抗磷脂抗体谱
抗磷脂抗体检测方法
抗磷脂抗体检测方法
抗磷脂抗体检测方法是用于检测人体血清中是否存在抗磷脂抗体（APA），这是一类自身免疫抗体，与磷脂类物质结合而产生。
以下是几种常见的抗磷脂抗体检测方法：
1.免疫酶联免疫吸附试验（ELISA）：ELISA是一种常用的检测方法，在抗磷脂抗体检测中也广泛应用。
该方法将标准化的抗磷脂抗原固定在微孔板上，然后通过加入待测血清样本，观察是否有抗磷脂抗体与抗原发生特异性结合。
结果可以通过酶标记的二抗或底物染色来定量或定性分析。
2.凝集试验：抗磷脂抗体可与磷脂类物质结合形成凝集，因此凝集试验也是一种常见的抗磷脂抗体检测方法。
这种方法通常通过向抗原和血清混合后进行观察，观察是否有凝集形成。
3.血浆高灵敏度C反应蛋白（hs-CRP）：hs-CRP是一种炎症标志物，但高水平的hs-CRP也可能与抗磷脂抗体的存在相关。
因此，测量血浆中的hs-CRP水平也可以作为抗磷脂抗体的间接指标。
抗心磷脂抗体综合征
概念
抗磷脂综合征（anti-phospholipid syndrome, APS）是指由 抗磷脂抗体（APL抗体）引起的一组临床征象的总称，主要 表现为血栓形成，习惯性流产，血小板减少等。在同一患者 可仅有上述一种表现，也可同时有多种表现。
由于抗心磷脂抗体（ACL抗体）的特异性更强，与上述临床 表现关系更密切，因而也称为抗心磷脂综合征（anticardiolipin syndrome, ACS)。
实验室标准
1 狼疮抗凝物
2 抗心磷脂抗体
3 抗 β2 糖蛋白 I 抗体
以上三项抗磷脂抗体至少每项发现2次阳性， 2 次间隔至少12 周
发病原因及机制
遗传因素
某些基因变异可增加患抗心 磷脂抗体综合征的风险
免疫因素
免疫系统异常导致抗心磷脂抗体产生，进而引 起血栓形成等病理过程
环境因素
感染、某些药物、理化因素等可 诱发抗心磷脂抗体综合征
血栓形成 血小板减少
3次或3次以上不明原因＜10周的胚胎 丢失
20周后胎儿在子宫内死亡
羊水少、FGR、脐动脉血流舒张期断流、 胎心监护异常
20周以后，血压高班尿蛋白阳性，或无 蛋白尿，但血小板减少、肾功能受损、 肺水肿
下肢静脉血栓
轻度50×109/L-150×109/L 重度＜50×109/L
治疗原则
发病机制
抗心磷脂抗体与内皮细胞、血小板等结合，导致血管 壁炎症、血栓形成等病理改变
发病机制
绒毛外滋养 细胞未能重 建螺旋动脉
胎盘缺血、 缺氧、损伤
子痫前期 FGR 死胎
母体流入胎 盘的血流减 少、中断
影响胎儿营 养输送
凝血是抗磷脂综合征的重要机制
抗磷脂 抗体
2020抗磷脂综合征诊断与治疗(系列八)(三)抗磷脂综合征实验室检查
2020抗磷脂综合征诊断与治疗（系列八）（三）抗磷脂综合征实验室检查2016年我国复发性流产（recurrent spontaneous abortion，RSA）诊治专家共识将复发性流产定义为：3次或3次以上在妊娠28周之前的胎儿丢失。
但大多数专家认为，连续发生2次流产即应重视并予评估，因其再次出现流产的风险与3次者相近。
2017年欧洲人类生殖与胚胎学会（ESHRE）的最新定义：反复妊娠丢失（recurrent pregnancy loss，RPL）又称反复自然流产（recurrent spontaneous abortion，RSA），是指2次或2次以上孕周在24周之前的妊娠丢失。
反复流产发病原因众多，既可能是单一因素、也可能是混杂的多因素。
反复流产病因主要包括遗传因素（夫妻染色体异常2%-5%）、生殖道解剖结构异常（7%）、内分泌紊乱（8%-12%）、生殖道感染（4%）、免疫及血栓性疾病等因素（50%-60%），其他还有男性因素、环境因素、精神因素、药物因素、不良生活习惯、营养状况及不明原因反复流产（unexplained recur-rent spontaneouse abortion，URSA）。
不明原因反复流产中约80%与免疫学因素相关。
反复流产的诊断为排除性诊断，病因检查和治疗费用较高。
中国地域辽阔，经济发展不平衡，对反复流产患者病因检查和保胎用药应遵循因地制宜、量力而行、规范检查和适度治疗的原则。
根据不良孕产史、流产次数、经济条件、检查技术、酌情选择检查项目，尽可能做到病因清楚，诊断准确。
