11 第十一讲1 植物脱毒技术概述

斑点 十字花科黑斑病
猝倒、棉花立枯病、瓜苗猝 立枯 倒病、水稻烂秧病 萎蔫 矮化 棉花枯萎病、茄科植 物青枯病 玉米矮化病、泡桐丛 枝病、小麦丛矮病
徒长 水稻恶苗病
疮痂
卷叶 马铃薯卷叶病
二、指示植物法 将一些对病毒反映敏感，症状特征显著的植物 作为指示植物，用以检验待测植物体内特定病毒 的存在。 特点：条件简单，操作方便，经济而有效，只 能测出病毒的相对感染力。
四、电镜检测法 运用电子显微镜可直接检测待检植物体内有无
病毒存在，并根据所观察病毒的形态等对病毒种
类进行鉴定。
是较为先进的方法，但需一定的设备和技术。
第三节 无病毒苗的保存和繁殖
通过不同脱毒方法所获得的脱毒植株，经鉴定确系 无特定病毒者，即是无病毒原种。 无病毒植株并不是有额外的抗组织和细胞病变 新陈代谢等生理机能受到干扰 外观表现不正常状态
由于危害可通过营养体传给后 代，病毒对寄主植物可造成毁灭性 危害，导致大幅度减产，甚至全株 死亡。 世界作物生产中，病毒危害程 度仅次于真菌。
甘蔗黑穗病
2006年，这一疾病能使作物的生长速度与收 成降低百分之三十，从而使澳大利亚昆州总值 十五亿澳元的蔗糖产业受到灾难性威胁。 感染黑穗病的作物呈现弯曲状，从作物顶 部朝下呈灰至黑色。
2、热空气处理脱毒法 将植物用35～40℃的热空气处理2～4周或更 长时间。 特点：损伤较小，操作简便，须严格控制温 度时间 适用：多数植物
3、热处理结合茎尖培养脱毒 目前常采用将热处理和茎尖分生组织培养结合 起来的方法脱毒。
特点：既可缩短热处理时间，提高植株成活率，
又可剥离较大的茎尖，提高茎尖培养的成活率和
三、抗血清鉴定法 特异性高，测定速度快，几小时甚至几分钟 就可以完成。植物病毒鉴定中最有用方法之一。 （一）原理 刺激抗体产生蛋白质抗原。抗原与抗体间能发 生高度专一性的血清学反应（免疫反应）
（二）方法 1、叶绿体凝集法 2、块茎沉淀法 3、环形接口法 4、酶联免疫法：用酶标记抗原或抗体的微量 测定法。是灵敏度较高和常使用的方法。
解剖镜下剥去幼叶
切下带1～2个叶原基的生长点（0.3～0.5mm）
切下的茎尖转至培养基上（顶部向上）。
3、培养条件 25+2℃ ，1500-4000LX 4、生根诱导 诱导生根的方法是将2～3cm高的无根苗转 入生根培养基继续培养1 ～ 2个月可生根。
（三）培养基与培养方式 1、培养基：MS， White , Morel等 2、培养方式：一般采用半固体培养基。 （四）影响茎尖脱毒效果的因素（茎尖脱毒技术 的关键） 植物种类、病毒种类、剥离茎尖的大小（0.30.5mm带1-3个叶原基）、培养基营养
叶尖呈浅黄色，有些 品种呈紫色或红色
马铃薯卷 叶病毒 （PLRV）
洋酸菜
（一）草本植物鉴定 1、汁叶涂抹法 被鉴定植物取1～3克幼叶加10ml 水及少量磷酸缓冲液-研碎过滤-加金钢砂作磨擦剂汁液在叶面上涂抹2～3次接种 2、小叶嫁接法 指示植物作砧木，被鉴定植物小 叶作接穗，常用劈接法。 （二）木本指示植物鉴定 直接在指示植物上嫁接待检植株的芽片
几种马铃薯病毒的指示植物及表现症状
