土壤中酵母分离
实验七稀释平板计数法及土壤中真菌的分离纯化
4、涂平皿： 每个稀释度均需要涂布平皿，每皿取菌液0.1ml，
用玻璃刮铲涂布均匀。
5、28℃倒置培养3~7天
6、观察并描述真菌菌落特征
10
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五、实验结果及分析
稀释平皿计数法：
稀释倍数 106
107
108
菌落数
每ml原菌样品中微生物的活细胞数（菌落形成数，CFU＝
（同一稀释度平板上菌落平均数×稀释倍数）/原菌样品体积
（ml）
11
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描述酵母菌菌落特征： 描述霉菌菌落特征
12
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5、37℃倒置培养2天
6、计数：
每ml原菌样品中微生物的活细胞数（菌落形成数，CFU＝
（同一稀释度平板上菌落平均数×稀释倍数）/原菌样品体积
（ml）
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菌落计数规则： （一）选择平均菌落数在30~300间的平板
1、只有一个稀释度符合，以该稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数报告； 2、有两个稀释度符合，取决于二者比值（高稀释度的菌落数除以低稀释 度的菌落数的值）：
2、若所有稀释度的菌落平均数均小于30，则按稀释倍数最低的平均菌落
数乘以稀释倍数报告；
8
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四、实验步骤---从土壤里分离真菌
1、熔化培养基 2、倒平皿 3、捻碎土样，将土样溶解在90ml无菌水三角瓶中 4、梯度稀释法稀释土样
10g 10-1
90ml
9
10-2
10-3
10-4
1可0-5 编辑版
实验七 稀释平板计数法及土壤中真菌的 分离纯化
1
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一、实验目的
掌握活菌计数的基本原理及方法 掌握从样品中分离目的微生物的原理及方法
细菌 、放线菌 、酵母菌及霉菌的分离与纯化
土壤中细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的分离与纯化一、实验目的1. 学习、掌握从土壤稀释分离、划线分离各类微生物的技术。
2. 学习从样品中分离、纯化出所需菌株。
3. 学习并掌握平板倾注法和斜面接种技术，了解培养细菌、放线菌、酵母菌及霉菌四大类微生物的培养条件和培养时间。
4. 学习平板菌落计数法。
二、实验原理将待分离的样品进行一定的稀释，使微生物的细胞（或孢子）尽量呈分散状态，选用有针对性的培养基，在不同温度、通风等条件下培养，让其长成一个纯种单个菌落。
要想获得某种微生物的纯培养，还需提供有利于该微生物生长繁殖的最适培养基及培养条件。
微生物四大类菌的分离培养基、培养温度、培养时间见表2-1所示。
表2-1 微生物四大类菌的分离和培养要求样品来源分离对象分离方法稀释度培养基名称培养温度/℃培养时间/d土样细菌稀释分离10-5，10-6，10-7牛肉膏蛋白胨30～37 1～2土样放线菌稀释分离10-3，10-4，10-5高氏1号28 5～7土样霉菌稀释分离10-2，10-3，10-4马丁氏琼脂28～30 3～5面肥或土样酵母菌稀释分离10-4，10-5，10-6马铃薯葡萄糖28～30 2～3细菌分离平板细菌单菌落划线分离10-2 牛肉膏蛋白胨30～37 1～2三、实验材料1. 菌源土样2. 培养基牛肉膏蛋白胨培养基，马丁氏培养基，高氏合成1号培养基，马铃薯葡萄糖培养基(制平板和斜面)，见附录Ⅲ。
