黑灵芝中三萜及其皂苷类化合物总量的光度测定
黑灵芝中性提取物三萜含量测定及抗氧化作用研究
中 图 分 类 号 ：Ｑ ６ ． Ｔ ４０６ 文献 标 志码 ： Ａ
Ｔｒ ｔ ｒ ｅ ｏ ｄ ｎ ｅ ｔ ａ ｄ Ａｎ ｉ ｘ ｄ ｎ ｔ ｉｙ ｏ ｕ ｒ ｌ ｉ ｐ ｎ ｉ ｓ Ｃｏ ｔ ｎ ｎ ｔｏ ｉ ａ ｔＡｃ ｉ ｔ ｆＮｅ ｔ ａ ｅ ｖ Ｃｏ ｐ ｎ ｎ ｓ ｆ ｏ Ｇａ ｏ ｅ ｍａ Ａｔｕ ｍ ｏ ｅ ｔ ｒ ｍ ｎ ｄ ｒ ｒ ｍ
性 。结 果 表 明 ： 它具 有较 强 的抗 氧 化 性 。另 外 ， Ｆｌ —ｉ ａ ｅ 方 法 测 得 黑 灵 芝 中性 组 分 的 总 酚 含 量 为 ３ ｇ 用 ｏ ｎＣｏ ｈ ｕ酚 ｉ ｃ １ｍ ／
ｇ 中性组分。据 此 ， 为黑灵芝质量评价及其中性组分开发应 用提供一定的理论 指导 。 关键 词 ： 黑灵芝 ； 中性组分 ； 三萜 ； 分光光度法 ； 氧化性 抗
ｎ ｕ ｒ ｌｃ ｍｐ ｎ ｎ ｓ Ｉ ｌ ｐ ｏ ｉ ｅ ｃ ｒａｎ ｔｅ ｒｔｃ ｌｇ ｉ ａ ｃ ｏ ｈｅｑ ａ ｉ ｖ ｌ ａｉｎ ａ ｄ ａ ｐ ｉ ａｉｎ ｏ ｎ ｄ ｒ ｅ ｔａ ｏ ｏ ｅ ｔ． ｔｗｉ ｒ ｖ ｄ ｅ ｔｉ ｈ ｏ ｅｉ ａ ｕ ｄ ｎ ｅｆ ｒｔ ｕ ｌ ｙ ｅ ａ ｕ ｔｏ ｎ ｐ ｌｃ ｔｏ ｆＧａ ｏ ｅ — ｌ ｔ
ｉ ｎ ｎｉｘ ａ ｔ ｃ ｖ ｙ Ｔ ｔｌ ｈ ｎ ｌ ｃｎｅ ｔ ｅ ｒ ｉｅ ｙＦ ｌ —ｉｃｈ ｕｃｌ ｉ ｅ ｉ ｍ ｔｏ ａ ． ｍＪｇ ｃ ｔ ｔ ｉ ｎ ａｔ ｉ ． ｏ ｅ ｏｓ ｏｔｎ ｄ ｔ ｍ ｎ ｄｂ ｏ ｎＣｏａ ｅ ｏｏ ｍ ｔ ｅ ｅｈｄ ｗ ｓ０ ３ ｒ ａ ａ ｏ ｄ ｉｔ ａｐ ｅ ｉ ｒ ｒ １
灵芝三萜的提取分离及总三萜的含量测定(精)
— 70 —现代中药研究与实践2010年第24卷第5期Chin Med J Res Prac,2010 Sept.,Vol.24 No.5灵芝是一种名贵的药用真菌，属于担子菌纲多孔菌科灵芝属真菌赤芝和紫芝的总称，始载于«神农本草经»，具有补中益气、滋阴强壮、扶正固本、延年益寿等功效。
灵芝主要成分为多糖类和三萜类。
三萜类成分复杂，曾祥丽等[1]报道灵芝含有122种三萜类成分，其中最主要是灵芝酸37种。
林志彬等研究认为灵芝三萜具有抗HIV-1及HIV-1蛋白酶活性、保肝、抗肿瘤和抗艾滋病毒等药理活性[2-5]。
本文对灵芝三萜的提取分离及总三萜的含量测定作以下报道。
1 仪器、试剂旋转蒸发仪（日本生产，EYELA ROTORYEVAPOPATOR N-1000）；GB204电子天平（瑞典）；751型紫外-可见分光光度计（上海分析仪器灵芝三萜的提取分离及总三萜的含量测定侯敏娜1，刘剑 2（1.陕西国际商贸学院，陕西咸阳 712046；2. 陕西香菊药业集团责任公司，陕西商洛 726000）摘要：目的研究灵芝三萜的最佳提取方法，并测定其总三萜的含量。
方法采用正交实验方法，用硅胶柱进行总三萜分离，通过紫外-可见分光光度法测定总三萜含量。
结果最佳提取方法为用5倍量95%乙醇回流提取3次，每次1.5 h ；用 30倍量硅胶装柱，以石油醚-乙酸乙酯（9：1和7：3）进行洗脱；经分离得到针状晶体Ⅰ和Ⅱ，测定该品种中灵芝总三萜含量为9.07%。
结论本提取方法稳定可行，可作为灵芝三萜工业化生产的参考。
关键词：灵芝三萜; 提取分离 ; 含量测定中图分类号：S567.3+1 文献标识码：A 文章编号：1673-6427(201005-0070-02 Ganoderma Triterpenoids Extraction and Determination of the Total TriterpenoidHOU Min- na1 , LIU Jan2(1.Shan’anxi Institute of International Trade & Commerce, Xianyang 712046, China ;2. Shan’anxi Xiangju Pharmaceutical Group Co., Shangluo 726000,ChinaAbstract: Objective To design the best out of