利用响应面法优化出芽短梗霉As3.933产普鲁兰多糖发酵培养基

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响应面法优化酵母菌产胞外多糖培养基的研究

响应面法优化酵母菌产胞外多糖培养基的研究杨迎凤;杨文娟;杨锟;闫家阔;姚淑敏【期刊名称】《中国酿造》【年(卷),期】2014(033)009【摘要】对能够影响酵母菌胞外多糖产量的基础培养基成分(碳源、氮源、无机盐离子)进行单因素试验,在单因素试验基础上,利用响应面法对主要影响因素进行优化,得出最适培养基配方为蔗糖6.0％、胰蛋白胨0.2％、硫酸铵0.1％、硫酸镁0.035％和磷酸二氢钾0.1％.此培养基在pH值为6、装液量50 mL/250 mL锥形瓶、温度28℃、转速170 r/min的条件下,在第8天酵母菌YF01-g胞外多糖产量最大,为4.672 g/L.【总页数】5页(P115-119)【作者】杨迎凤;杨文娟;杨锟;闫家阔;姚淑敏【作者单位】曲阜师范大学生命科学学院,山东曲阜273165;曲阜师范大学生命科学学院,山东曲阜273165;曲阜师范大学生命科学学院,山东曲阜273165;曲阜师范大学生命科学学院,山东曲阜273165;曲阜师范大学生命科学学院,山东曲阜273165【正文语种】中文【中图分类】TS201.3【相关文献】1.响应面法优化假单胞菌产胞外多糖发酵培养基 [J], 王晓霞;赵晨;赵祥颖;刘建军;张家祥2.响应面法优化桑黄菌产胞外多糖的培养条件研究 [J], 牛广财;朱丹;李志江;左锋;关琛3.响应面法优化黑木耳胞外多糖液体培养基组成的研究 [J], 刘芳茗;胡耀辉;隋新4.柠檬明串珠菌TD1产胞外多糖条件的响应面法优化及其抗氧化性研究 [J], 叶广彬;陈源红;王长丽;杨睿睿;宾晓芸;银联飞5.齐整小核菌发酵产胞外多糖的培养基优化研究 [J], 张丽;柳昊睿;赵馨仪;翟丽;黄福山;黄正梅;王敏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

普鲁兰短梗霉产脂肪酶发酵条件的优化

普鲁兰短梗霉产脂肪酶发酵条件的优化
徐伟;石海英
【期刊名称】《食品与发酵工业》
【年(卷),期】2011(037)005
【摘要】对普鲁兰短梗霉产脂肪酶的发酵条件进行优化研究。

在单因素试验的基础上，利用中心组合设计研究发酵工艺条件（温度、初始pH值、接种量）对产脂肪酶的影响。

结果表明，发酵温度、发酵液初始pH值和接种量3个因素对粗酶液的脂肪酶活力有显著影响，在实验水平范围内3个因素间均对响应值不产生交互影响作用。

拟合得到了该发酵过程的回归模型方程（R2=0．9556），优化得到的发酵温度、初始pH值和接种量分别为26．02℃、5．87和6．38％。

说明回归模型方程能较好地反映普鲁兰短梗霉的产酶量与发酵温度、初始pH和接种量之间的关系
【总页数】4页(P101-104)
【作者】徐伟;石海英
【作者单位】聊城大学生命科学学院,山东聊城,252059;聊城大学生命科学学院,山东聊城,252059
【正文语种】中文
【中图分类】TQ925
【相关文献】
1.碳源对出芽短梗霉发酵生产普鲁兰多糖的影响 [J], 刘鑫;周文红;韦海;刘慧霞
2.酵母粉对出芽短梗霉发酵普鲁兰多糖相对分子质量的影响 [J], 安超;马赛箭;常帆;上官亦卿;丁浩;薛文娇
3.利用响应面法优化出芽短梗霉As3.933产普鲁兰多糖发酵培养基 [J], 常帆;薛文娇;安超;马赛箭
4.秋水仙素诱发的产普鲁兰出芽短梗霉的变异性 [J], LI.,AA;郭慧云
5.出芽短梗霉新菌株RM1603产普鲁兰多糖条件优化及多糖分析 [J], 沈琦;张殿鹏;郝雅荞;罗翔莲;杨佳瑶;魏步云;李欧;赵洪新
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一种利用出芽短梗霉发酵生产超低分子量普鲁兰多糖的方法[发明专利]