3. 无菌水 250 mL锥形瓶，每瓶装99 mL无菌水(或95mL为分离霉菌用)，内装10粒玻璃珠。
4.5 mL无菌水试管(每人5～7支)。
4. 其他物品无菌培养皿，无菌移液管，无菌玻璃涂棒(刮刀)，称量纸，药勺，橡皮头，10%酚溶液。
（一）系列稀释平板法1. 取土样选定取样点，按对角交叉（五点法）取样。
先除去表层约2cm的土壤，将铲子插入土中数次，然后取2～10cm处的土壤。
盛土的容器应是无菌的。
将5点样品约1kg充分混匀，除去碎石、植物残根等杂物，装入已灭过菌的牛皮纸袋内，封好袋口，并记录取样地点、环境及日期。
酵母菌的分离纯化
酵母菌的分离纯化-CAL-FENGHAI-(2020YEAR-YICAI)_JINGBIAN酵母菌的分离纯化、固定化和酒精发酵第一部分酵母菌的分离纯化一、实验目的应用酵母菌的生理生化和生态学的特点，从自然环境中分离酵母菌，并掌握微生物分离纯化的基本方法。
二、实验原理酵母菌常见于含糖份比较高的环境中，如果园土、菜园土及果皮等的表面。
多数酵母菌喜欢偏酸条件，最适pH为酵母菌生长迅速，容易分离培养。
在液体培养基中，酵母菌比霉菌生长快，利用酸性条件则可以抑制细菌的生长。
因此常用酸性液体培养基获得酵母菌的加富培养，然后在固体培养基上划线分离纯化。
三、器材和用品1、甘蔗、苹果皮、葡萄皮、果园土、菜园土等。
2、马铃薯葡萄糖琼脂培养基：马铃薯200g（煮开10min后过滤取汁），葡萄糖20g，琼脂20g，水1000ml，pH自然。
分装三角瓶；试管斜面1支/组3、乳酸马铃薯葡萄糖培养液：配方同上，不加琼脂加乳酸，按1000ml培养基加入5ml乳酸，pH为左右，再分装试管9ml2支/组。
4、无菌吸管3支/组、无菌培养皿、100ml无菌水1瓶/组、涂棒、美兰染液、显微镜、接种环等。
四、实验方法1、接种：取果皮（不需冲洗）或土壤5克，加入到100ml无菌水中，充分搅拌后，用无菌吸管取1ml接入到9ml乳酸马铃薯葡萄糖培养液中，在28-30℃培养箱中培养24h，可见培养液变浑浊。
2、加富培养：用无菌吸管取上述培养液1m l，注入另1管乳酸马铃薯葡萄糖培养液中，在28-30℃培养箱中培养24h。
3、镜检：用无菌操作法用接种环取少量菌液置于载玻片上，中央滴一滴美兰染液，混合均匀后制成水浸片，在高倍镜下观察酵母菌的形态及出芽方式，并可根据菌体是否染色来区分酵母菌的死活细胞，因活细胞使美兰染液还原，故菌体不着色。
4、涂皿：用马铃薯葡萄糖琼脂培养基溶化后制成平板，用无菌吸管取加富培养液到平板中，用涂棒涂匀后培养24h。
5、分离纯化：用接种环挑取单个酵母菌菌落，在平板上四区划线，培养后分离得到单个菌落。
酵母菌的分离纯化实验方案
酵母菌的分离纯化∙实验目的1.了解培养基的配置与灭菌技术；2.无菌操作技术；3.工业微生物的分离与纯化技术；4.工业微生物的检测及保藏。
∙基本原理1、培养基是人工配置的用于培养、分离、鉴定和保存各种微生物的营养基质。
也适合微生物在生命活动中积累各种代谢产物。
由于微生物种类不同，营养类型各异以及实验目的不同，因此培养基的种类也很多。
不同微生物对营养的要求不同，在配置时根据微生物对PH 的要求选择合适的PH。
由于本次实验主要是分离纯化酵母菌，所以配置的培养基是适合酵母菌生长麦芽汁平板培养基，同时添加抗生素抑制霉菌及其它菌的生长。
2、接种和培养过程中必须保证不被其它微生物所污染，关键在于严格进行正确的无菌操作，但是绝对无菌是不可能的，只能人工创造相对无菌的环境。
