绞股蓝总皂苷的提取分离和鉴别
绞股蓝总皂苷提取分离及鉴别方法
绞股蓝总皂苷提取分离及鉴别方法该药是从植物中提取出来的，为七叶树科植物天师栗(Aesculus Wilsonii Rehd.)的干燥成熟果实(娑罗子)提取物得到的皂苷钠盐,是天然植物药，呈白色粉末或结晶性粉末,味苦涩而辣,具引湿性,符合未来用药趋势,注射用七叶皂苷钠有什么药理作用？①抗炎作用。
七叶皂苷可消退由卵白蛋白，福尔马林和葡聚糖诱导的大鼠爪肿胀。
V ogel 等注意到七叶皂苷对正常大鼠有促进钠排泄作用，但排钾维持正常水平，注射七叶皂苷后，立即显示利尿作用。
对于七叶皂苷抗炎作用的机理，一些学者认为抗炎作用在于能使炎症刺激剂所致的炎症初期的毛细血管通透性增大变为正常。
另一些学者认为皮质甾类化合物的正常分泌是七叶皂苷抗炎作用所必要。
②消肿胀作用。
七叶皂苷对大鼠脑水肿有保护作用；Siering证实七叶皂苷的抗肿胀作用与改善细胞通透性有关。
Mussgnug认为七叶皂苷抗水肿作用机理为：（1）表面张力活性；（2）提高红细胞与水结合的能力，随着边缘血浆流量提高，产生代谢被动钠泵的依赖；（3）使细胞内、外流体交换正常；（4）在结缔组织和细胞膜上有直接作用的位点。
③抗渗出作用。
七叶皂苷对大鼠巴豆油急性渗出和磷酸组织胺引起的小鼠毛细血管通透性增大具有显著的抑制作用，其强度分别约为氢化可的松的7倍和8倍；并能对抗紫外红斑渗出及缓激肽所致家兔后肢淋巴通透性增加。
④促皮质甾酮作用。
七叶皂苷能促进肾上腺皮质分泌皮质醇，抑制组胺所致的毛细血管通透性增加，增加前列腺素F2，减少前列腺素E1的释放量，阻滞细胞的胞苷二磷酸酯的作用，并延缓Na+交换，从而具有抗炎，抗渗出活性，提高静脉张力。
⑤抗自由基作用。
提高血浆过氧化物歧化酶活性，使抗自由基活性增强。
回答者：drinkyle方法：分别采用无水乙醇回流提取、无水乙醇回流-正丁醇萃取、体积分数为70％乙醇回流提取、体积分数为70％乙醇回流提取-正丁醇萃取、水提取、超声波提取和超临界CO2提取方法，以人参皂苷Re作对照品，比色法测定提取液中山茱萸总皂苷的含量。
绞股蓝总甙标准（卫生部颁标准）
绞股蓝总甙标准中华人民共和国卫生部WS3-Z-006-93（Z）部标准绞股蓝总甙Jiaogulan Zongdai本品为从葫芦科植物绞股蓝Gynostemme pentaphylium（Thunb.）Mak.全草中提取得到的总甙经精制而成。
〔性状〕本品为浅黄色粉末；气微，味微苦、甘。
在水及甲醇中易溶；在乙醚、氯仿中几乎不溶，在石油醚中不溶。
〔鉴别〕取本品加甲醇溶解，制成每1ml含10mg的溶液，作为供试品溶液；另取绞股蓝皂甙-A对照品，加甲醇溶解，制成每1ml 含1mg的溶液，作为对照品溶液。
照薄层色谱法（中国药典1990年版一部附录57页）试验，吸取供试品溶液及对照品溶液各2Ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水（15：40：22：10）10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开12cm，取出，挥尽残存溶剂，喷以10%硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，在日光下及紫外光灯（365nm）下检视。
供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上分别显相同颜色的斑点及荧光斑点。
