【实验】微生物的分离与纯化
微生物的分离纯化实验报告
微生物的分离纯化实验报告微生物的分离纯化实验报告引言：微生物是一类极小的生物体，包括细菌、真菌、病毒等。
它们广泛存在于自然界中的土壤、水体、空气中，对生态系统的平衡和物质循环起着重要作用。
微生物的分离纯化是微生物学研究的基础，通过分离纯化可以获得单一的微生物菌株，为后续的鉴定、培养和利用提供基础数据。
本实验旨在通过分离纯化微生物的方法，获得纯净的微生物菌株。
材料与方法：1. 实验材料：含有微生物的样品（如土壤、水样等）、琼脂平板培养基、无菌培养皿、无菌移液管、无菌匙、无菌培养管等。
2. 实验步骤：a. 取适量样品，加入适量的无菌生理盐水中，充分搅拌均匀。
b. 取一定体积的悬浮液，分别在琼脂平板上均匀涂布，避免重复涂布。
c. 将涂布好的琼脂平板培养基放置于恒温培养箱中，以适当温度孵育。
d. 孵育一段时间后，观察平板上的菌落情况，选择形态独特的单个菌落。
e. 用无菌匙将选中的菌落划取至无菌培养管中，加入适量的无菌生理盐水。
f. 将培养管中的菌液进行摇匀，称取一定体积的菌液，分别在琼脂平板上均匀涂布。
g. 重复以上步骤，直至获得纯净的微生物菌株。
结果与讨论：通过实验，我们成功地从样品中分离纯化了多个微生物菌株。
在观察菌落形态时，我们发现不同微生物菌株的菌落形态各异，有的呈圆形，有的呈不规则形状，有的呈乳白色，有的呈黄色等。
这些观察结果表明不同的微生物菌株具有不同的生长特性和代谢方式。
在分离纯化的过程中，我们注意到有些菌落会在培养基上形成菌落周围的透明区域，这是由于菌落分泌的溶解酶作用于琼脂平板中的胶原蛋白，导致胶原蛋白溶解而形成的。
这种现象被称为溶解圈，是一种常见的微生物特征，有助于鉴定微生物的溶解能力。
在实验过程中，我们还遇到了一些困难和挑战。
首先，样品中可能存在多种微生物，通过分离纯化的过程中需要进行多次的涂布和筛选，才能获得纯净的菌株。
其次，在涂布过程中需要注意避免交叉污染，以免影响结果的准确性。
微生物的分离和纯化
微生物的分离和纯化一、基本原理在土壤、水、空气或人及动、植物体中，不同种类的微生物绝大多数都是混杂生活在一起，当我们希望获得某一种微生物时，就必须从混杂的微生物类群中分离它，以得到只含有这一种微生物的纯培养，这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯化。
为了获得某种微生物的纯培养，一般是根据该微生物对营养、酸碱度、氧等条件要求不同，而供给它适宜的培养条件，或加入某种抑制剂造成只利于此菌生长，而抑制其他菌生长的环境，从而淘汰其他一些不需要的微生物，再用稀释涂布平板法或稀释混合平板法或平板划线分离法等分离、纯化该微生物，直至得到纯菌株。
土壤是微生物生活的大本营，在这里生活的微生物无论是数量和种类都是极其多样的，因此，土壤是我们开发利用微生物资源的重要基地，可以从其中分离、纯化到许多有用的菌株。
二、器材高氏1号琼脂培养基，肉膏蛋白胨琼脂培养基，马丁氏琼脂培养基，盛9ml无菌水的试管，盛90ml 无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶，无菌玻璃涂棒，无菌吸管，接种环，10％酚，无菌培养皿，链霉素，土样等。
三、操作步骤1．稀释涂布平板法（1）倒平板将肉膏蛋白胨培养基、高氏1号琼脂培养基、马丁氏琼脂培养基溶化，待冷至55—60℃时，向高氏1号琼脂培养基中加入10％酚数滴，向马丁氏培养基中加入链霉素溶液，使每毫升培养基中含链霉素30μg。
然后分别倒平板，每种培养基倒三皿，其方法是右手持盛培养基的试管或三角烧瓶，置火焰旁边，左手拿平皿并松动试管塞或瓶塞，用手掌边缘和小指、无名指夹住拔出，如果试管内或三角烧瓶内的培养基一次可用完，则管塞或瓶塞不必夹在手指中。
