大技术(Tyramide Signal Amplification)促使信号增强当实验样品的靶点不是很丰富的时候,通过二抗的信号扩增是不够的。
对于此种情况,我们已经开发了酪胺信号放大技术(TSA)试剂盒(表4),它利用了超亮度的Alexa Fluor染料以达到最终的高清晰度信号扩增。
TSA 技术—有时也称作CARD(catalyzed reporter deposition)—是一种利用了辣根过氧化物酶(HRP)的催化活性在靶蛋白或核酸序列上产生高密度原位标记的酶介导检测方法(图4)。
荧光染料

荧光蛋白 QY Y66H Y66F EBFP EBFP2 Azurite GFPuv T-Sapphire Cerulean mCFP ECFP CyPet Y66W mKeima-Red TagCFP AmCyan1 mTFP1 S65A Midoriishi Cyan 360 360 380 383 383 385 399 433 433 434 435 436 440 458 458 462 471 472 442 508 440 448 447 508 511 475 475 477 477 485 620 480 489 492 504 495 0.9 25 dimer 0.75 0.24 3 29 29 54 monomer dimer tetramer dimer 0.60 0.62 0.40 0.15 0.51 26 27 13 3 18 59 weak dimer 25 36 64 weak dimer weak dimer monomer 0.18 0.27 20 15 monomer monomer monomer BR PS
503 504 509 510 536 543;590 546 547 642 647 361/330 506 505 505 548/579
530/640 523 533 ~600
DNA/RNA DNA Vital stain, TOTO: Cyanine Dimer TO-PRO: Cyanine Monomer
0.68
39
0.69
26k 105k 26k
0.60 0.74 0.91 0.61 0.57 0.76 0.77
34 41 40 47 51 57 53 59 80 1.65 13 31
174
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
AlexaFluor系列染料
Alexa Fluor 系列染料――可见光谱的最佳染料,Alexa Fluor 是荧光标记试剂的一大突破,包括一系列近紫外、可见光和近红外光谱的优良染料,这些试剂产生的偶联物无一例外是实验检测过最好和最亮的,在蓝光和远红光范围提供了多色检测和FRET(荧光共振能量转移)的多种选择。
和R-PE 或APC 联用的Tandem 染料扩展了Alexa Fluor 在多色检测的应用。
Alexa Fluor 的优点如下:
◆亮度— Alexa Fluor 偶联物相比其他染料荧光更强。
◆光稳定性—Alexa Fluor 偶联物相比其他染料光稳定性更强,提供更
长的图像捕获时间。
◆仪器兼容性—Alexa Fluor 偶联物的吸收光谱与普通激发光源的主要
输出波长相匹配。
◆多种颜色— Alexa Fluor 偶联物有蓝色到红色的多种直接荧光.
◆pH 值不敏感— Alexa Fluor 染料在一个广泛的pH 范围内保持强荧
光.
◆水溶性— Alexa Fluor 反应性染料有良好的水溶性, 无需有机试剂即
可结合蛋白, 且储存不易产生沉淀.
Alexa Fluor 染料的光谱特性: Alexa Fluor 350—亮蓝和紫外光激发
Alexa Fluor 350 的蓝色荧光比AMCA 亮50%,而且最大发射波长稍短(为442 nm ,AMCA 为448nm),因此更容易与现有的绿色荧光基团区分。
Alexa Fluor 405 —近乎完美的匹配蓝色二极管激光器
Alexa Fluor 405 的激发/发射最大波长为402/421 nm,与近来使用的荧光显微镜和流式细胞仪405nm
谱线的蓝色二极管激光器近乎完美的匹配。
Alexa Fluor 405 琥珀酰酯是Cascade Blue 的氨基反应性衍生
物,后者是乙酰叠氮化物。
Alexa Fluor 405 琥珀酰酯纯度更高且有一个4-哌啶羧酸的间隔,使得荧光基团
与其偶联的生物分子之间的反应性最小化。
Alexa Fluor 430—高斯托克斯频移的430 nm 吸收
少数400 nm ~ 450 nm 吸收的染料在水溶液中可测荧光偏离500 nm。
Alexa Fluor 430 弥补了这一缺
陷,430 nm 激发时发射在540 nm 附近。
Alexa Fluor 488—最好的绿色荧光基团,Alexa Fluor 488 偶联蛋白优于其他荧光素,实验证明比包括Cy2 的其他绿色荧光基团都好。
