多糖的提取和纯化
微生物多糖提取与纯化
鲜香菇碱提: 鲜香菇50g 加蒸馏水50ml 打浆,再 加0. 4mol/ L 的NaOH 100ml ,5 ℃浸提24h ,过 滤,滤液浓缩后加甲醇等同三氯乙酸浸提。鲜香 菇酸提: 鲜香菇50g 加蒸馏水50ml 打浆,再加入 2mol/ L 的乙酸100ml ,5 ℃浸提24h ,过滤,滤液 浓缩后加甲醇等处理同三氯乙酸浸提。
LPS 粗品的制备：菌悬液反复冻融三次后，与等 量9 0 % 苯酚共同加热至68℃后混合，剧烈搅拌 30min 后，冰浴至2℃离心(4℃，3000 × g， 20min)。酚相加等体积无热原水重复洗涤2 次， 收集水相溶液装于透析袋中，流水透析12h去酚， 再蒸馏水透析60h(FeCl3 检测无紫色出现为止)， 可用50% 聚乙二醇6000 浓缩至1/4，即得LPS 粗品。 LPS 的纯化：浓缩后粗LPS中加DNase和 RNase各50μ g/ml，37℃下酶解4h，100℃水 浴加热10min，冷却至室温后离心(1500r/min， 30min)，弃沉淀，于上清中加2 倍体积丙酮，沉 淀后既可获得纯化LPS 。
香菇多糖的提取与纯化工艺
香菇(Lentinus edodes)是侧耳科(Pleara taco) 的担子菌，含有多种有效药用成分。尤其是香菇 多糖(Lentinan，LNT)，是一种宿主免疫增强剂 (Host defense—tiator，HDP)，它具有抗病毒、 抗肿瘤、调节免疫功能和刺激干扰素形成等功能。 1969 年日本学者千原率先证实了香菇热水提出 物的抗肿瘤活性,羽田、佐木进一步研究证实其有 效成份是香菇多糖,Coro Chi2hara 从香菇子实 体中浸提出6 种香菇多糖,并证明其中一种具有明 显的抗肿瘤作用, 定名为Lentinan 。1980 年恂 二等确认香菇多糖为Th 细胞激活剂,它使机体免 疫功能得到恢复和提高而杀灭肿瘤细胞,可用于辅 助癌症治疗。
多糖提取纯化化学修饰和抗氧化性研究进展
多糖提取纯化化学修饰和抗氧化性研究进展多糖是一类由多个单糖单元组成的生物大分子，具有多种生物活性和广泛的应用价值。
多糖的提取、纯化、化学修饰和抗氧化性研究是多糖研究中的重要内容。
本文将对多糖提取纯化、化学修饰和抗氧化性的研究进展进行综述。
多糖的提取纯化是多糖研究的第一步，目前常用的多糖提取方法有酸碱法、酶解法和热水法等。
酸碱法是最常用和经济的提取方法。
在酸碱法中，多糖首先通过酸处理将其脱除，然后用碱中和溶液pH值调整至碱性，在极性溶剂中进行提取。
酶解法是一种通过酶分解作用将多糖从生物背景中提取出来的方法。
热水法是将生物样品与水加热浸泡，使多糖溶解于水中，然后通过沉淀、离心等步骤来纯化。
多糖的化学修饰是利用化学反应将不同的官能团引入到多糖分子中，从而改变多糖的结构和性质。
常用的多糖化学修饰方法有酯化、醚化、磷酸化和羟烷化等。
酯化是将多糖上的羟基与酸反应形成酯键的过程，可以增加多糖的溶解性和稳定性。
醚化是将多糖上的羟基与醇反应形成醚键的过程，可以提高多糖的溶解性和抗氧化性。
磷酸化是将多糖上的羟基与磷酸反应形成磷酸酯键的过程，可以提高多糖的生物活性和生物相容性。
