枸杞多糖的生化分析和降血糖活性
枸杞多糖
枸杞多糖具有十分重要的、多方面的保健功能作用：
(1)免疫调节作用
枸杞多糖对小鼠非特异性免疫、特异性免疫有非常显著的免疫调节作用，能显著地增强小鼠脾淋巴细胞增殖、迟发型变态反应、升高小鼠血清溶血素含量、小鼠腹腔巨噬鸡红细胞功能、小鼠碳廓清能力、以及显著增强抗体生成的能力等。
(2)降血糖作用
枸杞多糖对实验性糖尿病有明显的降血糖作用，有效率达100%；且对正常小鼠血糖无影响。
(3)降血脂作用
枸杞多糖对实验性高脂血大鼠的血脂有明显影响，可显著降低血清胆固醇、甘油三脂含量、而对高密度脂蛋白有升高作用。
实验结果表明构把多糖有明显的调节血脂作用。
(4)延缓衰老作用
果蝇生存试验表明，枸杞多糖可明显延长雌性及雄性果蝇的平均寿命及最高寿命。
并有显著升高小鼠红细胞SOD作用和明显降低MDA的作用。
另外还有动物及临床实验结果表明拘把多糖能明显增强去胸腺小鼠的细胞免疫功能，对小鼠性功能也有一定的恢复作用。
(5)抗疲劳作用
构把多糖能提高实验小鼠的肌糖原、肝糖原储备。
增加乳糖脱氨的总活力、加速血尿素的清除和降低运动后的血乳酸水平，能明显延长小鼠游泳时间。
所以，拘把多糖能增强机体体力、迅速消除运动后的疲劳。
(6)其它作用
通过对天麻、人参、银杏、枸杞提取物的试验表明：枸杞提取物能显著延长动物缺氧条件下及辐射条件下的存活时间。
枸杞糖类研究报告
枸杞糖类研究报告摘要本研究旨在探究枸杞糖类的营养价值和药用功能，结合抗氧化剂和免疫调节剂的作用机制，以及枸杞糖类在糖尿病、心血管疾病和免疫力调节等方面的应用。
通过实验分析和文献综述，发现枸杞糖类具有丰富的营养成分和多种生物活性成分，能够增强机体的抗氧化能力和免疫调节功能，对人体健康具有重要意义。
该研究为进一步开发利用枸杞糖类的功能性食品提供了理论依据和实践指导。
1. 引言枸杞糖类是指从枸杞中提取的糖类物质，其主要成分包括果糖、葡萄糖、蔗糖等。
枸杞糖类具有浓郁的甜味和特殊的香气，可以被广泛应用于糖果、饼干和饮料等食品工业上。
随着人们对健康饮食的不断需求和健康意识的提高，枸杞糖类的营养价值和药用功能越来越受到关注。
本文通过对现有研究和实验数据的分析，揭示了枸杞糖类的营养成分和生物活性成分，以及其在糖尿病、心血管疾病和免疫力调节等方面的应用。
2. 枸杞糖类的营养成分枸杞糖类富含多种营养成分，包括碳水化合物、维生素、氨基酸和微量元素等。
其中，碳水化合物是枸杞糖类的主要成分，约占总质量的80%以上。
维生素C和维生素E是枸杞糖类中的重要成分，具有很强的抗氧化作用。
此外，枸杞糖类还富含多种氨基酸，如赖氨酸、异亮氨酸和苯丙氨酸等，对维持身体健康具有重要作用。
3. 枸杞糖类的生物活性成分枸杞糖类中含有多种生物活性成分，这些成分赋予了枸杞糖类良好的药用功能。
其中，特别值得关注的是多糖类成分。
多糖类具有很强的免疫调节和抗氧化能力，可以提高机体的免疫力和抗氧化能力，预防和改善多种疾病。
此外，枸杞糖类中还含有黄酮类、甾醇和酚酸类等成分，具有抗炎、抗菌和抗肿瘤作用。
4. 枸杞糖类的抗氧化作用抗氧化活性是枸杞糖类的主要功能之一。
实验证明，枸杞糖类能够显著提高血清总抗氧化能力，并降低血清中的氧化应激指标。
此外，枸杞糖类能够调节抗氧化酶的活性，提高体内抗氧化酶的表达水平，进一步增强抗氧化能力。
这些结果表明，枸杞糖类具有重要的抗氧化作用，对抵抗自由基的侵害起到积极的作用。
枸杞多糖的结构与生物活性研究
枸杞多糖的结构与生物活性研究随着人们生活水平的提高，人们的健康意识也逐渐增强。
枸杞作为一种具有多种保健功效的传统中药材，因其含有丰富的多糖而备受关注。
枸杞中的多糖以枸杞多糖为主要成分，其结构和生物活性成为当前热门的研究方向之一。