孕后根据既往流产病史、流产病因，孕后阴道超声、绒毛膜促性腺激素（HCG）、孕酮（P）、雌二醇（E2）、免疫和凝血等检查，横向及纵向综合分析，准确判断胚胎发育情况，恰当选择保胎药物，力争做到精准检查、精准诊断、精准用药、精准保胎。
为了推广普及反复流产与精准保胎事业，规范反复流产病因检查、诊断和治疗，我将反复流产与精准保胎理论知识按临床需要编排为以下篇章，供同行参考使用。
(完整版)抗磷脂抗体与抗磷脂综合征
稀释蛇毒凝血时间(dRVVT)
稀释凝血酶原时间(dPT)
➢ 通过纠正试验确诊：若有LA，缺乏血小板正常血清不能纠正凝血时间
，只有加入过量磷脂或血小板溶解物后，延长的APTT可被纠正。这里 要排除其他原因引起的凝血异常，如肝素、Ⅷ因子复合物等。
9
狼疮抗凝物的检测
➢
10
抗心磷脂抗体（ACL）Fra bibliotek➢ 最先发现的抗磷脂自身抗体之一，和血小板减少有明显相关性，ACL
➢ 1907年，先天性梅毒胎儿的肝脏提取物作为抗原检测梅毒抗体 ➢ 1941年，发现心磷脂及抗心磷脂抗体（ACL） ➢ “梅毒血清反应生物学假阳性（BFP-STS）” ➢ 1950年，慢性BFP人群自身免疫病发生率高 ➢ 1957年，在BFP（+）SLE患者血浆中发现：狼疮抗凝物（LA） ➢ 后证明其是一种免疫球蛋白：靶向前凝血酶活性复合物中磷脂 ➢ 1983年，LA能与其他带负电荷的磷脂结合，称之为抗磷脂抗体（APL） ➢ 1986年，Hughes命名：与之有关的疾病则称为抗磷脂综合征（APS） ➢ 1990年，APS患者的ACL识别血浆中的一种磷脂结合蛋白…β2-GPⅠ ➢ 在SLE和APS中，β2-GPI可显著增加ACL和心磷脂的结合强度 ➢ 1999年，第八届APL国际研讨会会后发表了APS的初步诊断标准(札幌标准) ➢ 2006年，悉尼国际血栓止血学会（ISTH）会议修订了APS分类诊断标准
神经精神症状（偏头痛、舞蹈病、癫痫、吉兰巴雷综合征）
➢ 病源病因分类：
原发性APS：家族聚集，危险因素有吸烟、口服避孕药等 是10-15%血栓性疾病和1/3青年人群中风的原因
继发性APS：SLE 30-40% RA 恶性APS：广泛血栓形成、多器官功能衰竭甚至死亡、起病隐匿
抗磷脂抗体综合征(APS)PPT课件
Autoimmunity Reviews 11 (2012) 25808–295
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aspirin or daily treatment with prophylactic doses low-dose aspirin; optimal management
of heparin plus low-dose aspirin; optimal
uncertain
management uncertain
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①溶血性尿毒症综合征(HUS)：起病较急，多见于儿童，在夏季多发，一般与产生志贺毒素的大肠杆菌感 染有关，在数日内出现贫血、黄疸、皮肤和黏膜出血、血小板减少及急性肾衰竭。 ②TTP：起病较隐匿，常见于成人，在短时间内出现贫血、黄疸、皮肤和黏膜出血，严重者可出现颅内出 血，血小板减少，多数伴有发热和神经系统受累症状，可表现为精神异常，严重者可出现癫痫样发作、 抽搐、瘫痪及昏迷等，肾损伤较HUS轻。 ③HELLP综合征：以溶血、肝酶水平升高和血小板减少为特点，是妊娠期高血压疾病的严重并发症，多数 发生在产前。临床表现为乏力、右上腹疼痛及恶心呕吐，体重骤增，脉压增宽。
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Who? Where？ What？ When? How？
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Proposed Management for Women With aPL Antibodies
Feature
APS with prior fetal death or recurrent pregnancy loss
the isotype and titre in the solid phase tests (1B).
