常用荧光染料探针列表(精校版本)
核内体定位荧光染料
核内体定位荧光染料
核内体定位荧光染料是一种用于标记和定位细胞核内体结构的荧光染料。
细胞核内体是细胞核内的特定区域或结构，常常与基因表达、DNA修复和转录调控等生物学过程密切相关。
常见的核内体定位荧光染料包括:
1. DAPI（4',6-二胺-2-苯基-indole）：DAPI是一种DNA结合荧光染料，可以顺利穿透细胞膜和核膜，与DNA结合形成蓝色荧光，用于标记和观察细胞核。
2. Hoechst染料：Hoechst染料系列是一类与核酸结合的荧光染料，可用于核内体的定位和染色。
常见的Hoechst染料包括Hoechst 33342和Hoechst 33258。
3. SYTOX染料：SYTOX染料是一类高亲和力DNA结合的荧光染料，可以用于细胞核内运动的核茎环和组蛋白复合物的观察。
4. Acridine Orange（AO）：AO是一种DNA/RNA双链荧光染料，可以用于核内体的定位和染色。
5. propidium iodide（PI）：PI是一种DNA结合荧光染料，用于细胞凋亡、细胞周期和细胞核破裂等核内体相关实验。
这些核内体定位荧光染料能够提供细胞核内体结构的明亮和清
晰的荧光信号，帮助研究人员观察和研究细胞核内体的形态和功能。
荧光染料参数表
荧光染料参数表荧光染料参数表（下图举例）能够让您查看某一选定荧光染料的性能参数，并确定其是否适合于您的实验，以及最适合的实验方法。
参数表将提供染料关键特性的介绍——更为详细的资料可到相应产品页面查看。
•初始亮度是指示荧光染料的相对亮度，该值由摩尔消光系数和量子产率得出，这两个参数对于每一单个荧光染料来说都是特异性的。
具有较高初始亮度的荧光染料适用于检测较低丰度的靶标。
•缓冲液中的光稳定性是初始荧光强度在经过30秒连续照明后残留比率的相对百分比，该值在使用40x/1.4NA的物镜和100w汞-弧光灯作为光源的条件下，通过观察置于磷酸盐缓冲液中的样本获得。
缓冲体系中光稳定性较高的染料将更适合于活细胞成像和检测等相关应用。
•抗淬灭剂中的光稳定性是初始荧光强度在经历30秒连续照明后残留强度的相对百分比，该值在使用40x/1.4NA的物镜和100w汞-弧光灯作为光源的条件下，通过观察ProLong® Gold或SlowFade® Gold抗淬灭剂中的样本获得。
抗淬灭试剂中光稳定性较高的染料更适合于固定细胞样本的成像和检测实验。
•染色指数是一个归一化数值，可用于比较不同荧光染料在流式细胞术应用中荧光亮度的差异；该值通过使用阳性区域的平均荧光强度（MFI）减去阴性区域的平均荧光强度得到的差值，再除以两倍的阴性区域标准差获得。
•激光束表示流式细胞检测中常用的激光束•通用检测通道表示能够生成最佳成像结果的标准显微镜滤光片设置•最大激发波长表示获得峰值的激发波长（参见荧光光谱查看器以了解完整光谱）•最大发射波长表示获得峰值的发射波长（参见荧光光谱查看器以了解完整光谱）荧光染料参数表样例初始亮度摘要部分突出强调荧光染料的关键属性及其典型应用和多通道兼容性。
缓冲液中的光稳定性抗淬灭剂中的光稳定性92 488 FITC 490 525染色指数激光束通用检测通道最大激发波长最大发射波长荧光光谱查看器。
DiI (细胞膜红色荧光探针)说明书
DiI (细胞膜红色荧光探针)产品编号 产品名称包装 C1036DiI (细胞膜红色荧光探针)10mg产品简介：DiI 即DiIC 18(3)，全称为1,1'-dioctadecyl-3,3,3',3'-tetramethylindocarbocyanine perchlorate ，是最常用的细胞膜荧光探针之一，呈现橙红色荧光。
DiI 是一种亲脂性膜染料，进入细胞膜后可以侧向扩散逐渐使整个细胞的细胞膜被染色。
DiI 在进入细胞膜之前荧光非常弱，仅当进入到细胞膜后才可以被激发出很强的荧光。
DiI 被激发后可以发出橙红色的荧光，DiI 和磷酯双层膜结合后的激发光谱和发射光谱参考下图。
其中，最大激发波长为549nm ，最大发射波长为565nm 。
DiI 的分子式为C 59H 97ClN 2O 4，分子量为933.88，CAS number 为41085-99-8。
DiI 可以溶解于无水乙醇、DMSO 和DMF ，其中在DMSO 中的溶解度大于10mg/ml 。
