枸杞多糖的生化和降血糖活性讲解

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枸杞多糖

枸杞多糖

枸杞多糖具有十分重要的、多方面的保健功能作用:
(1)免疫调节作用
枸杞多糖对小鼠非特异性免疫、特异性免疫有非常显著的免疫调节作用,能显著地增强小鼠脾淋巴细胞增殖、迟发型变态反应、升高小鼠血清溶血素含量、小鼠腹腔巨噬鸡红细胞功能、小鼠碳廓清能力、以及显著增强抗体生成的能力等。

(2)降血糖作用
枸杞多糖对实验性糖尿病有明显的降血糖作用,有效率达100%;且对正常小鼠血糖无影响。

(3)降血脂作用
枸杞多糖对实验性高脂血大鼠的血脂有明显影响,可显著降低血清胆固醇、甘油三脂含量、而对高密度脂蛋白有升高作用。

实验结果表明构把多糖有明显的调节血脂作用。

(4)延缓衰老作用
果蝇生存试验表明,枸杞多糖可明显延长雌性及雄性果蝇的平均寿命及最高寿命。

并有显著升高小鼠红细胞SOD作用和明显降低MDA的作用。

另外还有动物及临床实验结果表明拘把多糖能明显增强去胸腺小鼠的细胞免疫功能,对小鼠性功能也有一定的恢复作用。

(5)抗疲劳作用
构把多糖能提高实验小鼠的肌糖原、肝糖原储备。

增加乳糖脱氨的总活力、加速血尿素的清除和降低运动后的血乳酸水平,能明显延长小鼠游泳时间。

所以,拘把多糖能增强机体体力、迅速消除运动后的疲劳。

(6)其它作用
通过对天麻、人参、银杏、枸杞提取物的试验表明:枸杞提取物能显著延长动物缺氧条件下及辐射条件下的存活时间。

枸杞多糖是什么,枸杞多糖的作用与功效介绍

枸杞多糖是什么,枸杞多糖的作用与功效介绍

枸杞多糖是什么,枸杞多糖的作用与功效介绍
枸杞多糖是什么
枸杞多糖其实就是枸杞的提取物,属于枸杞果肉里面最有价值的成分之一。

这也就是枸杞多糖和枸杞的区别。

枸杞多糖的精华所在就在于多糖是非常复杂且庞大的分子结构,属于水溶性多糖。

枸杞多糖的作用有提升自身免疫力、增强造血功能、降血糖血脂等。

规格
别名:枸杞多糖/枸杞提取物
英文名:Ganoderma lucidum Polysaccharide
纯度:可定制
水溶性:易溶于热水,且为粘稠状
形状:枸杞多糖粉末、枸杞多糖片、枸杞多糖胶囊、枸杞多糖液体
味道:偏苦味
提取来源:枸杞
保质期:24个月(2年)
存储:本品应密封遮光,贮存在干燥、阴凉、通风良好的地方。

功效与作用
01、增强免疫力比如身体不舒服,动不动就感冒发烧等,可以适当去吃一些枸杞多糖,有利于提高自生免疫力。

02、增强造血功能,女性朋友想美容养颜,多吃一些枸杞多糖或红枣多糖,对于造血是很有帮助的。

03、降血糖血脂,老年人有三高,尤其是糖尿病,枸杞多糖有很好的的降血糖功效;
04、抗辐射和延缓衰老,对于经常熬夜的加班族,枸杞多糖绝对是不错的选择;
适用人群
所有人
副作用与禁忌
枸杞多糖服用以后,一般不会出现副作用。

