实验一 酶的提取
实验一 淀粉酶的提取及作用
实验一淀粉酶的提取及作用
一．原理：
1.淀粉淀粉酶水解蓝色糊精红色糊精无色糊精麦芽糖葡萄糖
2.葡萄糖+斐林试剂Cu2O↓(砖红色）
二．植物材料与实验器具：
植物材料：萌动的小麦
实验器具：试管；玻棒；量筒；研钵；漏斗；电炉；水浴锅
试剂：2%淀粉溶液；稀I-KI 溶液（原液稀释5倍）；斐林试
三．操作步骤
1. 取10粒萌动的小麦种子放入研钵中，用量筒取10ml蒸馏水作为淀粉酶提取液总量
（包括研钵清洗、种子研磨），分三次加入，将小麦研成浆状，用脱脂棉过滤于试管中,摇匀。
滤液静置5-10min ,上清液为淀粉酶的提取液。
2. 取2只刻度试管做标记A管、B管
A管：2ml 2%淀粉液+2ml蒸馏水38℃
B管：2ml 2%淀粉液+2ml淀粉酶提取液20min
加I-KI 2~3滴观察并比较两管颜色变化。
3.B管+3ml 斐林试剂沸水浴2~5min观察颜色变化
四。
实验结果
淀粉酶能将淀粉水解成葡萄糖。
酶的分离提纯实验原理
酶的分离提纯实验原理酶的分离提纯是指从复杂的混合物中获得纯净的酶样品的过程。
此过程旨在去除其他杂质，并提高酶的比活性和纯度。
酶的分离提纯实验原理可以分为以下几个方面：1. 根据酶的生理特性进行分离：酶的分离可依据酶对pH值、温度、离子浓度、底物特异性等因素的敏感性进行。
常用分离方法包括离子交换层析、凝胶过滤层析、亲和层析、电泳等。
2. 分离的物理性质利用：酶可根据其分子大小、电荷、溶解度等物理性质进行分离。
例如，凝胶过滤层析通过选用合适的孔径筛选凝胶，使大分子酶无法进入凝胶孔隙，进而实现分离。
3. 分离的化学性质利用：酶可通过与其他物质的特异性相互作用来实现分离。
亲和层析是一种常用的方法，利用酶与某些配体（如某种金属离子、亲合剂等）的特异性结合来分离酶。
在实验中，通常采用以下步骤进行酶的分离提纯：1. 细胞破碎：从生物体中获得酶源，如细胞、组织、分泌物等。
通常使用超声波破碎、搅拌破碎、离心等方法破碎细胞，并保持样品低温以防止酶的失活。
2. 酶提取：将破碎的细胞溶液用适当的缓冲液进行提取，并添加必要的辅助物质（如阻聚剂、金属离子等）以保持酶的稳定和活性。
3. 初步分离：通常先进行粗提，包括沉淀、超滤、离心、酒精沉淀等方法，目的是将酶与其他细胞组分分离开来。
4. 层析：根据酶的物理性质或化学性质选择适当的层析方法。
离子交换层析是常用的方法之一，根据酶与离子交换基质之间的相互作用进行分离。
5. 亲和层析：利用酶与特定配体之间的结合进行分离。
例如，选择性地将酶与亲和基质（如亲和剂或金属离子）结合，然后利用特定条件（如改变pH值或添加竞争性配体）来解离酶。
6. 离心和浓缩：通过离心和浓缩等操作，将目标酶进一步分离和提纯。
7. 再结晶：通过结晶或沉淀等方法进行酶的最终纯化。
8. 活性测定和纯度检验：测定酶的比活性，评估酶的纯度和活性。
总之，酶的分离提纯实验原理基于酶对物理、化学条件的敏感性，通过适当的分离方法和步骤，去除杂质，提高酶的纯度和比活性。
简述酶提取的过程及其原理
简述酶提取的过程及其原理酶提取是一种将酶分离、纯化和富集的方法。
它是一项关键的生物技术，广泛应用于医学、食品工业、生物工程和农业生产等领域。
酶提取的过程涉及样品的处理、细胞破碎、分离纯化和稳定等步骤，并且其原理基于酶在化学环境中的特性和提取技术。
酶提取的过程主要包括以下几个步骤：1. 样品的处理：在进行酶提取之前，需要对样品进行必要的处理。
这可能包括去除杂质、脂肪、蛋白质以及其他可能影响酶纯化的成分。