本文将从结构和生物活性两个方面介绍枸杞多糖的研究现状。
一、枸杞多糖的结构1.1 枸杞多糖的萃取方法枸杞多糖主要以酸、碱或酶解法进行萃取，其中，以酸法萃取得到的多糖含量最高。
萃取得到的多糖成分主要有枸杞多糖1、枸杞多糖2和枸杞多糖3三种类型，其中，枸杞多糖1为主要组分。
1.2 枸杞多糖的化学组成枸杞多糖的主要化学组成为多糖类物质，其中以多糖为主要成分。
多糖类物质是由单糖分子通过葡聚糖、木聚糖、半乳糖等多个分支链连接而成的高分子多糖，萃取得到的枸杞多糖中 mainly 以葡萄糖和甘露糖为主要单糖组成，同时还含有一定量的半乳糖、鼠李糖和阿拉伯糖等。
1.3 枸杞多糖的结构枸杞多糖的分子结构呈线性或分枝状，且其分子结构复杂，含有不同的糖链长度和不同的共价连接方式。
据文献报道，枸杞多糖含有α-葡萄糖-1，5-α-木糖、α-鼠李糖-1、4-α-半乳糖、或α-阿拉伯糖-1、3连接等不同的单糖顺序。
二、枸杞多糖的生物活性枸杞多糖具有多种生物活性，其中最为突出的有免疫调节、抗肿瘤、抗氧化和降血压等功效。
下面将从这几个方面简单介绍。
2.1 免疫调节研究发现，枸杞多糖能够增强机体免疫功能，提高T淋巴细胞的免疫活性。
同时，它还能够调节巨噬细胞的吞噬功能，促进巨噬细胞释放多种免疫因子，从而起到免疫调节作用。
2.2 抗肿瘤枸杞多糖在肝癌、乳腺癌、结肠癌、卵巢癌等多种癌症中均具有一定的抗肿瘤作用。
研究表明，枸杞多糖能够抑制癌细胞的生长和分裂，促进癌细胞的凋亡。
此外，它还能够调节人体免疫系统，增强机体对癌症的抵抗能力。
2.3 抗氧化枸杞多糖还具有较强的抗氧化能力，能够清除自由基及其产生的氧化物质，保护人体细胞免受氧化伤害。
枸杞多糖降血糖作用的细胞实验探究
世界最新医学信息文摘 2016年第16卷第51期 3250 引言糖尿病是目前临床上严重影响人类健康的非传染性疾病之一。
据世界卫生组织（WHO）的估算，目前全球所有人口中大约有1.8亿的人群是糖尿病患者，其中中国大约有3000万人是糖尿病患者[1]。
具统计到2030年全球的糖尿病患者人数会成倍的增加，中国糖尿病患者的总数会突破1亿人，因此对于糖尿病的治疗是临床上急需要解决的问题之一[2]。
有研究结果证明，患者长期使用常见的临床降糖药，其治疗效果不明显，且患者服药后有比较严重的副作用。
本次通过细胞实验研究枸杞多糖的降血糖的作用，具体报道如下：1 材料及方法1.1 材料实验对象为小鼠，其中小鼠NIT-L1胰岛β细胞是由中国医学科学院基础医学研究所提供;LBP由宁夏农科院枸杞研究所提供，其纯度为31.9% ;实验过程中用到的ＲPMI1640干粉培养基、胰蛋白酶是由美国GIBCO公司提供; 试验中需要的胎牛血清由杭州四季青生物工程有限公司；四氧嘧啶由本经索莱宝科技有限公司;试剂溴化二甲噻唑二苯四氮唑( MTT)购自AMＲESCO 公司; NO、SOD、MDA 试剂盒购自南京建成生物研究所; 其他仪器由本实验提供。
1.2 方法把小鼠NIT-L1胰岛β细胞接种到ＲP-MI1640干粉培养基上，在环境温度为37℃、空气条件为5%的CO2、饱和湿度的条件下进行培养，使用倒置显微镜随时观察细胞的生长状况，每隔2~3d进行一次换液。
当细胞贴壁80%~90%后，进行分瓶培养，同时取对数期的细胞，分别采用四氧嘧啶和LBP培养液进行培养，设置试验组，空白组为两者都没有使用，对照组是只使用四氧嘧啶培养液进行培养，试验组中低剂量为200μg·mL-1;中剂量为400μg·mL-1;高剂量为800μg·mL-1)，培养时间为24h，留取同期的培养液。