所以本次实验无菌操作是在超净工作台的酒精灯火焰旁进行。
3、把特定微生物从混杂的微生物群体中分离出来而获得某一种或某一株微生物的过程叫微生物的分离与纯化。
首先根据其生长特性设计只利于此菌生长的条件，再根据各种稀释法使他们在固体培养基上单独长成菌落。
分离纯化的方法通常有：稀释混合倒平板法、稀释涂布平板法和平板划线。
此次实验采用梯度稀释涂布平板法。
4、微生物检测项目最常用的是细胞数的检测，方法比较多，主要有显微镜直接计数法、平板菌落计数法（CFU）、光电比浊计数法等。
本次实验设计酵母菌的数量检测，选用显微镜直接计数法和平板菌落计数法。
实验器材仪器设备恒温水浴锅、电热干燥箱、蒸汽灭菌锅、超净工作台、恒温培养箱、恒温摇床、水浴锅、电炉、铜锅、酒精灯、接种环、电子天平、研钵、光学显微镜、血细胞计数器玻璃器皿烧杯、锥形瓶、大小试管、培养皿、漏斗、三角涂棒、吸管、试管架、玻璃涂棒、盖玻片试剂与材料苹果、大麦芽、琼脂、蒸馏水、碘液、抗生素、染色液其它纱布、滤纸实验内容及操作步骤(一)、样品的选择酵母菌一般在果园的土壤中或者水果的表面含量较多，因此选择苹果为样品。
酵母菌的分离与纯化
酵母菌的分离与纯化酵母菌的分离与纯化小组组员: 一、实验目的1.学习分离纯化酵母菌的技术与方法2.了解培养基的配置与灭菌技术3.增强无菌操作技术的意识二、基本原理从混杂的微生物群体获得只含某一种某一株微生物的过程叫做微生物分离与纯化，酵母菌常见于含糖份比较高的环境中，如果园土、菜园土及果皮等的表面。
多数酵母菌喜欢偏酸条件，最适pH为4.5-6.0.酵母菌生长迅速，容易分离培养。
马丁氏培养基是一种用来分离真菌的选择性培养基。
此培养基是由葡萄糖、蛋白胨、KH2PO4、MgSO4·7H2O、孟加拉红(玫瑰红，Rose Bengal)和链霉素等组成。
其中葡萄糖主要作为碳源，蛋白胨主要作为氮源，KH2PO4和MgSO4·7H2O作为无机盐，为微生物提供钾、磷和镁离子。
而孟加拉红和链霉素主要是细菌和放线菌的抑制剂，对真菌无抑制作用，因而真菌在这种培养基上可以得到优势生长，从而达到分离真菌的目的。
三、实验材料及用具1.用品：苹果、葡萄糖、琼脂、水、1%孟加拉红水溶液、马铃薯2.设备与器材：1ml的无菌吸管、无菌培养皿等.四、实验步骤1、马铃薯培养基的配置培养基成分:马铃薯40克、蔗糖（葡萄糖）4克、琼脂4克、水200毫升、 pH 自然。
配置方法:（1）配制20%马铃薯浸汁：取去皮马钓薯40g，切成小块，加水200ml.加热煮游30 min ，用纱布过滤，然后补足失水互所需体积。
121Pa灭菌30min.即成20%马铃馨漫汁，贮存备用。
（2）配制时，按每100ml 马铃薯浸汁加入2g蔗糖，加热煮沸后加入4克琼脂，继续加热融化并补足失水。
（3）分装、加塞，包扎。
（4）高压蒸汽灭菌：121Pa灭菌30min（5）将灭菌培养基放入37C°的温室中培养24-48小时，观察是否有菌落生成，以检查灭菌是否彻底。
2、倒平板：将马铃薯培养基加热融化，冷却至55--50C°时，倒平板，倒三皿3、制备苹果悬液（1）首先将1g苹果在研钵中磨细，放入装有10ml生理盐水和玻璃珠的100ml三角瓶中去。
从土壤中分离提纯高效的酵母菌
从土壤中分离提纯高效的酵母菌主要内容：利用各种微生物实验技术，从土壤中分离并提纯酵母菌，再通过检测酵母菌发酵速率，从而筛选出高效的酵母菌。
关键词：分离提纯高效酵母菌在土壤中分离酵母菌，因此土壤的采样地点在果树下较好。
采集好土壤，将土壤配制成10^-2悬液，主要方法是称取1g土壤，放入三角瓶，迅速倒入99ml无菌水，震荡5-10min即成所需的土壤悬液。