专利名称：一种利用出芽短梗霉发酵生产超低分子量普鲁兰多糖的方法
专利类型：发明专利
发明人：曾伟,梁智群,陈桂光,蒋莉,邓英丽
申请号：CN202010971945.3
申请日：20200916
公开号：CN112094752A
公开日：
20201218
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明属于微生物发酵领域，具体涉及到一种利用出芽短梗霉（）GXZ‑6，保藏编号为CCTCC NO：M 2017517，发酵生产超低分子量普鲁兰多糖的方法。

该方法以出芽短梗霉为生产菌种，利用葡萄糖或蔗糖为底物，30℃条件下，采用分批发酵方式生产普鲁兰多糖，生产得到的普鲁兰多糖的产量可达110~120 g/L，底物转化率达78~85%，分子量低至2.5×10~9.0×10，具有发酵液粘度低、普鲁兰多糖产量和底物转化率高、以及普鲁兰多糖分子量低的优点，极具工业生产潜力。

申请人：广西大学
地址：530004 广西壮族自治区南宁市西乡塘区大学东路100号
国籍：CN
代理机构：南宁市来来专利代理事务所(普通合伙)
代理人：来光业
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响应面法优化假单胞菌HFE733产脂肪酶发酵培养基的研究

响应面法优化假单胞菌HFE733产脂肪酶发酵培养基的研究胡珺;王常高;林建国;杜馨;蔡俊【期刊名称】《中国调味品》【年(卷),期】2017(042)012【摘要】研究采用响应面法对假单胞菌HFE733产脂肪酶的发酵培养基进行了优化.在前期运用单因素试验优化的基础上,利用Plackett-Burman试验设计筛选出培养基组分中影响脂肪酶活力的2个显著性因素:酵母膏和橄榄油.运用单因素试验研究非显著因素的最低添加量来降低生产成本,然后运用最陡爬坡试验找到中心复合试验的中心点,最后利用中心复合设计确定显著性因素之间的交互作用及最佳组成.结果表明:最佳培养基组分为酵母膏34 g/L、橄榄油5.92 mL/L、蔗糖12.5 g/L、CuSO4·5H2O 0.4 g/L、MnS O4·H2O 0.2 g/L,在此条件下脂肪酶酶活可达到9.27 U/mL,与模型预测值相近,且与单因素优化后的酶活(4.53 U/mL)相比,提高了104.64％.【总页数】5页(P12-16)【作者】胡珺;王常高;林建国;杜馨;蔡俊【作者单位】湖北工业大学发酵工程教育部重点实验室工业发酵湖北省协同创新中心,武汉430068;湖北工业大学发酵工程教育部重点实验室工业发酵湖北省协同创新中心,武汉430068;湖北工业大学发酵工程教育部重点实验室工业发酵湖北省协同创新中心,武汉430068;湖北工业大学发酵工程教育部重点实验室工业发酵湖北省协同创新中心,武汉430068;湖北工业大学发酵工程教育部重点实验室工业发酵湖北省协同创新中心,武汉430068【正文语种】中文【中图分类】TS201.25【相关文献】1.响应面法优化铜绿假单胞菌产鼠李糖脂发酵培养基的研究 [J], 巩志金;刘胜格;梁鑫鑫;魏贝贝;梁光杰;杨革;刘金锋;车程川2.响应面法优化假单胞菌产胞外多糖发酵培养基 [J], 王晓霞;赵晨;赵祥颖;刘建军;张家祥3.施氏假单胞菌 PS59产脂肪酶发酵条件及脂肪酶洗涤性能优化 [J], 刘金辉;李晓路;姜岩;王海宽4.响应面法优化洋葱假单胞菌产脂肪酶液体发酵工艺 [J], 尹利;阎金勇;杨江科;闫云君5.响应面法优化假单胞菌产低温淀粉酶发酵培养基 [J], 王继莲;任羽;李明源因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

