Alexa Fluor系列染料
流式细胞术中应用的荧光染料介绍
流式细胞术中应用的荧光染料介绍流式细胞术（Flow Cytometry）是一种用于分析和计数细胞的技术。
在流式细胞术中，荧光染料起着至关重要的作用，可以标记细胞的不同成分，使其能够通过流式细胞仪进行检测和分析。
荧光染料通过特定的荧光光谱来发出荧光信号，这些信号被流式细胞仪采集和分析，从而提供有关细胞类型、数量和功能的信息。
以下是几种常见的流式细胞术中应用的荧光染料的介绍。
1. FITC（Fluorescein Isothiocyanate）：FITC是最常用的荧光染料之一，通过与免疫球蛋白G（IgG）结合，可用于免疫细胞表面分子的检测。
FITC在波长为488 nm的激光下激发，发射的荧光信号在525 nm 左右。
它可以与其他荧光染料（如PE或APC）结合使用，以实现多参数流式细胞分析。
2. PE（Phycoerythrin）：PE是一种从红藻中提取的荧光染料，其发射的荧光信号在575 nm左右。
PE通常用于检测细胞表面的抗原或细胞内的蛋白质，如细胞因子。
PE也可以与其他染料结合使用，以实现多参数分析。
3. APC（Allophycocyanin）：APC是一种类似于PE的荧光染料，通过独特的发射波长（约于660 nm附近）和长的荧光寿命来区分。
APC适用于检测多种细胞表面分子和蛋白质，在深色的区域提供了可靠的信号。
5. PE-Cy7：PE-Cy7是PE染料与Cyanine 7（Cy7）结合形成的荧光染料。
它适用于多参数流式细胞术，利用其较长的荧光寿命和波长（激发于488 nm，发射于780 nm左右），可以与其他染料一起使用，以实现更多的细胞表面和内部分子的检测。
除了上述染料外，还有很多其他的荧光染料可以用于流式细胞术。
例如，Alexa Fluor系列、eFluor系列、Brilliant Violet系列等。
这些染料具有不同的光谱特性和荧光强度，可以根据实验需要选择合适的染料。
需要注意的是，在选择荧光染料时，需考虑染料的互相干扰问题和流式仪的激发和检测系统。
Alexa Fluor 647 标记山羊抗小鼠 IgG (H+L)
Alexa Fluor 647标记山羊抗小鼠IgG (H+L)产品简介：本Alexa Fluor 647标记山羊抗小鼠IgG (H+L) (Alexa Fluor 647-labeled Goat Anti-Mouse IgG (H+L))为进口分装，用于免疫荧光染色。
Alexa Fluor 647是一种较常用的非常明亮的远红外荧光探针。
通常该荧光探针被激发后肉眼不能观察到激发出来的长波长荧光，但可以被很多成像系统例如激光共聚焦显微镜等所检测到。
Alexa Fluor 647的荧光光谱与Cy5比较接近。
AlexaIgG、牛IgG(bovine IgG)、兔IgG和猪IgG吸附纯化的优质二抗。
对人IgG、马IgG、牛IgG(bovine IgG)、兔IgG和猪IgG几乎没有结合能力。
特别适合于对于二抗种属特异性要求比较高的荧光染色实验。
本Alexa Fluor 647标记山羊抗小鼠IgG (H+L)用于免疫荧光染色时的推荐稀释比例为1:500。
实际实验操作过程中需根据抗原和抗体的具体情况适当调节荧光标记二抗的稀释比例，推荐的调节范围为1:200-1000。
本抗体如果用于常规的免疫染色，以每次检测需1毫升1:500稀释的荧光标记二抗计，至少可以检测50次。
如果适当重复使用已经使用过的荧光标记二抗，至少可以多检测150-250次。
保存条件：-20℃避光保存，一年有效。
注意事项：为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：1.免疫荧光染色请参考相关实验步骤进行。
起始稀释浓度按照产品简介中推荐的稀释比例进行稀释。
2.如果希望重复使用稀释的荧光标记二抗，稀释的荧光标记二抗4℃保存。