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体内促凝，体外抗凝？
抗磷脂抗体(aPL)谱质控品产品技术要求博粹医学
抗磷脂抗体（aPL）谱质控品2.性能指标2.1外观产品各型号组成应齐全；产品外包装应完整，无破损；质控品为澄清黄色或淡黄色，无颗粒沉淀或絮状不溶性杂质；说明书和质量检查报告字迹清晰完整；标签等打码印字应正确、清晰、牢固。
2.2装量1）规格100μL /支的产品，装量要求不低于110μL /支；2）规格500μL /支的产品，装量要求不低于530μL /支。
2.3溯源赋值程序2.3.1溯源赋值依据1）抗β2-GPⅠIgG抗体质控品（QC131-1L，QC131-5L，QC131-1M，Q C131-5M）：选用磷脂国际大会推荐标准札幌标准品HCAL作为溯源赋值依据。
2）抗心磷脂IgG抗体质控品（QC132-1L，QC132-5L，QC132-1M，QC132-5M）：选用磷脂国际大会推荐标准札幌标准品HCAL作为溯源赋值依据。
3）抗β2-GPⅠIgM抗体质控品（QC133-1L，QC133-5L，QC133-1M，QC133-5M）：选用磷脂国际大会推荐标准札幌标准品EY2C9作为溯源赋值依据。
4）抗心磷脂IgM抗体质控品（QC134-1L，QC134-5L，QC134-1M，QC134-5M）：选用磷脂国际大会推荐标准札幌标准品EY2C9作为溯源赋值依据。
2.3.2溯源赋值方法提供溯源赋值的程序性文件和至少一个批次溯源赋值过程的记录。
（详见附录A）2.3.3赋值准确度2.3.3.1QC13-A 赋值准确度12.3.3.2QC13-B 赋值准确度2.3.3.3QC13-C 赋值准确度2.3.3.4QC13-D 赋值准确度22.3.3.5单支包装规格赋值准确度单支包装规格赋值准确度见“2.3.3.1 QC13-A赋值准确度”。
2.4均一性2.4.1瓶间均一性同批号质控品进行瓶间均一性检测，瓶间均一性CV%≤10%。
2.4.2瓶内均一性同批号质控品进行瓶内均一性检测，瓶内均一性CV%≤10%。
2.5生物安全性产品的HBsAg、HIV(1+2)抗体、HCV 抗体、TP 抗体检测结果应为阴性。
抗磷脂抗体综合征-PPT
❖ 抗β2GPⅠ抗体的存在增加了SLE 患者患血栓的危险
SLE 不伴血栓症 SLE伴血栓症
抗β2GPⅠ抗体阳性率（％） 17 88
——Gómez-Pacheco L, Villa AR, Drenkard C,et al. Serum anti-beta2-glycoprotein-I and anticardiolip in antibodies during thrombosis in systemic lupus erythematosus patients. Am J Med.1999,106:417-23.