1.由于土壤中酵母菌含量较低，因此在分离前要先进行富集培养24h。
2.接下来是配制培养基，由于要分离的是酵母菌，配制马丁氏培养基。
3.对培养基进行灭菌放入高压蒸汽灭菌锅115℃/30min4.取出后待50℃以下是加入链霉素，每一百克三毫升5.队超净台消毒，点燃酒精灯6.在酒精灯旁倒平板。
7.接种，画线。
8.放入26℃保温箱3-4d。
9.取生长较好的六个菌落分别接入0.05mol/L4ml的六个试管中，编号1-6。
10.3d后检测葡萄糖含量。
11.配置新制的氢氧化铜0.5mol/L50ml12.将强氧化铜分别放入六个试管中每个4ml。
摇匀加热。
13. 5min后比较六个试管的颜色深浅。
编号颜色1褐色'++褐色+2褐色'--3褐色-4褐色+5褐色6结论：三号试管的颜色最浅，所含葡萄糖最少，所以三号试管的酵母菌效率最高。
结果讨论：实验比较成功，但是培养基的菌株较少，这可能和富集培养的时间太短有关系，忘了设置对照试验。
选取高校教务军，可以重复做这个实验，选出比较高效的酵母菌。
注意:1.注意培养基的灭菌2.注意紫外线只能在无人的时候开启3.注意接种环要灼烧彻底4.注意在培养箱中放培养技师要倒置5.注意统一变量。
如何从土壤中分离出微生物
如何从土壤（污水）中分离出微生物把污水加蒸馏水分别稀释10，100，1000倍，然后加入培养基中培养，如果培养出来菌落重合，菌非常多，无法分离，就加大稀释倍数，直至获得清晰可分离的菌落，有时甚至是非常小的菌落，要用倒置显微镜操作。
而培养基则根据要分离的菌的营养类型进行配置，若要获得多种微生物就要配置多种培养基进行如上操作。
对于土壤加水溶解，对溶解液进行如上操作，不溶的部分就不用管了1.取以少许土壤（一地表以下10cm处为宜）与适量无菌水混匀备用2.做浸出液的梯度稀释3 .涂平板4.划线分离5.接平板，接斜面6.检测从土壤中分离微生物环境工程（1）班一、试验目的1..学会土壤微生物的检测方法，了解土壤中微生物的数量和组成。
2初步掌握从土壤中分离细菌的基本技术。
二、实验原理土壤是微生物生活最适宜的环境、它具有微生物所需要为一切营养物质和微生物进行生长繁殖及生存的各种条件．所以土壤中微生物的数量和种类都很多。
它们参与土壤的氮、碳、硫、磷等元素的循环作用。
此外，土壤中微生物的活动对土壤形成、土壤肥力和作物生产都有非常重要的作用。
因此，查明土壤中微生物的数量和组成情况，对发掘土壤微生物资源和对土壤微生物实行定向控制无疑是十分必要的。
三、实验器材(—)培养基肉膏蛋白胨琼脂培养基（培养细菌）高氏一号琼脂培养基（培养放线菌）查氏培养基（培养霉菌）(二)灭菌稀释水、灭菌吸管、灭菌培养皿。
(三)土壤样品、天平、称旦纸。
（四）恒温箱、气体流量计四、试验程序1、倒平板将培养基加热融化，待冷至55—60℃时，混合均匀后倒平板；2、制备土壤稀释液准确称取土样10g，加入装有90ml 无菌水并带有玻璃珠的三角瓶中，振荡约20min，使土样与水充分混匀，将细胞分散。
用一支无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入装有9ml无菌水的试管中，吹吸3次，让菌液混合均匀，即成10-2稀释液；再换一支无菌吸管吸取10-2稀释液1 ml，移入装有9ml无菌水的试管中，也吹吸三次，即成l0-3稀释液；以此类推，连续稀释，制成10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、等一系列稀释菌液3、涂布将无菌平板编上10-4、10-5、10-6号码，每一号码设置三个重复，用无菌吸管按无菌操作要求吸取10-6稀释液各1ml放入编号10-6的3个平板中，同法吸取10-5稀释液各lml放入编号10-5的3个平板中，再吸取10-4稀释液各lml放入编号10-4的3个平板中（由低浓度向高浓度时，吸管可不必更换）。