〔检查〕干燥失重取本品适量，在105℃干燥至恒重，减失重量不得过5%（中国药典1990年版一部附录31页）。
炽灼残渣不得过1.5%（中国药典1990年版一部附录32页）。
〔含量测定〕对照品溶液的制备精密称取于60℃，减压2.67KPa以下干燥3小时的绞股蓝皂甙-A对照品适量，加甲醇溶解，制成每1ml含2mg的溶液。
供试品溶液的制备精密称取本品50mg，加甲醇溶解，制成每1ml含2mg的溶液。
测定法精密吸取对照品溶液及供试品溶液各100ul，分别置15ml具塞试管中，精密加入新鲜配制的含5%香草醛冰醋酸溶液与高氯酸（2.8V/V）的混合液2ml，摇匀，密塞，置60℃水浴中加热15分钟，取出，立即放入冰水中冷却2分钟，精密加入冰醋酸10ml，摇匀，以试剂作空白，照分光光度法（中国药典1990年版一部附录51页）试验，于555±5nm波长处测定吸收度，计算，即得。
绞股蓝总皂甙(UV)
编号:FZD0157 绞股蓝提取物中总皂甙(Total Gypenoside)含量测定方法一、试剂
5%香草醛溶液：称取香草醛5.0g加冰醋酸溶解定容至100mL。
此溶液需临用新制。
二、溶液制备
对照品溶液：精密称取约20mg绞股蓝皂甙A对照品（自制）于50ml容量瓶中，用甲醇溶解定容。
样品溶液：精密称取约25mg绞股蓝提取物于50ml容量瓶中，加约30ml甲醇超声20min溶解，放至室温后以甲醇定容，过滤取续滤液。
三、样品测定与结果计算
分别精密吸取0.2ml、0.4ml、0.6ml对照品溶液、0.5ml样品溶液0.5ml甲醇于10ml具塞试管中，真空加热挥干溶剂，精密加入0.2ml 5%香草醛溶液，0.8ml高氯酸，混匀后于60℃水浴中加热15min，取出并立即放入冰水中冷却2min，随后加入冰醋酸溶液10ml，摇匀，待气泡消失后以试剂空白液（甲醇管）为参比，于550nm测吸光度。
以对照品管中皂甙绝对量(mg)与对应吸光度作工作曲线，由工作曲线计算样品管中皂甙绝对量(mg)。
绞股蓝总皂甙含量(%) =（C×50）/（W×0.5）×100%
式中：C为由工作曲线计算的样品管绝对量；W为样品称样量(mg)。
注：除甲醇外，其余均需平行显色两份。
绞股蓝皂苷的提取原理
绞股蓝皂苷的提取原理
绞股蓝皂苷是一种从绞股蓝根部提取出来的有效成分，具有抗炎、镇痛、抗菌等多种药理作用。
其提取原理主要包括以下几个步骤：
1. 原料准备：采集绞股蓝的根部，并鲜切、晒干等处理，使其达到适合提取的状态。
2. 研磨粉碎：将处理好的绞股蓝根部研磨成细粉，增加提取效率。
3. 固液提取：将绞股蓝根部粉末与适量的溶剂（如水、醇等）混合，并进行搅拌、浸泡等操作，使绞股蓝根部中的绞股蓝皂苷与溶剂发生充分的物质交换，使其溶解于溶剂中。
4. 滤液分离：将混合物进行过滤，分离出液相和固相。
液相中含有溶解的绞股蓝皂苷，固相中则是未溶解的植物残渣等。
5. 溶剂回收：通过蒸馏等方法将提取液中的溶剂进行回收，以减少生产成本和环境污染，并将溶剂用于后续的提取工序。
6. 结晶分离：通过控制温度、浓度等条件，使绞股蓝皂苷结晶沉淀，再通过离心、过滤等操作将结晶物与溶液分离。
7. 干燥收集：将结晶分离得到的绞股蓝皂苷进行干燥处理，使其得到固态的绞股蓝皂苷产品。
绞股蓝皂苷的提取原理基于物质的溶解性与物质之间的分配平衡，通过合理选择溶剂、控制条件等因素，使绞股蓝根部中的绞股蓝皂苷释放并溶解于溶剂中，最终得到纯净的绞股蓝皂苷产品。
绞股蓝总皂苷提取工艺分析