❖ aβ2-GPⅠ
❖ 其他抗体意义尚未明确:凝血酶原，钙依赖性膜磷脂结合蛋白Ⅴ，磷脂酰丝氨 酸，磷脂酰乙醇胺，磷脂酰肌醇
aPL的阳性率
正常人群
随年龄和病程阳性率增加
SLE
LAC: 11-30% aCL: 24-86%
初发中风
难治性流产
2 - 12 % 30 - 40 % 10 - 26 %
15 %
APS的临床表现
反复动静脉血栓形成
➢ 静脉闭塞：深静脉血栓 肺栓塞 ➢ 动脉闭塞：最常见中风和短暂性脑缺血（TIA）
妊娠并发症
➢ 难治性流产：APS是引起90%难治性流产的原因 ➢ 胎盘功能不全、早发型子痫 ➢ IUGR——胎儿宫内发育迟缓
血小板减少 精神神经症状 aCL或LA持续阳性
APS的非特异性临床症状
❖ 药物性:
酚噻嗪类,普鲁卡因，奎尼丁，苯妥英，肼屈嗪
aPL实验室检查的适应症
❖ 自发性静脉血栓
❖ 频发性心动过速（即使存在其他危险因素）
❖ 50岁以下人群中风或周围动脉闭塞事件
❖ 所有的 SLE 患者
抗磷脂抗体谱六项
抗磷脂抗体谱六项
抗磷脂抗体谱是一种检测自身免疫疾病中的一组抗体的检测项目。
这些抗体通常与抗磷脂抗体综合症（Antiphospholipid Antibody Syndrome，APS）有关，这是一种自身免疫疾病，患者体内产生抗磷脂抗体，可能导致血栓形成和其他血管问题。
抗磷脂抗体谱六项通常包括以下六个抗体的检测：
1.抗基底膜抗体（Anti-Basal Ganglia Antibodies，ABA）：这是
一种抗体，可能与自身免疫性疾病，特别是运动神经元疾病有
关。
2.抗磷脂抗体IgG：抗磷脂抗体是一类抗磷脂脂质的抗体，包括
IgG和IgM两种类型。
3.抗磷脂抗体IgM：IgM型抗磷脂抗体也是与抗磷脂抗体综合症
相关的抗体类型。
4.抗磷脂抗体抗凝物质：这是一种可能影响血液凝结和抗凝的抗
体。
5.抗磷脂抗体抗β2糖蛋白I：与抗磷脂抗体综合症相关的另一
种抗体。
6.抗磷脂抗体抗β2糖蛋白IgM：IgM型的抗β2糖蛋白I抗体。
这六项抗体的检测有助于评估患者是否存在抗磷脂抗体综合症，并帮助医生制定相应的治疗方案。
这些抗体检测通常在风湿免疫学或免疫学领域的实验室进行。
如果您或您身边的人需要进行这方面的检测，建议咨询医生以获取详细的建议和解释。
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APS的临床表现 师分会 • 动静脉血栓
颈内静脉血栓形成
科医 • 静脉闭塞：深静脉血栓 肺栓塞
疫 • 动脉闭塞：最常见中风和短暂性脑缺血（TIA） 风湿免 • 妊娠并发症
阴性
阳性
阳性
阴性
12周后复查
无APS/血清学 阴性的APS
阳性 诊断APS
无APS/血清学 诊断APS 阴性的APS
aPL检测的注意事项医师分会 • 异质性抗体，多种aPL之间会发 疫科 生交叉反应
• 高滴度、IgG型、多种aPL同时 存在与APS 的相关性高
师协会风湿免 4
医 LA
(7.5%)
β2GP1
中国医师协抗会磷风脂湿抗免体疫谱科医师分会
北京协和医院风湿免疫科
中国医师协会20风14张年湿蜀3 免月澜1疫5日科医师分会