Ganoderma triterpenoids extract programs and separation methods, and measured the total content of triterpenoid. Methods Filter through the orthogonal extraction method, using silica gel column for the total separation of triterpenoids by ultraviolet - visible spectrophotometry triterpenoid content. Results The optimum extraction method is to use fi ve times the amount of 95% ethanol was extracted three times for 1.5 hours each time; loaded with 30 times the amount of silica gel column with petroleum ether - ethyl acetate (9:1 and 7:3 for elution; by ultraviolet - visible spectrophotometry in order to ursolic acid as a reference substance, the total triterpene content of Ganoderma lucidum were determined. Conclusion The extraction method is stable and feasible, and Ganoderma triterpene content was to 9.07%.Key words: Ganoderma lucidum Triterpenes; extraction and separation; content determination厂）；硅胶G （青岛高能达化工有限公司）；薄层层析硅胶板HSGF254（烟台江友硅胶开发有限公司）、氯仿、石油醚、乙酸乙酯、甲醇等试剂均为分析纯，熊果酸对照品（中国药品生物制品检定所）。
不同产地灵芝孢子粉中多糖＼总三萜皂苷含量测定
不同产地灵芝孢子粉中多糖＼总三萜皂苷含量测定目的建立灵芝孢子粉中灵芝多糖、总三萜皂苷的含量测定方法。
方法采用紫外分光光度法，苯酚-浓硫酸比色法于波长492nm处测定灵芝多糖吸光度；以香草醛∶高氯酸∶冰乙酸（2∶8∶50）为显色剂，于波长555nm处测定总三萜皂苷的吸光度。
结果多糖、总三萜皂苷的标准曲线的线性范围分别为0.0100~0.0300mg（r=0.9982）；0.025~0.125mg（r=0.9996），多糖、總三萜皂苷的平均加样回收率分别为101.17%、100.74%，RSD分别为1.84%、1.29%。
结论该方法简便、快速、准确，可用于灵芝孢子粉中多糖、总三萜皂苷的含量测定。
Abstract：Objective To establish a method for content determination of total polysaccharides and triterpenoid saponin in the GLS.Methods UV Spectrophotometry,phenol-sulfuric acid;vanillin-glacial acetic acid-sulphuric acid-perchloric acid mixture at the wavelength of 492nm and 555nm absorbance.Results The linear range of total ginseng polysaccharides was 0.0100~0.0300mg(r=0.9982);0.025~0.125mg(r=0.9996).The recovery rate of the study was 101.17%、100.74%,RSD=1.84%、1.29%.Conclusion The results