应用范围
枸杞多糖丰富的丰富的营养成分,增强免疫、保护肝脏和抗衰老三大功效,是被国内外学者认可的。

目前市场上枸杞多糖的产品还是
有不少的。

随着具名水平的不断提高,枸杞多糖类的产品也将会不断增加,未来仍具有较大的市场空间和发展潜力。

枸杞多糖的功能主治

枸杞多糖的功能主治

枸杞多糖的功能主治1. 提高免疫力•枸杞多糖富含多种维生素和微量元素,能够提高机体的免疫力。

•枸杞多糖还可以增强抗氧化能力,减少自由基的损伤,延缓衰老过程。

2. 保护肝脏•枸杞多糖对肝脏具有保护作用,可以减轻肝脏的损伤。

•枸杞多糖还可以促进肝细胞再生,有助于肝脏的修复和恢复功能。

3. 抗疲劳•枸杞多糖可以提高身体的能量代谢,增加体力和抗疲劳能力。

•枸杞多糖还可以减轻疲劳情绪,改善睡眠质量,增加精力和注意力的集中度。

4. 降血糖•枸杞多糖可以降低血糖水平,有助于控制糖尿病患者的血糖。

•枸杞多糖还可以增加胰岛素的分泌,提高胰岛细胞的功能。

5. 保护眼睛•枸杞多糖对眼睛具有良好保护作用,能够改善视力和减少眼睛疲劳。

•枸杞多糖还可以防止黄斑病变和青光眼等眼部疾病的发生。

6. 改善睡眠质量•枸杞多糖可以调节神经系统,缓解焦虑和压力,改善睡眠质量。

•枸杞多糖还可以增强脑力,提高记忆力和学习能力。

7. 促进消化•枸杞多糖具有促进胃液分泌的作用,有助于消化食物。

•枸杞多糖还可以减少胃酸的反流,缓解胃部不适和消化不良。

8. 调节血脂•枸杞多糖可以调节血脂代谢,降低血液中的胆固醇和甘油三酯水平。

•枸杞多糖还可以保护血管壁,预防动脉硬化和心脑血管疾病的发生。

9. 抗肿瘤•枸杞多糖具有抗肿瘤的作用,可以增强机体的抵抗力,抑制肿瘤细胞的生长和扩散。

•枸杞多糖还可以减轻放疗和化疗对身体的损伤,提高治疗效果和生存率。

10. 改善性功能•枸杞多糖对男性具有改善性功能的作用,可以增强性欲和性能力。

•枸杞多糖还可以增加精子的数量和活力,提高生育能力。

综上所述,枸杞多糖具有提高免疫力、保护肝脏、抗疲劳、降血糖、保护眼睛等多种功能主治。

它是一种天然的保健品,对人体健康非常有益。

使用枸杞多糖应适量合理,并注意与自身情况相结合。

枸杞多糖的结构与生物活性研究

枸杞多糖的结构与生物活性研究

枸杞多糖的结构与生物活性研究随着人们生活水平的提高,人们的健康意识也逐渐增强。

枸杞作为一种具有多种保健功效的传统中药材,因其含有丰富的多糖而备受关注。

枸杞中的多糖以枸杞多糖为主要成分,其结构和生物活性成为当前热门的研究方向之一。

本文将从结构和生物活性两个方面介绍枸杞多糖的研究现状。

一、枸杞多糖的结构1.1 枸杞多糖的萃取方法枸杞多糖主要以酸、碱或酶解法进行萃取,其中,以酸法萃取得到的多糖含量最高。

萃取得到的多糖成分主要有枸杞多糖1、枸杞多糖2和枸杞多糖3三种类型,其中,枸杞多糖1为主要组分。

1.2 枸杞多糖的化学组成枸杞多糖的主要化学组成为多糖类物质,其中以多糖为主要成分。

多糖类物质是由单糖分子通过葡聚糖、木聚糖、半乳糖等多个分支链连接而成的高分子多糖,萃取得到的枸杞多糖中 mainly 以葡萄糖和甘露糖为主要单糖组成,同时还含有一定量的半乳糖、鼠李糖和阿拉伯糖等。