发现较难溶解时可以适当加热，并用超声处理以促进溶解。
DiI 被广泛用于正向或逆向的，活的或固定的神经等细胞或组织的示踪剂或长期示踪剂(long-term tracer)。
DiI 通常不会影响细胞的生存力(viability)。
被DiI 标记的神经细胞在体外培养的条件下可以存活长达4周，在体内可以长达一年。
DiI 在经过固定的神经元细胞膜上的迁移速率为0.2-0.6mm/day ，在活的神经元细胞膜上的的迁移速率为6mm/day 。
DiI 除了最简单的细胞膜荧光标记外，还可以用于检测细胞的融合和粘附，检测发育或移植过程中细胞迁移，通过FRAP(Fluorescence Recovery After Photobleaching)检测脂在细胞膜上的扩散，检测细胞毒性和标记脂蛋白等。
用于细胞膜荧光标记时，DiI 的常用浓度为1-25µM ，最常用的浓度为5-10µM 。
免疫分析中常用的荧光染料与标记染色
（⼀）免疫荧光标记最常⽤的荧光染料
最常⽤的染料有FITC和藻红蛋⽩类（PE）及罗丹明等。
FITC（异硫氰酸荧光素）：绿⾊530nm
PE（藻红蛋⽩）：橙黄⾊575nm
PerCP（多甲藻黄素叶绿素蛋⽩）：深红⾊675nm
PI（碘化丙啶）：橙红⾊620nm
488nm波长的氩离⼦激光激发
APC（别藻青蛋⽩）：红⾊660nm
630nm波长的氦氖激光或红⾊⼆极管激光激发
（⼆）免疫荧光标记
常⽤的标记染⾊为直接免疫荧光染⾊和间接免疫荧光染⾊。
在进⾏双参数或多参数分析时，常常需要进⾏荧光抗体的组合标记，⽬前已经有双⾊、三⾊以及四⾊标记。
（三）细胞⾃发荧光
⾃发荧光信号为噪声信号，在多数情况下会⼲扰对特异荧光信号的分辨和测量。
在免疫细胞化学等测量中，对于结合⽔平不⾼的荧光抗体来说，如何提⾼信噪⽐是个关键。
⼀般说来，细胞成分中能够产⽣⾃发荧光的分⼦（例如核黄素、细胞⾊素等）的含量越⾼，⾃发荧光越强；培养细胞中死细胞／活细胞⽐例越⾼，⾃发荧光越强；细胞样品中所含亮细胞的⽐例越⾼，⾃发荧光越强。
流式细胞仪测定常用的荧光染料
流式细胞仪测定常用的荧光染料
流式细胞仪测定常用的荧光染料有多种,他们分子结构不同,激发光谱和发射光谱也各异,选择荧光染料时必须依据流式细胞仪所配备的激光光源的发射光波长(如氩离子气体激光管,它的发射光波488ηm,氦氖离子气体激光管发射光波长633ηm）。
488ηm激光光源常用的荧光染料有FITC（异硫氰酸荧光素）、PE （藻红蛋白）、PI（碘化丙啶）、CY5（化青素）、preCP(叶绿素蛋白)、ECD(藻红蛋白-得克萨斯红)等。
他们的激发光和发射光波长分别是：
激发光波长（ηm）发射光峰值（ηm）
FITC 488 525（绿）
PE 488 575（橙红）
PI 488 630（橙红）
ECD 488 610（红）
CY5 488 675（深红）
PreCP 488 675（深红。
常用荧光探针小结
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视频：The Use of Carboxyfluorescein Diacetate Succinimidyl Ester (CFSE) to Monitor Lymphocyte Proliferation
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三、异硫氰酸罗丹明（TMRITC）
四甲基异硫氰酸罗达明，它是一种紫红色粉末，较稳定。其最 大吸收光谱为550nm，最大发射光谱620nm，呈橙红色荧光，与FITC 的黄绿色荧光对比清晰，与蛋白质结合方式同TITC。它可用于双标记 示踪研究。
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Endothelial cells under the microscope. Nuclei are stained blue with DAPI, microtubles are marked green by an antibody and actin filaments are labelled red with phalloidin.