1.3 观察指标采用MTT法间接测定NIT-L1胰岛β-细胞的存活率，其中检测波长为590nm，细胞存活率(%)=(OD值实验组/OD 值对照组)×100%;检测NO、SOD、MDA的含量是严格按照试剂盒上的说明进行。
枸杞多糖的结构与保健功能评价
枸杞多糖的结构与保健功能评价枸杞，被誉为“补肾佳品”，长久以来在中医药中扮演着重要的角色。
而枸杞多糖，作为枸杞的重要成分，近年来已引起广大科研工作者的浓厚兴趣。
本文将深入探讨枸杞多糖的结构、保健功能及其在未来中的应用。
枸杞多糖是一种结构复杂、不同于简单糖类的植物多糖。
它由多个枸杞糖单元组成，呈现出一种杂多糖的结构。
其中主要含有鼠李糖、半乳糖、木糖、葡萄糖、阿拉伯糖等，这些糖单元通过特定的排列方式和链接方式形成复杂的结构。
随着枸杞原料的成熟度提高，枸杞多糖的含量也有所增加，通常在枸杞的籽、花、叶、果等部位中均含有丰富的多糖。
提高免疫力：枸杞多糖能够显著提高人体的免疫力，增强体质。
它能够刺激免疫系统的活性，增强吞噬细胞的吞噬能力，从而提升人体的抗病能力。
抗氧化：枸杞多糖具有显著的抗氧化作用，能够延缓细胞的衰老，对抗自由基的损伤，从而减缓机体的老化过程。
预防慢性病：枸杞多糖对预防癌症、心脑血管疾病、肝病等疾病具有重要作用。
它能够调节人体的血脂、血糖水平，降低慢性病发生的风险。
改善睡眠：枸杞多糖对睡眠有显著的改善作用，它能够调节人体的神经内分泌系统，缓解疲劳，提高睡眠质量。
缓解视疲劳：枸杞多糖对缓解视疲劳也有很好的效果，它能够改善眼底血管的微循环，增加视网膜的供血供氧，对保护视力和预防眼部疾病有积极的作用。
随着人们对枸杞多糖的认识越来越深入，对它的应用也越来越广泛。
在未来，我们可以预期以下几个枸杞多糖的主要应用方向：健康食品和补充剂：由于枸杞多糖具有多种保健功能，因此被广泛应用于健康食品和补充剂中。
例如，枸杞茶、枸杞胶囊、枸杞粉等产品，都已成为许多人日常生活中的必备品。
医学和药物：由于枸杞多糖具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等活性，因此在医学和药物领域也有广泛的应用。
例如，它被用于制备药物，辅助治疗各种慢性疾病，如糖尿病、高血压、肝病等。
化妆品：近年来，越来越多的研究表明枸杞多糖具有护肤和美容的效果，因此也被广泛应用于化妆品中。
枸杞多糖的特性
附录二图表目录
150-152
附录三攻读学位期间发表论文
枸杞多糖的特性、结构及生物活性评价——生物学前沿技术的应用
目录
3-6
摘要
6-8
Abstract
8
1枸杞多糖的化学研究
13-14
1.2枸杞多糖的生物活性作用
14-19
1.2.1免疫调节作用
14-16
1.2.1.1对T、B淋巴细胞的影响
15
1.2.1.2对巨噬细胞的影响
45
2.3.2 LBP-4a的琼脂糖凝胶电泳鉴定结果
45-46
2.4 LBP-4a组成成分分析结果
46
2.5 LBP-4a的红外光谱
46-47
2.6刚果红实验分析
47-48
2.7β-消去反应
48-49
2.8高碘酸氧化
49-50
2.9 LBP-4a的扫描电镜观察
50-51
2.10 LBP-4a的激光共聚焦显微镜观察
51
3讨论
51-53
第三章LBP-4对人肝癌细胞QGY-7703细胞凋亡的影响
53-76
0引言
53-54
1材料与方法
54-59
2结果与分析
59-72
2.1枸杞多糖对人肝癌细胞增殖的影响
59-61
2.2枸杞多糖对人肝癌细胞QGY-7703凋亡指数和细胞形态的影响
61-69
2.2.1枸杞多糖对细胞凋亡指数的影响
19
1.2.10其它作用
19
2研究目的
19-21
第一章枸杞多糖的制备方法研究
21-36
0引言
21
1材料与方法
21-26
营养成分表里枸杞多糖