of simulation indicate that this method was accurate,reliable and reproducible.It was suggested that this method can be used to determine the content of total polysaccharides and triterpenoid saponin in the GLS.Key words：GLS;Polysaccharides;Triterpenoid saponin;Determination;Ultraviolet spectrophotometry灵芝，为担子菌纲多孔菌科灵芝属真菌赤芝（Ganoderma lucidum（Leyss.ex Fr.）Karst）、紫芝（Ganoderma sinense Zhao，Xu et Zhang）的干燥子实体。
保健食品功效成份灵芝三萜的检验方法
保健食品功效成份灵芝三萜的检验方法1 原理将样品溶于乙酸乙酯中并于100℃水浴上蒸干后，加入5%香草醛-冰醋酸溶液和高氯酸，于60℃水浴加热，再加入冰醋酸。
在一定浓度范围内其吸光度与三萜类化合物的含量成正比，以此进行比色定量。
2 仪器和试剂2.1仪器2.1.1紫外可见分光光度计2.1.2超声波清洗器2.1.3电热恒温水浴锅2.2试剂2.2.1熊果酸标准品2.2.2高氯酸（分析纯）2.2.3冰醋酸（分析纯），香草醛（分析纯）2.2.4乙酸乙酯（分析纯）2.2.5熊果酸对照品溶液：精密称取经五氧化二磷减压干燥12小时的熊果酸对照品一定量，置容量瓶中，用乙酸乙酯溶解，超声15min,并稀释至刻度，摇匀，制成0.1mg/ml的对照品溶液。
3 分析步骤3.1标准曲线的绘制分别精密吸取0.00ml、0.10ml、0.30ml、0.50ml、0.70ml、0.90ml对照品溶液于10ml试管中，于100℃水浴上蒸干后，加入0.20ml 5%香草醛-冰醋酸和1.0ml高氯酸，摇均，在60℃水浴中加热20min并移入冰水浴中冷却3min，再加入5.00ml冰醋酸, 摇匀并置于室温。
15min后用用分光光度计于548nm波长下测定对照品溶液的吸光度。
分别以熊果酸质量为横坐标和吸光度值为纵坐标绘制标准曲线。
3.2样品溶液的制备与测定取混合均匀的固体样品0.1g，精密称定，置100ml容量瓶中，用乙酸乙酯溶解，超声30min,并稀释至刻度，摇匀，过滤。
精密吸取1.0ml滤液于10ml的试管中，于100℃水浴上蒸干后，加入0.20ml 5%香草醛-冰醋酸和1.0ml高氯酸，摇均，在60℃水浴中加热20min并移入冰水浴中冷却3min，再加入5.00ml冰醋酸, 摇匀并置于室温。
15min后用用分光光度计于548nm波长下测定样品溶液的吸光度。
4 含量计算样品相当于对照品的量（mg）灵芝三萜（以熊果酸计，）= ×100%样品重（mg）。
紫外分光光度法测定破壁灵芝孢子粉中总三萜含量
紫外分光光度法测定破壁灵芝孢子粉中总三萜含量摘要】探讨灵芝孢子粉中紫外分光光度法检测总三萜的优化条件。
采用紫外分光光度法，以熊果酸作为标准品，用无水乙醇超声提取总三萜，吸取提取液进行减压蒸干后，加入显色剂，水浴，测定。
实验表明，在548nm波长下，标准品在10～100ug范围内，吸光度与含量呈良好的线性关系，回收率在97.64%～102.31%之间，说明该方法操作简便，准确性高，能对破壁灵芝孢子粉的质量起到控制作用。
【关键词】灵芝孢子粉总三萜提取溶剂超声提取【中图分类号】R932 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2014）15-0030-02灵芝孢子为灵芝的生殖细胞，在抑制肿瘤、增强免疫力方面作用强于灵芝子实体，破壁后的灵芝孢子粉中的有效成分三萜类化合物如灵芝多糖，核苷腺吟，蛋白质，氨基酸，维生素等更容易被人体吸收。
总三萜物质含量高低已成为破壁灵芝孢子粉质量控制的重要指标。
总三萜物质的检测多以熊果酸或齐墩果酸为对照品，采用分光光度法[1-4]，应用香草醛-高氯酸显色法，测定其含量。
