花药培养及单倍体育种
花药培养
花药培养应注意的问题
分化培养基为去除2,4－D，加入NAA或 KT。在分化培养基是，愈伤组织会出现 绿点，最后发育成绿色植株。此外，在 禾本科植物的花药培养中，常会出现白 化苗，目前还没有有效的控制方法。
花药培养应注意的问题
5 培养基成分
培养基成分包括无机盐、碳源、氨基酸、维 生素和植物激素等。它们对花药的培养的成 功率有明显的作用。先前是用已有的培养基， 如MS、Miller和Nitsch等，后来研制出适合不 同植物的专用培养基。
花药培养应注意的问题
（2）生理状态：花药供体植株的生 理状态，对花粉愈伤组织的诱导率有 直接影响。
对水稻、小麦和大麦等禾本科植物而 言，大田植株比温室植株、主茎穗比 分蘖穗花粉愈伤组织的诱导率都明显 的要高。
花药培养应注意的问题
不同季节接种的花药愈伤组织诱导 率也有显著变化。如烟草、小麦早 期的花药比晚期的要好，愈伤组织 诱导率高，说明供体植株的生态环 境，特别是温度和光周期可能对花 粉发育及其对离体培养的反应有重 要影响。
花药培养应注意的问题
（3）花粉发育时期：不是任何发育时期的花粉 都可在离体培养时诱导产生愈伤组织或胚状体， 只有那些发育到特定时期的花粉，对离体刺激才 最敏感。
实验证明，烟草、曼陀罗和水稻的花粉从单核中 期到双核早期都可离体诱导产生愈伤组织。
小麦和玉米处于单核中期的花粉培养效果最好。 天竺葵和番茄分别为四分体和中期I的培养效果
最常用的方法是低温冷藏。具体做法是将带 有叶鞘的穗子或花蕾用湿纱布包裹后再用塑 料袋套起，放在冰箱中冷藏。
花药培养应注意的问题
不同材料对处理温度的高低有不同的要 求，一般耐寒植物比喜温可耐受较低的 温度。低温处理时间视使用的温度而定， 较低的温度处理时间要短，反之则长。 烟草7～9度下处理7～14天，水稻7～10 度下处理10～15天，大麦3～7度下处理 7～14天，都可显著提高花药的出愈率。 但低温处理对小麦的效果不稳定物的花粉对离体培养有其特 定的、最敏感的发育时期。然而，对大 多数植物来说，单核期的花粉比较容易 培养成功。
第7章_花药培养及单倍体育种
一、单倍体的概念及其来源
1、概念 单倍体(haploid)：是指具有配子体染色体数（n） 的孢子体(植物个体)。 单倍体有一元单倍体和多元单倍体。
南瓜的单倍体和二倍体 的雄花和雌花
单倍体植物的特点：
体细胞染色体数减半； 生长发育弱，体形小、各器
官明显减小； 雌、雄配子严重败育，有的
生根培养：将分化出的芽苗转入含NAA的生根培 养基中，一般2周左右可形成根。
烟草花粉植株的生根培养基： 1/2 MS + 2%蔗 糖 + 0.5%琼脂。
壮苗培养：在生根培养基或基本培养基中添加 多效唑（1-3mg/L），提高蔗糖浓度（5-8%）。
培养条件： 25 ℃，光照下。
花粉植株的驯化移植
② 激素选择
烟草和毛曼陀罗：仅含蔗糖的琼脂板 茄子花药培养中： MS＋2,4-D 0.5 mg/L＋KT 1mg/L
n 93.8% 2n 6.2% MS＋2,4-D 2 mg/L ＋ KT 1mg/L
n 64,1% 2n 35.9%
③ 蔗糖：一般为3％～15％
烟草和油菜：2～3％诱导花粉胚； 水稻：3～6％诱导愈伤，分化时2～3％； 小麦：8～11％麦芽糖诱导愈伤，分化时5～8％蔗 糖； 玉米：12～15％诱导愈伤； 甘蔗：高达20％。
➢ 二，认为小孢子发育过程中花药内源激素平衡在 不断改变，随花药的成熟，激素平衡变得不适合 小孢子的生长和分裂，或脱分化必须的一些物质 被消耗尽，从而引起培养效果不佳。
花粉发育时期的确定
•鉴定花粉发育时期的方法可用涂片法来进行。 •为方便起见，可找出与花粉发育时期相对应的形 态学指标。
（3） 花药预处理