1.3 枸杞多糖的结构枸杞多糖的分子结构呈线性或分枝状,且其分子结构复杂,含有不同的糖链长度和不同的共价连接方式。

据文献报道,枸杞多糖含有α-葡萄糖-1,5-α-木糖、α-鼠李糖-1、4-α-半乳糖、或α-阿拉伯糖-1、3连接等不同的单糖顺序。

二、枸杞多糖的生物活性枸杞多糖具有多种生物活性,其中最为突出的有免疫调节、抗肿瘤、抗氧化和降血压等功效。

下面将从这几个方面简单介绍。

2.1 免疫调节研究发现,枸杞多糖能够增强机体免疫功能,提高T淋巴细胞的免疫活性。

同时,它还能够调节巨噬细胞的吞噬功能,促进巨噬细胞释放多种免疫因子,从而起到免疫调节作用。

2.2 抗肿瘤枸杞多糖在肝癌、乳腺癌、结肠癌、卵巢癌等多种癌症中均具有一定的抗肿瘤作用。

研究表明,枸杞多糖能够抑制癌细胞的生长和分裂,促进癌细胞的凋亡。

此外,它还能够调节人体免疫系统,增强机体对癌症的抵抗能力。

2.3 抗氧化枸杞多糖还具有较强的抗氧化能力,能够清除自由基及其产生的氧化物质,保护人体细胞免受氧化伤害。

枸杞多糖功效与作用是什么?

枸杞多糖功效与作用是什么?

枸杞多糖功效与作用是什么?枸杞我们都知道,属于一种健康的食材,一般来说人们都没有直接吃枸杞的,而是用枸杞来泡水喝,或者在一些食物当中放一些枸杞进去,进而达到健康养生的功效。

现代社会当中,用枸杞当做原料而制作成的养生产品,比较受大众的欢迎。

那么枸杞多糖功效与作用都是什么?枸杞多糖的提取纯化分为二步。

一是枸杞粗多糖的提取,二是枸杞多糖的分级纯化。

粗多糖的提取工艺如下:称取已烘干粉碎的枸杞子,以石油醚:丙酮(1:1)回流脱脂,滤出溶剂,残渣风干后以80%乙醇脱单糖和低聚糖。

将脱低聚糖等后的残渣用水在90~100℃水溶提多糖,提取液减压浓缩后用酒精沉淀多糖,再用无水乙醇、丙酮洗涤沉淀,真空干燥得枸杞粗多糖。

粗多糖的分级纯化是将上述枸杞粗多糖通过DEAE纤维素柱,以不同浓度的NaCl梯度洗脱,将不同盐浓度的洗脱液分别减压浓缩后,用透析法脱盐,冷冻干燥后得不同级分的枸杞糖蛋白。

抗肿瘤枸杞多糖能抑制多种肿瘤的生长,其作用机制说法不一,有人认为枸杞多糖可以通过激活机体的免疫系统来达到抗肿瘤目的,但其抑制肿瘤的作用尚缺乏可靠证据。

枸杞多糖3p通过增加免疫和降低脂质过氧化显著抑制S180肉瘤的生长,还有资料表明枸杞多糖的抗肿瘤作用与调节钙离子浓度有关,如对人类肝癌QGY7703细胞株的研究表明,枸杞多糖能在分裂循环的S期抑制QGY7703细胞的增殖并能诱导其凋亡,细胞内RNA的量和钙离子浓度上升,还能使细胞内钙离子的分布改变。

枸杞多糖可以抑制前列腺癌pC3和DU145细胞系的生长,并存在剂量和时间反应关系,引起癌细胞DNA断裂,通过Bcl2和Bax蛋白表达诱导凋亡,体内实验表明枸杞多糖可以抑制裸鼠pC3肿瘤的生长。

也有研究发现枸杞水提物可促进肝癌细胞的凋亡。

调节血脂和降血糖Wu等研究发现,枸杞多糖可降低非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)大鼠血糖和血清中的MDA及一氧化氮的含量,并显著提高血清中的SOD含量,减少外围淋巴细胞的DNA损伤。