绞股蓝总皂苷提取工艺分析【摘要】目的研究绞股蓝总皂苷的提取工艺。
方法采用正交试验设计法，以绞股蓝总皂苷提取量为考察指标，对影响绞股蓝总皂苷提取工艺的因素进行了优选。
结果提取时间、提取次数对提取效果有显著影响，乙醇用量的影响不显著。
结论绞股蓝总皂苷的最佳提取工艺为：药材加8倍量70%的乙醇，回流提取3次，每次2 h。
【关键词】绞股蓝总皂苷；提取工艺；正交设计Abstract：Objective To study the extraction techniques of total saponin in Gynostemma. Method According to the total saponin extracting rate， the extracting techniques were optimized by orthogonal design. Results The factors that extracting time and extracting times have significant effect on total saponin extraction， and the amount of alcohol solution has insignificant effect on it. Conclusion The optimal extracting techniques were A1B3C3， refluxing extraction for 3 times with 8 fold 70% ethand， 2 hours for each time.Key words：Gynostemma total saponin；extracting techniques；orthogonal design绞股蓝(Gynostemma)为葫芦科绞股蓝属多年生蔓生草本植物，主要含有皂苷、黄酮、多糖，还含有人体必须的多种氨基酸、维生素和微量元素等成分。
中草药绞股蓝中绞股蓝皂苷分离提取的研究
中草药绞股蓝中绞股蓝皂苷分离提取的研究本论文主要对中草药绞股蓝中绞股蓝皂苷的提取、分离和纯化进行了研究,在研究中采用醇提法提取,树脂法进行初步分离纯化,再经硅胶柱层析法进一步分离纯化。
通过实验确定了醇提法的最佳提取工艺条件为:料液比为1:12,乙醇溶液浓度为70%,浸提温度为40℃,浸提次数为3次。
通过对树脂法分离纯化绞股蓝皂苷的研究表明:D-280阴离子交换树脂对绞股蓝总皂苷具有较好的脱色效果,脱色后皂苷的损失量平均为0.58mg/mL。
AB-8大孔吸附树脂对绞股蓝皂苷的吸附量在充分吸附的情况下为37.47mg/mL,吸附后经75%的乙醇洗脱,洗脱率为90.07%。
分别选用了 20%、45%、75%和90%的乙醇进行洗脱,45%的乙醇可将绞股蓝总皂苷初步分成两部分。
绞股蓝皂苷粗品经脱脂、D-280脱色、AB-8脱糖纯化后的绞股蓝总皂苷得率为5.09%,皂苷含量为88.64%。
硅胶柱层析实验表明;硅胶柱层析法可对绞股蓝皂苷实现较好的分离作用。
本实验中经硅胶柱层析共获得三种组分分别为:Gyp2、Gyp3、Gyp4。
经HPLC检测Gyp2纯度为42.68%、Gyp3纯度为67.92%、Gyp4纯度为68.29%。
并对Gyp2和Gyp3进行了二次分离纯化,纯化后的纯度分别为Gyp2-2纯度为74.38%、Gyp3-2纯度为78.72%,较初次硅胶柱分离纯化纯度分别提高了 31.70%和10.80%。
绞股蓝总苷 标准
