对氨基苯甲酰胺中对氨基苯甲酸含量的测定

对氨基苯甲酰胺中对氨基苯甲酸含量的测定作者：王丰莉聂和俊熊永科陈伟强来源：《当代化工》2015年第06期摘要：运用薄层色谱、紫外光谱、红外光谱对对氨基苯甲酰胺中对氨基苯甲酸进行定性确认。

通过条件试验确定HPLC最佳分离条件，用乙酸铵调节缓冲体系，用20%（V/V）的甲醇作为流动相，外标法定量。

对氨基苯甲酸含量在0%～0.28%之间具有线性关系。

验证试验表明方法简单、可行。

可满足对氨基苯甲酰胺中对氨基苯甲酸含量的测定。

关键词：对氨基苯甲酰胺;对氨基苯甲酸;高效液相色谱中图分类号：O 657 文献标识码： A 文章编号： 1671-0460（2015）06-1435-03Determination of 4-Aminobenzoic Acid in p-Amino-BenzamideWANG Feng-li，NIE He-jun，XIONG Yong-ke，CHEN Wei-qiang（Lily Group Co.，Ltd.， Zhejiang Hangzhou 311228，China）Abstract： TLC＼UV＼IR were used to prove the existence of 4-aminobenzoic acid in p-amino-benzamide. The separating conditions were decided by condition tests. The pH of mobile phase was adjusted by ammonium acetate， mobile phase was methanol 20%（V/V）. Quantitative content was determined by external standard method. The results show that 4-aminobenzoic acid （0%～0.28%）in p-amino-benzamide can be determined by this method. The method is simple， rapid， accurate and can meet the requirement for determination of 4-aminobenzoic acid in p-amino-benzamide.Key words： P-amino-benzamide; 4-aminobenzoic acid; HPLC对氨基苯甲酰胺（DB-70）即红色基DB-70，（以下以DB-70表示）是重要的有机颜料中间体，是颜料红170的主要原材料[1]。

DB-70通常以对硝基苯甲酸为原料，经过酰氯化、氨解、还原反应制成[2]。

对氨基苯甲酸易在氨解过程产生，它能够与DB-70一起重氮化，与偶合组分偶合生成有色物质，对颜料的纯度、颜色性能甚至应用性能等产生影响。

并且其本身为双官能团化合物，也可以与芳胺类偶合，生成偶氮染料[3]和偶氮颜料[4]。

因此测定其中对氨基苯甲酸的含量对生产应用具有重要意义。

DB-70中对氨基苯甲酸含量通常用薄层色谱法测定。

该法萃取及分离时间较长，显色需经过重氮化、偶合反应，容易产生有毒氮氧类气体;并且使用高浓度的酸，产生酸雾，对测试环境及操作者造成不良影响。

依靠斑点的大小及颜色的深浅判定含量，量化准确度较差。

化妆品中的对氨基苯甲酸类物质色谱法测定已有报道[5]。

本文把高效液相色谱法应用于DB-70中对氨基苯甲酸的测定，用外标法进行定量。

测试快速、结果准确，过程安全，环保。

1 实验部分1.1 仪器与试剂1.1.1 试剂DB-70（工业样品）;对氨基苯甲酸标准品;甲醇（色谱纯）;乙酸铵、异丙醇、甲苯、氨水、亚硝酸钠、盐酸、N-（1-萘基）-二氯乙二胺均为分析纯试剂;GF254薄层硅胶板（制备板）。

1.1.2 仪器三用紫外分析仪（ZF-2）;真空泵（AP-9925）;超声波清洗器（KUDOS）;红外光谱仪（PE SPECTRU TWO）;高效液相色谱仪（LC-20AD，DAD 检测器，ODS C18柱，5 μm×4.6mm×250 mm）。

1.2 试验方法1.2.1 定性试验用TLC方法把DB-70中主杂质进行分离，通过显色找出待测杂质位置。

用硅胶制备板分离出对氨基苯甲酸，制取试验溶液。

同样方法配制对氨基苯甲酸标准品，作为标准溶液。

对试验溶液和标准溶液分别用HPLC和IR测试。

通过HPLC出峰位置，及对应位置峰提取的UV图，以及IR图来确定试验溶液的成分。

1.2.2 定量试验通过条件试验优化流动相组成，选取最佳分离条件。

称取0.5 g样品，用甲醇溶解并定容到50 mL，作为样品溶液。

在选定的HPLC分离条件进行测定。

以对氨基苯甲酸标准品配制标准溶液，用外标法，用峰面积计算其含量。

2 结果和讨论2.1 谱图定性分析2.1.1 HPLC图（图1）图1 标准溶液HPLC图Fig.1 HPLC spectrum of standard sample图2中，试验溶液在～4.1 min出峰（其中～6.2 min的微量峰为DB-70），与图1中对氨基苯甲酸标准品出峰位置吻合。