使用本产品的文献：1. Zhao G, Zhou A, Lu G, Meng M, Sun M, Bai Y, Han Y, Wang L, Zhou H, Cong H, Zhao Q, Zhu XQ, He S.Identification and characterization of Toxoplasma gondii aspartic protease 1 as a novel vaccine candidate againsttoxoplasmosis.Parasit Vectors. 2013 Jun 14;6:175. doi: 10.1186/1756-3305-6-175.2. Ge C, Song J, Chen L, Wang L, Chen Y, Liu X, Zhang Y, Zhang L, Zhang M.Atheroprotective pulsatile flow induces ubiquitin-proteasome-mediated degradation of programmed cell death 4 in endothelial cells.PLoS One. 2014 Mar 13;9(3):e91564. doi: 10.1371/journal.pone.0091564. eCollection 2014.。
共聚焦可用的荧光标记
共聚焦可用的荧光标记哎呀，说到“共聚焦可用的荧光标记”这玩意儿，先别被它的名字吓到。
说白了就是在显微镜下，用一些特定的染料让你观察到那些肉眼看不见的细小细胞、分子，甚至是微观世界里的小秘密。
你可能会想：“这不就是给细胞穿个衣服？”差不多！给它们涂上某种荧光的“颜料”，让它们在特定的光照下发光，这样一来，你就能把它们从背景中挑出来，看得一清二楚。
首先得说，为什么大家喜欢“共聚焦”？别急，听我慢慢道来。
共聚焦显微镜，它就像一个超级聪明的侦探，能精准地聚焦到样品的某个区域，不像普通显微镜那样有点“模糊”或者“搞不清楚”。
它的特别之处在于，通过选择性地聚焦，能让你看到非常细致、非常清晰的图像。
简单说，它能给你放大那些最微小的细节，让你看到那些普通眼睛看不见的部分。
你想象一下，平时你在街上走，眼睛看到的只是大致的景象；但如果你戴上了“共聚焦显微镜”这副眼镜，眼前的一切就变得清晰、细腻，连每一片树叶、每一颗小石子都能看得清清楚楚。
是不是挺酷的？好了，话说回来，为了让这些微小的细胞、分子在显微镜下跳出来，我们就得用一些荧光标记来帮助它们发光。
这些荧光标记一般就是一种特殊的染料，涂抹在细胞或者分子的表面，它们在激光照射下会“咚”地一声发光。
不同的染料可以发出不同颜色的光，你就能通过这些光的颜色来区分它们。
这就像每个细胞都有了自己的颜色衣服，走在显微镜的舞台上，光彩照人。
哦，对了，这种染料的选择可是大有讲究的。
你不能随便买个彩笔涂就行，不同的标记适合不同的细胞，甚至不同的实验需求。
有些标记就是专门用来标记细胞膜的，有些标记则用来专门显示细胞核。
你不能让每个细胞穿上不合适的衣服，那看起来就会五花八门，乱七八糟，结果啥也看不清楚。
那最常见的几种荧光标记有哪些呢？嘿嘿，这可真是门大学问。
首先要提的就是“FITC”（荧光异硫氰酸荧光素），它是最常见的一种荧光染料，绿色的光，常常用来标记抗体，几乎是实验室里的“常客”。
然后就是“DAPI”，这是个紫色的染料，它可专门喜欢亲近细胞的核，像是细胞核的守护神。
alexaflour 532分子式
主题：alexaflour 532分子式解析1. 介绍alexaflour 532的基本信息alexaflour 532是一种荧光染料，通常用于生物医学研究和生物标记。
它具有光稳定性和较高的荧光效率，被广泛应用于细胞成像和蛋白质定位等领域。
2. 分子式的组成及化学结构alexaflour 532的分子式为C38H46ClN3O6S2，它是一种有机化合物。
该分子由38个碳原子、46个氢原子、3个氮原子、6个氧原子和2个硫原子组成。
在分子结构上，alexaflour 532具有苯环和氨基等基团，这些基团赋予了它荧光性质。
3. 荧光性质alexaflour 532在适当的激发光下，会发出绿色荧光，具有较高的荧光量子产率和光稳定性。