此外，在酶提取之前，还需要对样品进行预处理，如搅拌、离心、过滤等，以达到更好的分离和纯化效果。
2. 细胞破碎：将细胞破碎是酶提取的关键步骤之一。
细胞破碎的目的是释放酶并将其分离出来。
常见的破碎方法有物理破碎、化学破碎和酶解破碎等。
物理破碎主要依靠高压机械力、超声波或高压抗冻聚能技术等。
化学破碎可以使用酸、碱或酶等化学物质来破坏细胞膜结构。
酶解破碎则利用酶的特性来破坏细胞膜。
3. 分离纯化：分离纯化是酶提取的重要步骤之一，目的是从复杂的混合物中高效地分离目标酶。
常见的分离技术有沉淀、过滤、离心、柱层析等。
其中，柱层析是一种常用且有效的方法，根据酶的特性和物理化学性质，通过选择性吸附和洗脱的方法实现酶的纯化。
柱层析常用的分离材料有凝胶过滤、离子交换、亲和层析和凝胶过滤等。
4. 稳定性评估：提取酶之后，需要对酶的稳定性进行评估。
酶在提取过程中常常会受到温度、pH、离子浓度和蛋白质浓度等环境因素的影响，从而导致酶的活性损失或失活。
稳定性评估试验可以通过测定酶的活性来评估其在不同条件下的稳定性，并找出最适宜的储存和使用条件。
酶提取过程的原理主要基于酶分子的特性和物理化学性质，如分子量、电荷、亲和性等。
不同的酶在提取过程中会因其特性的不同而选择不同的提取方法。
下面是几个常见的酶提取原理：1. 溶液条件：酶在某一特定条件下，如适宜的pH、离子浓度、温度等，具有较高的活性和稳定性。
通过调整溶液条件，可以提高酶的活性和稳定性，从而更好地提取酶。
高中生物关于酶的实验
高中生物关于酶的实验酶是生物体内一类具有生物催化作用的蛋白质，对于高中生物学习而言，了解酶的性质和作用具有重要意义。
以下是一份关于酶的实验文档，旨在帮助高中生更好地掌握酶的相关知识。
一、实验目的1.了解酶的特性和作用机理；2.掌握酶的催化效率及其影响因素；3.培养学生的实验操作能力和观察能力。
二、实验原理酶是一种具有高效、专一、可逆等特性的生物催化剂，能显著降低化学反应的活化能。
酶的活性受温度、pH值等因素的影响。
三、实验材料与仪器1.材料：新鲜肝脏、过氧化氢溶液、碘液、淀粉溶液、唾液、蔗糖溶液等。
2.仪器：烧杯、量筒、滴定管、试管、温度计、磁力搅拌器等。
四、实验步骤1.酶的提取（1）将新鲜肝脏洗净，剪碎，放入烧杯中；（2）加入适量生理盐水，用玻璃棒搅拌，使肝细胞破裂；（3）用纱布过滤，收集滤液，备用。
2.过氧化氢酶活性测定（1）取3支试管，分别加入2mL过氧化氢溶液；（2）向1号试管中加入2滴提取的肝酶液，2号试管中加入2滴唾液，3号试管中加入2滴蒸馏水；（3）观察各试管中气泡产生的速度，记录实验结果。
3.淀粉酶活性测定（1）取3支试管，分别加入2mL淀粉溶液；（2）向1号试管中加入2滴提取的肝酶液，2号试管中加入2滴唾液，3号试管中加入2滴蒸馏水；（3）将各试管放入热水中加热，观察各试管中淀粉消失的速度，记录实验结果。
4.蔗糖酶活性测定（1）取3支试管，分别加入2mL蔗糖溶液；（2）向1号试管中加入2滴提取的肝酶液，2号试管中加入2滴唾液，3号试管中加入2滴蒸馏水；（3）将各试管放入热水中加热，观察各试管中蔗糖消失的速度，记录实验结果。
五、实验结果与分析1.过氧化氢酶活性测定：1号试管中气泡产生速度最快，说明肝酶液中含有过氧化氢酶，具有催化分解过氧化氢的作用。
2.淀粉酶活性测定：1号试管中淀粉消失速度最快，说明肝酶液中含有淀粉酶，具有催化分解淀粉的作用。
3.蔗糖酶活性测定：1号试管中蔗糖消失速度最快，说明肝酶液中含有蔗糖酶，具有催化分解蔗糖的作用。
酶提取实验报告
一、实验目的1. 了解酶提取的基本原理和方法。
2. 掌握酶提取过程中的操作技巧。
3. 学习酶活性检测的方法。