利用响应面法优化出芽短梗霉As3.933产普鲁兰多糖发酵培养基

普鲁兰多糖产量的主要培养基参数进行优化，以期为
生产中提高普鲁兰产量提供依据。
液体发酵培养基的锥形瓶中，于２３０ｒ・ｍｉｎ＿。、２８℃
培养１２０ｈ。
１实验
１．２．３生物量和多糖含量的测定将发酵液于６０００ｒ・ｒａｉｎ离心１５ａｉｒｎ，沉淀用
（陕西省微生物研究所微生物代谢产物研究中心，陕西西安７１００４３）
摘要：采用响应面分析法对出芽短梗霉Ａｓ３．９３３产普鲁兰多糖的发酵培养基进行优化。首先利用Ｐｌａｃｋｅｔｔ — Ｂｕｒ —
１．２．１出芽短梗霉种子培养
利用出芽短梗霉发酵产普鲁兰多糖时，碳源、氮源、营养因子、溶解氧水平、温度和ｐＨ值等因素都影响其形态特征和产物的形成［８］。作者借助统计学软件
Ｄｅｓｉｇｎ－Ｅｘｐｅｒｔ８．０，采用响应面设计法（ＲＳＭ）对影响
四
２０１３，ＶｏＩ．３０Ｎｏ．５亿学与佳物Ｃｈ互猩
ｅｍｉｓｔｒｙ＆Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ
利用响应面法优化出芽短梗霉Ａｓ３．９３３产普鲁兰多糖发酵培养基
常帆。薛文娇，安超，马赛箭

响应面法优化假单胞菌产胞外多糖发酵培养基

响应面法优化假单胞菌产胞外多糖发酵培养基王晓霞;赵晨;赵祥颖;刘建军;张家祥【期刊名称】《中国酿造》【年(卷),期】2016(035)003【摘要】采用响应面法对假单胞菌(Pseudomonas sp.) FJY5-13生产胞外多糖的发酵培养基进行优化.通过Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验及Box-Behnken试验构建回归方程,结果表明,最佳发酵培养基成分为甘油83.0 g/L、酵母浸粉5.7 g/L、NaC1 8.2 g/L、柠檬酸钠5 g/L、(NH4)2SO41 g/L、玉米浆粉7.5 g/L,在此条件下,胞外多糖的产量为10.50g/L,约为优化前多糖产量7.9 g/L的1.3倍.【总页数】4页(P80-83)【作者】王晓霞;赵晨;赵祥颖;刘建军;张家祥【作者单位】齐鲁工业大学食品与生物工程学院,山东济南250353;山东省食品发酵工程重点实验室,山东济南250013;山东省食品发酵工程重点实验室,山东济南250013;齐鲁工业大学食品与生物工程学院,山东济南250353;山东省食品发酵工程重点实验室,山东济南250013;山东省食品发酵工程重点实验室,山东济南250013【正文语种】中文【中图分类】Q939【相关文献】1.响应面法优化桑黄产胞内多糖液体发酵培养基 [J], 谢丽源;谭伟;郭勇;贾定洪;彭卫红;甘炳成2.响应面法优化铜绿假单胞菌产鼠李糖脂发酵培养基的研究 [J], 巩志金;刘胜格;梁鑫鑫;魏贝贝;梁光杰;杨革;刘金锋;车程川3.响应面法优化假单胞菌HFE733产脂肪酶发酵培养基的研究 [J], 胡珺;王常高;林建国;杜馨;蔡俊4.响应面法优化假单胞菌产低温淀粉酶发酵培养基 [J], 王继莲;任羽;李明源5.响应面法优化弗氏葡糖杆菌PFY-8产胞外多糖发酵工艺 [J], 裴芳艺;薛迪;马岩石;刘宇超;刘得水;李慧;刘韩;陈雪因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