营养成分表里枸杞多糖枸杞多糖是指从枸杞子中提取出的一种具有多糖结构的物质。
枸杞是一种常见的中草药材，被广泛应用于中医药领域。
枸杞多糖具有多种保健功能，对人体健康有着积极的影响。
本文将从营养成分、功效和适宜人群三个方面来介绍枸杞多糖。
一、营养成分枸杞多糖是一种多糖类物质，主要成分是葡萄糖、果糖和鼠李糖。
此外，还含有一些维生素、矿物质和氨基酸等营养物质。
其中，维生素C、维生素E、维生素B1、维生素B2和β-胡萝卜素等维生素的含量较高，钙、铁、锌、镁等矿物质的含量也较为丰富。
二、功效1. 抗氧化作用：枸杞多糖具有较强的抗氧化活性，可以清除体内的自由基，减少氧化损伤，延缓衰老过程。
2. 免疫调节：枸杞多糖可以增强机体的免疫力，促进淋巴细胞的增殖和活化，提高机体对疾病的抵抗力。
3. 抗肿瘤作用：研究发现，枸杞多糖具有抑制肿瘤细胞生长的作用，可以起到一定的抗肿瘤作用。
4. 保护肝脏：枸杞多糖可以减轻肝脏损伤，促进肝细胞的修复和再生，对肝炎、肝硬化等疾病具有一定的保护作用。
5. 降血糖作用：枸杞多糖可以降低血糖水平，增加胰岛素敏感性，对糖尿病患者有一定的辅助治疗作用。
三、适宜人群1. 免疫力较差的人群：枸杞多糖可以增强机体的免疫力，对于免疫力较差的人群，如老年人、体弱者等，具有较好的保健作用。
2. 肿瘤患者：由于枸杞多糖具有一定的抗肿瘤作用，因此对于肿瘤患者来说，适量摄入枸杞多糖可以辅助治疗。
3. 糖尿病患者：枸杞多糖可以降低血糖水平，对糖尿病患者有一定的辅助治疗作用。
4. 肝脏疾病患者：枸杞多糖对于保护肝脏有一定的作用，对于肝炎、肝硬化等肝脏疾病患者来说，有一定的保健作用。
总结：枸杞多糖是一种营养丰富的保健品，具有抗氧化、免疫调节、抗肿瘤、保护肝脏和降血糖等多种功效。
适宜人群包括免疫力较差的人群、肿瘤患者、糖尿病患者和肝脏疾病患者等。
在摄入枸杞多糖时，应注意适量食用，不宜过量。
此外，还需注意个人体质和药物过敏史，避免过敏反应的发生。
枸杞多糖的药理作用概况分析
枸杞多糖的药理作用概况分析枸杞多糖的生物活性主要有降血糖，止血，降血脂，抗菌，调节免疫，抗氧化，利尿等作用，其中对于降血脂的作用机制有了详细具体的研究。
通过对枸杞多糖的结构特征和降血脂作用的探索可知，枸杞多糖主要由以下多糖构成，D-木糖、D-半乳糖醛酸、D-甘露糖、L-鼠李糖、D-葡萄糖、D-半乳糖、L-阿拉伯糖等，枸杞多糖主要通过(1→6)和(1→3)键结合，各种单糖均匀分布在主链和侧链中。
而且，枸杞多糖既没有三螺旋结构，也没有分子聚集。
重要的是，枸杞多糖能有效地结合体外胆汁酸，可以显著降低胆固醇水平。
多糖类化合物在枸杞干重中占重要比例，枸杞多糖的组成种类有葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露糖、木糖、鼠李糖、果糖和来苏糖，所有组分表现出不同的物理性质，如分子量、特性粘度、粒径和微观结构，此外，每种糖具有的抗氧化活性和α-葡萄糖苷酶抑制活性也不同。
其中多糖中含量较高的为葡萄糖和半乳糖。
糖尿病的蔓延给社会和公共卫生部门带来了沉重负担。
查阅资料发现大约有800种植物可用作降糖药的有效成分。
例如，仙人掌的树皮提取物、鹅掌、枸杞优于抗链脲佐菌素诱导的糖尿病糖尿病对大鼠有影响。
玉米须是一种著名的传统草药，它可以用于制造保健食品和药品。
多糖是非常重要的生化成分，在生物体的生长发育中起着重要作用。
由于具有多种生物学功能，例如抑制肿瘤生长和抗糖尿病能力。
因此，研究玉米须的多糖活性具有重要意义。
众所周知，许多目前正在使用的降糖药物，大部分是通过抑制α-葡萄糖苷酶发挥其抗糖尿病作用，如阿卡波糖、脱氧诺吉霉素和福格列波糖。