性状多年不变，室温下也能保存两年以上。异构体I、II均 能与蛋白质良好结合，但异构体I的荧光效率更高，与蛋白 质的结合也更稳定。 FITC的最大吸收光谱为490----495纳 米，最大发射光谱为520-530nm，呈明亮的黄绿色荧光。 FITC含有异硫氰基 ， 在碱性条件下能与IgG的自由氨基 （主要是赖氨酸的-氨基）形成荧光抗体结合物。
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五、溴化乙锭
详见第四节“应用于核酸检测的荧光探针技术”
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六、DAPI （ 4‘,6-diamidino-2-phenylindole）
DAPI was first synthesised in as part of a search for drugs to treat trypanosomiasis. Although it was unsuccessful as a drug, further investigation indicated it bound strongly to DNA and became more fluorescent when bound.
荧光探针和荧光染料
荧光探针和荧光染料来源：互联网 作者：未知 发布时间：2006-10-18实时荧光PCR 定量包括探针类和非探针类两种，探针类是利用与靶序列特异杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类则是不利用杂交原理，而利用其他的一些理化特征指示扩增产物的增加。
前者由于增加了探针的识别步骤，特异性更高，但后者则简便易行。
1．TaqMan 探针TaqMan 探针是一种寡核苷酸探针，荧光基团连接在探针的5’末端， 而淬灭剂则在3’末端。
当探针与靶序列配对时，荧光基团发射的荧光因与3’端的淬灭剂接近而被淬灭。
在进行延伸反应时，聚合酶的5’外切酶活性将探针切断， 使得荧光基团与淬灭剂分离，发射荧光。
一分子的产物生成就伴随着一分子的荧光信号的产生。
随着扩增循环数的增加，释放出来的荧光基团不断积累。
因此Taqman 探针检测的是积累荧光。
常用的荧光基团是FAM ，TET ，VIC ，HEX 。
2．分子信标（molecular beacon）分子信标是一种呈发夹结构的茎环双标记寡核苷酸探针，两端的核酸序列互补配对，因此标记在一端的荧光基团与标记在另一端的淬灭基团紧紧靠近。
荧光基团被激发后产生的光子被淬灭剂淬灭，由荧光基团产生的能量以红外而不是可见光形式释放出来。
分子信标的茎环结构中，环一般为15-30 个核苷酸长，并与目标序列互补；茎一般5-7 个核苷酸长，并相互配对形成茎的结构。
荧光基团标记在探针的一端，而淬灭剂则标记在另一端。
在复性温度下，因为模板不存在时形成茎环结构，当加热变性会互补配对的茎环双链解开，如果有模板存在环序列将与模板配对。
与模板配对后，分子信标将成链状而非发夹状，使得荧光基团与淬灭剂分开。
当荧光基团被激发时，因淬灭作用被解除，发出激发光子。
由于是酶切作用的存在，分子信标也是积累荧光。
常用的荧光基团：FAM ，Texas Red 。
3．SYBR Green ISYBR Green I 是一种能与双链DNA 结合发光的荧光染料。
常见荧光染料及用途
常见荧光染料及用途《常见荧光染料及用途》荧光染料是一种能够吸收可见光或紫外光，并在吸收能量的激发下发射可见光的化学物质。
它们的应用非常广泛，涵盖了许多领域，例如生物医学、材料科学、环境监测等。
以下介绍几种常见的荧光染料及其主要用途。
1. 墨水蓝(BR)：墨水蓝是一种具有强烈蓝色荧光的染料，常用于生物实验中的DNA染色。
它与DNA结合后能发出强烈的荧光信号，从而在实验中方便地观察和分析DNA的存在和定位。