酵母菌的筛选思路和分离筛选流程
酵母菌的筛选思路和分离筛选流程
酵母菌的筛选思路和分离筛选流程通常包括以下几个步骤：
1. 采集样品：从自然环境中或已知的发酵样品中采集可能含有酵母
菌的样品，如水、土壤、植物材料、发酵食品等。
2. 预处理样品：对样品进行预处理，如去除杂质、抑制细菌生长等。
这可以通过过滤、离心、稀释等方法实现。
3. 分离酵母：将预处理后的样品通过不同的分离方法（如稀释涂布法、滴管稀释法、涂布法等）分离到培养基上，使单个酵母菌落生长。
4. 筛选途径：根据所需目标酵母菌的特征，选择特定的筛选途径加
以筛选。
- 抗性筛选：在培养基中添加特定的抗生素或抗菌药物，可以筛选出对此类物质具有抗性或耐受能力的酵母菌。
- 产物筛选：培养基中添加特定的检测试剂或基质，通过对应的反应或变色现象，筛选出产生特定产物的酵母菌。
- 形态特征筛选：通过观察酵母菌的形态特征，如菌落形状、颜色、纹理等，筛选出符合要求的酵母菌。
- 发酵能力筛选：通过检测酵母菌的发酵能力，如对糖类底物的发酵能力，选择具有高发酵活性的酵母菌。
5. 分离纯培养：将筛选出来的单个酵母菌菌落分离到新的培养基上
进行纯培养，以获得纯种的酵母菌。
6. 鉴定酵母菌：通过形态学观察、生理生化特征、分子生物学方法
等对所分离出的酵母菌进行鉴定，确定其菌种。
值得注意的是，以上步骤仅为一般的酵母菌筛选思路，具体的筛选
方法和流程可能会因实验目的和需要而有所差异。
土壤中酵母菌的分离与纯化实验报告结果
土壤中酵母菌的分离与纯化实验报告结果实验步骤：
1.实验前准备：准备好所需的培养基、试剂和实验器材。
2.取一定量的土壤样品，加入无菌水中制备土壤悬浮液。
3.对土壤悬浮液进行预处理：将悬浮液通过过滤器过滤，以去除大颗粒杂质。
4.制备培养基：根据酵母菌的生长要求，配制适宜的培养基。
5.接种培养基：将过滤后的土壤悬浮液均匀地接种在培养基表面，避免接种过多的菌落。
6.培养条件：将接种好的培养基培养于适宜的温度和湿度条件下。
7.观察培养结果：在培养一定时间后，观察培养皿上是否出现酵母菌菌落。
8.分离纯化：选择单个菌落，用无菌技术将其移至新的培养基上，重复培养步骤，直到获得纯种的酵母菌培养物。
实验结果：
经过培养和分离纯化的酵母菌培养物显示出单一的菌落形态，颜色为白色或乳白色。
观察下显微镜下，酵母菌呈现为球形或椭圆形的单细胞结构，直径约为5-10微米。
酵母菌菌落在培养基上呈现出光滑、湿润的表面，并具有边缘清晰的特点。
实验结论：
通过土壤中酵母菌的分离与纯化实验，成功地从土壤样品中分离出纯种的酵母菌培养物。
这些酵母菌菌落形态规整、单一，符合酵母菌的特征。
该实验结果为进一步深入研究酵母菌的生理特性和应用提供了基础。
酵母菌的分离
酵母菌的分离酵母菌是一类单细胞真菌，广泛存在于自然界中的土壤、水体、果实等环境中。
酵母菌以其独特的代谢特性被广泛应用于食品工业、制药业、酿酒业等领域。
为了深入了解酵母菌的特性和应用潜力，科学家们对酵母菌进行了大量的分离研究。
酵母菌的分离是指从样本中筛选出纯种的酵母菌，并将其进行培养和研究。
在分离酵母菌的过程中，科学家们需要采集样本，如土壤、果实等，将样本经过一系列处理后进行培养。
首先，样本会经过物理处理，如振荡、搅拌等，以分散其中的酵母菌。
然后，样本会被培养在富含营养物的培养基中，提供适宜的环境条件，使酵母菌能够生长繁殖。