这使得它成为细胞成像和荧光标记的理想选择。
4. 应用领域alexaflour 532广泛应用于生物医学领域，包括细胞成像、蛋白质定位、细胞分析等。
由于其稳定的荧光特性，可以在活细胞中长时间追踪目标分子的位置和分布，为生命科学研究提供了重要工具。
5. 实验方法使用alexaflour 532进行细胞成像实验时，通常需要将其与待研究的生物分子标记结合，然后通过激发光源激发，并观察其发出的荧光信号。
还需要注意控制实验条件，以确保荧光信号的稳定性和准确性。
6. 总结alexaflour 532作为一种优秀的荧光染料，在生物医学研究领域发挥着重要作用。
它的分子式C38H46ClN3O6S2揭示了其化学组成和结构特点，其荧光性质和广泛的应用领域使它成为研究人员青睐的选择。
通过合理的实验方法和技术手段，能更好地发挥其在生物标记和成像中的作用，为科学研究提供更加丰富的信息和数据。
7. alexaflour532的荧光机制alexaflour 532的荧光性质主要源自于其特定的化学结构和分子组成。
当alexaflour 532受到激发光源的激发后，其中的某些电子被激发到一个较高能级的轨道上，形成激发态。
荧光染料
AlexaFluor 荧光素是市场上效果最好的荧光素，比较传统荧光素，它具有以下优点：·多色彩选择的灵活性- 染料颜色区广，从蓝色到远红外；·更亮- 荧光强度明显高于近似波长的对应染料，可高达20 倍，镜下可持续3 分钟；·更不容易光淬灭；·对PH 变化极不敏感，可耐受PH2.5-10 广泛的PH 环境；·仪器适配性佳- 荧光显微镜、流式细胞仪等。
AlexaFluor 488 和FITC 的荧光强度对比AlexaFluor488 的荧光强度随时间降低的速度要远小于FITCAlexaFluor 488 的荧光强度几乎不随pH 变化，而FITC 变化显著麦生物™ AlexaFluor 荧光标记抗体实验推荐稀释浓度：使用前先离心，只使用上清，这样能避免保存过程中可能出现的任何微小的蛋白沉淀带来的背景染色。
染色步骤根据应用不同而有差异，所以抗体稀释精确倍数也需要摸索。
一般来说，可使用下表的荧光二抗浓度来进行初始实验：流式细胞术0.06-1.0 ug/106细胞免疫荧光1-10 ug/ml您需根据不同实验需要滴定抗体的最适稀释比例，即最佳工作浓度。
用PBS 进行稀释。
普通荧光素和Alexa Fluor® 替换对应表（括弧中为激发/ 发射波长最值）如果您使用... 那么您可以尝试...AMCA, coumarin (350/445) A lexa Fluor® 350 (346/442)Cascade Blue® (4000/423)Alexa Fluor® 405 (402/421) Alexa Fluor® 430 (434/539)Cy®2, FITC (488/519)Alexa Fluor® 488 (495/519) Alexa Fluor® 532 (531/554)PE, TRITC, TAMRA(547/572)Alexa Fluor® 546 (556/573) Cy®3 (550/570)Alexa Fluor® 555 (555/565) Rhodamine Red (570/576) Alexa Fluor® 568 (578/603)Texas Red® (589/615)Alexa Fluor® 594 (590/617) Alexa Fluor® 633 (632/647)Cy®5, APC (650/670,660)Alexa Fluor® 647 (650/668) Alexa Fluor® 660 (663/690)Cy®5.5 (675/694)Alexa Fluor® 680 (679/702) Alexa Fluor® 700 (696/719)Cy®7 (743/767) Alexa Fluor® 750 (752/779)。
AlexaFluor488抗体标记试剂盒