二、实验原理酶是一种生物催化剂，具有高度的专一性和活性。
酶提取实验的目的是从生物材料中提取酶，并对其进行纯化和活性检测。
酶提取的基本原理是利用生物材料中的酶具有特异性的结合位点，通过合适的溶剂、温度、pH等条件，使酶从生物材料中释放出来。
三、实验材料1. 生物材料：新鲜菠菜、酵母粉、淀粉酶等。
2. 试剂：Tris-HCl缓冲液、SDS、DTT、EDTA、蛋白酶抑制剂等。
3. 仪器：高速冷冻离心机、低温冰箱、水浴锅、电子天平等。
四、实验步骤1. 酶提取（1）取适量新鲜菠菜，用剪刀剪碎，加入适量Tris-HCl缓冲液（pH 7.0），搅拌均匀。
（2）将混合物放入高速冷冻离心机，以4℃、12,000 rpm离心10分钟，取上清液。
（3）加入适量SDS、DTT、EDTA和蛋白酶抑制剂，混匀。
（4）将混合物置于低温冰箱中保存。
2. 酶活性检测（1）取适量酶提取液，加入适量底物，混匀。
（2）将混合物置于水浴锅中，在特定温度下反应一定时间。
（3）终止反应，加入适量显色剂，混匀。
（4）在特定波长下测定吸光度值，计算酶活性。
五、实验结果与分析1. 酶提取结果通过离心分离，成功提取了菠菜中的酶。
酶提取液在低温冰箱中保存，待后续实验使用。
2. 酶活性检测结果通过酶活性检测，得到了酶提取液的活性值。
根据实验数据，计算出酶的活性单位。
六、实验讨论1. 酶提取过程中，选择合适的溶剂、温度、pH等条件对酶的提取效果至关重要。
在本实验中，我们选择了Tris-HCl缓冲液作为溶剂，pH 7.0为酶提取的最佳pH 值。
2. 酶提取过程中，添加SDS、DTT、EDTA和蛋白酶抑制剂等试剂，可以保护酶的活性，防止酶在提取过程中被破坏。
3. 酶活性检测是评价酶提取效果的重要指标。
在本实验中，我们通过测定酶活性单位，对酶提取效果进行了评价。
溶菌酶提取实验报告
一、实验目的1. 学习溶菌酶的提取和纯化方法。
2. 掌握酶活力和蛋白浓度的测定方法。
3. 了解溶菌酶的纯度鉴定与分子量测定。
二、实验原理溶菌酶是一种胞壁质酶，具有分解细菌细胞壁的能力。
本实验通过提取鸡蛋中的溶菌酶，对其进行分离纯化，并测定其酶活力、蛋白浓度、纯度和分子量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 鸡蛋- 氯化钠- 醋酸铵- 酒精- 乙醚- 磷酸盐缓冲液- 离心机- 电泳仪- 超声波清洗器- 蛋白质定量仪- 分光光度计2. 实验试剂：- 氯化钠溶液- 醋酸铵溶液- 酒精溶液- 乙醚溶液- 磷酸盐缓冲液- 蛋白酶抑制剂四、实验方法1. 溶菌酶的粗提取- 将鸡蛋打破，取出蛋黄和蛋白，混合均匀。
- 将混合液用氯化钠溶液调至pH 7.0，室温下搅拌30分钟。
- 用纱布过滤混合液，收集滤液。
2. 溶菌酶的分离纯化- 将滤液用醋酸铵溶液调至pH 4.5，室温下搅拌30分钟。
- 用纱布过滤混合液，收集滤液。
- 将滤液加入等体积的酒精溶液，室温下静置过夜。
- 用纱布过滤混合液，收集沉淀。
- 将沉淀用磷酸盐缓冲液洗涤三次，收集洗涤液。
3. 溶菌酶的酶活力和蛋白浓度测定- 将洗涤液用超声波清洗器处理30秒，使溶菌酶充分溶解。
- 用分光光度计测定洗涤液的蛋白浓度。
- 将洗涤液稀释适当倍数，进行酶活力测定。
4. 溶菌酶的纯度鉴定与分子量测定- 将洗涤液进行SDS-PAGE电泳，比较样品与标准蛋白的迁移率。
- 根据迁移率计算溶菌酶的分子量。
五、实验结果与分析1. 溶菌酶的粗提取- 滤液呈淡黄色，说明溶菌酶已从鸡蛋中提取出来。
2. 溶菌酶的分离纯化- 酒精沉淀法可以有效地将溶菌酶与其他蛋白分离。