枸杞多糖的结构与保健功能评价

枸杞多糖的结构与保健功能评价

枸杞多糖的结构与保健功能评价枸杞,被誉为“补肾佳品”,长久以来在中医药中扮演着重要的角色。

而枸杞多糖,作为枸杞的重要成分,近年来已引起广大科研工作者的浓厚兴趣。

本文将深入探讨枸杞多糖的结构、保健功能及其在未来中的应用。

枸杞多糖是一种结构复杂、不同于简单糖类的植物多糖。

它由多个枸杞糖单元组成,呈现出一种杂多糖的结构。

其中主要含有鼠李糖、半乳糖、木糖、葡萄糖、阿拉伯糖等,这些糖单元通过特定的排列方式和链接方式形成复杂的结构。

随着枸杞原料的成熟度提高,枸杞多糖的含量也有所增加,通常在枸杞的籽、花、叶、果等部位中均含有丰富的多糖。

提高免疫力:枸杞多糖能够显著提高人体的免疫力,增强体质。

它能够刺激免疫系统的活性,增强吞噬细胞的吞噬能力,从而提升人体的抗病能力。

抗氧化:枸杞多糖具有显著的抗氧化作用,能够延缓细胞的衰老,对抗自由基的损伤,从而减缓机体的老化过程。

预防慢性病:枸杞多糖对预防癌症、心脑血管疾病、肝病等疾病具有重要作用。

它能够调节人体的血脂、血糖水平,降低慢性病发生的风险。

改善睡眠:枸杞多糖对睡眠有显著的改善作用,它能够调节人体的神经内分泌系统,缓解疲劳,提高睡眠质量。

缓解视疲劳:枸杞多糖对缓解视疲劳也有很好的效果,它能够改善眼底血管的微循环,增加视网膜的供血供氧,对保护视力和预防眼部疾病有积极的作用。

随着人们对枸杞多糖的认识越来越深入,对它的应用也越来越广泛。

在未来,我们可以预期以下几个枸杞多糖的主要应用方向:健康食品和补充剂:由于枸杞多糖具有多种保健功能,因此被广泛应用于健康食品和补充剂中。

例如,枸杞茶、枸杞胶囊、枸杞粉等产品,都已成为许多人日常生活中的必备品。

医学和药物:由于枸杞多糖具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等活性,因此在医学和药物领域也有广泛的应用。

例如,它被用于制备药物,辅助治疗各种慢性疾病,如糖尿病、高血压、肝病等。

化妆品:近年来,越来越多的研究表明枸杞多糖具有护肤和美容的效果,因此也被广泛应用于化妆品中。

枸杞水的血糖调控机制解析

枸杞水的血糖调控机制解析

枸杞水的血糖调控机制解析血糖调控一直是人们关注的重点,因为高血糖可能导致糖尿病等一系列健康问题。

在寻找血糖调节的方法中,传统草药被广泛应用并受到重视。

在众多传统中草药中,枸杞广泛用于血糖调控,并以其安全有效的特性备受推崇。

枸杞水作为一种常用的枸杞饮品,被认为具有促进血糖稳定的功能。

本文将探讨枸杞水对血糖调节的可能机制。

1. 枸杞水的成分分析首先,我们来看一下枸杞水的成分。

枸杞水主要由枸杞浸泡在水中得到,水提取物含有较低的糖分和热量。

此外,枸杞水富含维生素C、胡萝卜素、多种氨基酸、多糖等营养成分。

这些成分对于血糖调节可能具有重要作用。

2. 枸杞水可能的血糖调控机制在枸杞水的血糖调控机制中,有几个可能的因素需要考虑:2.1 抗氧化作用枸杞水的含有丰富的维生素C和胡萝卜素等抗氧化成分,这些成分具有抗氧化的作用。