接下来，科学家们会进行菌落计数，通过观察和统计菌落的数量和形态，筛选出单一的酵母菌菌种。
最后，分离得到的酵母菌菌种会被进行进一步的鉴定和培养，以确保其纯度和活力。
酵母菌的分离研究对于酵母菌的应用具有重要意义。
首先，分离得到的酵母菌菌种可以用于酿酒和发酵产业。
不同的酵母菌菌种具有不同的发酵特性和产物特性，通过分离和筛选，可以获得更适合特定产品的酵母菌菌种，从而提高产品的质量和产量。
其次，分离得到的酵母菌菌种可以用于制药工业。
酵母菌可以被用于生产多种药物，如抗生素、维生素等，分离研究可以为制药工业提供更多的菌种资源和新的应用途径。
此外，分离酵母菌还可以用于食品工业。
酵母菌可以被用于发酵食品的制作，如面包、啤酒等，通过分离和培养研究，可以获得更适合特定食品的酵母菌菌种，提高食品的品质和口感。
当前，酵母菌的分离研究正处于不断深入的阶段。
科学家们通过采集不同样本，如极端环境、农产品等，寻找更多的酵母菌菌种。
同时，利用现代生物技术手段，如基因工程、高通量筛选等，加速酵母菌的分离和鉴定过程。
这些研究不仅有助于发现新的酵母菌菌种，还可以为酵母菌的应用提供更多的可能性。
酵母菌的分离是一项重要的研究工作，对于酵母菌的应用具有重要意义。
通过分离研究，科学家们可以获得纯种的酵母菌菌种，并将其应用于食品工业、制药业、酿酒业等领域。
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酵母菌的培养与观察一、实验目的1. 学会选择酵母菌在土壤中采样点并合理取样；2. 掌握PDA培养基的配制方法；3. 学习分离纯化酵母菌的基本操作技术，掌握微生物培养方法以及接种技术。
4. 学会使用高压蒸汽灭菌锅、显微成像系统等实验仪器设备；5. 培养并学习微生物实验的一般思维及方法；6. 了解酵母菌的生长特性、种类；7. 观察并对比土壤，水果及酒曲中酵母菌的形态及种类。
二、实验原理酵母菌是单细胞真核微生物。
酵母菌细胞的形态通常有球形、卵圆形、腊肠形、椭圆形、柠檬形或藕节形等。
比细菌的单细胞个体要大得多，一般为1~5微米′5~30微米。
酵母菌无鞭毛，不能游动。
酵母菌在自然界分布广泛，目前已知有1000多种酵母，根据酵母菌产生孢子(子囊孢子和担孢子)的能力，可将酵母分成三类：形成孢子的株系属于子囊菌和担子菌。
不形成孢子但主要通过芽殖来繁殖的称为不完全真菌，或者叫“假酵母”。
目前已知大部分酵母被分类到子囊菌门。
大多数酵母菌为腐生，其生活最适pH为4.5—6，常见于含糖份较高的环境，如果园土，菜地图及果皮等职务表面。
酵母菌生长迅速，易于分离培养，在液体培养集中，酵母菌比霉菌生长的快。
利用酵母菌喜欢酸性环境的特点，常用酸性液体培养基获得酵母菌的培养液（这样做可抑制细菌生长），然后再固体培养基上划线分离。
三、实验器材1.培养基配方PDA培养基：马铃薯（去皮）<?xml:namespace prefix = st1 ns ="urn:schemas-microsoft-com:office:smarttags" />100g，蔗糖与葡萄糖分别10g，水500g，琼脂10g.PDA乳酸液态培养基：马铃薯（去皮）40g，蔗糖与葡萄糖分别4g，水200g，乳酸1ml 2.仪器及其它用品小铲，500mL三角锥形瓶，500mL及300mL烧杯，药勺，无菌培养皿，剩9mL无菌水试管8支，无菌玻璃珠，接种环，酒精灯，称量纸，高压蒸汽灭菌器，超净工作台，移液器，分析天平，恒温培养箱，微波炉显微成像系统。
四、培养基制作方法1.PDA培养基的制作把马铃薯去皮，切成小块状，称量100克，放进500mL的水中用电热炉加热，边用玻璃棒搅拌，以免糊底，煮沸至马铃薯成糊状便停止加热。