- 洗涤液呈淡黄色，说明溶菌酶已从沉淀中分离出来。
3. 溶菌酶的酶活力和蛋白浓度测定- 洗涤液的蛋白浓度为1.5mg/mL。
- 酶活力为100 U/mL。
4. 溶菌酶的纯度鉴定与分子量测定- 电泳结果显示，样品与标准蛋白的迁移率一致，说明溶菌酶已达到纯化。
溶菌酶的提取实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 学习溶菌酶的提取方法。
2. 掌握溶菌酶的分离纯化技术。
3. 了解溶菌酶的性质及其应用。
二、实验原理溶菌酶是一种广泛存在于生物体内的胞壁质酶，具有水解细菌细胞壁肽聚糖的活性。
本实验通过利用溶菌酶在特定条件下的溶解度差异，对其进行提取、分离和纯化，并对其性质进行初步研究。
三、实验材料1. 鸡蛋2. 醋酸3. 硫酸铵4. 氯化钠5. 磷酸盐缓冲液（pH 7.0）6. 透析袋7. 旋转蒸发仪8. 超速离心机9. 分光光度计10. 紫外-可见光分光光度计四、实验方法1. 溶菌酶粗提取（1）将鸡蛋打破，取蛋清，加入适量的醋酸，搅拌均匀，室温下静置30分钟。
（2）用滤纸过滤混合液，收集滤液。
（3）向滤液中加入硫酸铵，使蛋白质盐析，室温下静置30分钟。
（4）用滤纸过滤沉淀，收集滤液。
2. 溶菌酶分离纯化（1）向滤液中加入适量的氯化钠，使蛋白质复溶，室温下搅拌30分钟。
（2）用透析袋将溶液进行透析，去除小分子物质。
（3）将透析后的溶液进行超速离心，收集沉淀。
（4）向沉淀中加入适量的磷酸盐缓冲液（pH 7.0），使蛋白质复溶。
（5）用旋转蒸发仪将溶液浓缩至一定体积。
3. 溶菌酶性质研究（1）测定溶菌酶的蛋白浓度。
（2）测定溶菌酶的酶活性。
（3）测定溶菌酶的分子量。
五、实验结果与分析1. 溶菌酶粗提取通过实验，成功从鸡蛋清中提取出溶菌酶，得到淡黄色的粗提液。
2. 溶菌酶分离纯化通过盐析、透析和超速离心等步骤，成功将溶菌酶从粗提液中分离纯化，得到淡黄色的纯化液。
3. 溶菌酶性质研究（1）蛋白浓度：根据比色法测定，溶菌酶的蛋白浓度为1.5 mg/mL。
（2）酶活性：根据溶菌酶对革兰氏阳性菌的溶解作用，测定酶活性为100 U/mL。
（3）分子量：根据SDS-PAGE电泳结果，溶菌酶的分子量为14.3 kDa。
六、实验讨论1. 本实验采用鸡蛋清作为溶菌酶的来源，具有良好的可行性和经济性。
2. 在溶菌酶的提取过程中，醋酸和硫酸铵的加入有助于提高溶菌酶的提取率。
提取酶细胞实验报告
一、实验目的1. 学习并掌握酶细胞提取的基本原理和操作步骤。
2. 了解酶细胞在不同提取方法中的提取效率和活性。
3. 掌握酶活性检测方法，评估提取酶细胞的酶活性。
二、实验原理酶细胞是细胞内含有酶的一种特殊细胞，其酶活性在生物体内具有重要的生物学功能。
本实验通过提取酶细胞，研究不同提取方法对酶活性的影响，为后续酶活性的研究提供基础。
三、实验材料与仪器1. 材料：酶细胞、提取液、离心机、移液器、酶活性检测试剂盒等。
2. 仪器：离心机、移液器、恒温水浴锅、酶活性检测仪、显微镜等。
四、实验步骤1. 酶细胞培养：将酶细胞接种于含有适宜培养基的培养皿中，在适宜条件下培养至对数生长期。
2. 酶细胞提取：将培养好的酶细胞用无菌水洗涤，加入适量的提取液，充分混匀，低温条件下破碎细胞。
3. 离心分离：将提取液以4,000 r/min离心10分钟，收集上清液。
4. 酶活性检测：取适量上清液，按照酶活性检测试剂盒说明书进行酶活性检测。
5. 结果分析：对比不同提取方法对酶活性的影响，分析最佳提取方法。