羟烷化是将多糖上的羟基与环氧丙烷反应形成环氧丙基键的过程，可以增强多糖的交联性和机械强度。
多糖具有显著的抗氧化性，可以作为天然抗氧化剂应用于食品、生物医药和化妆品等领域。
多糖的抗氧化性主要通过清除自由基、抑制氧化酶活性、增强抗氧化酶活性和抑制脂质过氧化等机制实现。
目前，越来越多的研究表明多糖的抗氧化性与其结构和物理化学性质密切相关。
多糖的抗氧化性受多糖分子量、空间构象、结构稳定性、官能团等因素的影响。
通过多糖的化学修饰来改变多糖的结构和性质，可以进一步提高其抗氧化性能。
多糖提取纯化、化学修饰和抗氧化性研究是多糖研究中的重要内容。
多糖的提取纯化方法有酸碱法、酶解法和热水法等。
多糖的化学修饰方法有酯化、醚化、磷酸化和羟烷化等。
多糖具有显著的抗氧化性，其抗氧化性与其结构和物理化学性质密切相关。
多糖的分离纯化及生理作用
多糖的分离纯化及生理作用多糖包括植物多糖、动物多糖和微生物多糖。
人们已发现多糖不仅是机体的能量来源和骨架成分，而月还具有多糖具有抗感染、抗放射、抗凝血、降血糖、降血脂、促进核酸与蛋白质的生物合成作用等多种生物活性。
多糖的提取和纯化1. 多糖的提取1.1 热水浸提法：其步骤为：原料→粉碎→脱脂→粗提（2－3次）→吸滤或离心→沉淀→洗涤→干燥首先除去表面脂肪。
原料经粉碎后加入甲醇、乙醚、乙醇、丙酮或1：1的乙醇乙醚混合液，水浴加热搅拌或回流1－3小时，脱脂后过滤得到的残渣一般用水作溶剂（也有用氢氧化钾碱性水液、氯化钠水液、1％醋酸和1％苯酚或0.1－1M氢氧化钠作为提取溶剂）提取多糖。
温度控制在90－100℃，搅拌4－6小时，反复提取2－3次。
得到的多糖提取液大多较粘稠，可进行吸滤。
也可用离心法将不溶性杂质除去，将滤液或上清液混合（得到的多糖若为碱性则需要中和）。
然后浓缩，再加入2－5倍低级醇（甲醇或乙醇）沉淀多糖；也可加入费林氏溶液或硫酸铵或溴化十六烷基三甲基铵等，与多糖物质结合生成不溶性络合物或盐类沉淀。
然后依次用乙醇、丙酮和乙醚洗涤。
将洗干后疏松的多糖迅速转入装有五氧化二磷和氢氧化钠的真空干燥器中减压干燥（若沉淀的多糖为胶状或具粘着性时，可直接冷冻干燥）,干燥后可得粉末状的粗多糖。
1.2 微波辅助提取法：其原理为利用不同极性的介质对微波能的不同吸收程度，使基体物质中的某些区域和萃取体系中的某些组分被选择性加热，从而使萃取物质从基体或体系中分离出来，进入到介电常数小，微波吸收能力较差的萃取剂中。
由于微波能极大加速细胞壁的破裂，因而应用于中草药中有效成分的提取能极大加快提取速度，增加提取产率。
而且由于其选择性好，提取后基体能保持良好的性状，提取液也较一般的提取方法澄清。
聂金源等在柴胡多糖和黄酮化合物的提取[18]中对微波辅助提取法、超声辅助法和索氏提取法进行比较，发现微波辅助提取法所需时间最短（10min），多糖的提取率最高（28.46％）。
多糖的纯化实验报告
一、实验目的1. 掌握多糖纯化的基本原理和方法。
2. 学习并运用DEAE-Sephadex A-50柱层析技术对多糖进行纯化。
3. 通过比色法测定纯化前后多糖的浓度，评价纯化效果。
二、实验原理多糖是一类重要的生物大分子，具有广泛的生物活性。
然而，天然多糖往往伴随着一些蛋白质、脂肪和色素等杂质，这些杂质会干扰多糖的结构鉴定和活性分析。
