酵母菌的培养与分离
酵母菌的分离及培养条件的优化
2. 酵母浸液0.5g (NH4)2SO4 2g 葡萄糖1g (2) 1.酵母浸液0.5g NH4NO3 1g 葡萄糖1g
2. 酵母浸液0.5g NH4NO3 2g 葡萄糖1g
(3) 1.酵母浸液0.5g NaNO3 1g 葡萄糖1g • 2. 酵母浸液0.5g NaNO3 2g 葡萄糖1g • 3.对比试验:酵母浸液0.5g 蛋白胨1g 葡萄糖1g • 4.配置完毕调PH值 PH等于5为准确 • 包三个移液管然后将以上培养基一起拿去灭菌
• 5.3减少进气量，控制罐压在0.02MPa左右后，点 燃接种火圈内的酒精棉球。
• 5.4 拧下进料口螺盖，放入盛有酒精的培养皿中。
• 5.5将接种瓶是瓶口在火焰上烧一下，并在火焰的 保护下拔下瓶塞，迅速将菌种倒入发酵罐内。
• 5.6旋上进料口螺盖后灭火焰，拧紧螺盖，并用酒 精棉球将进料口擦洗干净。
二、配制
1、配多少培养基 10L罐装料量60%：10X60%=6L 接种量10%：培养基5400ml(实际操作培养基
5000ml)，种子液600ml 2、配方用多少
6L:60g酵母浸粉1%,120gc120g葡萄糖2%； 150ml:1.5g酵母浸粉1%,3g酵母浸粉1%,3g葡 萄糖2%.其中100ml加1g琼脂配成固体培养基用于 倒平板；50g原液用于测OD时做标准液。 3、所需器材包扎灭菌 4个装有9ml蒸馏水的试管，6个空试管，4个涂 布器，4个移液管1ml，6个平板
四 实验内容
1、分离单菌落
（1）实验物品灭菌
仪器：包扎9个移液管、9个涂布器、9个装有9ml 蒸馏水的试管、16个平板、
液体：3g酵母浸粉1%、6g蛋白胨2%、6g葡萄糖 2%，配成300ml溶液，取240ml溶液平均分装两个三 角瓶中，然后每个三角瓶放入2.4g琼脂，剩下60ml 为液体培养基，然后将以上设备拿去灭菌
酵母菌的纯培养实验原理
酵母菌的纯培养实验原理酵母菌是一种单细胞真核生物，广泛存在于自然界中，常见于土壤、果皮和发酵食品等环境中。
酵母菌的纯培养实验是一种常用的实验手段，通过这种实验可以得到纯净的酵母菌培养物，为后续的研究提供了可靠的基础。
酵母菌的纯培养实验主要包括以下几个步骤：酵母菌的分离、酵母菌的培养和酵母菌的纯化。
酵母菌的分离是实验的第一步。
我们可以从自然界中采集到含有酵母菌的样品，比如果皮、土壤等。
将样品放入培养基中，利用其富含的养分和适宜的温度等条件，促使酵母菌开始生长。
然后，通过显微镜观察，可以看到培养基中存在着许多酵母菌细胞。
选取单个酵母菌细胞，将其转移到另一个培养基中，再次进行培养。
经过多次的分离，我们可以得到纯净的酵母菌培养物。
酵母菌的培养是纯培养实验的关键步骤。
酵母菌的培养基一般由碳源、氮源、矿物质和维生素等组成，提供了酵母菌生长所需的养分。
培养基的配制需要根据酵母菌的需求来确定，以确保酵母菌能够正常生长和繁殖。
在培养过程中，温度和氧气供应也是需要注意的因素。
一般情况下，酵母菌的最适生长温度为28-30摄氏度，过高或过低的温度都会对其生长产生不利影响。
此外，酵母菌对氧气的需求较高，需要提供充足的氧气供应。
酵母菌的纯化是实验的最后一步。
在酵母菌培养物中，可能会存在其他微生物的杂菌。
为了获得纯净的酵母菌培养物，我们可以采用多种方法，如温度选择法、抗生素选择法和营养选择法等。
这些方法可以通过调节培养基中的温度、添加抗生素或改变培养基中的营养成分，来选择性地培养酵母菌，排除其他微生物的干扰。
通过以上的步骤，我们可以得到纯净的酵母菌培养物。
这些纯净的酵母菌培养物可以用于研究酵母菌的生理特性、代谢途径、基因表达和蛋白质功能等方面的问题。
同时，纯培养的酵母菌也为酵母菌在工业生产中的应用提供了基础。