中国医师协会风湿免疫科医师分会 概述 • 磷脂： 分子中含有醇、脂肪酸和磷酸基团的一类化合物，包括心 磷脂、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰胆固醇和磷脂酰乙醇胺等。 是血小板以及其他血细胞细胞膜的脂质双分子层的主要成 分。
国内质控回报结果统计
抗磷脂抗体检测中存在的挑战
中• 国缺乏医适合师每个协实验会室自风身的湿参考免范围疫科医师分会
中国医师协会风湿免疫科医师分会 因此每个实验室应该结合本实验室使用的试剂，仪器 在健康人群的基础上建立适合本实验室的cut-off值。 B Montaruli1, E De Luna etc. Lupus (2012) 21, 799–801
抗磷脂抗体检测策略
中国医师协会风湿免疫科医师分会 APS疑似病例
aCL, aβ2-GPI IgG, IgM/LAC或抗磷脂抗体谱筛查
阴性
其他抗磷脂抗体 Prothrombin、 Annexin V、
抗磷脂抗体谱
阳性
临界值
12周后复查
Laminin
临界值
中国医师协会风湿免疫科医师分会 阳性 流产风险升高
中国医师协会风湿免疫科医师分会 • 试验条件对检测结果的影响 温度：随温度增高，检出率下降，最优温度为25°C 摇床：孵育过程中使用摇床震荡可提高检出率 离子强度（样本稀释）：随离子强度增高，检出率下降 类风湿因子的干扰
中国医师协会风湿免疫科医师分会 抗磷脂抗体检测中存在的挑战 • aPL与相关疾病认识有限 IgA型aPLs的临床价值？ 其他aPLs的临床价值？ 扩大aPLs的筛查，减少不典型症状患者的漏诊？
1941年 发
1954年 首次
1983年
1990年 证 2006年
现梅毒血清 报道凝血时间
抗心磷脂 实凝血酶
β2–GPⅠ
1976 1983 1984 1985 1986 1987 1988 1989 1990 1991 1992 1993 1994 1995 1996 1997 1998 1999 2000 2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010 2011 2012 2013
国际血栓和止血协会狼疮抗凝物/磷脂依赖性抗体学术分会建议标准检测步骤：
筛选试验
混合试验
中国医师协会风湿免疫科医师分会 异常 APTT 正常
不能纠正
乏血小板血浆
过量磷脂或血小板
纠正 确证LA
纠正
不能纠正
dRVVT
正常 排除LA
凝血因子或其他 凝血抑制物检测
其他凝血抑制物检测
LA的检测应采用两种方法，包括筛选试验 和确证试验，并在此的基础上进行纠正试验
瓣膜损伤
协会 • 难治性流产：APS是引起90%难治性流产的原因
医师 • 胎盘功能不全、早发型子痫
布加氏综合症
中国 • IUGR——胎儿宫内发育迟缓
中风 肺栓塞 肾脏微血管病
• 血小板减少
异常妊娠
• 神经系统症状
中国医师协会风湿免疫科医师分会 • 偏头痛、舞蹈病、癫痫、吉兰巴雷综合征
• 血清aPL持续阳性
中国医师协会风湿免疫科医师分会 • 抗磷脂抗体，Antiphospholipid antibodies (aPLs)： 一组针对带负电荷磷脂或带负电荷磷脂与蛋白复合物的异 质性抗体。 ¾ 多数的抗磷脂抗体都不与磷脂直接反应