然而，由于这些目前使用的抗糖尿病药物的潜在副作用，如胃肠道不适，寻找低或无毒副作用的替代品是可取的。
所以，从植物中提取天然多糖成为越来越多人的研究方向。
现有的可用于癌症治疗的化学治疗剂都有很多的副作用，例如脱发，贫血，免疫缺陷，疲劳，周围神经病，生育力问题和神经系统问题等，严重的甚至威胁生命而且病人也会异常痛苦。
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枸杞多糖的生化分析和降血糖活性摘要：本实验研究了枸杞多糖的纯化，表性特征和降血糖活性。
通过超滤膜分离获得水溶性多糖（LBP），并通过DEAE纤维素柱和Sephadex的色谱法进一步纯化G-150得到LBP3a和LBP3b。
分析表明LBP3b的平均分子量（Mw）为4.92kDa。
单糖组成分析显示，LBP3b由摩尔比为5.52：5.11：28.06：1.00：1.70的甘露糖，鼠李糖，葡萄糖，半乳糖和木糖组成。
并通过UV，FTIR，NMR和SEM研究了LBP3b的初步结构特征。
体外细胞实验显示，LBP3b以剂量依赖的方式显著抑制葡萄糖的吸收。
研究表明LBP3b具有作为抗糖尿病药物的潜在用途。
1.引言糖尿病（DM）是指具有异常高水平的血糖的慢性代谢病，已经成为世界上主要的健康问题。
它是由胰岛素分泌缺乏或器官对胰岛素的反应减弱引起的。
包括1型和2型在内的DM在全球发病率急剧增加，到2030年估计超过4亿。
许多口服降糖药，如双胍类和磺酰脲类可用于治疗糖尿病，但这些药物是化学合成的，缺乏多剂量方案，且高成本，具有不良副作用和毒性。
因此，研究和发现新型更安全和更有效的替代品是至关重要的，其中传统的食用和药用资源已成为研究低血糖活性的焦点]。
枸杞，属于茄科，是中国著名的草药，已使用了2300多年。
目前，枸杞受欢迎的功能食品已被广泛使用，其具有很大功效，如减少血糖和血清脂质，滋养眼睛，肾脏和肝脏，抗辐射，提高免疫力，抗衰老，抗癌，抗疲劳，增强血细胞生成，改善男性不育。
据报道，枸杞果干中有胡萝卜素，氨基酸，微量矿物质，维生素，脂肪酸，多糖和甜菜碱与健康相关的生物活性成分。
在枸杞的这些化学成分中，最好研究的组分是水溶性的多糖（LBP）估计占干果的5-8％。
许多关于药理学和光化学的研究已经证明LBP是以上的生物活性的主要成分之一[15-17]。
然而，由于LBP的结构复杂性，不同的提取和纯化方法得到的LBP具有不同组分，结构和功能。
而每种LBP的结构和功能从未进行过全面和深入的讨论。
本研究通过超滤膜分离方法从枸杞果实中提取粗LBP，通过DEAE离子交换纤维素和Sephadex凝胶过滤的方法纯化粗LBP，使用前柱衍生高效液相色谱法鉴定单糖组成，然后确定LBP亚基的结构。
此外，进行体外细胞实验以评价LBP3b 的降低血糖的效应。
部分（LBP3b）通过UV，FT-IR，NMR和SEM测定表型特征。
2.材料和方法2.1. 材料和化学物质枸杞果实在宁夏回族自治区市场购买。
将植物材料干燥并在使用前储存在干燥的地方。
DEAE-纤维素，Sephadex G-150，葡萄糖，半乳糖，阿拉伯糖，鼠李糖，甘露糖，木糖和三氟乙酸（TFA）购自Sigma。
所有其他化学品和溶剂均为分析等级。
2.2. 粗多糖的制备多糖通过Yin和Dang的方法制备。
将枸杞果实的干果用搅拌器粉末化，并将研磨的样品浸入给定体积的60℃的热水中。
在一定条件下，混合的提取物通过有机膜进行超滤，其分离分子量从300至50kDa（从Suntar Membrane Technology Co.，Ltd.，Xiamen，China获得）。
超滤后用氯仿：甲醇（2:1）（v / v）的过滤液回流三次，以除去脂质。
过滤后，将残余物风干，然后再次用80％乙醇回流。