总结起来，酵母菌的纯培养实验是一种重要的实验手段，通过分离、培养和纯化等步骤，可以得到纯净的酵母菌培养物。
这些纯净的酵母菌培养物可以为酵母菌的研究提供可靠的基础，也为酵母菌在工业生产中的应用提供了有力支持。
酵母分离培养
YPD培养基YPD 或YPED，：Yeast Extract Peptone Dextrose Medium(1L)，又叫酵母浸出粉胨配方：1% Yeast Extract（酵母膏），2% Peptone（蛋白胨），2% Dextrose (glucose)（葡萄糖），若制固体培养基，加入2%琼脂粉配制方法：1 .溶解10gYeast Extract（酵母膏）, 20gPeptone（蛋白胨）,20g琼脂粉于900ml水中2 .高压 115度 20min3.加入100ml 10×Dextrose (glucose)（葡萄糖），(葡糖糖溶液灭菌后加入) ,注：葡萄糖，yeast extract ,peptone溶液混合后在高温下可能会发生化学反应，导致培养基成分变化，所以要分别灭菌后再混合。
酵母的分离与纯化1、接种：取酵母0.5克，加入到5ml的YPD培养液中，在30℃摇床中过夜培养，可见培养液变浑浊。
2、计数：将酵母菌液稀释到合适的倍数（约102-103倍）以每小格的菌数可数为度，涂于血球计数板上，在高倍显微镜下计数酵母菌数。
3、涂皿：将培养基溶化后制成平板，用无菌吸管取0.1ml稀释合适倍数的菌液到平板中，用涂棒涂匀后培养24h。
做平行样。
4、分离纯化：用接种环挑取单个酵母菌菌落，在平板上三区划线，培养后分离得到单个菌落。
5、镜检：挑取单菌落，制片观察其形态。
6、菌种保藏：接种酵母菌到马铃薯葡萄糖琼脂斜面培养基上，长出菌苔后冰箱保藏。
血球计数板使用1.取洁净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。
将菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液，然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。
2.静置片刻，使细胞沉降到计数板上，不再随液体漂移。
将血球计数板放置于显微镜的载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。
微生物实验报告
酵母菌的分离,接种和培养摘要:200人类认识和利用酵母菌的历史悠久，早在史前时期，先人们就学会酿酒。
约在6000年前，就发明发面的方法。
直到十九世纪有了显微镜，人们才窥探到醉母菌的真面目。
对酵母菌做纯系培养分类研究的是与巴斯德同时代的丹麦人汉斯，他是为寻求酿造高品质啤酒的途径才去深入研究酵母菌的。
本文将在实验室酵母菌的分离，接种和培养方面做详细论述。
关键词:酵母菌；分离；接种；培养前言:酵母菌属真菌。
体呈圆形、卵形或椭圆形，内有细胞核、液泡和颗粒体物质。
通常以出芽繁殖；有的能进行二等分分裂；有的种类能产生子囊孢子。
广泛分布于自然界，尤其在葡萄及其他各种果品和蔬菜上更多。
是重要的发酵素，能分解碳水化合物产生酒精和二氧化碳等。
酵母菌在治疗消化系统疾病，作为发酵和繁殖的供体等方面有着重要的作用。
所以了解酵母菌的分离，接种和培养的方法也是很有必要的。
1.材料与方法1.1样品及玻璃器皿手提式不锈钢蒸汽消毒器DF205电热鼓风干燥箱SW-CJ-2FD双人单面净化工作台DHP-500型电热恒温培养箱(酵母菌30°左右)1.2方法1.2.1 培养基的配制及灭菌葡萄糖酵母培养基:蛋白胨10g,葡萄糖20g , 酵母膏5g琼脂15~18g ,蒸馏水1000ml1.2.1.1称量药品根据培养基配方依次准确称取各种药品，放入适当大小的烧杯中，琼脂不要加入。
蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。
1.2.1.2溶解用量筒取一定量(约占总量的1/2)蒸馏水倒入烧杯中，在放有石棉网的电炉上小火加热，并用玻棒搅拌，以防液体溢出。
待各种药品完全溶解后，停止加热，补足水分。
如果配方中有淀粉，则先将淀粉用少量冷水调成糊状，并在火上加热搅拌，然后加足水分及其它原料，待完全溶化后，补足水分。
1.2.1.3调节pH根据培养基对pH的要求，用5%NaOH或5%HC1溶液调至所需pH。
测定pH可用pH 试纸或酸度计等。
1.2.1.4溶化琼脂固体或半固体培养基须加入一定量琼脂。
酵母菌的纯培养(课件)人教版 高中生物选择性必修3
平板划线法
问题4：在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？
以免接种环温度太高，杀死菌种。
问题5：在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线 的末端开始划线？
划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线 的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终 能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
2.接种和分离酵母菌 通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀 释分散到培养基的表面。经过数次划线后培养，可以分离得到单菌落。平板
划线的具体操作目见录下面的流程图。
CONTENTS
2.接种和分离酵母菌 通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀 释分散到培养基的表面。经过数次划线后培养，可以分离得到单菌落。平板
问题6：为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？ 在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗？为什么？
平板划线法
1划线前
接种前， 杀死接种 环上的微 生物，避 免污染培 养基
2划线时
杀死残留 菌种，确 保每次划 线菌种来 自上次划 线的末端
3划线后
划线结束 后，杀死 残留菌种， 避免环境 污染和感 染操作者
酵母菌培养液、马铃薯、葡萄糖（或蔗糖）、琼脂、蒸馏水、天平、小刀、 纱布、烧杯、锥形瓶、棉塞、牛皮纸（或报纸）、皮筋、培养皿、接种环、酒 精灯、超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、干热灭菌箱和恒温培养箱等。
1.制备培养基
配制培养基 称
取去皮的马铃薯 目录
200g，切成小块，
加沸至水马10铃00薯mLC软,加O烂热N，煮用TENTS
1
2
3
接种环三个不同时期灼烧的目的
酵母菌纯培养的实验步骤
酵母菌纯培养的实验步骤
酵母菌纯培养的实验步骤如下：
1. 取少量酵母菌样品，使用选择培养基（例如固体葡萄糖、面粉琼脂培养基，添加有特殊药液和增菌剂的选择培养基有利于酵母菌的筛选）进行分离纯化。
2. 筛选出发酵力良好的菌落并进行纯培养。
在酒精发酵实验中发现典型的酵母菌菌落可移种至综合生化管培养箱中进一步鉴定。
3. 使用液体培养基进行酵母菌扩大培养，准备好无菌吸管和无菌锥形瓶，将酵母菌从锥形瓶中转移到试管中。