体细胞干扰 生殖细胞的自发加倍 培养过程的各种影响因素
人教版选修1 月季的花药培养 课件(35张)
基 础 知 识
小孢子四分体 （ ）时期 （生殖 ）细胞 （ 营养）细胞 N N N
单核（中 ）期 N
花粉管 ）细胞 （生殖 ）细胞核 （ N N
（ 有丝 ）分裂 双核期 单核（ 边 ）期 N
zxxkw
花 粉 粒
花粉囊
花药
zxxkw
成熟 花粉
小孢
思考： （1）假如一种生物体细胞有20条染色体，则 小孢子母细胞、小孢子、营养细胞、精子 中各有多少条染色体？ 小孢子母细胞：20 小孢子：10 营养细胞：10 精子：10
(三)、影响花药培养的主要因素 为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？
花瓣松动后，微生物就可能侵入到花 药，给材料的消毒带来困难。
实验操作 （一）材料选取
通过镜检来确定是否处于适宜的发育期。 方法：① 醋酸洋红法(将染色体染成 红色 ) 花药（载玻片上）→1%的醋酸洋红1滴→ 用镊柄将花药捣碎，盖上盖玻片→镜检
② 焙花青-铬矾法(花粉细胞核染成蓝黑色 ) 花药（在卡诺氏固定液中处理20min）→ 取出，置于载玻片上→焙花青－铬矾溶液染色→ 盖上盖玻片→镜检
实验操作 （二）材料的消毒
1、花蕾用体积分数为70%的酒精 2、 无菌水 清洗 浸泡30秒
3、无菌吸水纸 吸干花蕾表面的水分 4、放入 质量分数为0.1%的氯化汞 溶液中2～ 4分钟 （质量分数为1%的次氯酸钙溶液或饱和 漂白粉溶液） 5、 无菌水 冲洗3～5次
课堂小结：
一、花药培养与单倍体育种之间的关系； 二 、被子植物花粉的发育； 三 、产生花粉植株的两条途径； 四、影响花药培养的因素。
（4）草莓生产上传统的繁殖方式易将所感染的病毒传播 给后代，导致产量降低。品质变差。运用微型繁殖技术可 以培育出无病毒幼苗。草 莓微型繁殖的基本过程如下： 外植体 愈伤组织 芽、根 植株 ② ① 请回答： （1）微型繁殖培育无病毒草莓苗时，一般选取 茎尖、根尖 _________ 作为外植体，其依据是_ 茎尖、根尖不含病毒 ___ 。 （2）在过程①中，常用的MS培养基主要成分包括大量元 有机物 素、微量元素和______ ，在配制好的培养基中，常常需要 植物激素 添加________ ，有利于外植体启动细胞分裂形成愈伤组织。 接种后2~5d，若发现外植体边缘局部污染，原因可能是 外植体消毒不彻底 __________ 。 （3）在过程②中，愈伤组织在诱导生根的培养基中未形 培养基中生长素类 成根，但分化出了芽，其原因可能是__________ ___ 物质和细胞分裂素类物质用量的比值偏低 。
第4章 花粉培养和单倍体育种
花药培养和单倍体育种
5
第一节
相关知识基础三、花药培养的简和概况• 第一个被发现的单倍体植物是1921年Bergner在蔓陀罗植物 群体中发现的。发现单倍体植物后不久，1924 Blakeslee和 Belling就提出了在植物育种中利用单倍体减少杂交后代分离， 加速性状稳定，缩短育种年限的设想。 • 由于自然条件下出现的单倍体很少，此后育种学家和植物学 家的工作主要集中在对单倍体植株的人为诱导方面。由于当 时组织培养技术的水平还很低，直到 1964年才由Guha和 Maheshwari利用花药培养的方法在毛叶蔓陀罗这个植物种上 取得成功。
花药培养和单倍体育种
15
第二节
花药培养技术
二、选材
• 有研究结果表明，发育落后的花粉在培养条件下有发 育成愈伤组织或胚的更大可能，并将这部分花粉称为 胚性花粉。 • 在大麦中，花药下半部的异常花粉的比例比花药上半 部的比例高，因此，由花药下半部的花粉形成的愈伤 组织也比上半部要多。 • 异常花粉并不是愈伤组织的唯一起源，正常的花粉也 是可以形成愈伤组织或胚的，不过两者在对培养基的 反应程度有不同。