产普鲁兰糖出芽短梗霉菌株的初步筛选

度并纯化制备普鲁兰糖，比较糖转化率及普鲁兰糖产量ｔ６４ｎ处测定制备的普鲁兰糖溶液的吸光度值，比较色５ｍ
素的分泌量。结果菌株Ａ３３８ｓ．９４普鲁兰糖产量、糖转化率最高，色素含量最低。结论确定菌株Ａ３３８ｓ．９４作
０６Ｈ６５１．；ｐ．，１５℃灭菌３ｎ０ｍｉ。
其他试剂均为进口或国４，Ａ３８７３３８ｓ．３，Ａｓ．３３９３，３株菌株摇
ＵＶ２０一１０型紫外分光光度计（上海尤尼柯仪器有瓶分别发酵９６，１０ｈ制备普鲁兰糖，产量见表２２。限公司）Ａ１０；Ｆ０４电子天平（上海电子天平仪器有限公司）；ＤＶ— Ｅ型旋转黏度计美国博力飞公司）（。
即得所需种子液。
２３摇瓶发酵培养．
Ａ３３８ｓ．９４，Ａ３８７ｓ．３ｓ．３，Ａ３９３３株菌株摇瓶分
别发酵９，１０ｈ制备普鲁兰糖，测定发酵液中残６２５０ｍ０Ｌ三角瓶内装１０ｍＬ０液体培养基，种子糖、总糖含量及底物糖转化率。结果见表３。液用液体培养基稀释至１Ｘ１／０个ｍＬ，％接种量每５表３菌株摇瓶发酵后底物糖转化率的测定结果
ｗｉｅｈｇｅｔｒｄｃｏｆｕｌｌｎｕｉｚｄｒｔｆｈｕａｓａｄｌｗｅｔｓｃｅｉｎｏｉｍｅｔＣｏｃｕｉｎｔｔｉｈｓｏｕｔｎｏｌａ，ｔｉｅａｅｏｅｓｇｒｏｓｅｒｔｆｐｇｎ．ｎｌｓｏｈｈｐｉｐｕｌｔｎｏＡｓ．９４ｃｎｂｓｄａｅｏｉｉａｔａｎｆｒｅｐｏｕｔｎｏｕｌｌｎ３３８ａｅｕｅｓｒｇｎｓｉｒｄｃｉｆｐｌａ．ｈｔｌｒｏｔｈｏｕＫｅｒｓｙｗｏｄ：Ａｕｅｂｓｄｕｐｕｌｌｎｐｌｌｎｐｇｅｔｒｏａｉｉｍｌａ；ｕｌａ；ｉｍｎｕｕ

出芽短梗霉发酵生产普鲁兰多糖研究进展

大多数微生物产生胞外多糖的功能与其自我保护机制相关，微生物用分泌的大分子多糖包裹自身形成一层保护膜，防止自身干燥或者被侵染。［５］国内外虽然对出芽短梗霉的细胞学及生理学特征进行了大量的研究，但短梗霉多糖的生物合成机理目前仍然存在争议。Ｄｕａｎ在２００８年提出了一种可能的普鲁兰多糖生物合成途径（见图１）［６］。在无细胞的出芽短梗霉酶系中，加入ＡＴＰ和ＵＤＰＧ（尿甘二磷酸葡萄糖）时，短梗霉多糖可以得到合成，而且ＵＤＰＧ不能被ＡＤＰＧ（腺苷二磷酸葡萄糖）取代，表明短梗霉多糖链或短梗霉多糖前体起源于ＵＤＰＧ，可以证明，作为葡萄糖和淀粉合成主要途径的ＡＤＰＧ的转糖苷过程并没有在短梗霉多糖合成中发生。Ｃａｔｌｅｙ和Ｍｃ－Ｄｏｗｅｌｌ提出了短梗霉多糖形成的反应进程。最初阶段是ＵＤＰＧ脱下葡萄糖残基和脂质分子（ＬｐＨ）通过磷酸酯键结合，然后另一个ＵＤＰＧ的葡萄糖残基通过转移反应，形成与脂质体连接的异麦芽糖基（Ｉｓｏｍａｌｔｏｓｙｌ）［７］。
· １２２ ·
陕西农业科学
２０１２（３）
１：α－磷酸葡萄糖异构酶；２：尿苷二磷酸焦磷酸化酶；３葡糖基转移酶
图１普鲁兰多糖生物合成途径推测
２普鲁兰多糖发酵条件优化

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利用响应面法优化出芽短梗霉As3.933产普鲁兰多糖发酵培养基常帆;薛文娇;安超;马赛箭【摘要】采用响应面分析法对出芽短梗霉As3.933产普鲁兰多糖的发酵培养基进行优化.首先利用Plackett-Burman实验筛选出影响普鲁兰多糖产量的主要因素为酵母膏、(NH4)2SO4和K2 HPO4,再利用最陡爬坡实验逼近最大响应区域,最后通过Box-Behnken实验并运用Design-Expert 8.0软件优化发酵培养基.确定优化培养基组成为:蔗糖62.5g· L-1,(NH4)2SO40.67 g· L-1,酵母膏2.84 g·L-1,K2 HPO4 7.12 g·L-1,NaCl 1.25 g·L-1,MgSO4· 7H2O 0.25g·L-1,pH值6.5,优化后的普鲁兰多糖产量达到22.29 g·L-1,较初始液体发酵培养基(17.32 g·L-1)提高了28.70％.【期刊名称】《化学与生物工程》【年(卷),期】2013(030)005【总页数】4页(P42-45)【关键词】普鲁兰多糖;培养基优化;Plackett-Burman设计;响应面法(RSM)【作者】常帆;薛文娇;安超;马赛箭【作者单位】陕西省微生物研究所微生物代谢产物研究中心,陕西西安710043;陕西省微生物研究所微生物代谢产物研究中心,陕西西安710043;陕西省微生物研究所微生物代谢产物研究中心,陕西西安710043;陕西省微生物研究所微生物代谢产物研究中心,陕西西安710043【正文语种】中文【中图分类】TQ929.2普鲁兰多糖（Pullulan），又称茁霉多糖、短梗霉多糖等，是由出芽短梗霉（Aureobasidium pullulans）发酵产生的一类多聚糖［1］，为右旋葡聚糖［2］。