Alexa Fluor 488抗体标记试剂盒试剂盒组分：A．AF488活性染料5瓶B．碳酸氢钠～84mgC．纯化树脂～10mlD．空柱5个E．收集管5个注意：纯化的蛋白buffer中不得含有铵离子或伯铵，因为它们会与蛋白质竞争结合活性染料。
不纯的抗体或者含BSA或明胶的抗体标记效果不好。
低浓度的叠氮钠（小于3mM）或thimerosal（小于1mM）不影响偶联效果。
一、实验步骤：1．标记蛋白1．1将1ml去离子水加入B组分瓶中，配成1M的碳酸氢钠溶液。
振荡或吹打至完全溶解。
该溶液pH约8.3，2～6度保存可用2星期；1．2若抗体是溶液，将抗体稀释至1mg/ml，再加入1/10体积的上述碳酸氢钠溶液；若抗体是冻干粉，将1M碳酸氢钠溶液用10倍去离子水稀释成0.1M后，用其将抗体溶成1mg/ml的溶液；1．3将上一步的蛋白溶液100μl加入活性染料瓶中。
盖上盖子轻轻翻动一会儿至染料完全溶解。
剧烈震动可能会导致蛋白降解（可将瓶上的标签撕掉后观察溶解情况）；1．4室温孵育溶液1小时，每10～15min轻轻翻动瓶子使两种反应物混合均匀（孵育期间进行2.1~2.4步准备树脂柱，这个过程需要大约15min）。
2．纯化标记上的蛋白2．1 将树脂柱放入一个13×100mm的玻璃管中；2．2 搅动纯化树脂（组分C），加入1.0ml悬浮液至空柱中静置；2．3 继续加入树脂至床体积为～1.5ml；2．4将树脂柱放入一个收集管中，用垂直转子1100g离心3min，rpm与相对离心力g的换算公式如下：相对离心力g=(1.12×10-5)(rpm)2(半径cm)；离心后静置待缓冲液全部流出，弃去缓冲液，保留收集管（若没有垂直转子，角转子也可）；2．5 将1.4步的反应液100μl逐滴加入树脂柱的中心部位，使溶液被吸入胶床中；2．6 将树脂柱放入空的收集管中，1100g离心5min；2．7 离心后，收集管内是标记好的蛋白，溶在100μlPBS中，pH7.2，包括2mM的叠氮钠。
Alexa Fluor 染料
无论你的实验需要标记的一抗，的键，但是四氟苯酯更不容易在结合反应中自发水解。
Alexa Fluor 488四氟苯酯也可以单独提供（表3）。
通过标记的二抗增强信号如果所制备的标记一抗是不实用的，或者无法提供足够的灵敏度，那就需要高质量的二抗来解决问题。
尽管来自于一抗和二抗的非特异性结合可以提高背景水平，选择一个较好的标记了的二抗，通常可以通过显著性的信号扩增来克服升高了的荧光背景。
当然，不是每一个商业上可以提供的二抗都是完全被纯化或优化标记的(图3)。
Molecular Probes提供了在任何地方均可获得的可以进行最大选择的荧光二抗。
（全部目录详见在线手册的第7章，网址是/handbook）。
图3. Molecular Probes的Alexa Fluor 647山羊抗鼠IgG 抗体与可购买到的其它公司提供的Cy5 山羊抗鼠IgG抗体亮度的比较这些包括具有强烈荧光的Alexa Fluor抗体耦合物，在各个光谱都胜过大多数常规使用的荧光二抗。
在制备每个二抗耦合物时，我们采用了质量最高的蛋白，然后优化标记，以形成最亮的的耦合物，最后使用细胞样品进行严格的测试，以确保低非特异性结合和高特异性染色。
Alexa Fluor二抗正快速成为所有基于荧光免疫测定的首选的二级试剂。
在我们新的Image-iT 试剂盒中还将包含几个Alexa Fluor 抗体耦合物—－每个Image-iT试剂盒都含一个明亮的并且光稳定的Alexa Fluor耦合物和所有用来优化固定细胞和组织成像的试剂。
通过酪胺信号放大技术（Tyramide Signal Amplification）促使信号增强当实验样品的靶点不是很丰富的时候，通过二抗的信号扩增是不够的。
对于此种情况，我们已经开发了酪胺信号放大技术(TSA)试剂盒(表4)，它利用了超亮度的Alexa Fluor染料以达到最终的高清晰度信号扩增。
TSA 技术—有时也称作CARD（catalyzed reporter deposition）—是一种利用了辣根过氧化物酶(HRP)的催化活性在靶蛋白或核酸序列上产生高密度原位标记的酶介导检测方法(图4)。