病毒种类 马铃薯X病 毒（PVX） 马铃薯S病 毒（PVS） 指示植物 千红日、曼陀罗、 辣椒、心叶烟 苋色藜、千日红、 曼陀罗、昆诺阿藜 表现症状 脉间花叶 叶脉深陷，粗缩
马铃薯Y病 野生马铃薯、洋酸 毒（PVY） 菜、曼陀罗
随品种而异，有些轻 微花叶或粗缩，敏感 品种反应为坏死
二、无病毒苗的繁殖 （一）无病毒苗的繁殖方法 1、嫁接繁殖 2、扦插繁殖 3、压条繁殖 4、匍匐茎繁殖 5、微型薯块繁殖
（二）无病毒苗繁育生产体系
我国农作物无病毒苗繁育生产体系归结为以
下模式：
国家级（或省级）脱毒中心——无病毒苗繁
育基地——无病毒苗栽培示范基地——作物无病毒
化生产
三、无病毒苗的利用 无病毒苗在生产中的利用也要防止病毒的再感 染。 生产场所应隔离病毒感染途径，做好土壤消毒 或防蚜等工作。在此种植区及种植规模小的地方， 要较长时间才会感染。而在种植时间长、轮作及种 植规模大的产地则在短期内就可感染。
另一种更便宜的方法，是把由茎尖得到 的并已经过脱毒检验的植物通过离体培养进 行繁殖和保存。
（二）长期保存 1、低温保存 将无病毒苗原种的器官或幼小植株接种到培 养基上，低温下离体保存，是长期保存无病毒苗 及其他优良种质的方法。只需半年或一年更换培 养基，也叫最小生长法。
2、冷冻保存（超低温保存） 用液氮（-196℃）保存植物材料的方法。 常用冷冻保护剂为DMSO（5-8%）、甘油、 脯氨酸（10%）、各种可溶性糖、聚乙二醇 等。
脱毒率。
适用：大多数植物，并可除去一般培养难以去
除的纺锤块茎类病毒。
三、其他组织培养脱毒方法 （一）愈伤组织培养脱毒 将感染病毒的组织离体培养获得愈伤组织，再诱导愈 伤组织分化成苗，从而获得无病毒植株的方法，即愈伤组 织培养脱毒法。 部分愈伤组织细胞不带病毒可能有以下两方面的原因： ①是愈伤组织细胞分裂增殖速度快，而病毒复制速度 较慢，赶不上细胞的繁殖； ②是愈伤组织发生了抗病毒突变。
部分病毒的木本指示植物及相应症状
病毒种类 苹果褪绿叶斑病 毒 木本指示植物 苏俄苹果 表现症状 叶片出现褪绿斑点，叶小，植株矮 化，长势弱
苹果茎痘病毒
苹果茎沟病毒
司派227或光辉
弗吉尼亚小苹果 兰蓬王、红玉和 金冠 国光 沙地葡萄圣乔治
叶片反卷，植株矮化，皮层坏死
植株矮小，接合部内有深褐色坏死 环纹，木质部产生深褐色纵向条沟
用于脱毒的适宜茎尖大小
植物 病毒名称 马铃薯卷叶病毒 马铃薯Y病毒 马铃薯 马铃薯X病毒 马铃薯G病毒 马铃薯S病毒 斑纹花叶病毒 甘薯 缩叶花叶病毒 羽毛状花叶病毒 剥离茎尖大 小 （mm） 1.0～3.0 1.0～3.0 0.2～0.5 0.2～0.3 0.2以下 1.0～2.0 1.0～2.0 0.3～1.0 植物 百合 鸢尾 菊花 剥离茎尖大 病毒名称 小 （mm） 花叶病 花叶病 各种病毒 0.2～1.0 0.2～0.5 0.2～1.0 0.2～0.8 0.6 0.3～1.0 0.7～3.0 0.2～1.0
马铃薯病毒病
马铃薯新品种推广后，随着种植年限的增 加，产量逐年下降，植株变矮，薯快变小， 并伴有茎叶异常现象，如花叶、叶片卷曲或 皱缩等。这种现象称之为退化。 引起马铃薯退化的主要原因就是病毒病。
花卉