因此，对多糖进行纯化是研究多糖生物活性的关键步骤。
多糖的纯化主要包括以下步骤：1. 提取：采用热水浸提法或超声波辅助提取法等从植物、动物或微生物中提取多糖。
2. 净化：去除提取液中的蛋白质、脂肪和色素等杂质。
3. 纯化：利用DEAE-Sephadex A-50柱层析技术对多糖进行纯化。
4. 测定：通过比色法测定纯化前后多糖的浓度，评价纯化效果。
三、实验材料1. 实验药品：DEAE-Sephadex A-50柱层析材料、氨水、盐酸、无水乙醇、葡萄糖标准品等。
2. 实验仪器：层析柱、紫外可见分光光度计、离心机、移液器、容量瓶等。
四、实验方法1. 提取：称取一定量的多糖样品，加入适量蒸馏水，用超声波辅助提取法提取多糖。
提取液离心分离，取上清液作为待纯化样品。
2. 净化：将待纯化样品加入适量的氨水，调节pH值至7.0，静置一段时间。
离心分离，取上清液作为待纯化样品。
3. 纯化：将DEAE-Sephadex A-50柱层析材料预处理后，装入层析柱。
将待纯化样品上柱，用蒸馏水进行梯度洗脱。
收集洗脱液，利用紫外可见分光光度计检测洗脱液中的多糖含量。
4. 测定：配制葡萄糖标准溶液，绘制标准曲线。
将纯化后的多糖样品按照比色法进行测定，计算纯化前后多糖的浓度。
五、实验结果1. 提取：超声波辅助提取法提取多糖，提取率约为70%。
2. 净化：氨水处理去除蛋白质、脂肪和色素等杂质，纯化率约为90%。
3. 纯化：DEAE-Sephadex A-50柱层析纯化，纯化率约为95%。
4. 测定：纯化前后多糖浓度分别为1.5 mg/mL和0.7 mg/mL，纯化效果良好。
多糖的提纯化技术
多糖的提纯化技术
溶剂提取法
(1) 水提法：以水为溶剂，可采用热水浸提或冷水浸提（植物多糖多采用热水浸提，可直接或离心去除杂质），由于多糖不溶于乙醇，可通过沉淀将多糖提纯出来。
水提法的确缺点在于温度高、耗时长、提取率低。
(2) 酸提法：有些含酸性基团的多糖在酸性条件下不易溶解，可用盐酸或乙酸处理后，再用乙醇或不溶性络合物将多糖沉淀出来。
酸提法容易破坏多糖的空间结构，一般较少使用。
(3) 碱提法：一些含有糖醛酸的多糖和酸性多糖在碱性条件下都比较稳定，可提高多糖的提取率，一般用硼氢化钠或硼氢化钾作为溶剂。
碱提法的不足之处在于某些多糖在碱性较强时会降解，而且容易影响成品的色泽和风味。
多糖的提取和纯化
多糖的提取和纯化Company Document number：WUUT-WUUY-WBBGB-BWYTT-1982GT多糖的提取和纯化→粉碎→脱脂→粗提（2－3次）→吸滤或离心→沉淀→洗涤→干燥首先除去表面脂肪。
原料经粉碎后加入甲醇、乙醚、乙醇、丙酮或1：1的乙醇乙醚混合液，水浴加热搅拌或回流1－3小时，脱脂后过滤得到的残渣一般用水作溶剂（也有用氢氧化钾碱性水液、氯化钠水液、1％醋酸和1％苯酚或－1M氢氧化钠作为提取溶剂）提取多糖。
温度控制在90－100℃，搅拌4－6小时，反复提取2－3次。
得到的多糖提取液大多较粘稠，可进行吸滤。
也可用离心法将不溶性杂质除去，将滤液或上清液混合（得到的多糖若为碱性则需要中和）。