绞股蓝总苷标准1.植物来源2.绞股蓝总苷是从绞股蓝植物中提取的有效成分，具有清热解毒、止咳祛痰、降血脂、抗疲劳等功效。
3.提取工艺4.绞股蓝总苷的提取工艺包括以下步骤：（1）原料清洗：将绞股蓝植物新鲜采摘后，用清水冲洗干净。
（2）破碎：将绞股蓝植物破碎成小块。
（3）提取：将破碎的绞股蓝植物放入乙醇中浸泡一段时间，然后进行加热回流提取。
（4）过滤：将提取液过滤，去除残渣，得到提取液。
（5）浓缩：将提取液进行浓缩，得到浓缩液。
（6）干燥：将浓缩液干燥，得到绞股蓝总苷粉末。
5.质量标准6.绞股蓝总苷的质量标准应符合以下要求：（1）性状：绞股蓝总苷为淡黄色或类白色的无定形粉末。
（2）鉴别：用紫外光谱法和薄层色谱法等方法进行鉴别。
（3）检查：应符合药典中有关各项检查的规定。
7.成分含量8.绞股蓝总苷的成分含量应符合以下要求：（1）绞股蓝总苷含量：不得少于90%。
（2）其他成分含量：不得超过规定限度。
9.药理作用10.绞股蓝总苷具有多种药理作用，包括降血脂、抗疲劳、保护肝脏、抗肿瘤、抗炎等作用。
具体药理作用可参考相关文献报道。
11.安全性评估12.绞股蓝总苷的安全性较高，长期使用对机体无明显不良影响。
但需要注意的是，孕妇和哺乳期妇女慎用，过敏体质者禁用。
在使用过程中如有不适或过敏反应，应立即停止使用并寻求专业医生的帮助。
13.包装储存14.绞股蓝总苷应密封包装，置于阴凉干燥处保存，避免阳光直射和潮湿环境。
在使用期限内，应按照规定的储存条件进行保存和使用。
过期产品应按照规定进行处理，不得再次使用。
15.使用方法16.绞股蓝总苷的使用方法如下：用法用量：口服，一次2粒，一日3次，或遵医嘱。
对于降血脂的作用，一般建议连续使用3个月以上。
绞股蓝提取
加2%无水氯化钙搅拌2h，离心去除果胶，上清液再加20%过氧化氢， 1mol/L氢氧化钠调pH8-9之间，搅拌5h,每隔0.5h调pH一次，上清液再加3 沉淀 倍95%乙醇，4℃冷藏过夜离心 蒸馏水溶解，滤过，滤液浓缩，浓缩液加3倍95%乙醇，4℃冷 藏过夜，离心，沉淀用无水乙醇和丙酮各洗涤一次，50摄氏度 干燥5h 绞股蓝多糖
乙醚液
沉淀（粗总皂苷）
3.大孔吸附树脂法
绞股蓝粗粉 水煎煮3次，每次1h 煎煮液
调pH9-10放置过滤
滤液
通过大孔吸附树脂柱0.5mol/L氢氧化钠溶液洗涤至流 出液为淡黄色，再用水洗至流出液pH中性，再用95% 乙醇解析洗脱
醇洗脱液 少量活性炭回流30min,抽滤
滤液 减压回收至干 绞股蓝总皂苷粉末状固体
2.醇提法
绞股蓝粗粉
10倍量乙醚回流脱脂3h，过滤
药渣 晾干，加75%乙醇回流提取3次，过滤，滤液减压回
收至乙醇含量为15%-20%，冰箱放48h，过滤
浓缩液
蒸去乙醇浓缩至1:1用水饱和正丁醇萃取至无皂苷
滤液
水层
正丁醇层
减压回收正丁醇并蒸干，残留物加 甲醇溶解。再加入5倍量乙醚，边 加边搅拌，放置过滤
绞股蓝450g
药渣 浓缩液
用2500ml95%乙醇回流提 取2次，每次1h过滤
挥干溶剂，取40g加10倍量水100℃提取3次， 每次0.5h，合并提取液，滤液浓缩至50ml
加3倍量95%乙醇，4℃冷藏过夜，抽滤
沉淀 依次用95%乙醇、无水乙醇、丙酮洗涤一次，50℃干燥5hபைடு நூலகம்
绞股蓝多糖 称取4g溶于200ml蒸馏水，用1mol/l盐酸调pH至7.0左右，加多糖量0.05 倍的木瓜蛋白酶，60℃恒温搅拌5h，每隔0.5h调一次pH反应5h后加热煮 沸维持10min离心去除变性蛋白质 上清液