本实验以破壁灵芝孢子粉为样品，从提取溶剂，提取方式和提取条件三方面着手；进一步确定[1]试验中主要检测因素：香草醛-冰醋酸用量，高氯酸用量，水浴温度，水浴加热时间进行单因素考察后进行正交试验，选出最佳的试验条件，最后进行线性关系，稳定性，回收率的验证。
确定一种应用于灵芝孢子粉三萜类含量的高效，快速，科学，安全的检测方法。
1 材料与方法1.1 材料1.1.1 样品与试剂破壁灵芝孢子粉(福建仙芝楼生物科技有限公司)；熊果酸标准品(中国药品生物制品检定所，含量为100%)；高氯酸、冰醋酸、香草醛、无水无水乙醇、无水甲醇、乙酸乙酯、三氯甲烷均为分析纯。
1.1.2 主要仪器与设备 UV-2450紫外分光光度计(日本岛津)；MS 304/S 电子天平(梅特勒-托利多)；恒温水浴锅(苏州金坛市中大仪器厂)；旋转蒸发仪(上海申胜生物技术有限公司)；KQ-500E 超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。
灵芝中三萜类化合物的研究进展
灵芝中三萜类化合物的研究进展周晓;王成忠;李双;唐晓璇;王晓华【摘要】灵芝作为我国历史悠久的传统珍贵药材，有着极其不菲的药用价值。
其中，三萜类化合物，作为灵芝中的主要活性物质之一，在抗HIV、抗炎、保肝护肝、抗肿瘤等方面发挥了其特有的生物活性；同时，灵芝三萜类化合物也是鉴定灵芝相关商品质量及品质的重要指标和保证，其应用前景非常可观。
本文主要就近年来灵芝中三萜类化合物的提取、检测分析和药理活性等方面的研究现状及进展进行归纳总结。
【期刊名称】《齐鲁工业大学学报：自然科学版》【年(卷),期】2014(028)004【总页数】4页(P47-50)【关键词】灵芝三萜;提取方法;检测分析;生物活性【作者】周晓;王成忠;李双;唐晓璇;王晓华【作者单位】齐鲁工业大学食品与生物工程学院,山东济南250353;;;;;【正文语种】中文【中图分类】TS201.2灵芝(Ganoderma lucidum)又名灵芝草、仙草、瑞草，始载于《神农本草经》，属灵芝属，多孔菌科真菌，包括赤芝Ganoderma lucidum(leyss.ex.Fr)和紫芝Ganoderma sinense的干燥子实体。
灵芝自古就被人们视为一种滋补强壮、扶正固本的名贵中药,主要分布在中国、朝鲜、韩国等亚洲国家，2000年版的中国药典首次承认了灵芝的药用价值。
科学研究表明,灵芝中含有多糖、三萜、生物碱、核苷、呋喃类衍生物、多肽氨基酸、甾醇类、油脂类、有机锗等化学成分[1]。
目前，已被开发的灵芝产品主要有灵芝孢子粉、灵芝孢子油、灵芝多糖等，而灵芝三萜相关产品却在市面上较为罕见。
萜类化合物作为灵芝的苦味成分,其广泛的药理活性越来越受到研究者的青睐。
因此具有极为广阔的开发前景。
1 灵芝中三萜类化合物的结构三萜类化合物的基本母核是由30个碳原子组成(图1)，其结构由六个异戊二烯单位聚合而成。
三萜类化合物多为四环三萜和五环三萜，少数为链状、单环、双环和三环三萜。
紫外-可见分光光度法测定破壁灵芝孢子粉中总三萜及多糖含量
灵芝孢子是灵芝在生长成熟期从灵芝菌褶中弹射出来的卵形生殖细胞，它的主要成分包含三萜类、多糖类、氨基酸多肽类、核苷酸与生物碱类等，具有抗肿瘤、抗氧化、调节血糖血脂和增强免疫调节等作用[1-3]。
灵芝孢子为双层细胞壁结构，由几丁质和葡聚糖构成，质地坚韧，极难氧化分解，因此破壁处理后的灵芝孢子粉更有利于机体对孢内有效物质的消化吸收[4]。
快速测定灵芝孢子粉中所含有效活性成分具有重要意义，本文采用紫外-可见分光光度法测定破壁灵芝孢子粉中的总三萜及多糖含量，并对测定方法的精密度、重复性及检出限进行验证。
1 材料1.1 主要试剂无水乙醇、冰乙酸、高氯酸、乙酸乙酯、香草醛、硫酸、苯酚、氢氧化钠、硫酸铜、无水硫酸钠统一枸橼酸钠；标准品：齐墩果酸（1339），购于NATURE STANDARD公司；葡聚糖（S14110-100 g，Mw：1×105 g/mol），购于上海源叶生物科技有限公司。
1.2 仪器Cary50紫外-可见分光光度计（美国瓦里安），EL204分析天平（上海菁海有限公司），KQ-400KDE高功率数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），MTN-2800W氮吹浓缩装置（天津奥特赛恩斯仪器），SC-3610低速离心机（安徽中科中佳）。