花药培养和单倍体育种
9
第一节
相关知识基础
四、花粉的发育过程
• 减数分裂 有丝分裂 胼胝质壁溶解 • 小孢子母细胞 2个小孢子 4个小孢子 单个小孢子
• 形成大液泡，分裂 积累储藏物质 • 单个小孢子 营养细胞…………在花粉管伸长过程中退化 • + 分裂 • 生殖细胞 2个精子……（双受精）
花药培养和单倍体育种
花药培养和单倍体育种
13
第二节
花药培养技术
二、选材
• 花粉发育时期的确定一般采用对花药进行染色压片后在显 微镜下观察的方法。染色的染料一般是醋酸洋红，也叫醋 酸卡红（acetocarmine）。通过染色可以简单地辨别减数分 裂前期的花粉母细胞，减数分裂后的四分体初期和后期， 单核期和双核期等。 • 在染色镜检后，通过建立花粉适当时期和植株某些器官的 发育阶段特征的联系就可以进行准确有效的选材。例如， 水稻采样的合适时期是剑叶完全抽出后剑叶叶片基部距离 前一片叶的叶片基部2-10厘米左右时；矮牵牛是花瓣开始 显色的时候。
植物组织培养的应用
植物组织培养的应用一、增加遗传变异性，改良作物单倍体育种：通过花药培养，从小孢子获得单倍体植株，染色体加倍后获得正常二倍体植株，这是一条育种的新途径。
单倍体育种可以缩短育种年限，节约人力物力，较快地获得优良品种，目前已有四十多种植物获得了单倍体植株。
我国在水稻、小麦、烟草、柏树、橡胶、辣椒等植物的单倍体育种的工作上，处于领先地位。
胚培养、子房培养、胚珠培养：为了克服远缘杂交的不亲和性，可采用胚、子房、胚珠培养和试管受精等手段。
最早成功的例子是两个栽培种亚麻的杂交胚发生败育，利有杂种胚培养克服了一些障碍，得到种子。
现在在棉花、黄麻上也获得成功。
从玉米的离体子房培养，经体外受粉可以得到种子。
突变体的选择和应用：由于植物的单细胞培养成功，可以用这个方法诱发单细胞进行突变，通过筛选所需要的突变体，然后使细胞分化成植株，再通过有性世代使遗传性稳定下来，这是从细胞水平来改造植物的一种途径。
除细胞外，愈伤组织、花药、原生质体都可诱发突变。
70 年代以来，世界各国在这方面已有不少成功的例子，如：已选育出抗花叶病毒的甘蔗无性系，抗1-2%NaCl 的野生烟草细胞株，抗除草剂的白三叶草细胞株等。
体细胞杂七杂八交和遗传工程：自1960 年以来用酶法获得大量有活力的植物原生质体，现已从四十多种植物的原生质体产生出再生植株。
通过异种原生质体的相互融合（即体细胞杂交）为植物育种工作开阔新的途径。
原生质体融合的工作自1972 年Carlson 在两个烟草种间成功以来，现在除种内与种间能获得杂种植株外，在属间甚至不同科的植物间亦做了许多工作，如烟草与大豆、烟草与天仙子、矮牵牛与小花矮牵牛、番茄与矮牵牛等都得到了杂种植株。
此外，通过原生质体融合，并以选择胞质链霉素抗性做手段以转移烟草的雄性不育性状，或通过原生质体融合转移胞质的抗林可霉素因子都得到成功。
原生质体没有胞壁，容易接受外来的引入物质。
由于致癌农杆菌可以使多种植物形成肿瘤，以及已发现它所带的Ti 质粒可以有效的插入植物细胞的基因组中，所以一些研究者也设想能否以Ti 质粒作为载体，与固氮基因重组后转入植物的细胞中，如能实现将固氮基因转到非豆科植物如水稻、小麦、玉米等作物中，则遗传工程在创新植物类型上的前景，无疑是非常广阔的。
植物单倍体诱导和育种方法的研究
植物单倍体诱导和育种方法的研究植物育种是交叉育种、自交育种和杂交等手段利用植物的自然或人工杂交的方法，以培育各种新品种。
而在植物育种中，单倍体诱导和育种方法是目前广泛使用的一种方法。
一、什么是植物单倍体植物体细胞通常含有一组二倍体染色体（2n），而植物单倍体则只有一组单倍体染色体（n）。
在植物中，单倍体常常存在于生殖细胞、花粉或胚乳中。