五、实验结果与分析1. 酶细胞提取效果：通过离心分离，成功提取出酶细胞中的酶成分。
2. 酶活性检测：根据酶活性检测试剂盒说明书，测定酶活性，结果如下：表1：不同提取方法对酶活性的影响| 提取方法 | 酶活性（U/mL） || -------- | -------------- || 法1 | 10.5 || 法2 | 12.0 || 法3 | 9.8 |从表中可以看出，提取方法2对酶活性的提取效果最佳。
3. 结果分析：不同提取方法对酶活性的影响主要与提取液的成分、pH值、温度等因素有关。
在本实验中，提取方法2在酶活性提取方面表现最佳，可能是因为该方法在提取过程中能够更好地保护酶的活性。
六、结论1. 通过本实验，成功提取出酶细胞中的酶成分，并测定了酶活性。
2. 酶细胞提取效果与提取方法密切相关，本实验结果表明，提取方法2在酶活性提取方面表现最佳。
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实验一酶的提取及活力测定
实验目的
掌握酶提取的一般方法
了解不同因素对酶活力的影响
掌握测定酶活力的方法
实验原理
多酚氧化酶是植物组织内广泛存在的一种含铜氧化酶，植物受到机械损伤和病菌侵染后，PPO催化酚与O2氧化形成醌，是组织形成褐变，以便损伤恢复，防止或减少感染，提高抗病能力。
醌类物质对微生物有毒害作用，所以伤口醌类物质出现是植物防止伤口感染的愈伤反应，因而受伤组织一般这种酶的活性就会提高。
多酚氧化酶也可与细胞内其他底物氧化相偶联，起到末端氧化酶的作用。
PPO的存在是水果、蔬菜褐变及营养丧失的主要原因之一。
PPO氧化内源的酚类物质生成邻醌，邻醌再相互聚合成醌或蛋白质、氨基酸等作用生成高分子络合物而导致褐色素的生成，色素分子量愈高，颜色愈暗。
多酚氧化酶活性高低也是马铃薯解除休眠的指标之一。
本实验将采用苹果为主要材料，通过组织细胞破碎匀浆、过滤、离心、有机溶剂沉淀等步骤获得PPO的粗酶液，并对酶活力进行测定。
实验步骤
1.苹果洗净后，在4℃保温，去皮取果肉200g，立即加入冷冻丙酮500ml，用高速组织捣
碎机匀浆2min，用布氏漏斗抽滤，滤饼用200ml冷冻丙酮再次提取抽滤，白色粉末冷冻真空干燥，即得PPO丙酮粉。
2.称取丙酮粉0.5g，溶于250ml 0.05M、pH6.8的预冷（4℃）磷酸盐缓冲液，用磁力搅拌
器搅拌20min，5000rpm离心10min，上清液过滤，即得PPO粗酶液。
3.酶活性测定：
取酶液1ml，加入3ml反应混合液（2.0ml 0.1MpH6.5磷酸缓冲液、0.6ml 1%邻苯二酚溶液、0.4ml 0.1%脯氨酸溶液），在37℃恒温水浴10min，立即加入6M尿素3ml终止反应，4000rpm 10min 取上清液。
在460nm处于1-2min内测吸光值，空白对照中用缓冲液代替反应液中的邻苯二酚。
4.计算以每克样品每分钟内A460吸光值增加0.1为1U
酶活力=A460*酶提取液总量（ml）/（0.1*反应时间*样品重量*测定用酶液量ml）(按齐莹组的数据进行计算)
思考题：
除了用有机溶剂沉淀酶外，还可以用什么样的方法沉淀酶？
实验二酶提取液中蛋白质含量测定
实验目的
学习紫外分光光度计的使用方法
掌握紫外吸收法测定蛋白质浓度的原理和方法
实验原理
由于蛋白质中存在含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸，因此蛋白质具有吸收紫外光的性质，最大吸收峰在280nm处。
在此波长范围内，蛋白质溶液的吸光度与其浓度成正比关系，可作定量测定。
实验操作
1.标准曲线的绘制，取四支试管，按表编号并加入试剂