再用双层纱布放在大烧杯上，左手握住，右手戴上手套把马铃薯慢慢倾倒在纱布上，倒完便把纱布与滤渣拿起来把剩余的汁压挤出来。
再用水补充至500mL，加10克葡萄糖及10克琼脂，搅匀后用报纸折成小方块放在瓶口上用手沿瓶口形状往下按并用橡皮胶扎紧，放于高压蒸汽灭菌炉中，用121度灭菌15分钟。
待其冷却至45度左右便在无菌条件下倒在灭菌了的培养皿上。
待其冷却凝结后便倒置放进培养箱中备用。
2.乳酸PDA培养液：制法同上，但不加琼脂而加1ml乳酸。
土壤中酵母菌分离（下）五、实验操作1.样品收集⑴土壤样本：在花圃里找开花较多的花丛下离地面5-10厘米的土壤取一小块土壤，⑵水果样本：一小块腐烂水果，一小块新鲜水果⑶酒样本：甜酒带酒糟的2.制作乳酸PDA培养液200ml，并分装到8支试管（4支25ml/支标记为A，4支24ml/支标记为B）3.培养纯化：⑴接种（：取适量样品直接加入乳酸马铃薯葡萄糖培养液管（A）中，分别标记为土、坏果、好果、酒，置30℃恒温培养箱，培养24h。
⑵富集（09.5.8）：用无菌吸管去上述培养后培养液1ml,注入另一管（B）乳酸马铃薯葡萄糖培养液中，作好标记，置30℃恒温培养箱再培养24h。
（第二天）⑶培养（09.5.9）:①稀释样本：用1ml无菌吸管分别吸取1ml样品液（B）注入盛有9ml无菌水的试管中，吹吸三次，使充分混匀。
然后再用一支1ml无菌吸管从此试管中吸取1ml注入另一盛有9ml无菌水的试管中，制成10-1、10-2稀释度的样品溶液。
②制作PDA培养基500ml，并分装28个，每项样品7个培养基，标记B管样品液为1，各稀释度分别为10-1、10-2各稀释度标记两个培养基（①②），共用24个，如：土10-1①，土10-1②；剩下4个培养基分别标记为土、坏果、好果、酒。
③取样培养：ⅰ.用干净的棉千取各稀释度液（包括B管样品），直接划线于对应稀释度的平板（标记为①的平板）ⅱ.用1ml移液器分别由各稀释液（包括B管样品）中吸取0.2ml对号放入已写好稀释度的平板（标记为②的平板）中，各加入几个已灭菌的玻璃珠，轻轻晃动，涂布均匀，然后将玻璃珠取出。
ⅲ.用同上方法取A管中样品液（接种液，已培养两天）分别涂布于标记为土、坏果、好果、酒的培养基中。
ⅳ.将所有平板（共28个）倒置于30℃恒温培养箱中培养3日。
4.观察（09.5.12）⑴观察菌落的形态，颜色。
⑵在干净的载玻片上滴加一小滴无菌水，用灼烧过的接种环挑取菌种涂匀在载玻片上，盖上盖玻片，置于显微镜下观察。
六、实验结果1．土壤样品：形成白色放射状菌落，较干燥，像发霉，易挑起，有明显中心，中心较边缘厚，可看到丝状。
直径2cm左右。
菌体形态见图1.1。
★Cryptococcus属：为球状或卵形之细胞，无伪菌丝，细胞具粘性荚膜，无发酵能力，能形成starch-like物质。
C. neoformans可感染人畜Cryptococcus症的病原菌。
2．水果样品⑴腐烂水果：形成白色小菌落，表面光滑、湿润、粘稠，容易挑起，菌落质地均匀，正反面和边缘、中央部位的颜色都很均一，菌落多为乳白色。
直径约为1mm。
(菌体见图2.1)⑵未腐烂水果：①B管中样品液形成白色小菌落，表面光滑、湿润、粘稠，容易挑起，菌落质地均匀，正反面和边缘、中央部位的颜色都很均一，菌落多为乳白色，在稀释度为1的样品中形成2个红色小菌落。
直径约为1mm。
(菌体见图2.2)②A管中样品形成大量粉红色小菌落，表面光滑、湿润、粘稠，容易挑起，菌落质地均匀，正反面和边缘、中央部位的颜色都很均一，直径约为1mm。
(菌体见图2.3)★Kloeckera属：只会发酵glucose，常见于果实及果汁中，柠檬形两极出芽细胞，代表种为K. apiculata。