研究表明,氧化应激与高血糖相关,因为高血糖会增加自由基的产生,进而引发氧化应激反应。

抗氧化作用可以减少氧化应激反应,从而帮助血糖的稳定。

2.2 调节胰岛素敏感性胰岛素敏感性是血糖调节的关键,胰岛素可以促进葡萄糖的进入细胞,降低血糖水平。

研究显示,枸杞水可能通过提高胰岛素敏感性来调节血糖。

枸杞中的多糖成分被认为可以增加胰岛素受体的表达,从而增加细胞对胰岛素的敏感性。

2.3 抑制α-淀粉酶活性α-淀粉酶是参与糖的消化和吸收的重要酶。

抑制α-淀粉酶活性可以减慢葡萄糖的吸收速度,从而降低血糖峰值。

枸杞中的营养成分被发现具有抑制α-淀粉酶活性的潜力,这也是枸杞水可能对血糖调控起作用的一部分原因。

2.4 降低肝糖原的释放肝糖原是肝脏中储存的一种多聚糖,可以在需要时分解为葡萄糖释放到血液中。

过度释放肝糖原可能导致血糖升高。

枸杞水中的多糖成分被发现可以抑制肝糖原的释放,从而减缓血糖上升速度。

3. 枸杞水的血糖调控研究进展目前,关于枸杞水的血糖调节作用的研究还比较有限,大部分研究集中在枸杞提取物的血糖调节研究上。

营养成分表里枸杞多糖

营养成分表里枸杞多糖

营养成分表里枸杞多糖枸杞多糖是指从枸杞子中提取出的一种具有多糖结构的物质。

枸杞是一种常见的中草药材,被广泛应用于中医药领域。

枸杞多糖具有多种保健功能,对人体健康有着积极的影响。

本文将从营养成分、功效和适宜人群三个方面来介绍枸杞多糖。

一、营养成分枸杞多糖是一种多糖类物质,主要成分是葡萄糖、果糖和鼠李糖。

此外,还含有一些维生素、矿物质和氨基酸等营养物质。

其中,维生素C、维生素E、维生素B1、维生素B2和β-胡萝卜素等维生素的含量较高,钙、铁、锌、镁等矿物质的含量也较为丰富。

二、功效1. 抗氧化作用:枸杞多糖具有较强的抗氧化活性,可以清除体内的自由基,减少氧化损伤,延缓衰老过程。

2. 免疫调节:枸杞多糖可以增强机体的免疫力,促进淋巴细胞的增殖和活化,提高机体对疾病的抵抗力。

3. 抗肿瘤作用:研究发现,枸杞多糖具有抑制肿瘤细胞生长的作用,可以起到一定的抗肿瘤作用。

4. 保护肝脏:枸杞多糖可以减轻肝脏损伤,促进肝细胞的修复和再生,对肝炎、肝硬化等疾病具有一定的保护作用。

5. 降血糖作用:枸杞多糖可以降低血糖水平,增加胰岛素敏感性,对糖尿病患者有一定的辅助治疗作用。

三、适宜人群1. 免疫力较差的人群:枸杞多糖可以增强机体的免疫力,对于免疫力较差的人群,如老年人、体弱者等,具有较好的保健作用。

2. 肿瘤患者:由于枸杞多糖具有一定的抗肿瘤作用,因此对于肿瘤患者来说,适量摄入枸杞多糖可以辅助治疗。

3. 糖尿病患者:枸杞多糖可以降低血糖水平,对糖尿病患者有一定的辅助治疗作用。

4. 肝脏疾病患者:枸杞多糖对于保护肝脏有一定的作用,对于肝炎、肝硬化等肝脏疾病患者来说,有一定的保健作用。

总结:枸杞多糖是一种营养丰富的保健品,具有抗氧化、免疫调节、抗肿瘤、保护肝脏和降血糖等多种功效。

适宜人群包括免疫力较差的人群、肿瘤患者、糖尿病患者和肝脏疾病患者等。

在摄入枸杞多糖时,应注意适量食用,不宜过量。

此外,还需注意个人体质和药物过敏史,避免过敏反应的发生。

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枸杞多糖的生化分析和降血糖活性摘要:本实验研究了枸杞多糖的纯化,表性特征和降血糖活性。