二、植物单倍体诱导植物单倍体诱导是指将植物体细胞诱导成为单倍体细胞的过程。
常见的方法有化学处理、辐射处理和发育停滞等方法。
1、化学处理化学处理是最常见的一种植物单倍体诱导方法。
该方法靠化学物质在体外直接作用于植物体细胞，使染色体分离，形成单倍体细胞。
常用的化学物质有植物生长调节剂、生长素和激素等。
2、辐射处理辐射处理是利用辐射源对植物进行辐射处理，以诱导植物单倍体。
常见的辐射源有X射线和紫外线等。
该方法的缺点是对植物细胞易造成基因突变，影响植物后代的形态和生物学性状。
3、发育停滞发育停滞是将植物体细胞放在营养缺乏或生长停滞的环境中，使细胞停止生长和分裂，进而形成单倍体细胞。
三、植物单倍体育种方法目前，植物单倍体育种方法主要有两种：即卵细胞诱导剂法和花药培养法。
1、卵细胞诱导剂法该方法是首先使用单倍体诱导方法将植物体细胞诱导为单倍体细胞，然后将单倍体细胞作为卵细胞参与杂交育种过程。
由于卵细胞具有很高的遗传变异能力，该方法能够大大提高新品种的育种效率。
2、花药培养法花药培养法是将植物雄蕊花药缺氧处理，使花药中的细胞发育生长并分化形成花粉囊。
然后，将花药细胞培养在营养液中，并加入生长调节剂和抗生素。
通过培养培养出千倍体的花粉囊，再利用去除壳层的方法获取单倍体细胞。
提取得到的单倍体细胞可作为种质资源，或用于育种操作。
四、单倍体育种的意义和发展前景单倍体育种方法在植物育种领域中有着非常重要的作用。
由于单倍体材料的遗传变异能力较高，可以有效的提高植物育种过程的效率，并培育出更具有优异性状的新品种。
(第七章)第八章植物花药(花粉)培养
第四节
花药培养
（2）材料生理状态 花药供体植株的生理状态，对花粉愈伤组织的诱导 率有直接影响。 对水稻、小麦和大麦等禾本科植物而言，大田植株 比温室植株、主茎穗比分蘖穗花粉愈伤组织的诱导率都 明显的要高。不同季节接种的花药愈伤组织诱导率也有 显著变化，例如：水稻，早造比晚造接种的愈伤组织诱 导率要高；烟草，开花早期比开花晚期的花药可产生更 多的花粉植株；小麦，早期接种比晚期接种的材料愈伤 组织诱导率可提高2～3倍。说明供体植株的生态环境， 特别是温度和光周期可能对花粉发育及其对离体培养的 反应有重要影响。
第二节
花药和小孢子的发育
（以烟草花粉发育过程为例，说明被子植物花粉发 育过程，P222） 第一期：小孢子母细胞经减数分裂形成孢子四 分体，随胼胝质分解，4个小孢子分离。 第二期：小孢子为球形细胞，核大，有液泡， 挤核靠边（单核靠边期），期末细胞明显增大，细 胞壁特化，小孢子进行第一次花粉细胞有丝分裂 （不对称），形成2个不均等的细胞。 第三期：小孢子细胞中有2个核。 在离体培养条件下，花粉发育偏离正常发育途 径，第一次花粉细胞有丝分裂是对称的，结果形成 两个形态和体积相等的细胞，把此作为B型。
第四节
花药培养
2、材料预处理 对所取用的穗子或花蕾，进行低温、激素（生长 素）或其他方法预处理，能有效提高愈伤组织诱导 率和苗分化率。 （1）低温预处理： 一般是将材料置于冰箱5～10℃下冷藏一定时 间再接种。处理时间视不同植物而定，水稻在5～ 10℃时为5～8天，烟草在7～9℃时为7～14天。 同种植物不同品种的要求也有差异，需作试验比较 才能确定。
第四节
花药培养
3、材料灭菌： 取回的材料，在接种前必须进行表面灭菌。一 般方法是先用70～75%酒精擦洗穗子和花蕾的外 部苞叶，然后用0.1%升汞浸泡7～10分钟（水稻、 玉米等需剥取穗子浸入消毒液）或用饱和漂白粉溶 液浸泡10～20分钟以灭菌，最后用无菌水冲洗3～ 5次，供接种用。 材料灭菌是花药培养成功与否的一个重要环节， 此关不过，谈不上什么培养。
花药离体培养获得单倍体的原理