普鲁兰多糖是由麦芽三糖通过α－1，6－糖苷键连接形成的高分子量的线形多糖［3］，其中α－1，4－糖苷键与α－1，6－糖苷键的比例为2∶1，聚合度为200～5000，平均分子质量为4．8×104～2．2×106 Da［4］。

普鲁兰多糖因其易溶于水、不凝胶化、可以任意加工成型、无毒性等特点应用于食品、医药、化工等诸多行业［5，6］，尤其是作为食品添加剂应用广泛［7］。

利用出芽短梗霉发酵产普鲁兰多糖时，碳源、氮源、营养因子、溶解氧水平、温度和pH值等因素都影响其形态特征和产物的形成［8］。

作者借助统计学软件Design－Expert 8．0，采用响应面设计法（RSM）对影响普鲁兰多糖产量的主要培养基参数进行优化，以期为生产中提高普鲁兰产量提供依据。

1 实验1．1 菌种与培养基出芽短梗霉As3．933，中国科学院普通微生物保藏中心。

PDA固体培养基（g·L－1）：马铃薯200．0，葡萄糖20．0，琼脂20．0。

液体种子培养基（g·L－1）：葡萄糖50．0，酵母膏2．5，NaCl 1．0，MgSO4·7H2O 0．2，K2HPO45．0，（NH4）2SO40．6，pH 值6．5。

液体发酵培养基（g·L－1）：蔗糖50．0，酵母膏2．5，NaCl 1．0，MgSO4·7H2O 0．2，K2HPO45．0，（NH4）2SO40．6，pH 值6．5。

以上培养基均于115℃灭菌30min。

1．2 方法1．2．1 出芽短梗霉种子培养从保藏斜面挑取一环出芽短梗霉As3．933菌种接种于装有50mL液体种子培养基的锥形瓶中，于230r·min－1、28℃培养48h。

1．2．2 发酵培养产普鲁兰多糖将种子液以5%（2．5mL）接种量接入装有50mL液体发酵培养基的锥形瓶中，于230r·min－1、28℃培养120h。

1．2．3 生物量和多糖含量的测定将发酵液于6000r·min－1离心15min，沉淀用水洗涤2次后，105℃烘干至恒重。

向上清液中加入2 BV无水乙醇，振荡摇匀，4℃放置12h，10 000r·min－1离心5min，沉淀于80℃烘干至恒重，即得普鲁兰多糖粗品，称量。

1．2．4 Plackett－Burman实验设计根据单因素实验结果，以粗普鲁兰多糖产量为指标进行Plackett－Burman实验设计。

选择实验次数N＝12，对蔗糖（X1）、（NH4）2SO4（X2）、酵母膏（X3）、MgSO4·7H2O（X4）、NaCl（X5）、K2HPO4（X6）和pH值（X7）7个因素进行考察，另外取4个虚拟项进行误差估计。

每个因素取2个水平，高水平编码为＋1，低水平编码为－1。

各因素水平取值见表1。

以普鲁兰多糖产量为响应值，每组3个平行，取平均值。

用Design－Expert 8．0进行数据处理。

表1 Plackett－Burman实验因素与水平／g·L－1Tab．1 Factors and levels of Plackett－Burman experiment／g·L－1X1．蔗糖50 75 X2．（NH4）2SO4 0．6 0．9 X3．酵母膏 2．5 3．75 X4．MgSO4·7H2O 0．2 0．3X5．NaCl 1．0 1．5 X6．K2HPO4 5．0 7．5 X7．pH 值6．25 6．75 1．2．5 最陡爬坡实验最陡爬坡实验以Plackett－Burman（PB）实验的实验值变化方向为爬坡方向，根据PB实验结果设计步长，尽快逼近最大响应区域。