常见荧光通道命名
在荧光成像和荧光定量分析中，常见荧光通道的命名通常与荧光染料的激发和发射波长有关。
不同的荧光染料有不同的激发和发射特性，因此它们通常被分配到特定的通道以便于识别和管理。
以下是一些常见的荧光通道命名：1. FAM (Fluorescein Amidite): FAM是一种常用的荧光染料，其激发波长通常在494-590纳米之间，发射波长在515-605纳米之间。
FAM 通道通常用于标记DNA或RNA分子。
2. VIC (Violet Invader): VIC是一种荧光染料，其激发波长在405-470纳米之间，发射波长在490-570纳米之间。
VIC通道常用于多种应用，包括细胞标记和DNA/RNA检测。
3. Cy5 (Cyanine 5): Cy5是一种荧光染料，其激发波长在649-680纳米之间，发射波长在670-705纳米之间。
Cy5通道通常用于远红外荧光成像和生物检测。
4. Cy3 (Cyanine 3): Cy3是一种荧光染料，其激发波长在554-570纳米之间，发射波长在570-605纳米之间。
Cy3通道常用于双色或多色荧光标记。
5. Alexa Fluor 488 (AF488): AF488是一种荧光染料，其激发波长在495-540纳米之间，发射波长在515-555纳米之间。
AF488通道用于绿色荧光标记。
6. Alexa Fluor 532 (AF532): AF532是一种荧光染料，其激发波长在532-580纳米之间，发射波长在540-590纳米之间。
AF532通道用于红色荧光标记。
7. Alexa Fluor 647 (AF647): AF647是一种荧光染料，其激发波长在642-685纳米之间，发射波长在655-700纳米之间。
AF647通道通常用于远红外荧光标记。
8. Pacific Blue (PB): PB是一种荧光染料，其激发波长在405-470纳米之间，发射波长在455-495纳米之间。
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Alexa Fluor 350——亮蓝和紫外光激发
Alexa Fluor 350的蓝色荧光比AMCA 亮50%，而且最大发射波长稍短（为442 nm ，AMCA 为448nm），因此更容易与现有的绿色荧光基团区分。
Alexa Fluor 405——近乎完美的匹配蓝色二极管激光器
Alexa Fluor 405的激发/发射最大波长为402/421nm，与荧光显微镜和流式细胞仪405nm 谱线的蓝色二极管激光器近乎完美的匹配。
Alexa Fluor 405 琥珀酰酯是Cascade Blue 的氨基反应性衍生物，后者是乙酰叠氮化物。
Alexa Fluor 405 琥珀酰酯纯度更高且有一个4-哌啶羧酸的间隔，使得荧光基团与其偶联的生物分子之间的反应性最小化。
Alexa Fluor 430——高斯托克斯频移的430nm吸收
少数400nm-450nm吸收的染料在水溶液中可测荧光偏离500nm。
Alexa Fluor 430弥补了这一缺陷，430nm激发时发射在540nm 附近。
Alexa Fluor 488——最好的绿色荧光基团
Alexa Fluor 488 偶联蛋白优于其他荧光素，实验证明比包括Cy2 的其他绿色荧光基团都好。
不仅亮度更高，而且光稳定性更好。
在pH4-10的范围内保持稳定是其另一优越之处。
Alexa Fluor 532——最适于532nm激发光源的染料
激发发射波长位于绿色荧光Alexa Fluor 488和橙色荧光的Alexa Fluor 546之间，适用于双频Nd:YAG激光器在内的532 nm激发光源。
Alexa Fluor 546——Cy3和四甲基罗丹明的替代物
Alexa Fluor 546 标记的偶联物良好应用于橙色范围光谱，比四甲基罗丹明(TRITC 、TAMRA) 及Cy3荧光更强，容易被汞弧灯激发，发射波长546 nm。