4. 对酵母菌进行计数，准备血液培养皿和牛肉膏琼脂培养基，接种菌液到培养基中使其生长并繁殖，观察生长情况并进行计数。
通过以上步骤，就可以对酵母菌进行纯培养，请确保所有使用到的工具和试剂都经过灭菌处理。
以上步骤仅供参考，建议您咨询专业人士获取更具体的信息。
酵母菌的分离纯化实验方案
酵母菌的分离纯化•实验目的1.了解培养基的配置与灭菌技术；2.无菌操作技术；3.工业微生物的分离与纯化技术；4.工业微生物的检测及保藏。
•基本原理1、培养基是人工配置的用于培养、分离、鉴定和保存各种微生物的营养基质。
也适合微生物在生命活动中积累各种代谢产物。
由于微生物种类不同，营养类型各异以及实验目的不同，因此培养基的种类也很多。
不同微生物对营养的要求不同，在配置时根据微生物对PH 的要求选择合适的PH。
由于本次实验主要是分离纯化酵母菌，所以配置的培养基是适合酵母菌生长麦芽汁平板培养基，同时添加抗生素抑制霉菌及其它菌的生长。
2、接种和培养过程中必须保证不被其它微生物所污染，关键在于严格进行正确的无菌操作，但是绝对无菌是不可能的，只能人工创造相对无菌的环境。
所以本次实验无菌操作是在超净工作台的酒精灯火焰旁进行。
3、把特定微生物从混杂的微生物群体中分离出来而获得某一种或某一株微生物的过程叫微生物的分离与纯化。
首先根据其生长特性设计只利于此菌生长的条件，再根据各种稀释法使他们在固体培养基上单独长成菌落。
分离纯化的方法通常有：稀释混合倒平板法、稀释涂布平板法和平板划线。
此次实验采用梯度稀释涂布平板法。
4、微生物检测项目最常用的是细胞数的检测，方法比较多，主要有显微镜直接计数法、平板菌落计数法（CFU）、光电比浊计数法等。
本次实验设计酵母菌的数量检测，选用显微镜直接计数法和平板菌落计数法。
实验器材仪器设备恒温水浴锅、电热干燥箱、蒸汽灭菌锅、超净工作台、恒温培养箱、恒温摇床、水浴锅、电炉、铜锅、酒精灯、接种环、电子天平、研钵、光学显微镜、血细胞计数器玻璃器皿烧杯、锥形瓶、大小试管、培养皿、漏斗、三角涂棒、吸管、试管架、玻璃涂棒、盖玻片试剂与材料苹果、大麦芽、琼脂、蒸馏水、碘液、抗生素、染色液其它纱布、滤纸•实验内容及操作步骤(一)、样品的选择酵母菌一般在果园的土壤中或者水果的表面含量较多，因此选择苹果为样品。
土壤中酵母菌的分离与纯化实验报告结果
土壤中酵母菌的分离与纯化实验报告结果实验步骤：
1.实验前准备：准备好所需的培养基、试剂和实验器材。
2.取一定量的土壤样品，加入无菌水中制备土壤悬浮液。
3.对土壤悬浮液进行预处理：将悬浮液通过过滤器过滤，以去除大颗粒杂质。
4.制备培养基：根据酵母菌的生长要求，配制适宜的培养基。
5.接种培养基：将过滤后的土壤悬浮液均匀地接种在培养基表面，避免接种过多的菌落。
6.培养条件：将接种好的培养基培养于适宜的温度和湿度条件下。
7.观察培养结果：在培养一定时间后，观察培养皿上是否出现酵母菌菌落。
8.分离纯化：选择单个菌落，用无菌技术将其移至新的培养基上，重复培养步骤，直到获得纯种的酵母菌培养物。
实验结果：
经过培养和分离纯化的酵母菌培养物显示出单一的菌落形态，颜色为白色或乳白色。
观察下显微镜下，酵母菌呈现为球形或椭圆形的单细胞结构，直径约为5-10微米。
酵母菌菌落在培养基上呈现出光滑、湿润的表面，并具有边缘清晰的特点。
实验结论：
通过土壤中酵母菌的分离与纯化实验，成功地从土壤样品中分离出纯种的酵母菌培养物。
这些酵母菌菌落形态规整、单一，符合酵母菌的特征。
该实验结果为进一步深入研究酵母菌的生理特性和应用提供了基础。