不仅亮度更高,而且光稳定性更好。
在pH4~10 保持稳定是另一优越之处。
Alexa Fluor 532 —最适于532 nm 激发光源的染料
激发发射波长位于绿色荧光Alexa Fluor 488 和橙色荧光的Alexa Fluor 546 之间,适用于双频Nd:YAG
激光器在内的532 nm 激发光源。
Alexa Fluor 546—Cy3 和四甲基罗丹明的替代物
Alexa Fluor 546 标记的偶联物良好应用于橙色范围光谱,比四甲基罗丹明(TRITC 、TAMRA) 及Cy3 荧
光更强,容易被汞弧灯激发,发射波长546 nm。
Alexa Fluor 555—优于Cy3 的替代物
Alexa Fluor 555 与Cy3 偶联物的光谱相匹配,因此适用于Cy3 的滤光器。
Alexa Fluor 555 的总荧光更强,且光稳定性更好,为研究者提供了更长的图像捕获时间。
Alexa Fluor 568 —最适于568 nm 激发光源
Alexa Fluor 568 的橙红色荧光最适用于激光共聚焦显微镜的Ar–Kr 混合气体激光器,其发射的谱线为
568 nm。
与具有相似最大激发/发射波长的Lissamine Rhodamine B 和Rhodamine Red-X 相比,AlexaFluor 568 的偶联物亮度更高。
Alexa Fluor 594 —优于Texas Red 的替代品
Alexa Fluor 594 偶联物发出红色光,可与绿色荧光探针一同用于多色标记实验。
比Texas Red 偶联物有更高的亮度。
Alexa Fluor 610—Alexa Fluor 最好的红色染料
Alexa Fluor 610 亮度高、光稳定,可用检测Texas Red 和Alexa Fluor 594 的光学元件检测。
前身是
FRET-based Alexa Fluor–phycobiliprotein 的受体染料。
新的Alexa Fluor 610 激发/发射波长为612/628
nm,容易与绿色荧光基团相区分,适用于多色标记。
Alexa Fluor 610 仍为人眼可见,优于Alexa Fluor 633
和其他更长波长的荧光团。
Alexa Fluor 633 —光稳定性更强
远红光染料近来大受欢迎,是因为它们的光谱范围在大多数样品的自发荧光之外。
He–Ne 激光器
633 nm 和红色二极管激光器635 nm 谱线的广泛应用加速了兼容染料的开发。
Alexa Fluor 633 偶联物具有
亮度和光稳定性,吸收峰在632 nm,发射峰在650 nm。
Alexa Fluor 635 —He–Ne 激光器633 nm 线的最佳染料新的Alexa Fluor 635 染料,其偶联物比Alexa Fluor 633 亮度更高,因为它的吸收光谱不会象Alexa
Fluor 633、Cy5 和tetramethylrhodamine 那样分成两个峰。
Alexa Fluor 635 同样适用于He–Ne 激光器的
633 nm 谱线和红色二极管激光器的635 nm 谱线,吸收峰在633 nm,发射峰在647 nm。
Alexa Fluor 647 —优于Cy5 的替代品
Alexa Fluor 647 与Cy5 偶联物的光谱及滤光器相匹配。
Alexa Fluor 647 二抗偶联物的总荧光亮度高
于其他公司的Cy5 偶联物。
在与大多数的蛋白质、寡核苷酸和核酸结合时,Alexa Fluor 647 相比Cy5 荧光
吸收光谱波动很小,因此在同等程度的替换时发出的荧光更强。
Alexa Fluor 680 —Cy5.5 的替代物
Alexa Fluor 680 的激发峰在679 nm,最大发射为702 nm,与Cy5.5 类似。
Alexa Fluor 680 能够很好
的与其他红色荧光团区分,如Texas Red, R-phycoerythrin, Alexa Fluor 594 和Alexa Fluor 647,是理想
的三色与四色标记用染料。
Alexa Fluor 700 —远红光二极管激光器的最适染料
Alexa Fluor 700 最大吸收在696 nm,能够被675–700 nm 范围的氙弧灯、远红外二极管激光器或
dye-pumped lasers 激发。
发射光在红外区,峰值为719 nm。
Alexa Fluor 750—Alexa Fluor 最长波长的产品
Alexa Fluor 750 是目前的Alexa Fluor 系列产品中波长最长的产品,与Cy7 光谱相似。
其发射的最大
波长为779 nm,能够和Alexa Fluor 647 及allophycocyanin (APC)区分,适合多色分析。
Alexa Fluor 700
偶联物752 nm 的最大激发光使其适用于720–750 nm 范围的氙弧灯或dye-pumped lasers。