花药离体培养获得单倍体的原理花药离体培养获得单倍体是一种常用的植物遗传学技术，其原理是利用花药中的生殖细胞在合适的培养条件下分裂分化，最终得到单倍体植株。
花药是花的雄性生殖器官，包括花粉和花丝。
花药离体培养一般以花期结束后的花药为材料，经过消毒处理后，将其放置在含有适当濃度植物生长调节剂的培养基中，控制温度、光照和湿度等条件，使其逐渐分裂分化生成胚胎或胚愈伤组织。
在特定培养基配方和培养环境的作用下，胚胎或胚愈伤组织可以继续发育，分化出合适的植株。
这种技术的优点在于可以在短时间内大批量地获得同源性强、单倍体的植株，有助于植物育种、品种改良等研究工作的开展。
同时，这种方法适用于不同种类的花卉，包括樱花、玫瑰、百合、茉莉等，可以充分利用植物遗传资源，提高植物的遗传多样性。
此技术同样适用于果树、蔬菜等植物的研究。
然而，花药离体培养也存在着一些缺点和限制。
例如由于植物细胞易被污染所致的不稳定性大、培养环境的影响等，植株的发育率和质量难以保证，需要经过精心的操作和长期的观察和培养。
此外，还要考虑到减数分裂过程中的染色体異變且难以控制，可能导致基因结构改变和表达的不正常，影响植株的生长和遗传稳定性。
总之，花药离体培养是一种有效的植物遗传学技术，可以使植物在较短时间内分化出单倍体的植株，具有重要的科研和实践价值。
但
同时也需要充分了解各种因素的影响，切实提高技术操作水平，才能达到理想的效果。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
2、单倍体的来源
自然产生 人工诱发
孤雌生殖 孤雄生殖 无配子生殖 体细胞减数分裂
单倍体细胞离体培养 植物体上诱发单倍体
花药培养 花粉培养 未授粉子房/
胚珠培养
双单倍体(Double Haploid, DH)
指单倍体经过自然加倍或人工诱导加倍所获 得的纯合二倍体。
双二倍体(Double Diploid)
体育种中将比常规的二倍体育种法高 2ⁿ 倍，
大大提高了选择效率。
（3）单倍体是诱变育种、突变体筛选 的良好材料。
与诱变育种相结合可以提高诱变频率，遗 传类型丰富；
也可在花药培养过程中进行抗病、耐盐碱 等方面进行细胞水平的突变体筛选。
（4）单倍体在远缘杂交中的利用。
✓与细胞融合相结合 二倍体。 ✓克服远缘杂交不育性：远缘杂交后代高度不 育，但可产生部分有活性的花粉。
指杂交F1代个体经过人工诱导加倍所获得的 纯合多倍体（双亲的单套染色体组均加倍）。
二、单倍体育种
1、概念
单倍体育种：是将具有单套染色体的 单倍体植物，经人工染色体加倍，使其成 为纯合二倍体，从中选出具有优良性状的 个体，作为杂交育种的原始材料，称为单 倍体育种。
2、单倍体的优点
遗传的稳定性，经人为加倍，可得到纯和 的二倍体 。
只有花粉发育到一定时期对离体培养最敏感，才 可能被诱导产生愈伤或胚状体。
一般情况下，对大多数植物来说，在单核期的花 粉比较容易培养成功。
单核中晚期到有丝分裂期是最适培养时期。
No Image 花粉发育简图
对花药培养适宜时期的解释
➢ 一，认为小孢子有丝分裂形成成熟花粉的初期是 胚胎形成的临界期，若在接种时花药发育已超过 了此阶段，胚状体就不能形成。
育
二、花药培养
花药培养的一般程序
材料准备 花药接种及诱导培养 分化培养 生根、壮苗培养及驯化移植 单倍体植株的鉴定及其二倍化
1、材料准备
（1）供体材料选择： 供试材料的遗传背景：选择易培养的材料、
杂合性的材料。 供试材料的生理状态：开花期的早晚、生长
环境、营养状态等。
（2）花粉的发育时期选择：
体植株的技术。（属于器官培养的范畴。）
➢ 花粉培养（pollen culture）或小孢子培养 （microspore culture）： 是将处于一定发育阶段的花粉细胞从花药 中分离出来，加以离体培养获得单倍体植株的 技术。（属于细胞培养的范畴。）