通过超滤膜分离获得水溶性多糖(LBP),并通过DEAE纤维素柱和Sephadex的色谱法进一步纯化G-150得到LBP3a和LBP3b。

分析表明LBP3b的平均分子量(Mw)为4.92kDa。

单糖组成分析显示,LBP3b由摩尔比为5.52:5.11:28.06:1.00:1.70的甘露糖,鼠李糖,葡萄糖,半乳糖和木糖组成。

并通过UV,FTIR,NMR和SEM研究了LBP3b的初步结构特征。

体外细胞实验显示,LBP3b以剂量依赖的方式显著抑制葡萄糖的吸收。

研究表明LBP3b具有作为抗糖尿病药物的潜在用途。

1.引言糖尿病(DM)是指具有异常高水平的血糖的慢性代谢病,已经成为世界上主要的健康问题。

它是由胰岛素分泌缺乏或器官对胰岛素的反应减弱引起的。

包括1型和2型在内的DM在全球发病率急剧增加,到2030年估计超过4亿。

许多口服降糖药,如双胍类和磺酰脲类可用于治疗糖尿病,但这些药物是化学合成的,缺乏多剂量方案,且高成本,具有不良副作用和毒性。

因此,研究和发现新型更安全和更有效的替代品是至关重要的,其中传统的食用和药用资源已成为研究低血糖活性的焦点]。

枸杞,属于茄科,是中国著名的草药,已使用了2300多年。

目前,枸杞受欢迎的功能食品已被广泛使用,其具有很大功效,如减少血糖和血清脂质,滋养眼睛,肾脏和肝脏,抗辐射,提高免疫力,抗衰老,抗癌,抗疲劳,增强血细胞生成,改善男性不育。

据报道,枸杞果干中有胡萝卜素,氨基酸,微量矿物质,维生素,脂肪酸,多糖和甜菜碱与健康相关的生物活性成分。

在枸杞的这些化学成分中,最好研究的组分是水溶性的多糖(LBP)估计占干果的5-8%。

许多关于药理学和光化学的研究已经证明LBP是以上的生物活性的主要成分之一[15-17]。

然而,由于LBP的结构复杂性,不同的提取和纯化方法得到的LBP具有不同组分,结构和功能。

而每种LBP的结构和功能从未进行过全面和深入的讨论。

本研究通过超滤膜分离方法从枸杞果实中提取粗LBP,通过DEAE离子交换纤维素和Sephadex凝胶过滤的方法纯化粗LBP,使用前柱衍生高效液相色谱法鉴定单糖组成,然后确定LBP亚基的结构。

此外,进行体外细胞实验以评价LBP3b 的降低血糖的效应。

部分(LBP3b)通过UV,FT-IR,NMR和SEM测定表型特征。

2.材料和方法2.1. 材料和化学物质枸杞果实在宁夏回族自治区市场购买。

将植物材料干燥并在使用前储存在干燥的地方。

DEAE-纤维素,Sephadex G-150,葡萄糖,半乳糖,阿拉伯糖,鼠李糖,甘露糖,木糖和三氟乙酸(TFA)购自Sigma。

所有其他化学品和溶剂均为分析等级。

2.2. 粗多糖的制备多糖通过Yin和Dang的方法制备。

将枸杞果实的干果用搅拌器粉末化,并将研磨的样品浸入给定体积的60℃的热水中。

在一定条件下,混合的提取物通过有机膜进行超滤,其分离分子量从300至50kDa(从Suntar Membrane Technology Co.,Ltd.,Xiamen,China获得)。