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微生物学大实验实验指导编者：生物技术教研室2007.3目录实验一酵母菌的培养与分离‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥2 实验二酵母菌的鉴定‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥7 实验三酵母菌耐受能力的测定‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥19 实验四酵母菌发酵工艺条件的优化‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥22 实验五耐高温酵母菌株的诱变选育‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥24 实验六酿酒酵母细胞固定化与酒精发酵‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥27耐高温酒精酵母菌的选育及发酵条件的研究实验一酵母菌的培养与分离一、实验目的学习培养和分离酵母菌的技术和方法二、基本原理大多数酵母菌为腐生，其生活最适pH为4.5－6，常见于含糖分较高的环境中，例如果园土、菜地土及果皮等植物表面。
酵母菌生长迅速，易于分离培养，在液体培养基中，酵母菌比霉菌生长得快。
利用酵母菌喜欢酸性环境的特点，常用酸性液体培养基获得酵母菌的培养液（这样做的好处是酸性培养条件则可抑制细菌的生长），然后在固体培养基上用划线法分离之。
三、实验主要内容和要求（一）本次实验的方案由同学们自己制定，实验包括：1．马铃薯葡萄糖培养基, 乳酸马铃薯葡萄糖培养液的配制。
2.菌株的筛选,根据一定的生产目的并从特定的样品筛选出高产酒精的适宜的酵母菌株。
3.酵母菌的分离,要求接种一次, 28-30℃，培养24小时，转接一次，28-30℃，培养24小时，并用镜检的方法独立判定所分离菌株是否为酵母菌。
4.用划线分离法对酵母菌进行纯化，要求每组挑取单个菌落，连续划线分离4代，镜下为单一纯菌株，每组扩繁10支斜面菌种，备用。
四、实验的准备1、甘蔗、成熟葡萄或苹果等果皮、0.1%美蓝染液、1ml的无菌吸管、无菌培养皿等。
2、马铃薯葡萄糖琼脂培养基：原料：马铃薯（200克）、葡萄糖（20克）、琼脂（15-20克）、蒸馏水（1000ml）。
配制方法：（1）先将马铃薯去皮，切片，称200克并加蒸馏水1000ml，煮沸半小时，用纱布过滤，补足蒸馏水量至1000ml ，制成20%的马铃薯汁。
（2）在20%的马铃薯汁中加入琼脂，煮沸溶化，补足水分并在115℃条件下高压灭菌20分种。
（3）加入葡萄糖，制成培养酵母菌的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。
3、乳酸马铃薯葡萄糖培养液：配方同上，但不加琼脂而加乳酸，按每1000ml培养液中含5ml乳酸的量加入，并分装试管。
五、实验设计l、接种：取一小块果皮，不需冲洗，直接接入乳酸马铃薯葡萄糖培养液管中，置28-30℃，培养24小时，可见培养液变混浊。
2、培养，用无菌吸管取上述培养后培养液0.lml，注入另一管乳酸马铃薯葡萄糖培养液中，置28一30℃再培养24小时或稍长(过长则霉菌长出)。
3、观察：用无菌操作法取少许菌液置于载玻片中央的0.l%美蓝染色液中，混匀后加盖玻片制成水浸片，先用低倍镜后换高倍镜观察酵母菌的形态和出芽生殖情况。
活酵母菌可使美蓝还原，从而使菌体不着色，用此方法可判断酵母菌的死活。
4、分离：马铃薯葡萄糖琼脂培养基溶化后制成平板。
用划线法分离酵母菌培养液，从而得到单个菌落。
挑取单个菌落反复再次划线分离纯化，最终可获得纯培养。