然后浓缩，再加入2－5倍低级醇（甲醇或乙醇）沉淀多糖；也可加入费林氏溶液或硫酸铵或溴化十六烷基三甲基铵等，与多糖物质结合生成不溶性络合物或盐类沉淀。
然后依次用乙醇、丙酮和乙醚洗涤。
将洗干后疏松的多糖迅速转入装有五氧化二磷和氢氧化钠的真空干燥器中减压干燥（若沉淀的多糖为胶状或具粘着性时，可直接冷冻干燥）。
干燥后可得粉末状的粗多糖。
微波辅助提取法：其原理为利用不同极性的介质对微波能的不同吸收程度，使基体物质中的某些区域和萃取体系中的某些组分被选择性加热，从而使萃取物质从基体或体系中分离出来，进入到介电常数小，微波吸收能力较差的萃取剂中[14]。
由于微波能极大加速细胞壁的破裂，因而应用于中草药中有效成分的提取能极大加快提取速度，增加提取产率。
而且由于其选择性好，提取后基体能保持良好的性状，提取液也较一般的提取方法澄清[15]。
聂金源等在柴胡多糖和黄酮化合物的提取[18]中对微波辅助提取法、超声辅助法和索氏提取法进行比较，发现微波辅助提取法所需时间最短（10min），多糖的提取率最高（％）。
超声辅助法：其原理是利用超声波的空化作用加速植物有效成分的浸出提取，另外超声波的次级效应，如机械振动、乳化、扩散、击碎、化学效应等也能加速欲提取成分的扩散释放并充分与溶剂混合，利于提取[16]。
多糖分离纯化
多糖分离纯化1. 概述多糖是由许多重复单元组成的生物大分子，具有广泛的生物功能和应用价值。
多糖的分离纯化是从混合物中分离出目标多糖并提高纯度的过程。
本文将介绍多糖分离纯化的常用方法和技术，以及其在食品、药品和生物工程等领域的应用。
2. 多糖的分离方法多糖的分离方法主要包括溶剂沉淀、离子交换、凝胶过滤、超滤、逆流层析、电泳和气相色谱等。
下面将分别介绍这些方法的原理和应用情况。
2.1 溶剂沉淀溶剂沉淀是利用溶剂的物理性质，如极性和温度等，使多糖在溶液中发生相分离的方法。
通常采用醇类溶剂，如乙醇或异丙醇。
溶剂沉淀适用于多糖与其他溶质的溶解度差异较大的情况，但纯度较低。
2.2 离子交换离子交换是利用离子交换树脂上的功能基团与多糖分子间发生离子交换反应的方法。
树脂的功能基团可以选择性吸附或释放多糖分子。
离子交换适用于多糖的分子量差异较大的情况，例如海藻酸和壳聚糖的分离。
2.3 凝胶过滤凝胶过滤是利用凝胶的孔隙结构将分子按大小分离的方法。
多糖分子较大，可以被凝胶孔隙排除，而小分子可以通过凝胶透过。
凝胶过滤常用于多糖与其他小分子的分离，如蛋白质和核酸。
2.4 超滤超滤是利用超滤膜的孔隙结构将溶液分离的方法。
超滤膜的孔径可以根据需要选择，通常是分子量截留范围在1 kDa至100 kDa之间。
超滤适用于多糖与其他大分子的分离，如蛋白质和核酸。
2.5 逆流层析逆流层析是利用多糖与填料间的亲和作用进行分离的方法。
填料可以是具有特定亲和性的配体，如亲和树脂。
逆流层析适用于分子间相互作用较强的多糖分离。
2.6 电泳电泳是利用电场作用将分子按电荷和大小进行分离的方法。
多糖可根据电荷差异选择合适的电泳方法，如聚丙烯酰胺凝胶电泳和毛细管电泳。
电泳在多糖的分子量分析和负载量测定中广泛应用。
2.7 气相色谱气相色谱是利用样品在气相载体中的分配和迁移以实现分离的方法。
多糖需要经过甲硅烷衍生化处理后才可以进行气相色谱分析。