两者的异同点
共同点：培养目的相同，获得单倍体植株。 不同点：花药培养属于器官培养；而花粉培 养属于细胞培养；花粉培养没有药壁组织干 扰，易于观察雄核发育的全过程，技术更复 杂。
大多数被子植物(约70%)发育到2-细胞花粉粒 时期花粉粒即发育成熟，如百合、棉花等。
也有少数植物其生殖细胞再进行一次有丝分裂 形成2个精细胞，即花粉粒成熟时含有3个细胞，为 3-细胞花粉粒，如向日葵、小麦等。
No Image
2细胞花粉
3细胞花粉粒
No
Image
烟草
拟南芥
No
雄 配
子
Image
体 的 发
隐性性状易于表现。 遗传的变异性。
3、单倍体在遗传和育种中的应用价值
（1）迅速获得纯合型材料，缩短的育种年限。 与常规的杂育种相比，单倍体育种技术可以
加速纯系的获得，缩短4-5年的育种年限。
（2） 排除显、隐性干扰，提高选择效率，有 利于筛选隐性突变体，消除致死基因。
当有 n 对独立遗传的隐性基因及重组体分离 时，这些隐性性状及其重组体的出现几率在单倍
第一节 单倍体及单倍体育种
一、单倍体的概念及其来源
1、概念 单倍体(haploid)：是指具有配子体染色体数（n） 的孢子体(植物个体)。 单倍体有一元单倍体和多元单倍体。
南瓜的单倍体和二倍体 的雄花和雌花
单倍体植物的特点：
体细胞染色体数减半； 生长发育弱，体形小、各器
官明显减小； 雌、雄配子严重败育，有的
②高温预处理：
✓ 小麦：32-33°C，培养3～8d，再转到2628°C正常培养。
✓ 油菜：30°C，培养2～3d ✓ 玉米：30°C，14d，再转到27°C培养，能促
➢ 二，认为小孢子发育过程中花药内源激素平衡在 不断改变，随花药的成熟，激素平衡变得不适合 小孢子的生长和分裂，或脱分化必须的一些物质 被消耗尽，从而引起培养效果不佳。
花粉发育时期的确定
•鉴定花粉发育时期的方法可用涂片法来进行。 •为方便起见，可找出与花粉发育时期相对应的形 态学指标。
（3） 花药预处理
一、花粉的发育过程
造孢细胞（分裂） 花粉母细胞（小孢子母细胞）分裂 二分体 四分体 单核花粉粒（小孢子）
单核早期 单核中期 单核晚期 成熟花粉（两核花粉、三核花粉）
花药的发育阶段
幼花粉囊 成熟花粉囊
单核花粉粒（小孢子）的形成
雄配子体（成熟花粉粒）及 雄配子（精子）的形成
成熟的花粉粒即为雄配子体，其中的精细胞为 有性生殖中的雄配子。
（5）单倍体作为遗传工程受体更为有效。
基因工程上：花药和花粉培养系统可用于转基因。 染色体工程上：可以创造二体附加系、代换系。
（6）单Байду номын сангаас体用作基础遗传研究的各个领域。
基因定位、绘制遗传图谱。
第二节、花药培养和花粉培养
➢ 花药培养（anther culture）： 以花药为外植体进行离体培养，获得单倍
✓ 烟草、茄子 ✓ 水稻 ✓ 柑橘 ✓ 马铃薯 ✓ 小麦
3～5°C 10°C
3°C 4°C 1～3°C
3d 10～14d
5～10d 2d 7～14d
低温处理的作用
降低了小孢子新陈代谢，延长花粉的寿命,中断正常的配 子体发育，促进花药营养成分的转运； 低温能改变纺锤丝的轴向, 破坏纺锤丝的微管蛋白而阻 止纺锤丝形成，打破有丝分裂正常过程, 导致细胞分化； 阻止了细胞在预处理时的细胞周期，一旦培养在25度-28 度下重新返回有丝分裂； 低温、饥饿胁迫作用。
预处理目的：是改变小孢子的发育方向，使尽可 能多的小孢子从配子体发育途径转向孢子体发育 途径（即成为具胚胎发生潜力的小孢子）。大量 试验证明，花药培养前的预处理可以提高诱导频 率与分化率。
预处理方法：主要是对花药进行适度的逆境处理， 包括物理因素处理和化学因素处理。
Ⅰ：物理因素处理
①低温处理：是最常用的一种预处理方法。