六、实验注意事项1.配制培养基时，应注意琼脂的加量，不同规格及批次的琼脂的加量应由实验确定，不能照搬书上的加量。
2.对培养基加热时应注意琼脂的糊底与暴沸。
3.灭菌锅操作时，首先应注意水一定要加足够，排气要彻底，其次灭菌期间不要离开人，灭菌结束后，关闭电源，拔掉插头，最后放气一定要缓慢，均匀，气放彻底才能开锅，取锅内物品，应小心，防止烫伤。
4.接种前应注意无菌工作台的消毒与杀菌，接种时应注意手与接种工具的消毒。
七、实验结果的观察及记录1.24小时，观察试管内培养液的情况并作记录，每组转接2支试管。
2.48小时，观察试管内培养液的情况，镜检培养液内菌的数量，粗略判断是否为酵母菌并作记录，每人蘸取培养液进行划线分离，并作记录。
3.72小时后，观察培养皿内菌的生长的情况，挑取单个菌落进一步划线分离，直到为纯菌落。
4.每组转接10支斜面试管，备用。
八、实验的延伸自然条件下酿造苹果酒，葡萄酒、猕猴桃酒。
七实验报告要求1.实验完毕后，每位同学都应独立作出实验报告，实验报告应类似于小型论文格式。
2.实验报告内容包括：（1）立题意义。
（2）实验设计。
（3）实验步骤详细记录。
（4）对实验结果的分析讨论和总结。
（5）实验延伸。
（6）实验心得体会。
附1：果酒的酿制方法—、目的要求了解果酒酿制原理，学习苹果酒酿制技术。
二、基本原理果酒是一类营养丰富、含酒精度低的上乘饮料。
它是用含一定糖分和水分的果实压汁，经微生物发酵而成。
其生化作用，除酒精发酵的主产物外，还有甘油、醋酸、琥珀酸、杂醇油等的形成；同时，陈酿期中，各种酸类与醇类的酯化反应，赋予果酒特殊的香味；果酒中的单宁、色素、果屑微粒及蛋白质（包括酵母尸体）等的氧化和下沉，使酒液澄清、风味增浓。
各种果酒以原料而称名。
除坚果外，所有栽培果，野生果均可做酿果酒的原料。
本实验以苹果酒为例，学习其酿制方法。
三、实验材料1、菌种在7°Be’麦芽汁琼脂斜面培养基上的葡萄酒酵母（s.cerevisae ellipsoieleus）。
2、器材苹果汁培养基，7°Be’麦芽汁培养基，10ml／管、100ml／三角瓶等装量，白糖，食用酒精，亚硫酸，果胶酶，发酵缸，破碎机，果汁分离器等。
a.苹果汁培养基粗滤新鲜果汁（蔗糖调至13°Be，酸度0.5%以下）1000mlK2HPO4 0.1g MgSO4·7H2O 0.1g配好后，加热煮沸3～5分钟，静置10小时以上，过滤、分装，0.7Kg／cm2灭菌20分钟。
四、实验步骤（一）酒母培养1、菌种活化（一级种）取装有10ml苹果汁或7°Be’麦芽汁培养基1支，按无菌操作法接种葡萄酒酵母菌一环，混匀后置28～30℃下培养2～5天（用苹果汁活化菌种时需培养5天以上），镜检酵母繁殖良好，无杂菌即可。
2、母发酵剂制备（二级种）在装有100ml苹果汁培养基的三角瓶中，接1～2ml 经活化的葡萄酒酵母菌液，于28℃下培养2～3天，当培养液表面有气泡产生，嗅之有酒香味、取样镜检无杂菌时使用。
3、生产发酵剂的制备（三级种）方法与母发酵剂相同，只是采取更大的容器。
一般采用500～1000ml的三角瓶或卡氏罐，盛装占容积1／2～3／5的果汁培养液，灭菌冷却后，按10％接种量接人母发酵剂，在25～28℃下培养24～48小时，待发酵正常，镜检无杂菌方可使用。
4、如果使用活性干酵母，添加量为20g/L发酵醪，复水用水量是干酵母重量的5～10倍。
复水用水的温度应保持在40℃左右（38～43℃），将酵母静置5～10min后搅拌，酵母在水中的时间不能超过30min。
然后使酵母溶液缓慢冷却到与将被接种发酵醪的温差小于10℃，然后直接加入发酵醪。
（二）果酒生产工艺流程如下：果胶酶↓苹果→分选除杂下清洗→破碎→压榨→粗果汁→果楂、苹果酸、丹宁↑活化酵母→母发酵剂→生产发酵剂↓蔗糖→发酵→皮渣分离→后发酵→原酒→→换捅除渣→贮存陈酿→配制→贮存→澄清过滤→装瓶→巴氏灭菌→封口→成品。