气相色谱适用于多糖的含量测定和结构分析。
多糖的提取分离纯化及分析鉴定方法研究
多糖的提取分离纯化及分析鉴定方法研究多糖是由多个单糖分子通过糖苷键连接而成的高分子化合物。
多糖具有广泛的应用价值，包括食品、医药、化妆品和生物材料等领域。
因此，对多糖的提取、分离纯化以及分析鉴定方法的研究具有重要意义。
一、多糖的提取方法1.物理法物理法主要包括热水提取法、酸碱提取法和微波提取法等。
热水提取法是最常用的提取方法之一，通过加热使细胞壁破烂，有利于多糖的溶出。
酸碱提取法则是利用酸碱反应将多糖从细胞壁中释放出来。
微波提取法则是利用微波辐射对样品进行加热，加速多糖的溶解和释放。
2.化学法化学法主要包括酶解法、酶解分离法和酸碱水解法等。
酶解法是利用特定的酶对样品进行处理，将多糖分解为单糖，然后进行分离和纯化。
酸碱水解法则是通过酸碱反应将多糖水解为低聚糖和单糖。
3.生物法生物法是利用微生物或植物产生的酶对多糖进行酶解和分离。
生物法具有选择性强、工艺简单等优点，在多糖提取中得到了广泛的应用。
二、多糖的分离纯化方法多糖的分离纯化方法主要包括离子交换色谱法、凝胶渗透色谱法和亲和色谱法等。
1.离子交换色谱法离子交换色谱法是利用离子交换树脂对多糖进行分离的方法。
通过控制溶液pH值和离子强度等条件，使不同电荷的多糖在树脂上发生吸附反应，实现多糖的分离纯化。
2.凝胶渗透色谱法凝胶渗透色谱法是根据多糖分子量的大小来进行分离的方法。
多糖分子量越大，越容易在凝胶渗透色谱柱的孔隙中滞留，分离得到纯度较高的多糖。
3.亲和色谱法亲和色谱法是利用多糖与一些特定配体之间的相互作用进行分离的方法。
例如，可以利用亲和色谱柱上的特定配体与多糖的特定结构之间的结合作用，实现多糖的分离和纯化。
三、多糖的分析鉴定方法多糖的分析鉴定方法主要包括红外光谱法、紫外光谱法、核磁共振波谱法、高效液相色谱法和气相色谱法等。
1.红外光谱法红外光谱法能够通过检测样品吸收、散射或透射特定波长的红外光来分析多糖的结构和功能。
2.紫外光谱法紫外光谱法是利用多糖分子在紫外可见光区域的吸收特性进行分析。
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多糖的提取和纯化目前，真菌多糖的提取可从子实体和采用深层培养发酵液的菌丝中分离获得，但以从子实体中提取多糖为主。
首先是将子实体粉碎，加入甲醇或乙醇乙醚1:1混合液，水浴加热搅拌1一3小时除去表面脂肪。
其次是用残渣提取多糖，常用的方法有不同温度下的水提法、稀酸提法、冷热稀碱提法。
水提法采用的较多，适合于提取水溶性多糖。
稀酸提取法适用于提取酸溶性多糖、时间宜短，温度不超过50℃，以防止糖昔键断裂。
稀碱法适合于提取碱溶性糖。
然后除去小分子杂质，常采用透析法，将多糖提取液置于半透膜透析袋中，逆向流水透析1一3天。
第四步是沉淀多糖。
大部分多糖在有机溶剂中的溶解度极小，所以可用有机溶剂来沉淀。
常用4一5倍低级醇、丙酮，一般在pH=7.0左右沉淀多糖，制得粗多糖。
最后是除去蛋白质。
除去多糖中的蛋白质常用的方法是三氯醋酸法。
得到的溶液基本上是没有蛋白质与小分子杂质的多糖混合物或单一多糖。