超滤后用氯仿:甲醇(2:1)(v / v)的过滤液回流三次,以除去脂质。

过滤后,将残余物风干,然后再次用80%乙醇回流。

混合的滤液依次用95%乙醇,100%乙醇和丙酮沉淀。

过滤和离心后,收集沉淀物并真空干燥,得到粗LBP(CLBP)的粗多糖(糖缀合物)。

2.3. CLBP的分离和纯化CLBP用Sevag试剂脱蛋白3次,然后将所得多糖溶液冻干以得到粗产物。

将粗产物溶解并经受DEAE纤维素柱(OH - ,2.6cm×90cm),并用蒸馏水和0.05-0.5mol / l NaCl以30ml / h的流速洗脱。

通过自动级分收集器收集洗脱液并测定280nm处UV吸收和490nm的苯酚硫酸量。

并且获得称为LBP1,LBP2,LBP3和LBP4的四个均匀子级分。

其中含量最高的亚级分LBP3,使用Sephadex G-150柱(2.5cm×60cm)进一步纯化。

经离心,浓缩和冷冻干燥后,LBP3b用于后续实验。

通过苯酚 - 硫酸法[22],使用d-葡萄糖作为标准样品,测得LBP3b 的总糖含量为96.53%。

2.4 . 单糖组成和分子量测定的分析LBP3b样品用三氟乙酸(TFA)水解,并由1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生。

LBP3b的单糖组成在ZORBAX Eclipse XDBC 18柱(250mm×4.6mm,Agilent,USA)上通过反相液相色谱(Agilent 1260,VWD检测器,美国)进行,流动相0.1mol / l PBS (pH6.7):乙腈为83:17,流速1ml / min,温度30℃,进样体积为10μl。

检测在250℃ nm d-甘露糖,l-鼠李糖,d-葡萄糖,d-半乳糖,d-木糖,d-阿拉伯糖用作参考。

通过高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)测定LBP3b的平均分子量,将样品溶液置于装有Shodex OHpak SB-802HQ和Shodex OHpak SB-805HQ柱(8.0mm×300mm,ShowaDenko,Japan)的Agilent高效液相色谱(HPLC),用含有0.2mol / l NaCl 的0.1mol / l磷酸盐缓冲液(pH 5.5)洗脱,其流速为0.8ml / min,并通过Agilent 1260折射率检测器检测。

并用用已知分子量的葡聚糖P-82系列作为标准品(805000,339000,210000,48800,2700,10000,6000,180Da),制作标准曲线。

参照上述制作的标准曲线,估算LBP3b的分子量。

2.5. 紫外和FT-IR分析将均匀的LBP3b溶解稀释至适当的浓度,并用UV分光光度计(CARY50UV-vis,Agilent,USA)对其测定。

测定范围从200至500nm 。

同时用配备有OMNIC软件的傅里叶变换红外分光光度计(NEXUS 870,USA)测定LBP3b的FT-IR。

将LBP3b样品分别用KBr粉末研磨,然后压制为用于在4000-400cm -1的频率范围内进行变换红外光谱测量的粒料。

2.6. NMR分析通过冻干将多糖与DMSO中的氘交换三次。

并在NMR波谱仪(Brucker AVANCE III)上于600MHz记录1 H和13 C NMR光谱。

2.7. 扫描电子显微镜将多糖用金箔涂覆,并在高真空条件下,于5kV的加速电压下,用扫描电子显微镜系统(Hitachi S-3400N,Japan)检测,并将图像放大500至10000倍。