一般来说，病毒侵染花卉后，使花卉表现褪 色、组织坏死和畸形等症状。但是，有些情况， 使花卉的叶和花发生变异而更具有观赏价值。 菊花中的“绿牡丹”,由于受病毒和类菌原体 的侵染，使菊花花冠卷曲，花朵呈绿色，而且通 过无性繁殖，可以保存下来。
第二节 脱毒苗鉴定
一、直接检查法 直接观察待测定植株生长状态是否异常，茎叶 上有无特定病毒引起的可见症状，从而可判断病 毒是否存在。
一些常见病毒病引起的可见病症
症状 病毒病名称 症状 病毒名称
褪绿、黄 小麦黄矮病 化 花叶、斑 烟草花叶病、菜豆花叶病、 驳 黄瓜花叶病 溃疡 枯死 穿孔 杨树溃疡病、柑桔溃疡病， 番茄溃疡病 马铃薯晚疫病、水稻白叶枯 病 桃细菌性穿孔病 柑桔疮痂病、梨黑星病、马 铃薯疮痂病
又被重新感染。所以一旦培育得到无病毒苗，就应很好保
存，这些原原种或原种材料保管得好可以保存利用5～10
年。
一、无病毒苗的保存 （一）隔离保存 通常无病毒苗应种植在隔虫网内，使用300 目，即网眼为0.4～0.5mm大小的网纱，也可用 盆栽。 要求：A、 栽培土壤消毒； B 、周围环境要整洁； C、及时喷施农药防治虫害。
（二）茎尖脱毒方法
1、取样与消毒
可直接选定的植株上取顶芽进行消毒接种。采顶芽与
侧芽消毒接种 。 消毒方法是：剪取顶芽梢段3～5厘米，剥去大叶片，
用自来水冲洗干净，在75%酒精中浸泡30秒左右，用1%
次氯酸钠或5% ～ 7%的漂白粉溶液消毒10 ～ 20min，最
后用无菌水冲洗材料4 ～ 5次。
2、茎尖剥离和接种 将已消毒的芽放在带滤纸的培养皿上
物种
苹果 柑橘 葡萄 草莓 桃 梨
感染病 毒种类 36
23 26 24 23 11
所谓脱毒就是采用一定的方法除去植物体内 病毒的技术。 无病毒苗：指不含该种植物的主要危害病毒， 即经检测主要病毒在植物体内的存在表现阴性
反应的苗木。
第一节 脱毒方法
一、茎尖培养脱毒 （一）通过茎尖培养脱毒的原理 1、病毒在植物体内的分布 离茎尖端越远病毒浓度越高。茎尖或根尖，离体培 养便可获得无病毒再生植株。 2、茎尖大小与脱毒 茎尖外植体的大小与脱毒效果成反比。茎尖分生组织 不能合成自身需要的生长素，但下部叶原基能提供，因而 带叶原基的茎尖生长快，成苗率高。但茎尖越大，脱毒效 果差。
LN33 Baco 22A 110R 河岸葡萄
仅在Kober5BB上会产生茎沟
节间肿大，部分叶片背面出现栓皮 植株矮化，叶片下卷、黄化
叶片背面沿叶脉出现坏死斑，卷须 和嫩梢坏死
褪绿斑，沿脉斑驳，叶片畸形 新叶上出现叶片扭曲，叶缘残缺呈 破碎状
柑橘碎叶病
腊斯克枳橙、特洛 亚枳橙、卡里佐枳 橙和厚皮来檬
（二）珠心胚培养脱毒 柑橘类种子为多胚种子，除具有合子胚外还有珠心胚， 种子一般不带病毒，因此珠心胚植株不易带病毒。 （三）微尖嫁接脱毒 指在人工培养基上培养实生砧木，嫁接无病毒茎尖 （0.1-1.0mm,带3-4个叶原基），以培养脱毒苗的技术。 脱毒程序：无菌砧木培养——茎尖准备——嫁接—— 嫁接苗培养——移植。
一旦感染，影响产量质量的，就应重新采用
无病毒苗，以保证生产的质量。
思考题：
1、植物脱毒方法有哪些? 2、植物脱毒效果的检测方法有哪些？
康乃馨 各种病毒 大丽花 大蒜 甘蔗 草莓 花叶病 花叶病毒 花叶病 各种病毒