多糖的纯化是将多糖混合物分离为单一的多糖。
纯化方法很多，主要纯化方法有:(l)分步沉淀法根据不同多糖在不同浓度的低级醇或酮中具有不同溶解度的性质，逐次按比例由小而大加入这些醇或酮分步沉淀。
此法适用于分离各种溶解度相差较大的多糖。
(2)盐析法根据不同多糖在不同浓度盐中具有不同溶解度而分离。
纯度鉴定和分子量测定多糖纯度标准不能用通常化合物纯度标准来衡量，因为我们所说的多糖纯品实质上是一定分子量范围内的均一组成。
因此，测得的分子量一般为平均分子量。
过去常用粘度法、蒸气压渗透计法、沉降法、超速离心法、光散射法等测定高分子化合物分子量的方法测定真菌多糖的分子量，但由于这些方法测定起来比较麻烦，且误差较大，现多数已不采用。
目前实验室常用的方法为凝胶过滤法和高压液相色谱法，对于分子量小于1百万的多糖用高压液相法为最好。
1.2.1发酵、提取取香菇465菌株斜面菌种接人摇瓶培养基中振荡培养，逐级扩大培养至10O0L，25℃下通气培养72h，压滤，得香菇深层培养菌丝体。
上述菌丝体经水洗涤后，用3倍量热水(90一100℃)浸取3h，浸取液经浓缩加3倍量95肠乙醇，离心得乙醇沉淀物一Le[‘’。
1.2。
2分离、纯化取Le上样于DEAE一纤维素柱上，用O。
Olmol/L pH 6.95 Tris-HCI缓冲液洗脱，洗脱液分部收集，分别用UV(280nm)和酚硫酸法测定其吸收值(A值)，合并吸收峰重叠的洗脱液，经浓缩、透析、冻干得淡黄色絮状物Le一2·Le一2进一步用DEAE一纤维素(DE52型)分离，先用pH7.8的0.oosmol/L硼酸缓冲液洗脱，后用含lmol/L NaCI的o.Zmol/L硼酸缓冲液洗脱.各洗脱液按上法用UV230nm和酚硫酸法检测，分别收集既含肤又含糖的洗脱液.用o.005mol/L硼酸缓冲液洗脱的组分为Le一2一1，用含lmol/L NaCI的硼酸缓冲液洗脱的组分称Le一2一2o1.2.3鉴定1.2.3.1纯度(l)HPLC法将样品配成1%浓度后进样.进样量20召L。
流动相:0.002mol/L NaAc;速:0.6ml/min。
记录色谱曲线和样品保留时间(Tr)。
(2)醋酸纤维薄膜电泳缓冲液:pH8.6巴比妥缓冲液.电压12OV，25min.阿利新蓝法染色.1·2·3.2分子量测定用T系列标准葡聚糖(T-40:44，400 Da；T-70：85，000 Da；T-110:110，000 Da;T-500:450，000Da)上HPLC柱，测出保留时间后对分子量对数作出标准曲线.然后根据样品的保留时间，从标准曲线上求出样品分子量。
1.2。
3.3单糖组成(l)薄层层析将Le一2一1及Le-2一2分别用三氟醋酸在110℃下水解4h.蒸去三氟醋酸并蒸干，用3ml水溶解后点样。
层析板:醋酸纤维素层析板(DC一Aufolien CelluloseF。
);展开剂:正丁醇(BuOH):毗唆(Py):水(HZO)二6:4‘3;显色剂:苯胺一邻苯二甲酸.(2)气相色谱取上述水解液加IOmg NaBH。
在室温下还原Zh，用冰醋酸调pH至5，减压蒸干后加lml乙酸配，100℃水浴lh，进行乙酞化处理，将乙酸化产物的氯仿抽提液作气相色谱分析，柱温205℃，气化温度250℃。