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绞股蓝总皂苷的提取分离和鉴别
(设计性实验)
绞股蓝为葫芦科植物Gynostemma pentaphyllum（Thunb.）干燥全草，又名七叶胆。
从绞股蓝中分得皂苷已达80余种，其中七种与人参皂苷完全相同，故绞股蓝又有“南方人参”的美誉。
绞股蓝总皂苷是绞股蓝全草中有效成分，具有降血脂、降血糖、抗肿瘤、抗衰老、保护肝脏及增强机体免疫功能等作用。
主要药理实验证明绞股蓝总皂苷对肿瘤细胞的增殖具有明显的抑制作用。
对人体有滋补、镇静、催眠、促食欲、降血脂、降胆固醇、降转氨酶、延缓衰老等作用。
一、实验目的：
1．掌握D-101大孔吸附树脂分离纯化绞股蓝总皂苷的原理和实验操作方法；
2．掌握查阅文献资料的方法和思路；
3．熟悉皂苷类成分的性质及鉴别方法。
二、仪器与试药：
（一）仪器
D-101大孔吸附树脂玻璃层析柱（2.0ⅹ50）圆底烧瓶（1000mL）
SHB-循环水式多用真空泵 HHS型电热恒温水浴锅玻璃仪器气流烘干器
ZF-2型三用紫外仪电热恒温干燥箱烧杯空气回流管移液管（10mL、5mL）锥形瓶（100mL）硅胶G（薄层层析用）滤纸研钵球形冷凝管
（二）试药
绞股蓝药材乙醇蒸馏水盐酸氢氧化钠等
三、实验原理：
大孔吸附树脂（Macfofeticulaf Resin）是六十年代末发展起来的一类有机高聚物吸附剂，它具有多孔网状结构和较好的吸附性能，为白色的球状颗粒，粒度多为20～60目，通常分为非极性、弱极性、中极性和强极性等几大类。
目前常用的为苯乙烯型和丙烯腈型，在树脂合成时根据需要引人极性基团则成为极性树脂从而增强吸附能力。
它的理化性质稳定，不溶于酸、碱及有机溶剂。
对有机物的选择性较好，不受无机盐类及强离子低分子化合物存在的影响，在天然化合物的分离和富集工作中被广泛应用。
大孔吸附树脂为吸附和筛选原理相结合的分离材料。
它的吸附性是由于范德华引力或生成氢键的结果。
分子筛原理是由于其本身多孔性结构所决定。
由于吸附和分子筛原理，有机化合物根据吸附力的不同及分子量的大小，在大孔吸附树脂上经一定的溶剂洗脱而分开。
这使得有机化合物尤其是水溶性化合物的提纯得以大大简化。
大孔吸附树脂技术简单讲就是将中药复方煎煮液通过大孔树脂，吸附其中的有效成分，再经洗脱回收，除掉杂质的一种纯化精制方法。
根据药液成分的不同，提取的物质不同，选择不同型号的树脂。
其操作的基本程
序大多是：中药提取液——通过大孔树脂——吸附上有效成分的树脂——洗脱——洗脱液——回收溶液——药液有效成分——干燥——半成品。
该技术目前已较广泛应用于中药新药的
开发和中成药的生产和抗生素的分离精制，主要用于分离和提纯过程。
四、实验内容
（一）绞股蓝总皂苷的提取分离和鉴别方法的实验设计
要求：1．查阅文献资料，综述绞股蓝提取、分离及鉴别方法；
2．设计适合于本实验室操作的提取方法（至少两种方法）；
3．设计采用D-101大孔吸附树脂分离纯化绞股蓝总皂苷的实验方法和鉴别方法（至少两种方法）。
（二）实验操作
要求：从设计的多种实验方法中选择最优的提取分离纯化及鉴别方案进行实验，确定绞股蓝总皂苷的提取分离工艺。
五、实验结果
1．详细记录实验内容。
2．详细记录定性鉴别结果，并绘制色谱图，计算R f值。
3．总结实验过程中遇到的问题和解决方法。
六、思考题
1．比较不同方法提取分离绞股蓝总皂苷的优缺点。
2．在实验过程中遇到哪些困难？并如何解决？
3．大孔吸附树脂吸附作用的影响因素有哪些？。