图2 试验溶液HPLC 图Fig.2 HPLC spectrum of sample2.1.2 UV 吸收结果分别提取图1、图2及图3中～4.1 min处峰对应的UV图，其紫外吸收相同，最大吸收波长均为265 nm。

斑点位置的杂质与对氨基苯甲酸标准品的紫外吸收一致。

2.1.3 IR测试结果用液膜法，在4 000 ～450 cm-1对试验溶液进行扫描。

结果显示，特征峰位置（cm-1）：3 460;3 390;3 360;1 660～1 575;1 355;1 180;845，与对氨基苯甲酸特征峰匹配。

综合2.1.1、2.1.2、2.1.3，可以判定DB-70中主杂质为对氨基苯甲酸。

2.2 DB-70中对氨基苯甲酸含量的测定图3为车间生产的DB-70工业品的HPLC图。

对氨基苯甲酸含量以～4.1 min峰的峰面积，用外标法测定。

图3 DB-70的HPLC图Fig.3 HPLC spectrum of p-amino-benzamide2.2.1 色谱条件的选择在现有仪器条件，通过对流动相的选择优化分离条件。

考虑到DB-70及对氨基苯甲酸结构中含有路易斯酸碱基团，向流动相中加入缓冲盐调节其pH值，使被测物质以单一的形态存在于体系中。

本研究中选择乙酸铵进行调节。

在C18反相色谱中，流动相中有机成分比例对大多数待测组分的保留行为影响较大。

30%（V/V）甲醇作流动相，DB-70与对氨基苯甲酸重叠。

而10%（V/V）甲醇体系中，分离效果较好，但出峰较慢，甚至部分其它杂质成分不能洗出。

考虑分离效果及操作时间，选定20%（V/V）比例的有机相组成。

UV图显示，该体系中对氨基苯甲酸的最大吸收波长为265 nm，DB-70的最大吸收波长271 nm，综合其它杂质成分的紫外吸收特性，选定270 nm作为定量的波长。

最终确定测试的色谱条件为：柱温箱：35 ℃流速：0.8 mL/min流动相：（甲醇：0.2%乙酸铵溶液=20：80，V/V）HPLC图提取波长：270 nm。

2.2.2 测量范围的确定以对氨基苯甲酸的线性范围作为测量范围选择的依据。

图4中，对氨基苯甲酸含量在0～2 800 mg/kg，即不超过0.28%范围内，相关系数达到0.999 1，有很好的线性关系，能满足工业DB-70中对氨基苯甲酸含量测定的需求。

图4 对氨基苯甲酸线性范围Fig.4 Linear range of 4-aminobenzoic acid注释：TLC评级是通过薄层分离显色后，以对照品批次的杂斑点颜色为参考，样品批次的杂斑点与之相比较，根据颜色深浅评定为不同的等级，颜色越深级别越高。

2.2.3 可行性试验同时对5个不同生产批次和1个对照品批次的的DB-70样品中对氨基苯甲酸进行薄层显色评级和本法测定含量进行比较（表1）。

表1中TLC评级与测出的对氨基苯甲酸含量高低相对应，说明该法测定可行。

3 结束语通过标准物质对照，借助UV、HPLC、IR手段确定待测组分为对氨基苯甲酸。

用乙酸铵调节流动相的pH值，以20%（V/V）的甲醇作流动相，能够使DB-70中的杂质完好分离。

用峰面积进行定量，可以快速准确的测定其中对氨基苯甲酸的含量，该法也可推广运用于DB-70中其它杂质成分的测定。

本研究中使用的HPLC使用的DAD检测器，可以用UV检测器，固定检测波长进行测定。

测试中使用的其它试剂、仪器等也比较大众化，宜于测定方法的推广。

参考文献：[1] 周春隆，穆振义.有机颜料化学与工艺学[M].修订版.北京：中国石化出版社，2002：335.[2] 喻素娟，栾永勤，周飞舟，等.对氨基苯甲酰胺合成方法研究[J].化工时刊，1998，12（7）：19-20.[3] Riesz E. Bull. [J].Sc. Inst. Text. Fr. ，1982，11（43）：61-63.[4] Keys B A ， Ouderirk J T. PCT Int. Appl： WO，8910385[P].[5] 张可冬，李慧勇，谭建华，等.高效液相色谱法测定化妆品中9种对氨基苯甲酸及其酯类防晒剂[J].分析试验室，2014，33（9）：1108-1113.。