试管（瓶）口在火焰上灭菌，然后左手将培养皿盖在火焰附近打开一缝，迅速倒入培养基约15ml，加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布，平置于桌面上，待凝后即成平板。
也可将平皿放在火焰附近的桌面上，用左手的食指和中指夹住管塞并打开培养皿，再注入培养基，摇匀后制成平板，如图Ⅶ-1所示。
微生物的分离纯化综合实验
一、实验方案
1. 实验现象与结果
2. 本实验的关键环节及改进措施
⑴、接种环的灭菌操作要到位:接种环使用前, 直接在酒精灯上烧灼灭菌, 把环和金属丝烧红即可。
接种环使用后, 先在火焰周围把环上标本烤干, 再烧灼灭菌, 以免标本汽化, 爆烈四溅, 污染环境。
金属杆快速通过火焰2－3次, 杀灭表面微生物。
⑵、划线技术要很娴熟,具体要求参照上图。
⑶、整个过程要严格防止实验中被污染,每个阶梯稀释换新的移液管,要等平板冷却后再倒置。
思考题
1.食品中微生物为何繁殖迅速、种类繁多？
2.食品被微生物污染后有哪些危害？
3、检样稀释时, 每个稀释度都要更换刻度吸管, 为什么？
1.答:因为食品中含有大量的淀粉、蛋白质、糖类、脂肪等有机物, 且无机盐含量相对较低, 食品中含有一定的水分, 并且食品包装后容易使内部升温, 这些都是很适合微生物(细菌、原虫、病毒)生长繁殖的情况, 因此食品中的微生物能够繁殖迅速且种类繁多。
所以很多食物要严格灭菌或者添加防腐剂、干燥剂、脱氧剂等, 或者真空包装。
2.答:⑴、降低食品的营养；
⑵、引起食品腐败变质；
⑶、引起呕吐、中毒或者某些疾病(如痢疾、腹泻、呼吸道感染等)和潜在性的慢性危
害等。
3.答: 每个稀释度都要更换刻度吸管可以在一定程度上保证不会沾有上一个稀释度得溶液, 且减少污染, 使浓度稀释得更加准确, 增加实验结果的准确性。
指导教师评语及评分:
签名: 年月日。
微生物的分离和纯化实验原理及步骤
实验五微生物的分离和纯化
实验目的：
掌握倒平板的方法和几种常用的分离纯化微生物的基本操作技术。
实验原理：
从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。
常用的方法有简易单细胞挑取法；平板分离法。
本实验采用平板分离法：该方法操作简便，普遍用于微生物的分离与纯化，包括两个方面
1．选择适合于待分离微生物的生长条件等要求或者加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其它微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物；2．微生物在固体培养基生长形成的单个菌落可以是一个细胞繁殖而成的集合体，因此可通
过挑取单菌落而获得一种纯培养。
获得单个菌落的方法可通过稀释涂布平板或平板划线等技术来完成的。
单个菌落并不一定保证是纯培养，纯培养的确定除观察其菌落特征外还要结合显微镜检测个体形态特征后才能确定。
实验器材：
1．菌种米曲霉 (Aspergillus oryzae)。
2．培养基高氏Ⅰ号培养基，牛肉膏蛋白胨培养基，马丁氏琼脂培养基，查氏琼脂培养基。
3．溶液或试剂 10%酚，盛9ml无菌水的试管，盛90ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶，4%水琼脂。
4．仪器或者其他用具无菌玻璃涂棒，无菌吸管，接种环，无菌培养皿，链霉素和土样，显微镜，血细胞计数板等。
【实验】微生物的分离与纯化
4．将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入
37 ℃恒温箱的目的是( D )