2 实验方法2.1 总三萜含量测定称取破壁灵芝孢子粉颗粒约0.2 g，置于100 mL容量瓶中，加入60 mL 无水乙醇，水浴超声提取（功率400 W，频率40 kHz）45 min后，冷却至室温后，用无水乙醇定容，摇匀后过滤，吸取过滤液0.20 mL于10 mL具塞比色管中，氮吹使溶剂完全挥发。
加入新配置的5%香草醛-冰乙酸溶液0.20 mL和高氯酸0.80 mL，摇匀。
置于70 ℃水浴加热15 min，取出，冰水冷却5 min。
加乙酸乙酯4.00 mL稀释，摇匀，在546 nm波长下测定吸光度。
2.2 多糖含量测定称取破壁灵芝孢子粉颗粒5.0 g，置于100 mL圆底烧瓶中，加水80 mL左右，搅拌加热回流1 h，冷却至室温后转移至100 mL容量瓶中，定容至刻度，混匀后过滤。
灵芝三萜的提取分离及总三萜的含量测定(精)
— 70 —现代中药研究与实践2010年第24卷第5期Chin Med J Res Prac,2010 Sept.,Vol.24 No.5灵芝是一种名贵的药用真菌，属于担子菌纲多孔菌科灵芝属真菌赤芝和紫芝的总称，始载于«神农本草经»，具有补中益气、滋阴强壮、扶正固本、延年益寿等功效。
灵芝主要成分为多糖类和三萜类。
三萜类成分复杂，曾祥丽等[1]报道灵芝含有122种三萜类成分，其中最主要是灵芝酸37种。
林志彬等研究认为灵芝三萜具有抗HIV-1及HIV-1蛋白酶活性、保肝、抗肿瘤和抗艾滋病毒等药理活性[2-5]。
本文对灵芝三萜的提取分离及总三萜的含量测定作以下报道。
1 仪器、试剂旋转蒸发仪（日本生产，EYELA ROTORYEVAPOPATOR N-1000）；GB204电子天平（瑞典）；751型紫外-可见分光光度计（上海分析仪器灵芝三萜的提取分离及总三萜的含量测定侯敏娜1，刘剑 2（1.陕西国际商贸学院，陕西咸阳 712046；2. 陕西香菊药业集团责任公司，陕西商洛 726000）摘要：目的研究灵芝三萜的最佳提取方法，并测定其总三萜的含量。
方法采用正交实验方法，用硅胶柱进行总三萜分离，通过紫外-可见分光光度法测定总三萜含量。
结果最佳提取方法为用5倍量95%乙醇回流提取3次，每次1.5 h ；用 30倍量硅胶装柱，以石油醚-乙酸乙酯（9：1和7：3）进行洗脱；经分离得到针状晶体Ⅰ和Ⅱ，测定该品种中灵芝总三萜含量为9.07%。
结论本提取方法稳定可行，可作为灵芝三萜工业化生产的参考。
关键词：灵芝三萜; 提取分离 ; 含量测定中图分类号：S567.3+1 文献标识码：A 文章编号：1673-6427(201005-0070-02 Ganoderma Triterpenoids Extraction and Determination of the Total TriterpenoidHOU Min- na1 , LIU Jan2(1.Shan’anxi Institute of International Trade & Commerce, Xianyang 712046, China ;2. Shan’anxi Xiangju Pharmaceutical Group Co., Shangluo 726000,ChinaAbstract: Objective To design the best out of Ganoderma triterpenoids extract programs and separation methods, and measured the total content of triterpenoid. Methods Filter through the orthogonal extraction method, using silica gel column for the total separation of triterpenoids by ultraviolet - visible spectrophotometry triterpenoid content. Results The optimum extraction method is to use fi ve times the amount of 95% ethanol was extracted three times for 