混合的滤液依次用95％乙醇，100％乙醇和丙酮沉淀。
过滤和离心后，收集沉淀物并真空干燥，得到粗LBP（CLBP）的粗多糖（糖缀合物）。
2.3. CLBP的分离和纯化CLBP用Sevag试剂脱蛋白3次，然后将所得多糖溶液冻干以得到粗产物。
将粗产物溶解并经受DEAE纤维素柱（OH - ，2.6cm×90cm），并用蒸馏水和0.05-0.5mol / l NaCl以30ml / h的流速洗脱。
通过自动级分收集器收集洗脱液并测定280nm处UV吸收和490nm的苯酚硫酸量。
并且获得称为LBP1，LBP2，LBP3和LBP4的四个均匀子级分。
其中含量最高的亚级分LBP3，使用Sephadex G-150柱（2.5cm×60cm）进一步纯化。
经离心，浓缩和冷冻干燥后，LBP3b用于后续实验。
通过苯酚 - 硫酸法[22]，使用d-葡萄糖作为标准样品，测得LBP3b 的总糖含量为96.53％。
2.4 . 单糖组成和分子量测定的分析LBP3b样品用三氟乙酸（TFA）水解，并由1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）衍生。
LBP3b的单糖组成在ZORBAX Eclipse XDBC 18柱（250mm×4.6mm，Agilent，USA）上通过反相液相色谱（Agilent 1260，VWD检测器，美国）进行，流动相0.1mol / l PBS （pH6.7）：乙腈为83:17，流速1ml / min，温度30℃，进样体积为10μl。
检测在250℃ nm d-甘露糖，l-鼠李糖，d-葡萄糖，d-半乳糖，d-木糖，d-阿拉伯糖用作参考。
通过高效凝胶渗透色谱法（HPGPC）测定LBP3b的平均分子量，将样品溶液置于装有Shodex OHpak SB-802HQ和Shodex OHpak SB-805HQ柱（8.0mm×300mm，ShowaDenko，Japan）的Agilent高效液相色谱（HPLC），用含有0.2mol / l NaCl 的0.1mol / l磷酸盐缓冲液（pH 5.5）洗脱，其流速为0.8ml / min，并通过Agilent 1260折射率检测器检测。
并用用已知分子量的葡聚糖P-82系列作为标准品（805000,339000,210000,48800,2700，10000，6000，180Da），制作标准曲线。
参照上述制作的标准曲线，估算LBP3b的分子量。
2.5. 紫外和FT-IR分析将均匀的LBP3b溶解稀释至适当的浓度，并用UV分光光度计（CARY50UV-vis，Agilent，USA）对其测定。
测定范围从200至500nm 。
同时用配备有OMNIC软件的傅里叶变换红外分光光度计（NEXUS 870，USA）测定LBP3b的FT-IR。
将LBP3b样品分别用KBr粉末研磨，然后压制为用于在4000-400cm -1的频率范围内进行变换红外光谱测量的粒料。
2.6. NMR分析通过冻干将多糖与DMSO中的氘交换三次。
并在NMR波谱仪（Brucker AVANCE III）上于600MHz记录1 H和13 C NMR光谱。
2.7. 扫描电子显微镜将多糖用金箔涂覆，并在高真空条件下，于5kV的加速电压下，用扫描电子显微镜系统（Hitachi S-3400N，Japan）检测，并将图像放大500至10000倍。
2.8. LBP3b对Caco-2细胞培养模型中葡萄糖吸收的影响细胞培养：从中国科学院（上海，中国）生物化学与细胞生物学研究所的细胞库得到了Caco-2细胞，细胞在含有10％胎牛血清DMEM培养基的25cm 塑料瓶中生长。
将它们置于37℃，5％CO 2和85-90％相对湿度的的环境中培养，每隔一天更换培养基。