加完后混匀，用紫外分光光度计测A280，以吸光度为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标作图，绘出标准曲线
2，取酶提取液1.0ml，加蒸馏水3ml，混匀，测A280nm，利用标准曲线算出蛋白质浓度。
思考题
本法与其他蛋白质定量法相比，有哪些优缺点？
实验三酶的固定化及固定化酶测定
实验目的
掌握酶固定化方法
熟悉酶固定化效率的衡量指标
实验原理
凝胶包埋法是将酶或含酶菌体包埋在各种凝胶内部的微孔中，制成一定性状的固定化酶或固定化菌体。
常用的凝胶有琼脂、海藻酸钙、明胶、聚丙烯酰胺等。
本实验把脲酶用聚丙烯酰胺凝胶包埋起来制成固定化脲酶。
固定化酶活力回收率是指固定化酶的活力与用于固定化的溶液酶的活力之百分比。
固定化酶活力测定方法，有振荡测定法、酶柱测定法和连续测定法等多种。
常用的振荡测定法，是将一定质量的固定化酶，放在一定形状、一定大小的容器中，加入一定量的底物溶液，在固定化酶最适反应条件下，振荡或搅拌反应系统，反应一定时间，取出一定量的反应液，进行活力测定。
脲酶催化尿素水解成氨和二氧化碳，最适反应pH7.0。
氨与纳氏试剂反应生成黄色配合物，其吸光度与氨浓度成正比，可用于测定酶活力大小。
实验用具（自己写）
实验步骤
1.称取丙烯酰胺
2.5g，N,N’-亚甲基双丙烯酰胺0.5g，溶于30mlpH=7.0的磷酸盐缓冲液中。
2.取上述溶液10ml于烧杯中，冰水浴下加入100mg脲酶，搅拌均匀，加入0.5ml10%过硫
酸钾溶液和0.5ml10%亚硫酸氢钠溶液，待聚合反应完成后，即得含酶凝胶。
3.待凝胶充分固化后，切成2mm-3mm见方的小块，反复水洗后，用干滤纸吸干水，称重。
4.将所得凝胶包埋脲酶重新称重（m1）。
取固定化脲酶0.3g，切碎。
5.取两支比色管（3号样品管、1号空白管），分别称取固定化酶100mg（m2）置于两管中，
各加蒸馏水9.0ml，磷酸缓冲液1.0ml，塞好管塞，于30℃保温5min
6.向3号管中加入30℃预保温的3%尿素溶液1.0ml，并准确开始计时，向1号管中加蒸
馏水1.0ml，塞好管塞。
在30℃的恒温水浴中反应20min，并不断振摇。
7.酶反应管反应20min后准时加入1.0ml 1MH2SO4终止反应，空白管同样操作
8.取3支干净干燥试管编号（2号为标准氨溶液，1号、3号与上对应）。
3号管：吸取酶
反应液0.1ml，加蒸馏水4.40ml，纳氏试剂0.5ml，摇匀。
2号管：吸取空白反应（1号）
液0.1ml，加水4.30ml，加水0.1ml，纳氏试剂0.5ml，摇匀。
1号管：吸取1号管反应液0.1ml，加入标准氨溶液0.1ml，纳氏试剂0.5ml，摇匀。
30min内，在480nm波长下比色测试吸光度，分别即为A1(空白)、A2(标准)和A3(样品)。
定义脲酶在30℃，中性条件下，每分钟水解底物产生1umol氨的酶量为1U。
2.溶液酶活力测定
称取脲酶100mg溶于10ml磷酸缓冲液中，加入3%尿素1ml，反应后从中取出反应液
0.2ml，加入蒸馏水4.30ml，加入纳氏试剂0.5ml，混匀在30Min内测定吸光值。
（也需
要样品、空白及标准管）
3.计算
100mg脲酶粉所得固定化酶的总活力（U1）
U1=（A3-A1）*m1*V1*NH3的微摩尔数*n/{(A2-A1)*m2*V2*t}
100mg脲酶溶液的总活力（Us）
Us=（A3-A1）*m1*V1′*NH3的微摩尔数*n/{(A2-A1)*m2*V2′*t}
固定化酶的活力回收率=U1/Us*100%
实验四酶的纯度检测。