果皮上酵母菌的分离与提纯

果皮中酵母菌的分离与纯化

一、实验目的

应用酵母菌的生理生化和生态学的特点，从自然环境中分离酵母菌，并掌握微生物分离纯化的基本方法。

二、实验原理

酵母菌常见于含糖比较高的环境中，如果园土、菜园土及果皮等的表面。多数酵母菌喜欢偏酸条件，最适 pH 为

4.5-

6.0.酵母菌生长迅速，容易分离培养。在液体培养基中，酵母菌比霉菌生长快，利用酸性条件则可以抑制细菌的生长。因此常用酸性液体培养基获得酵母菌的加富培养，然后在固体培养基上划线分离纯化。

三、器材和用品

1、苹果皮、葡萄皮等。

2、马铃薯葡萄糖 xx 培养基：

马铃薯200g （煮开10min后过滤取汁），葡萄糖20g，琼脂20g,水 1000ml， pH 自然。

3、乳酸马铃薯葡萄糖培养液：

配方同上，不加琼脂加乳酸，按 1000ml培养基加入5ml乳酸，pH为

5.5 左右。

4、无菌吸管、无菌培养皿、涂布棒、美兰染液、显微镜、接种环等。

四、实验方法

1 、接种：

取果皮（不需冲洗） 5 克，加入到 100ml 无菌水中，充分搅拌后，用无菌吸管取

1ml接入到9ml乳酸马铃薯葡萄糖培养液中，在 28-30C培养箱中培养24h- 48h,可见培养液变浑浊。

2、xx培养：

用无菌吸管取上述培养液1ml,注入另1管乳酸马铃薯葡萄糖培养液中，在

28-30C培养箱中培养24h-48h。

3、分离纯化 :

用 1ml 的无菌吸管单独吸取上述培养液至 9ml 的无菌水中便是 10-1 如此稀释

10-

2、 10-3。马铃薯葡萄糖琼脂培养基溶化后制成平板，用1ml的无菌吸管吸取10-3 培养液至培养基表面,用无菌的玻璃刮产迅速涂抹均匀,而后做好标记放置恒温箱培养大约 24-48小时（培养皿倒置）,菌落长出后,观察菌落,并镜检菌体,一般一个单独的菌落可视为一个细胞发育而来,是纯培养,如果结果复杂,未得纯培养,可进行再次分离培养（划线法）,直到纯化为止（注意保藏菌种），对纯化菌种再次固体培养 24h-48h,观察菌落特征（特征：

菌落质地是否为奶酪状、粘液状。菌落颜色常为乳白色、奶油色、红色等。菌落表面是否反光或暗淡,是否平滑或粗糙,有无纹状皱折或疣状突起, 菌落边缘是否光滑。）以及是否有酒香味。并拍照。

3、分离纯化：

用马铃薯葡萄糖琼脂培养基溶化后制成平板,用无菌吸管取

0.1ml加富培养液到平板中，用涂棒涂匀后培养 24h-48h。然后用接种环挑取单个酵母菌菌落,在平板上四区划线,培养后分离得到单个菌落。

4、镜检：

挑取单菌落,制片观察其形态（美兰染色水浸片）。观察记录（拍照）细胞的

形态、大小和出芽方式。

5、菌种保藏：

接种酵母菌到马铃薯葡萄糖琼脂斜面培养基上，长出菌苔后冰箱保藏。