指数生长的细胞用于实验。
并根据每个孔一定量的菌体浓度接种，将细胞接种在培养板上的Transwell聚碳酸酯膜中（Corninig，3413）。
在第一周期间每隔一天更换培养基，之后，每天一次，培养时间为19-21天。
通过用Millicell-ERS（Millipore Corp.）测量的跨膜电阻值评价单层完整性。
单细胞层的TEER≥300cm 。
说明细胞的生长是封闭膜，因此可以用作肠吸收的体外模型。
葡萄糖摄取测定：除去上述Caco-2单层细胞模型的培养基。
用2ml HBSS （pH7.2）洗涤细胞两次，第二次洗涤时于CO 2培养箱中静置20分钟。
根据实验组，将适量的葡萄糖和LBP3b溶于HBSS，过滤灭菌，在使用前加热至37℃。
MTT 测定法用来测试LBP3b对Caco-2细胞的毒性。
混合葡萄糖和（或者）混有HBSS 的LBP3b，连接0.1ml至AP侧，向BL侧加入0.7ml HBSS作为进料流体，并将它们放置在孵化器中。
在此期间，吸出AP侧的液体来检测过量的葡萄糖。
根据课程的数量，在小房间中将等量的液体再次放入AP侧。
葡萄糖的浓度通过葡萄糖氧化酶法估算，通过其在培养基中的减少量来计算葡萄糖的吸收量并且用mmol / l来表达。
管号管号图1.LBE在DEAE-纤维素柱上的洗脱曲线（A）; LBP3在Sephadex G-150柱上的洗脱曲线（B）。
2.9. 统计分析所有组的数据都用SPSS 18.0软件来统计评估，通过方差（ANOVA）的单向分析来进行统计分析，区别测试和对照研究的方法的意义由学生的t检验确立，P值小于0.05被认为是显着的，所有结果表示为每组的平均值为±SD（n = 5）。
3.结果与讨论3.1. 提取CLBP称为CLBP的粗多糖从L.barbarum果实通过超滤膜分离的方法萃取出来。
根据个人的因素实验的结果，正交实验表明影响膜通量的主要因素是物质的温度和操作压力。
考虑到膜的使用寿命和生产成本，综合这些因素，结果表明最优的工艺温度是30℃，使用中性物质的工作压力为0.25 MPa。
3.2. CLBP的纯化按照上面所述从大麦杆菌L.中分离CLBP。
在流速0.5ml / min条件下，将CLBP在带有蒸馏水和0.05-0.5mol / l NaCl的DEAE纤维素柱（OH-，2.6cm×90cm）上纯化，通过自动馏分收集器收集洗脱液并通过在280nm条件下的UV吸收进行监测以及在490nm下测定苯酚硫酸。
将洗脱物分成四部分，分别命名为LBP1，LBP2，LBP3和LBP4（图1A）。
使用Sephadex G-150进一步纯化亚级分LBP3柱（2.5cm×60cm），得到另外两种纯化的组分，命名为LBP3a和LBP3b（图1B）。
从洗脱曲线来看，多糖（490nm）和蛋白质（280nm）的洗脱峰通常发生在相同位置。
这表明多糖可以与蛋白质组合存在。
3.3. LBP3b的分子量和单糖分析LBP3b的HPGPC如图2所示。
根据基于P-82系列葡聚糖标准[log（MW）= 0.00228t3-0.24764t2 + 8.58241t-90.4349（R2 =0.9961，t = 36.716min）]的标准曲线测定，其分子量为4.92kDa。
通过柱前衍生化高效液相色谱分析LBP3b中的单糖组成。
LBP3b的单糖组成在标准糖的HPLC保留时间的基础上来分析（图3A）。
很明显，有六种标准单糖组合物被鉴定了，从低到高，D-甘露糖的保留时间为11.618 min，鼠李糖为15.435分钟，d-葡萄糖为22.474分钟，d-半乳糖为25.225分钟，d-木糖为26.898分钟，并且d-阿拉伯糖为27.493分钟。