(2～3次)操作要点：1、分选取成熟苹果，除去腐烂、干疤和伤果。
2、清洗清水充分洗涤，除去果皮上的污物、杂质及药剂，以保证原料干净卫生。
3、破碎为易于压榨，提高出汁率，需进行破碎。
用破碎机破碎至果块粒度0．5cm3左右，并除去果籽。
4、压榨分离破碎后立即进行压榨分离。
分离出的果汁中不得夹带果肉，同时需添加适量苹果酸调整含量（要求果汁总酸含量为5g／L），并加入0.1～0.15g／L的果胶酶，促进果胶分解，使果汁澄清并提高酒的风味。
由于苹果汁易被自身含有的多酚氧化酶氧化，故需加SO2还原剂抑制酶活性，同时SO2也具有杀菌、防腐和澄清果汁作用。
SO2来源，除工厂应用液态SO2外，实验室常加入亚硫酸钠（Na2SO3）和偏重亚硫酸钾（K2S2O5），其用量为果汁量的0.02％即可。
5、前发酵取澄清果汁放入经干热灭菌的发酵缸中，装量占缸容积的4／5，按3～5％的接种量接入酵母生产发酵剂进行发酵，保持品温在18～22℃之间，最高勿超过25℃，发酵应在7～12天内结束。
一般苹果汁糖分约为11％，经发酵后，酒精含量约达6％以上，前发酵结束后，原酒酒度应大于8％（V），残糖＜20g／L，总酸（苹果酸）＞5g／L。
6、后发酵前发酵结束后，迅速将酒液与皮渣分离，酒汁转入经干热灭菌的发酵缸中，进行后发酵，使残糖继续分解。
期间，控制品温在18～22℃之间，不要超过25℃，时间1个月，即得原酒。
要求残糖含量小于2g／L以下，挥发酸（以醋酸计）小于0.6g ／L，总酸（以苹果酸计）大于5g／L。
7、换桶除渣为使已澄清的原酒与其酒脚（沉淀物）及时分离，以免酒脚产生异味而影响酒质，故需进行换桶（缸）。
换桶次数新酒每年换三次。
8、贮存陈酿应满桶贮存。
陈酿即酒的老熟，经长期密闭贮存，可使酒质澄清、风味醇厚。
贮存室温8～16℃，存期半年以上。
9、配制原酒贮存半年后可开始配制。
配制时，按工艺规定将不同原酒按一定配比相混，然后添加适量的糖、酒精、继续贮存半年以上。
10、澄清过滤可采用冷冻法使其澄清，即于-4℃左右存放7天，然后冷过滤。
澄清后的酒置-5～-7℃下冷冻3天不发生混浊沉淀，或暴露空气中氧化4天不变混浊即为合格。
11、装瓶灭菌装瓶后需进行巴氏灭菌，即在63℃下处理15分钟，冷却后封口保存。
五、实验报告1、简述苹果酒的酿制法。
2、二氧化硫在果酒酿制中的作用是什么？六、思考题1、酵母菌酿酒的原理是什么？2、果酒酿制中为何要加入果胶酶？实验二酵母菌的鉴定酒精生产中所用酵母菌在微生物学中的分类依据是什么?微生物学的类别分门、纲、目、科、属、种，生产酒精用酵母菌属于微生物中的真菌门、子囊菌纲、原子囊菌亚纲、内孢霉目、内孢霉科、啤酒酵母属、卡尔斯伯酵母属等。
酵母菌的分类依据是根据它的形态特征、生理生化反应特征来确定的。
在分类前将菌体细胞进行分离纯化，得到由单细胞长成的菌落，然后再进行形态特征和生理生化鉴定。
(一)形态特征的鉴定把酵母菌接种到麦芽汁固体培养基上，让它长成菌落，观察其菌落的形态、颜色、质地、边缘、表面等特征。
把它再接种到液体麦芽汁培养基中，观察是否能产生醭、试管或培养仪器表面壁上能否形成菌环，培养液中是否产生沉淀、混浊程度等。
另外，还要取样在显微镜下观察其单细胞的形态、大小、能否形成孢子、孢子的大小以及繁殖方式等。
(二)生理生化特征的鉴定酵母菌的生理生化特征主要表现为发酵葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖等糖类的能力。
同时，还需测定利用其它碳水化合物、同化酒精、耐酒精，利用硝酸盐还是硫酸盐，发酵产酸、产醋、耐温、耐酸、抗重金属离子、抗杂菌性等的能力。