¾ 多数抗磷脂抗体识别的是磷脂结合蛋白 β2–GPI、凝血酶原等
aPLs的认识历程
¾中到高滴度（>40 GPL或MPL，
妊娠异常 一次或多次
或滴度>99%可信限） ¾ ≥ 2次
中国医师协会风湿免疫科医师分会 a) 不明原因胎儿死亡 ≥10周 b) 子痫、先兆子痫或胎盘功能不全 所致胎儿早产 ≤34周
¾ 间隔12周
c) ≥3次不明原因连续自发流产 ＜10 周
确诊APS: 1 项临床指标 + 1项实验室指标
aPL实验室检查的适应症
中国医师协会风湿免疫科医师分会 • 所有的 SLE 患者,监测血栓及高凝状态 • 3次以上连续流产的女性
II-III期正常形态胎儿流产 早期重症先兆子痫
普通产检孕妇不需要筛查
严重胎盘功能不全
• 自发性静脉血栓及反复发作者
中国医师协会风湿免疫科医师分会 • 频发性心动过速（即使存在其他危险因素） • 50岁以下人群中风或周围动脉闭塞事件 • 无其它危险因素的年龄较大的动脉栓塞者
中• 国不同医实验抗师室磷，协不脂同抗会方体法风学检间湿测的中检免测存一疫在致的性科差挑异医战较师大 分会
中国医师协会风湿免疫科医师分会 变异系数 LA dRVVT aCL
< 10-20 % 40-200 %
结果来自RCPA Haematology QAP
E. Favaloro, International journal of laboratory hematology (2013) 35, 269-74.
血小板凝集 血管收缩
血小板活化
TxA2
血小板聚集
aPLs的临床意义 师分会 • 原发性抗磷脂综合征 疫科医 • 继发性抗磷脂综合征
湿免 自身免疫性疾病 会风 SLE；RA；SS；硬皮病；血管炎；糖尿病；克罗恩病 国医师协 • 50% APS患者合并SLE 中• 40% SLE患者aPLs阳性，10-20% 合并APS
• 正常人
低滴度aPLs 10%； 中－高滴度aPLs 1%
中国医师协会风湿免疫科医师分会 抗磷脂抗体综合征 (APS) • 一组由APL介导的，以动静脉血栓形成为特征的非器官特异的自身免 疫性疾病，又称休氏综合征（Hughes’s syndrome）。
• 病源病因分类： • 原发性APS • 继发性APS SLE 10‐20% RA
中国医师协会风湿免疫科医师分会 2 (10.5%)
0 M
1 (5.3%)
16 (21.9%) 0 (50%)
5 (15.6%) M
实验数据来自本实验室
中国医师协会风湿免疫科医师分会 中国医师协会风湿免疫科医师分会
抗磷脂抗体检测中存在的挑战
中国医师协会风湿免疫科医师分会 • 亟需进一步规范实验操作 • 外部质控品的使用： 国际标准品（HCAL、EY2C9） 实验室自制质控品（阳性混和血清，阳性值位于标准曲线上升区临界 值附近)
中国医师协会风湿免疫科医师分会 • 抗蛋白S抗体 (Anti-PS) • 抗蛋白C抗体 (Anti-PC) • 抗钙依赖性膜磷脂结合蛋白V抗体 (Anti-Annexin V) ……
狼疮抗凝物 LA 医师分会 • 具有体外抗凝活性的一组异质性抗体 免疫科 • 靶抗原：血浆蛋白阴离子磷脂 会风湿 • 主要由抗β2–GPⅠ抗体和aPT引起 中国医师协 • LA 与血栓形成、病态妊娠以及SLE患者中血栓症的相关性强于aCL
中国医师协会风湿免疫科医师分会 抗磷脂抗体谱 • 抗心磷脂抗体 (Anti-cardiolipin antibody, aCL) • 抗β2–糖蛋白Ⅰ抗体 (aβ2–GPⅠ) • 狼疮抗凝物 (Lupus anticoagulant, LA) • 抗凝血酶原抗体 (Anti-prothrombin antibody, aPT) • 抗磷脂酰丝氨酸抗体 (Anti-phosphatidylserine)
惯 性
对滋养层的细胞毒性
流
产
胎盘组
织
血
栓
aPLs
形
IgG类抗体作用于 胚胎血管内皮细胞
炎症反应
胎盘组织
胎盘抗凝蛋白
胎盘局部抗凝能力
成
内皮细
胞
凝血级联系统
抗凝
蛋白C、蛋白S、
纤溶
中国医师协会风湿免疫科医师分会 PGl2
粘附分子受体 组织因子
血栓调解蛋白、抗 凝血酶 III、 β2GPⅠ
血小板凝集 血管舒张
凝血因子异常; 其他凝血抑制物
中国医师协会风湿免疫科医师分会 抗心磷脂抗体，aCL
• 常规aCL检测的抗体包括
•
依赖于β2-GPⅠ的aCL
•
不依赖于β2-GPⅠ的aCL
• 针对其他磷脂结合蛋白的aCL
（凝血酶原、蛋白S和蛋白C等） 自身免疫性疾病 高滴度IgG型aCL β2–GPⅠ依赖
中国医师协会风湿免疫科医师分会 非自身免疫性疾病低滴度IgM型aCL 非β2–GPⅠ依赖
中国医师协会风湿免疫科医师分会 反应的靶抗 延长与异常妊
抗体检测 原是aPL的 抗体检测
原为心磷脂 娠相关
方法建立 另一靶抗
被纳入诊
原
断标准
600
500
400
300
200
100
0
De Laat B et al. Nat Clin Pract Rheumatol. 2008.