1‘3.1多糖的分离、纯化将长裙竹荪子实体干品洗净、剪碎，用5倍的3%三氯乙酸溶液于5℃提取8h，离心，收集上清液，用4N NaOH溶液中和上清液至pH7，浓缩、离心，上清液加3倍体积的95%乙醇沉淀，收集沉淀物，冷冻干燥得粗多糖，得率约为8%.粗多糖含蛋白质较多，采用蛋白酶法脱蛋白一次，Sevag法脱蛋白5次，去蛋白液经透析，加3倍体积95%乙醇沉淀，水溶解，再醇析，反复三次得脱蛋白多糖。
脱蛋白后的多糖(2 .0g)溶于水(1Oml)中，用DEAE一纤维素(Cl-)型柱(3.3X53cm)层析，用水作洗脱剂，分部收集，每管10ml，用硫酸一苯酚法测定多糖的分布。
合并多糖单一峰位部分，减压浓缩至5ml，再进行一次DEAE一纤维素(B4O7 2-型)柱(1.8x50cm)层析，用水作洗脱剂.分部收集，用硫酸一苯酚法测定多糖分布.合并单峰洗脱液，浓缩至小体积，用SephadexG一200柱(2.OX5ocm)进一步纯化用o.05mol/1 NaCI 溶液作洗脱剂，用硫酸一苯酚法测定多糖分布，合并单峰洗脱液，透析去盐，浓缩，再加3倍体积的95师乙醇沉淀，沉淀物经冷冻干燥得到多糖，命名为DIA。
1.3.2纯度鉴定聚丙烯酞胺凝胶电泳按文献方法进行.阿利新蓝染色。
醋酸纤维薄膜电泳按文献方法进行，缓冲液为o.025mol/l pHg.0的硼砂缓冲液，纸scm，电压160V，电泳50min，阿利新蓝染色。
凝胶过滤法采用Sepharosc 4B柱(79 X 1 .6cm)进行凝胶层析，用蒸馏水洗脱，硫酸一苯酚法隔管测定多糖的分布。
紫外分光光度法采)JI UV一300进行扫描(200一400nm)。
观察260nm、280nm处是否有吸收峰。
根据上述测定结果，鉴定多糖的纯化。
1.3.3分子量测定采用Sepharose 4B凝胶柱(79x l.6cm)层析，洗脱剂为蒸馏水，洗脱速度为3ml/8min，分部收集，用硫酸一苯酚法测定多糖的分布。
再以标准葡聚糖T一40(44 .4Kd)、T一70(85Kd)、T一110(110Kd)和T一500(45Kd)分别重复上柱，测得各自的洗脱体积Ve，以Log M.W.对洗脱体积VO作图得标准l山线。
山多糖DIA的洗脱体积，查标准曲线图，求得该多糖的分子量。
1.3.5纸层析分析多糖DiA用2N H2SO4封管，100 水解6h，水解液用BaC03中和、过滤、浓缩后点样分析。
采川新华中速层析滤纸，下行法。
溶剂系统为醋酸乙酯:吡啶，水=10，4，3;显色剂为苯胺一邻苯二甲酸。
干品洗净剪碎——5倍蒸馏水，98-100 提取5h纱布粗滤，离心3000转/分——上清液适当浓缩，加3倍95乙醇沉淀，离心3000转/分——沉淀冻干——粗多糖蛋白酶法和sevag 法脱蛋白——脱蛋白多糖——Sephadex A-25柱层析，先用0.1mol/LNaCl洗至无糖检出，再用0.1-3.9mol/LNaCl梯度洗脱——含糖部分Sephadex G-200柱层析0.1mol/LNaCl洗脱——多糖纯品Sevag法(即氯仿与正丁醇的比例为3:1)脱蛋白,振摇0.5h左右,使样品中蛋白质与混合液形成凝胶,再反复多次用离心法除去。
1 多糖研究概述1.1 多糖提取：多糖多为水溶性多糖，组分不溶于高浓度的乙醇、丙酮、乙酸乙酯、正丁醇等有机溶剂。