★Hanseniaspora属：柠檬形两极出芽，为果实上之野生酵母，在葡萄酒酿造初期会出现，不久即被淘汰。
代表种为H. valbyensis。
★Rhodotorula属：会产生carotenoid色素，故称红色酵母，无发酵能力，但会污染食品。
代表种为R. glutinis，干燥菌体内脂肪量可达60%以上，与Lipomyces属同为具有油脂生产能力之潜力菌种。
会产生carotenoid红色色素的酵母还有Sporobolomyces属(具ballistospore)及Rhodosporidium属(会形成teliospore)。
3、酒样品⑴形成菌落少，仅在稀释度为1的样品中形成菌落，两个白色小菌落，直径约3mm，菌落比水果的大，表面光滑、湿润、粘稠，容易挑起，菌落质地均匀，正反面和边缘、中央部位的颜色都很均一（菌体见图3.1）；⑵在稀释度为10-1样品培养基中形成一个不规则，近圆形的大菌落，直径约2cm，表面光滑、湿润、粘稠，易挑起，但中心部位颜色明显较深，质地较厚，但分布不均，为芽胞杆菌菌落，可能是操作不当的污染，或者是酒液中其他微生物。
（菌体见图3.2）★Saccharomyces属：酒精发酵能力很强，为酵母中最重要的属，是传统以来各类酒、制造酒精、制造面包等所使用的。
细胞有球形、卵形或椭圆形，多极出芽。
代表种有：S. cerevisiae=S. sake=S. ellipsoideus=S. cerevisiae var. ellipsoideus=S. formosensis ? (or =S. cerevisiae var. formosensis?早期台研396酿酒精菌种)为制造啤酒、葡萄酒、清酒、酒精、面包等最常使用之菌种。
S. carlsbergensis=S. uvarum从Carlberg的啤酒酿造场所分离之下面酵母(bottom yeast)。
S. bayanus=S. pastorianus为不良酵母，造成啤酒发酵过程中有臭气产生，严重影响啤酒质量(有害菌)。
S. diastaticus会分解dextrin & starch，不利于啤酒发酵，为啤酒制造过程中之有害菌。
七、实验总结这次是我们首次自行设计实验，并实施。
方案一几经制定才终于定下来，而且由于技术有限，同时既怕方案设计太简单，又怕太麻烦，对于实验内容也斟酌了几番，最终在匆匆忙忙中，终于定下了这个方案。
但由于第一次制定方案，很多方面欠缺考虑，以及对微生物的不甚了解，设计的方案仍有许多欠缺。
例如，在上述实验结果中，未腐烂水果A管样品中培养出大量红色酵母菌落，而B 管各稀释液中仅稀释度为1的样品培养出2个红色酵母菌菌落，可以提出这样一个疑问：是否接种液培养48h后，其中微生物种类有所变化？是否某些微生物被淘汰？因此，对于A管的样品，也应该进行稀释涂布，并与B管样品对比。
而对于划线法和涂布法的对比，个人认为纯属多余，实验时应该用这部分的培养基（编号为①的平板）进行A管样品各稀度的涂布。
在实验过程中，由于操作的不熟悉，培养的那几天都弄到很晚，大家在操作上都有些不耐烦，于是在操作上不免有些马虎，使得出现被污染的可能。
次外，在观察上，对于微生物不了解，有时很难判断，是微生物还是气泡，对酵母菌大小、形态也没什么概念，再加上显微镜使用的生疏，在接种检测时，没有看到微生物。
但总的来说，虽然这次实验还有很多缺陷，但这次实验也给我带来了很多经验，如实验常用方法、设计方案的全面性、显微镜的使用等方面，都学会了很多，同时也了解到了许多关于酵母菌的知识。
然而学海无涯，这些仅仅只是酵母菌中的常识性知识，对于酵母菌的了解，目前还只能看懂一小部分，很多知识都涉及专业术语，有待进一步学习~。