酶联免疫吸附试验的原理及分类

酶联免疫吸附试验的原理及分类

酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA）是一种广泛应用于生命科学领域的实验技术，用于检测和定量分析一系列分子，如蛋白质、抗体、荷尔蒙和细胞因子等。ELISA具有高灵敏度、高特异性和高通量的优势，被广泛应用于医学诊断、生物医药研发和农业科学等领域。

ELISA的核心是利用抗原与抗体结合的特异性反应，通过酶标记的系统，检测目标物质的存在量。具体步骤如下：

1.固相抗体：将特异性抗体（捕获抗体）固定在固相支持物上，例如多孔板或微球。这些抗体可以通过亲和层析、制备融合蛋白或是克隆单克隆抗体的方式获得。

2.样本孵育：将待测样本或控制样品加入到固相抗体包被的孔中，使得目标分子与固相抗体结合。

3.洗涤：通过洗涤，将未结合的物质从孔中清除，以减少背景信号的干扰。

4.二抗结合：加入标记有酶的二抗，即辅助抗体。这些二抗能够与固相抗体或捕获抗体上的抗原结合。

5.再次洗涤：洗去未结合的二抗。

6.底物添加：加入适当的底物，例如染色底物或荧光底物。底物将与酶反应，产生可视化的信号。

7.反应终止：通过添加特定的终止剂，停止酶的反应。

8.信号测量：测量底物反应产生的光学信号，例如吸光度或荧光强度。这些信号与目标分子在样本中的浓度成正相关。

根据标记的物质，酶联免疫吸附试验可以分为多种不同类型。常见的

分类有如下几种：

1.直接ELISA：在固相抗体上直接标记酶或检测物质，例如酶标化的

抗原或抗体。

2.间接ELISA：在固相抗体上结合与待测物质特异结合的二抗。这种

方法可以提高灵敏度。

3.竞争ELISA：待测物质与已知浓度的标准品竞争与固相抗体上结合

的二抗。

4.桥联ELISA：通过两种或两种以上的抗体与待测物质形成一个桥联

复合物，然后用标记物检测抗原或抗体。

5.双抗体ELISA：通过两种不同特异性的抗体与待测物质结合。一种

抗体被固定在固相上，另一种抗体被标记。

6.封闭ELISA：用于检测抗原结合位点或特定区域的特异性抗体。

7.拉普拉斯ELISA：将多个抗体标记在酶上，通过颜色和反应程度来

评估抗原浓度。

这些分类方式仅仅是ELISA方法的一部分，ELISA在实验操作方面有

非常丰富的发展，可以根据实际需要进行改进和创新。