A．对比观察培养基有没有被微生物利用 B．为了下次接种时再使用 C．没必要放入未接种的培养基 D．对比分析培养基是否被杂菌污染
预测高考：
5.微生物的分离、培养和计数是现代生物工程 应用中的重要环节。图为大肠杆菌分离和
（3）微生物的恒温倒置培养
放入37℃恒温箱中培养12h和24h。
（4）培养结果
课堂总结
1．下列操作与消毒灭菌无关的是 ( C ) A．接种前用酒精灯火焰灼烧接种环 B．接种前用酒精擦拭双手 C．将平板倒置，放入培养箱中培养 D．接种在酒精灯的火焰旁完成
2．采用干热灭菌、灼烧灭菌、高压蒸汽灭菌、 紫外线照射等几种方法，可分别杀死哪些部位的杂
2．消毒和灭菌 (1)消毒是指使用较为__温__和____的物理或化学方法仅杀死 物体表面或___内__部__的__部__分___微生物(不包括芽孢和孢子)。常用 的方法有__煮__沸____消毒法和___化__学__药__剂___消毒法。 (2)灭菌是指使用__强__烈__的理化因素杀死物体内外__所__有__ 的 微 生 物 ( 包 括 芽 孢 和 孢 子 ) 。 常 见 的 方 法 有 ： __灼__烧__ 灭 菌 、 __干__热__灭菌、__高__压__蒸__汽__灭菌。
课题1 :微生物的实验室培养
弗
罗
兰
马
克
凯
国
撒
王
大
帝
以 色 列 国 王
亚 历 山 大 大 帝
三、实验操作
（一）制备培养基
（二）操作步骤
计 算称 量溶 化灭 菌倒 平 板
微生物的分离与纯化实验报告结果
微生物的分离与纯化实验报告结果
实验报告标题：微生物的分离与纯化实验结果
摘要：
1.引言
微生物是指在肉眼无法直接观察到的生物体，生活在各种环境中，包括土壤、水体、空气和动植物的体内等。
微生物在环境中起着重要的生态功能和生物转化作用，对维持生态平衡和生物圈的稳定具有重要作用。
研究微生物的分离与纯化方法对于了解微生物的生物学特性和应用价值具有重要意义。
2.材料与方法
2.1实验材料
（列举实验所需的材料，如培养基、培养皿等）
2.2实验方法
（详细描述实验的步骤，如样品处理、分离过程、纯化步骤等）
3.实验结果与讨论
3.1样品处理结果
（描述肠道样品处理过程中的观察结果，如样品的外观、颜色、气味等）
3.2微生物分离结果
（描述微生物分离过程中的观察结果，如培养基上的菌落形态、颜色、大小等）
3.3微生物纯化结果
（描述微生物纯化过程中的观察结果，如通过重复接种获得纯化培养
物的观察结果）
3.4微生物形态特征与生理特性分析
（对纯化的微生物培养物进行形态特征与生理特性的观察与分析）
4.结论
通过本实验的分离与纯化方法，我们成功获得一株纯化的微生物培养物。
对该培养物进行形态特征与生理特性的观察与分析表明，该微生物呈
现出特定的形态特征，并具有一定的生理特性。
这证明了本实验所采用的
分离与纯化方法的有效性，为后续的微生物研究奠定了基础。
注：此为辅助写作结果，实际的实验报告应根据实际实验结果进行详
细描述与分析。
微生物的分离与纯化实验报告
微生物的分离与纯化实验报告微生物的分离与纯化实验报告引言：微生物是一类非常微小的生物体，包括细菌、真菌、病毒等。
它们广泛存在于自然界中的土壤、水体、空气中，同时也存在于人体内。
微生物对人类的生活和健康具有重要影响，有些微生物可以引起疾病，而另一些微生物则可以用于食品发酵、环境修复等方面。
为了更好地研究微生物的特性和功能，需要对其进行分离与纯化实验。
材料与方法：1. 样品采集：我们选择了土壤样品作为研究对象，从自然环境中采集了多个不同地点的土壤样品。
2. 稀释与接种：将采集到的土壤样品进行适当稀释，然后在琼脂平板上接种。
3. 培养与分离：将接种好的琼脂平板置于恒温箱中，以适当的温度和湿度进行培养。
经过一段时间后，我们观察到在琼脂平板上形成了不同形状和颜色的菌落。