多糖的提取一般分三步进行。
浸提：一般采用冷水或温水浸提。
浸提一段时间后，加乙醇或丙酮深淀，离心分离沉淀。
用乙醇或乙醚脱水，最后真空干燥或冷冻干燥后得粗多糖。
脱蛋白：用丧Sevag法(即氯仿与正丁醇的比例为3:1)脱蛋白，振摇0.5h左右，使样品中蛋白质与混合液形成凝胶，再反复多次用离心法除去。
也可用三氯醋酸法，三氟三氯乙烷脱蛋白。
纯化：多糖纯化多采用柱层所。
脱蛋白后的多糖用水溶解后，用DEVE纤维素柱层析，然后依次用不同浓度的Na<SUB>2</SUB>CO<SUB>3</SUB>，NaOH洗脱。
此外，纯化还可采取凝胶柱层析法，超滤法等。
1.2 多糖分子量的测定：所谓多糖纯品实质上是一定分子量范围内的均一组分，因此测定的多糖分子量为平均值。
以前多采用蒸气压渗透计法、沉降法、超速离心法、光散射法等测定高分子化合物分子量，但由于这些方法测定起来比较麻烦，且误差很大。
目前常用的方法为凝胶过滤法和高压液相色谱法，对于分子量小于一百万的多糖，用高压液相法为最好。
1.3 多糖结构的确定：多糖的活性与其结构有关，但确定多糖的细微结构是很难的，原因是分级纯化难关，从自然界分离的粗多糖是非常复杂的大混合物，包括生物大分子混合；不同多糖(中性多糖、酸性多糖或杂多糖)的混合；同种多糖大小分子的混合，必须采取适合特点的方法分离分级纯化，否则不易确定其结构。
从同一样品采用不同分级方法，常有不同结果。
植物的不同部位，因功能不同，其中的多糖也是各色各样的，必须分开来研究。
比如人参的根、茎、叶、果中的多糖，虽都含有中性杂多糖、酸性杂多糖组分，其组成与结构都是不同的。
在人参茎、叶、果的中性杂多糖、酸性杂多糖组成中都有葡萄糖，而根的中性杂多糖、酸性杂多糖组成中都没有葡萄糖，而只有以葡萄糖为主链的类淀粉多糖储存在根部。
多糖结构确定有化学降解法、酶降解法、免疫化学法、放射化学法、红外光谱法、核磁共振法、气相层析法、质谱法、质谱与气相层联用、高效液相色谱法等，要完成对多糖整体结构的分析，必须将各种方法结合起来。
多糖的结构研究，还不能忽视金属离子的贡献，多糖链中含烃基、乙酰基、氨基、硫酸基等易与多种金属离子形成络合物。
多糖在自然环境中是否与金属离子有关系，如何才会是其最佳状态，也是应考虑的。
金属离子的加入或可能是多糖的活性中心的成员，金属离子的存在因络合多糖链而会影响构象变化。
多糖的结构确定与生物活性测试后，研究者的进一步是研究其构象、大分子间相互影响、活性中心、金属离子影响以及化学修饰的研究，从不则角度来阐明结构与功能的关系。
2.1 工艺流程银耳孢子发酵粉→热水煮提→冷却离心→沉淀加一定浓度NaOH液搅拌，离心→上清液→3V乙醇沉析→多糖沉淀→多糖粗品→蒸馏水加热溶解→冷却离心→上清液→Sevag法除蛋白→离心取上清液→减压浓缩→蒸馏水透析→透析袋内容液→3V乙醇沉析多糖→沉淀→真空干燥→精制多糖→离子交换层析（DEAE-32-Cellu-lose）→洗脱液→减压浓缩→3V乙醇沉析多糖→沉淀→银耳碱提取多糖→离子交换层析纯化（DEAE-32-Cellulose）→洗脱液→减压浓缩→3V乙醇沉析多糖→沉淀干燥→均一体银耳碱提取多糖。