2.8. LBP3b对Caco-2细胞培养模型中葡萄糖吸收的影响细胞培养:从中国科学院(上海,中国)生物化学与细胞生物学研究所的细胞库得到了Caco-2细胞,细胞在含有10%胎牛血清DMEM培养基的25cm 塑料瓶中生长。

将它们置于37℃,5%CO 2和85-90%相对湿度的的环境中培养,每隔一天更换培养基。

指数生长的细胞用于实验。

并根据每个孔一定量的菌体浓度接种,将细胞接种在培养板上的Transwell聚碳酸酯膜中(Corninig,3413)。

在第一周期间每隔一天更换培养基,之后,每天一次,培养时间为19-21天。

通过用Millicell-ERS(Millipore Corp.)测量的跨膜电阻值评价单层完整性。

单细胞层的TEER≥300cm 。

说明细胞的生长是封闭膜,因此可以用作肠吸收的体外模型。

葡萄糖摄取测定:除去上述Caco-2单层细胞模型的培养基。

用2ml HBSS (pH7.2)洗涤细胞两次,第二次洗涤时于CO 2培养箱中静置20分钟。

根据实验组,将适量的葡萄糖和LBP3b溶于HBSS,过滤灭菌,在使用前加热至37℃。

MTT 测定法用来测试LBP3b对Caco-2细胞的毒性。

混合葡萄糖和(或者)混有HBSS 的LBP3b,连接0.1ml至AP侧,向BL侧加入0.7ml HBSS作为进料流体,并将它们放置在孵化器中。

在此期间,吸出AP侧的液体来检测过量的葡萄糖。

根据课程的数量,在小房间中将等量的液体再次放入AP侧。

葡萄糖的浓度通过葡萄糖氧化酶法估算,通过其在培养基中的减少量来计算葡萄糖的吸收量并且用mmol / l来表达。

管号管号图1.LBE在DEAE-纤维素柱上的洗脱曲线(A); LBP3在Sephadex G-150柱上的洗脱曲线(B)。

2.9. 统计分析所有组的数据都用SPSS 18.0软件来统计评估,通过方差(ANOVA)的单向分析来进行统计分析,区别测试和对照研究的方法的意义由学生的t检验确立,P值小于0.05被认为是显着的,所有结果表示为每组的平均值为±SD(n = 5)。

3.结果与讨论3.1. 提取CLBP称为CLBP的粗多糖从L.barbarum果实通过超滤膜分离的方法萃取出来。

根据个人的因素实验的结果,正交实验表明影响膜通量的主要因素是物质的温度和操作压力。

考虑到膜的使用寿命和生产成本,综合这些因素,结果表明最优的工艺温度是30℃,使用中性物质的工作压力为0.25 MPa。

3.2. CLBP的纯化按照上面所述从大麦杆菌L.中分离CLBP。

在流速0.5ml / min条件下,将CLBP在带有蒸馏水和0.05-0.5mol / l NaCl的DEAE纤维素柱(OH-,2.6cm×90cm)上纯化,通过自动馏分收集器收集洗脱液并通过在280nm条件下的UV吸收进行监测以及在490nm下测定苯酚硫酸。

将洗脱物分成四部分,分别命名为LBP1,LBP2,LBP3和LBP4(图1A)。

使用Sephadex G-150进一步纯化亚级分LBP3柱(2.5cm×60cm),得到另外两种纯化的组分,命名为LBP3a和LBP3b(图1B)。

从洗脱曲线来看,多糖(490nm)和蛋白质(280nm)的洗脱峰通常发生在相同位置。

这表明多糖可以与蛋白质组合存在。

3.3. LBP3b的分子量和单糖分析LBP3b的HPGPC如图2所示。

根据基于P-82系列葡聚糖标准[log(MW)= 0.00228t3-0.24764t2 + 8.58241t-90.4349(R2 =0.9961,t = 36.716min)]的标准曲线测定,其分子量为4.92kDa。

通过柱前衍生化高效液相色谱分析LBP3b中的单糖组成。

LBP3b的单糖组成在标准糖的HPLC保留时间的基础上来分析(图3A)。

很明显,有六种标准单糖组合物被鉴定了,从低到高,D-甘露糖的保留时间为11.618 min,鼠李糖为15.435分钟,d-葡萄糖为22.474分钟,d-半乳糖为25.225分钟,d-木糖为26.898分钟,并且d-阿拉伯糖为27.493分钟。

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