4. 单菌分离：选择单个菌落，用无菌的铂丝将其转移到新的琼脂平板上，进行二次培养。
重复此过程，直到获得纯净的单菌培养物。
5. 形态观察：观察纯菌培养物的形态特征，包括菌落形状、颜色、透明度等，以及菌体形态特征，如细胞形状、大小等。
6. 生理生化特性检测：对纯菌培养物进行一系列生理生化特性检测，包括氧需求性、温度适应性、酸碱耐受性、产酶能力等。
7. 16S rRNA测序：对纯菌培养物进行16S rRNA基因测序，以确定其系统发育地位和亲缘关系。
结果与讨论：经过分离与纯化实验，我们成功地获得了多个不同的微生物菌株。
通过形态观察，我们发现这些菌株在菌落形状、颜色和透明度等方面存在显著差异。
进一步的菌体形态观察发现，它们的细胞形状和大小也各不相同。
在生理生化特性检测中，我们发现不同菌株对氧的需求性、温度适应性和酸碱耐受性存在差异。
有些菌株需要氧气才能生长，而另一些则可以在无氧条件下生长。
对于温度适应性，有些菌株在低温下能够生长，而另一些则喜欢高温环境。
此外，我们还发现一些菌株对酸性环境更耐受，而另一些则对碱性环境更适应。
通过产酶能力的检测，我们发现一些菌株具有蛋白酶、淀粉酶等多种酶的产生能力，这对于它们在环境修复和食品工业中的应用具有重要意义。
微生物的分离和纯化实验报告
微生物的分离和纯化实验报告实验目的：本实验旨在探究微生物分离和纯化的方法，经过分离和纯化后，得到单一纯种菌液。
同时，也能够使学生了解微生物分离和纯化的基本原理，并掌握常见的微生物分离和纯化方法。
实验原理：微生物的分离和纯化是一项非常重要的工作。
在微生物的研究和生产中，首先需要得到单一纯种菌液，因为纯种菌液才能进行严格的实验控制和可靠的测定。
微生物分离的方法一般包括增殖法、培养法、过滤法、离心法等。
而纯化的方法则一般有染色法、板块法、过筛法等多种方法。
本实验中的分离和纯化工作采用了增殖法和染色法。
增殖法是指利用菌落增殖的现象来分离单一纯种菌，而染色法则是指通过不同的着色方法，将微生物区分为不同的种类，从而进行微生物分离和纯化的方法。
常用的染色方法有革兰染色、抗酸染色等。
在本实验中，我们采用了革兰染色这一经典的染色方法。
实验步骤：1、制备分离培养基配制分离液，以波尔多液、胰蛋白胨、葡萄糖制成培养基，并加入20ug/ml氯霉素。
2、分离样品取所需数量样品，经过适当的处理，比如切碎、摇匀等，制备样板。
3、制备菌液将样品加入分离培养基中，然后在恒温摇床上震荡培养24小时，形成单一菌种的细菌培养液。
4、革兰染色将接种在玻璃片上的菌液进行革兰染色。
a、在玻璃片上制作菌液薄膜。
b、将薄膜上的细菌经过固定，用碘液水洗，以去色。
c、淋加革兰染色溶液，使之染色。
d、过水洗、双氧水漂洗，洗去多余革兰染色剂和已触及的碘素。
e、使用显微镜观察。
5、单一菌种分离通过以上实验过程，我们可已得到单一纯种菌液，而且还可以将它们放入固体培养基中培养，以便于观察和下一步实验。
实验结果：在本次实验中，我们使用了增殖法和染色法对样品菌液进行分离和纯化。
在增殖法中，我们使用的是增殖液，经过24小时的培养，得到了单一的菌种培养液。
而在染色法中，我们使用的是革兰染色法，可以准确地将细菌分为革兰阳性菌和革兰阴性菌。
在实验过程中，我们发现革兰染色能够很好地区分出不同种类的细菌，同时，在细菌分离和纯化过程中，采用增殖法和染色法的方法，能够快速地得到单一纯种菌液，为微生物的研究和鉴定提供了很大的帮助。
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微生物的实验室培养——自酿葡萄酒中酵母菌的分离与纯化
一、实验目的：掌握无菌技术的操作，尝试用平板划线法和稀释涂布平板法分离纯化酵母菌。
二、实验步骤
（1）制备培养基（马铃薯琼脂培养基）：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板（已完成）