Alexa Fluor 555——优于Cy3的替代物
Alexa Fluor 555 与Cy3 偶联物的光谱相匹配，因此适用于Cy3 的滤光器。
Alexa Fluor 555 的总荧光更强，且光稳定性更好，为研究者提供了更长的图像捕获时间。
Alexa Fluor 568——最适于568 nm激发光源
Alexa Fluor 568 的橙红色荧光最适用于激光共聚焦显微镜的Ar–Kr 混合气体激光器，其发射的谱线为568nm。
与具有相似最大激发/发射波长的Lissamine Rhodamine B 和Rhodamine Red-X 相比，Alexa Fluor 568的偶联物亮度更高。
Alexa Fluor 594——优于Texas Red的替代品
Alexa Fluor 594偶联物发出红色光，可与绿色荧光探针一同用于多色标记实验。
比Texas Red 偶联物有更高的亮度。
Alexa Fluor 610——Alexa Fluor最好的红色染料
Alexa Fluor 610亮度高、光稳定，可用检测Texas Red 和Alexa Fluor 594 的光学元件检测。
前身是FRET-based Alexa Fluor–phycobiliprotein 的受体染料。
新的Alexa Fluor 610 激发/发射波长为612/628nm，容易与绿色荧光基团相区分，适用于多色标记。
且Alexa Fluor 610仍为人眼可见，优于Alexa Fluor 633和其他更长波长的荧光团。
Alexa Fluor 633——光稳定性更强
远红光染料大受欢迎，是因为它们的光谱范围在大多数样品的自发荧光之外。
He–Ne
激光器633nm和红色二极管激光器635nm谱线的广泛应用加速了兼容染料的开发。
Alexa Fluor 633偶联物具有亮度和光稳定性，吸收峰在632nm，发射峰在650nm。
Alexa Fluor 635——H-Ne激光器633nm线的最佳染料
新的Alexa Fluor 635染料，其偶联物比Alexa Fluor 633亮度更高，因为它的吸收光谱
不会象Alexa Fluor 633、Cy5和tetramethylrhodamine 那样分成两个峰。
Alexa Fluor 635同
样适用于He–Ne 激光器的633 nm 谱线和红色二极管激光器的635nm谱线，吸收峰在633nm，发射峰在647nm。
Alexa Fluor 647——优于Cy5的替代品
Alexa Fluor 647与Cy5偶联物的光谱及滤光器相匹配。
Alexa Fluor 647二抗偶联物的
总荧光亮度高于其他公司的Cy5偶联物。
在与大多数的蛋白质、寡核苷酸和核酸结合时，Alexa Fluor 647相比Cy5荧光吸收光谱波动很小，因此在同等程度的替换时发出的荧光更强。
Alexa Fluor 680——Cy5.5的替代物
Alexa Fluor 680的激发峰在679nm，最大发射为702nm，与Cy5.5类似。
Alexa Fluor 680能够很好的与其他红色荧光团区分，如Texas Red, R-phycoerythrin, Alexa Fluor 594 和Alexa Fluor 647，是理想的三色与四色标记用染料。
Alexa Fluor 700——远红光二极管激光器的最适染料
Alexa Fluor 700最大吸收在696nm，能够被675-700nm范围的氙弧灯、远红外二极管
激光器或dye-pumped lasers 激发。
发射光在红外区，峰值为719nm。
Alexa Fluor 750——Alexa Fluor最长波长的产品
Alexa Fluor 750是目前的Alexa Fluor系列产品中波长最长的产品，与Cy7光谱相似。
其发射的最大波长为779nm，能够和Alexa Fluor 647及allophycocyanin(APC)区分，适合多色分析。
Alexa Fluor 700偶联物752nm的最大激发光使其适用于720–750nm范围的氙弧灯
或dye-pumped lasers。