1.5 hours each time; loaded with 30 times the amount of silica gel column with petroleum ether - ethyl acetate (9:1 and 7:3 for elution; by ultraviolet - visible spectrophotometry in order to ursolic acid as a reference substance, the total triterpene content of Ganoderma lucidum were determined. Conclusion The extraction method is stable and feasible, and Ganoderma triterpene content was to 9.07%.Key words: Ganoderma lucidum Triterpenes; extraction and separation; content determination厂）；硅胶G （青岛高能达化工有限公司）；薄层层析硅胶板HSGF254（烟台江友硅胶开发有限公司）、氯仿、石油醚、乙酸乙酯、甲醇等试剂均为分析纯，熊果酸对照品（中国药品生物制品检定所）。
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1 材料与试剂
1. 1 主要仪器与设备 UV2800 紫外可见分光光度计 (上海 UNICO) 、TU2
1901 型 双光束紫外可见分光光度计 (北京普析) 、 BS224S 电子天平(德国赛多利斯) 、HH24 型数显恒温水 浴锅(国华电器有限公司) 、HY23 型多功能调速振荡器 (金坛环宇) 、DGG29104 B 型电热恒温鼓风干燥箱 (上海 森信) 、RE252A 旋转蒸发器 (上海亚荣生化仪器厂) , ZK∃82A 型真空干燥箱(上海实验仪器总厂) ,LJX ∃ Ⅱ型 离心沉淀机 (上海医用分析仪器厂) 1. 2 药材与试剂
图 1 齐墩果酸显色溶液的吸收光谱 Fig11 Absorption spectra of colored solution of oleanolic acid
3. 2 酸体系的选择 常用的体系有香草醛2高氯酸体系和香草醛2硫
酸体系 ,采用 2. 2 方法 ,仅改变酸的种类 ,以水为参 比 ,试剂空白 1 为使用高氯酸体系的空白 ,试剂空白 2 为使用硫酸体系的空白 ,每隔一定时间测定吸光 度 ,结果如下 。
称取灵芝 0. 500 g ,加入不同溶剂于 70 ℃回流 1 h ,过滤 ,减压浓缩 ,甲醇定容 10 mL 。
3 结果与讨论
3. 1 测定波长的选择 将齐墩果酸对照品加显色剂显色后 ,在紫外可
见分光光度计上扫描 ,得吸收光谱图 ,结果见图 1 。 从图中可见 ,齐墩果酸显色溶液在 548 nm 处有一最 大吸收峰 ,故确定 550 nm 为测定波长 。
收稿日期 :2005207208 接受日期 :2006202222 基金项目 :江西省教育厅科学技术项目 (赣教技字 200622 号) 3 通讯作者 Tel :86279128305011 ; E2mail :myxie @ncu. edu. cn
三萜类成分是灵芝的主要活性成分之一 ,测定 方法有高效液相法 ( HPLC) 、薄层色谱法 ( TLC) 等[5] 。 HPLC 法可以准确检测各种单一萜类或皂苷类的量 , 但测定皂苷的干扰较大 ,TLC 法测定皂苷 ,首先皂苷 要水解为苷元 ,操作步骤多 ,尤其是这两种方法都需 要标准品 ,而从灵芝中分离提取单一的三萜及皂苷 类化合物较困难 。Liberman2Байду номын сангаасurchard 显色方法可以 用来对萜类化合物进行定性鉴定 ,利用三萜类化合 物可以和香草醛高氯酸或硫酸试剂起显色反应[6] , 从而可以进行比色法来测定灵芝中三萜及皂苷类化 合物的总量 。
表 3 L9 (34) 正交试验结果及其分析 Table 3 Results and analysis of orthogonal experiment
序号
吸光度
No .