（2）分离纯化
实验
步骤
操作流程流程叙述操作目的、作用
接种方法一：点燃酒精灯
↓
1.灼烧接种
环并冷却
↓
2.沾取菌液
↓
3.平板划线
↓
4.转动培养
皿约70°角
↓
5.灼烧并冷
却接种环
↓
6.平板划线
↓
7．倒置培养
用火柴点燃酒精灯，保证实验操作在酒精
灯火焰进行
将接种环放在火焰上灼烧，直至烧红，
让接种环自然冷却
打开装有菌液的试管，塞子要拿在手上，
将试管口通过火焰灭菌，将冷却的接种环
伸入菌液中，沾取菌液。
将试管口通过火
焰灭菌，用塞子塞住试管
左手将皿盖打开一条缝隙；右手把沾有菌
种的接种环迅速伸入平板内，划3到5条
平行线（不要划破培养基），盖上培养皿盖
逆时针旋转培养皿约70°角
将接种环放在火焰上灼烧，直至烧红让接
种环自然冷却
从第一区域划线的末端开始往第二区域划
线，重复以上操作，在三、四、五区域划
线，注意不要将最后一区的划线与
相连。
（也可以用连续划“Z”字形线的方
法
倒置培养皿，放入培养箱中培养
避免周围环境中微生物的
污染
清除；
防止杀死菌种
防止塞子被污染；
清除的杂菌
接种到培养基表面
调整角度，准备第二区域
的划线
在琼脂固体培养基表面连
续划线的操作，将聚集的
菌种逐步稀释分散到培养
基的表面
减少培养基内的水分蒸
发，使培养基保持湿润；
防止水珠回流打散菌落
在右图所示
的培养皿内
用笔模拟接
种环画出两
种平板划线
法的划线轨
迹
接种
方法
二：
1.系列稀
释操作
准备六只试管
↓
分别加入4.5mL蒸馏水并灭菌，编号
↓
取 mL菌液放入第1支试管并混匀
↓
从第1支试管取0.5ml菌液放入第2只试管并
混匀
↓
重复步骤，直至最后一支试管
2.涂布平
板操作
滴加100μL菌液到培养基表面
↓
引燃涂布器，待酒精燃尽后，冷却8～10s
↓
把培养皿打开一条缝
↓
在培养皿盖内侧进一步冷却涂布器，均匀涂布
菌液，转动培养皿，涂匀
↓
盖上皿盖,放置10min
↓
倒置培养皿，放入培养箱中培养
清除涂布器上的杂菌
使菌液均匀分布在培
养基表面
使液体被充分吸收
结果
观察
观察划线平板和涂布平板上的菌落形态、颜
色、大小，可挑取少量菌落制成临时装片，显
微镜下观察。
对菌落进行初步鉴定
1
三.巩固检测
1．获得纯净培养物的关键是( )
A．在无菌环境中培养B．接种纯种细菌
C．接种环灼烧灭菌D．防止外来杂菌的污染
2．巴氏消毒法常用于酒、奶等食品的消毒，该消毒法就是加热到70～75 ℃、保持30 min，或加热到80 ℃、保持15 min，能杀死一般杂菌和病原菌。
这与灭菌的要求相比，巴氏消毒法() A．不能杀灭芽孢和孢子B．只能杀灭芽孢等休眠状态的细菌
C．能杀灭各种细菌，包括芽孢D．能杀灭各种真菌，包括孢子
3．细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，这些方法依次用于杀灭哪些部分的微生物（）
A．接种环、手、培养基 B. 高压锅、手、接种针
C. 培养基、手、接种环
D. 接种环、手、高压锅
4.下列操作与消毒或灭菌无关的是（）
A. 接种前用酒精灯火焰灼烧接种环
B. 接种前用酒精擦试双手
C. 接种在酒精灯水焰旁完成
D. 培养基在冷却到50℃时倒平板
5．制备固体培养基的步骤是( )
A．计算、称量、倒平板、溶化、灭菌
B．计算、称量、溶化、倒平板、灭菌
C．计算、称量、溶化、灭菌、倒平板
D．计算、称量、灭菌、溶化、倒平板
6.平板冷却凝固后要将平板倒置，其意义是（）
A. 防止菌种死亡B．利于培养基的冷却
C．利于大肠杆菌的接种D．防止皿盖上的冷却水倒流入培养基