1．2．6 响应面分析在最陡爬坡实验结果的基础上进行3因素3水平实验，利用Design－Expert 8．0软件优化培养基组成。

2 结果与讨论2．1 Plackett－Burman设计方案与结果Plackett－Burman实验设计及结果见表2，各因素效应及显著性分析见表3。

由表3可知，对普鲁兰多糖产量产生正效应的因素为蔗糖、MgSO4·7H2O、NaCl 和 K2HPO4，产生负效应的因素为（NH4）2SO4、酵母膏和pH值。

而可信度在95%水平上时酵母膏、（NH4）2SO4和 K2HPO4差异显著。

2．2 最陡爬坡实验Plackett－Burman 实验结果表明，（NH4）2SO4（X1）、酵母膏（X2）为负效应，K2HPO（X3）4为正效应根据效应大小决定步长、其它因素分别取中心点水平，进行最陡爬坡实验。

最陡爬坡实验设计与结果见表4。

表2 Plackett－Burman实验设计与结果Tab．2Design and results of Plackett－Burman experiment1 －1 1 1 1 －1 1 1 18．573 2 1 －1 1 1 －1 1 －1 19．873 3 －1 －1 1 1 1 －1 1 17．769 4 －1 1 －1 －1 －1 1 1 19．642 5 1 1 1 －1 1 1 －1 18．609 6 1 －1 1 －1 －1 －1 1 18．929 7 1 1 －1 1 1 －1 1 18．913 8 1 －1 －1 －1 1 1 1 22．480 9 －1 1 1 －1 1 －1 －1 17．429 10 －1 －1 －1 1 1 1 －1 22．127 11 1 1 －1 1 －1 －1 －1 19．749 12 －1 －1 －1 －1 －1 －1 －1 19．833表3 Plackett－Burman实验结果分析Tab．3Significance analysis of Plackett －Burman experimentX1．蔗糖1．37 0．244 4 X2．（NH4）2SO4 －3．48 0．025 3 X3．酵母膏－4．96 0．008 1 X4．MgSO4·7H2O 0．04 0．974 7 X5．NaCl 0．31 0．770 6 X6．K2HPO4 3．73 0．020 2 X7．pH 值－0．56 0．603 5表4 最陡爬坡实验设计与结果Tab．4 Design and results of the steepest ascent experiment1 0．75 3．0 6．25 21．88 2 0．65 2．6 7．05 22．91 3 0．55 2．2 7．85 20．837 4 0．45 1．8 8．65 14．837 5 0．35 1．4 9．45 8．55 6 0．25 1．0 10．25 4．778由表4可知，（NH4）2SO40．65g·L－1、酵母膏2．6g·L－1、K2HPO47．05g·L－1时普鲁兰多糖产量最高，因此将第2组作为Box－Behnken的中心点进行进一步优化。

2．3 Box－Behnken实验设计和响应面分析根据Plackett－Burman实验和最陡爬坡实验确定的中心点，以普鲁兰多糖产量（Y）为响应值对普鲁兰多糖的发酵培养基进行3因素3水平的Box－Behnken 实验，实验的因素和水平见表5，设计和结果见表6。

表5 Box－Behnken实验因素与水平／g·L－1Tab．5Factors and levels of Box －Behnken experiment／g·L－1X1．（NH4）2SO40．55 0．65 0．75X2．酵母膏 2．2 2．6 3．0 X3．K2HPO46．25 7．05 7．85用 Design－Expert 8．0软件对 Box－Behnken实验结果进行二次回归分析，得到的回归方程为：Y＝21．6313＋1．3188 X1＋1．9666 X2－0．7932 X3－2．076－1．5833－1．5943－1．2165 X1X2＋1．6225 X1X3＋1．3133X2X3。

表6 Box－Behnken实验设计与结果Tab．6Design and results of Box－Behnken experiment1－1 －1 0 12．694 2 1 －1 0 18．467 3－1 1 0 19．91 4 1 1 0 20．857 5－1 0 －1 19．62 6 1 0 －1 18．317－1 0 1 14．427 8 1 0 1 19．507 9 0 －1 －1 18．837 10 01 －1 22．254 11 0 －1 1 15．047 12 0 1 1 20．717 13 0 0 0 22．09 14 0 0 0 21．954 15 0 0 0 20．85二次响应模型的方差分析结果见表7。