2. 罗丹明B(RhB)：罗丹明B是一种红色荧光染料，广泛用于组织切片和细胞染色。
它能够与细胞核和胞浆中的核酸结合，以显示细胞和组织的结构，帮助科研人员研究细胞分裂和组织结构变化。
3. 草酸罗丹明G(OG)：草酸罗丹明G是一种绿色荧光染料，主要应用于蛋白质和核酸的定量分析。
在分光光度计中配合荧光检测器使用，可以精确测定溶液中蛋白质和核酸的浓度。
4. 罗丹明110(Rh110)：罗丹明110是一种黄绿色荧光染料，常用于细胞活性检测。
通过与细胞内的酶或细胞膜结合，罗丹明110可以用来评估细胞的活力和存活情况，特别适用于细胞毒性测试和细胞增殖研究。
5. 荧光素(FITC)：荧光素是一种与生物相容性极高的荧光染料，常用于免疫染色和分子生物学实验。
它能与抗体特异性结合，在免疫组化和流式细胞术中用于检测蛋白质的表达以及细胞表面标记。
以上只是常见的荧光染料中的几种，它们的应用还远不止于此。
随着科学技术的不断进步，新型的荧光染料不断问世，为各个领域的研究提供了更多更有力的工具。
通过荧光染料的运用，科学家们能够更好地理解和研究生物、物质和环境，进一步推动科学的发展。
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这是来自于Salk的一个比较全的荧光染料列表，这些荧光染料可广泛用于流式细胞术以及荧光显微镜技术，汇集了各种荧光染料的特性，方便大家查找。
可根据实际所用的检测平台、染料的最大激发光波长和最大发射光波长来选择合适的
荧光染料用于实验。
请注意这上面所显示的颜色可能会由于所用浏览器不同而有所不同，他们只是一个与实际颜色的近似值。
染料名称Excitation
(nm)
Emissio
n(nm)
分子量备注信息
Reactive and conjugated probes
Hydroxycoumarin 325 386 331 Succinimidyl ester Aminocoumarin 350 445 330 Succinimidyl ester Methoxycoumarin 360 410 317 Succinimidyl ester Cascade Blue (375);401 423 596 Hydrazide
Pacific Blue 403 455 406 Maleimide
Pacific Orange 403 551
Lucifer yellow 425 528
NBD 466 539 294 NBD-X
R-Phycoerythrin
(PE)
480;565 578 240 k
PE-Cy5 conjugates 480;565;65
670
aka Cychrome, R670,
Tri-Color, Quantum Red
PE-Cy7 conjugates 480;565;74
3
767
Red 613 480;565 613 PE-Texas Red
PerCP 490 675 Peridinin chlorphyll protein
TruRed 490,675 695 PerCP-Cy5.5 conjugate FluorX 494 520 587 GE Healthcare Fluorescein 495 519 389 FITC; pH sensitive BODIPY-FL 503 512
TRITC 547 572 444 TRITC
X-Rhodamine 570 576 548 XRITC
Lissamine Rhodamine
B
570 590
Texas Red 589 615 625 Sulfonyl chloride Allophycocyanin
(APC)
650 660 104 k
APC-Cy7 conjugates 650;755 767 PharRed
Alexa Fluor系列荧光染料
Alexa Fluor 350 343 442 410。