7．将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入恒温箱培养的目的是（）A．为了检测温度是否最适宜B．检查培养基是否灭菌彻底
C．为了下次接种时再使用D．没必要放入未接种的培养基
8. 下列关于平板划线操作的叙述正确的是（）
A．使用已灭菌的接种针、培养皿，在操作过程中不再灭菌
B．打开含菌种的试管，需通过火焰灭菌，取出菌种后，需马上塞上棉塞
C．将培养皿盖全部打开后，用沾有菌液的接种环进行划线接种
D. 接种时，接种环在培养基上迅速划线后盖上皿盖
9. 在农业生产研究上，常需要进行微生物的培养和计数，下
图是利用平板划线法进行微生物接种过程中的部分操作，有
关叙述不正确的是（）
A．每次划线前都需要灼烧接种环
B．接种环冷却后从上一区划线的末端开始划线
C．最后一区和第一区要保证不重叠
D．只有在图中的5区域才可以得到所需菌落10. 稀释涂布平板法是微生物培养中的一种常用的接种方法。
下列相关叙述错误的是（）
A．操作中需要将菌液进行一系列的梯度稀释
B．需将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基表面
C．不同浓度的菌液均可在培养基表面形成单个的菌落
D．操作过程中对培养基和涂布器等均需进行严格灭菌处理
11. 下列关于平板划线法和稀释涂布平板法纯化大肠杆菌的叙述，正确的是（）
①可以获得单个的菌落②都需要使用接种环进行接种
③都需要在火焰旁进行接种④都可以用来计数活菌．
A．①② B. ③④ C.①③ D. ②④
12. 下列有关实验室中微生物培养和分离的叙述，错误的是（）
A. 获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵
B. 高温灭菌的目的是杀死所有微生物
C. 划线分离可在培养基上获得均匀分布的单菌落
D. 稀释涂布平板法可用于计数活菌数目
13. 平板划线法：通过在琼脂固体培养基表面的操作，将聚集的菌种逐步
_____ 到培养基的表面。
在数次划线后培养，可以分离到由繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这就是。
14. 稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的，然后将不同稀释度的菌液分别
在琼脂固体培养基的表面，进行培养。
在稀释度的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成。
15．大肠杆菌是生存在人体肠道中的正常菌群，每克粪便中含有109个，且能够与致病菌混杂生长。
如果食品和饮用水中出现大肠杆菌，就意味着食物可能被粪便污染而带上致病菌，因而常将大肠杆菌的数量作为食品卫生的检测指标之一。
请据此回答下列问题：
（1）测定街边出售的奶茶中大肠杆菌的数目，常用稀释涂布平板法进行测定。
该方法首先配置LB______________培养基，进行高压蒸汽灭菌后冷却至60℃，在___________旁倒在培养皿中形成平板；对奶茶样品进行一定倍数的稀释，取0.1mL奶茶稀释液，加在培养皿的固体培养基上，用___________涂布在培养基平面上，然后进行培养；观察统计培养皿中________的数目；该数据比实际数值要______(高、低)，原因是___________________________________________ _________________________。
实验完成后需要对培养基进行________处理，然后才能倒掉。
（2）若要对上述培养基中的菌种进行扩大培养，则需配置
LB_________培养基，灭菌后，将________在酒精灯火焰上烧红后冷却，然后蘸取单菌落中的菌体接种到新的培养基中，在适宜环境中培养。
2。