天然产物研究与开发 Nat Prod Res Dev 2006 ,18 :8252829
文章编号 :100126880 (2006) 0520825205
黑灵芝中三萜及其皂苷类 化合物总量的光度测定
弓晓峰1 ,2 ,谢明勇1 3 ,陈 奕1
(1. 南昌大学食品科学教育部重点实验室 ; 2. 南昌大学教育部鄱阳湖湖泊生态与生物资源利用实验室 ,南昌 330047)
摘 要 :采用正交试验法优化了香草醛高氯酸法测定黑灵芝三萜及其皂苷类化合物总量的显色条件 ,建立了测
定黑灵芝中三萜及其皂苷类化合物总量的分光光度法 ,检测波长为 550 nm ,回归方程为 : A = 0. 0093 C - 0. 0032
(μg) , R2 = 0. 9986 ( n = 6) ,齐墩果酸对照品在 0～128. 4μg 范围内呈良好线性关系 , RSD 为 4. 09 % ,对样品进行
GONG Xiao2feng1 ,2 ,XIE Ming2yong1 3 ,CHEN Yi1
(1. The Key Laboratory of Food Science of MOE , Nanchang University ;2. Key Laboratory of Poyang Lake Ecology and Bio2resource Utilization of MOE , Nanchang University ,Nanchang 330047 ,China)
0. 168
1. 132
从显色结果看 ,硫酸体系显色较深 ,但放置时间 越久 ,吸光度越大 。从试剂空白值来看 ,也是硫酸体 系的高 ,考虑香草醛2冰乙酸是无色溶液 ,高氯酸也 是无色液体 ,故本实验选择高氯酸体系 。 3. 3 正交试验设计及结果
根据预试验 ,选择显色剂用量 、加热时间 、加热 温度 、高氯酸用量作为考察因素 ,设定三个水平 ,根 据因素水平表 ,选择正交表 L9 (34) 进行实验 ,本实验 以吸光度为指标 ,吸光度越大 ,说明显色越完全 。结 果见表 2 ,3 。 通 过 直 观 分 析 可 以 得 出 最 优 水 平 组 合 是 A3B1C3D3 ,香草醛用量 0. 2 mL , 高氯酸用量为 1. 2 mL ,70 ℃加热 15 min ,此条件下显色反应最完全 。
称取 0. 500 g 灵芝 ,分别加入 40 mL 溶剂 (50 % ～95 %乙醇 、甲醇 、丙酮 、氯仿 、5 % Na2CO3) ,超声 30 min ,过滤 ,再加入 40 mL 溶剂超声 30 min ,共 2 次 ,合 并滤液 ,减压浓缩 ,甲醇定容 10 mL 。 2. 3. 2 溶剂回流法
Vol118
弓晓峰等 :黑灵芝中三萜及其皂苷类化合物总量的光度测定
827
表 2 因素水平表 Table 2 Levels of experimental factors
因素 显色剂用量 A
Factors Dosage of
水平
vanillin2
加热时间 B Heating time
表 1 酸体系的选择 Table 1 Selection of acid system
时间 Time (min)
试剂空白 1 Reagent blank 1
高氯酸 Perchloric
acid
试剂空白 2 Reagent blank 2
硫酸 Sulfuric
acid
0
0. 085
1. 137
0. 073
本文先对香草醛高氯酸试剂的显色效果进行了 探讨 ,然后采用正交试验确定显色反应的最佳测定 条件 ,并对样品不同制备方法的含量进行了比较测 定 ,筛选出最佳制备方法 。结果证明这种方法是可 靠的 ,可供灵芝质量控制 。
826
天然产物研究与开发 Vol118
齐墩果酸 (Oleanolic acid) 对照品购自中国药品 生物检定所 ;黑灵芝由江西赣州灵芝基地提供 ,赤灵 芝及野生灵芝由江西医药公司提供 ; 高氯酸 、香兰 素 、硫酸 、乙酸乙酯 、冰乙酸 、甲醇 、无水乙醇 、丙酮 、 乙醚 、氯仿 、正丁醇 、Na2CO3 等均为分析纯 。
2 实验方法
1. 148
10
0. 070
1. 088
0. 070
1. 088
20
0. 099
1. 102
0. 092
1. 129
30
0. 095
1. 062
0. 125
1. 087
40
0. 098
1. 058
0. 128
1. 132
50
0. 105
1. 065
0. 140
1. 109
60
0. 128
1. 043
灵芝为担子菌纲 ,多孔菌科 ( Polyporaceae) 灵芝 属 ( Ganoderma) 真 菌 灵 芝 ( G. lucidum ) 和 紫 芝 ( G. japonicum) 的总称 。灵芝属真菌 ,国内有二十多种 , 包括赤芝 、黄芝 、紫芝 、黑芝 、薄盖灵芝 、树舌等 。国 内外研究过的灵芝属真菌仅有赤芝 ( G. lucidum) 、紫 芝 ( G. japonicum) 、树舌 ( G. applanatum) 、薄 盖 灵 芝 ( G. capense) 、南方灵芝 ( G. austrole) 等五种 ,其中研 究最多的是赤芝 ,紫芝次之 ,从中分离得到的多糖 类 、三萜类 、核苷类 、甾醇类 、生物碱类等有效成份成 为研究热点 。而有关黑灵芝中有效成分的研究却鲜 有报道 ,尤其是灵芝三萜及皂苷类化合物总量的测 定未见任何报道 ,作者已对江西赣州黑灵芝微量元 素形态分布 、抗氧化作用等进行了一些研究[124] 。