高效液相色谱法检测葡萄酒中5种人工合成色素方法的探讨_欧阳燕玲
固相萃取-超高效液相色谱法同时测定葡萄酒中的12种合成色素
贵港市疾病预 防控制 中心 ， 广西 贵港 ５ ３ ７ １ ０ ０
摘要 ：目的
建立 同时测定葡萄酒 中的 １ ２种人工合成色素的 固相萃取 一超高效液相 色谱 （ Ｓ Ｐ Ｅ—Ｕ Ｐ Ｌ Ｃ ） 分析 方法 。方
法 葡 萄酒样 品经 Ｏ Ａ Ｓ Ｉ Ｓ ＷＡ Ｘ固相萃取小柱 净化和富集 ， 然后进 行 Ｕ Ｐ Ｌ Ｃ分析 。采用 反相 Ａ ｃ ｃ ｕ ｃ ｏ ｒ ｅ Ｃ 柱 （ １ ０ ０ ｍ ｍ ｘ ４ ． ６ ｍ ｍ， ２ ． ６ ｍ） 分离 ， 以甲醇 一乙酸铵 水溶 液 （ ０ ． ０ ２ ｍｏ ｌ ／ Ｌ ） 为流动 相进 行梯度 洗脱 ， 使 用可 变波 长分 别在 ４ ２ ８ ｎ ｍ、
ｐｈ ａ ｓ ｅ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ— — ｕ ｌ ｔ ｒ ａ ｈ ｉ ｇ ｈ ｐ ｅ ｒ ｆ ｏ ｒ ｍａ ｎ ｃ ｅ ｌ ｉ ｑ ｕ ｉ ｄ ｃ ｈ ｒ ｏ ｍａ ｔ ｏ ｇ ｒ ａ ｐｈ ｙ
ＺＥＮＧ Ｙｏ ｎｇ—ｆ ａ ｎｇ，ＳＵＩ Ｓｈ ｉ— ｉ ，ＬＩ Ｙｏ ｎ
５ １ ０ ａ ｍ、 ５ ６ ０ ｎ ｍ和 ５ ４ ７ ｎ ｍ下进行 检测 。结果 １ ２种合成色素 的线性 关系 良好 ， 相关 系数为 ０ ． ９ ９ ９ ４—１ ． ０ ０ ０ ０ ； 线 性范 围分别 为 ： 柠檬黄 、 苋菜红 、 胭脂 红 、 诱惑 红为 ０ ． ２ ０ ｍｇ ／ Ｌ一 ５ ０ ． ０ ｍｇ ／ Ｌ， 新红、 亮蓝 、 红色 ２ Ｇ、 偶氮 玉 红、 荧 光桃 红 Ｂ为 ０ ． ３ ０ ｍ ｓ ／ Ｌ～５ ０ ． ０ ｍ ｇ ／ Ｌ ， 日落黄 、 赤 藓红 、 虎红 为 ０ ． ５ ０ ｍ ｇ ／ Ｌ～ ５ ０ ． ０ ｍ ｇ ／ Ｌ ； 检 出限为 ０ ． ０ ５ ｍｇ ／ Ｌ一 ０ ． １ ５ ｍ ｇ ／ Ｌ， 加标 回收率 为８ ２ ． ８ ％ ～１ ０ ６ ． Ｏ ％， 相对标准偏差 为 ０ ． ３ ０ ％一 ３ ． ８ ７ ％。结论 非法添加 的 １ ２种人 工合成色素的检测 。 本方法简单 、 快速 、 结果准确 ， 可用 于同时测 定葡萄酒中
超高效液相色谱快速检测葡萄酒中5种合成着色剂
超高效液相色谱快速检测葡萄酒中5种合成着色剂
陈欣欣;谢娅黎;肖汉;杨彬
【期刊名称】《现代食品科技》
【年(卷),期】2009(025)009
【摘要】采用超高效液相色谱同时测定葡萄酒中5种人工合成着色剂(柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、赤藓红).采用ACQUITYUPLC(R)BEHC18色谱柱分离,以甲醇-20mmol/L乙酸铵水溶液为流动相进行梯度洗脱.利用每种色素最大可见吸收波长,在检测过程中变化波长测定各个着色剂以消除杂质干扰,在428nm测定柠檬黄,520nm测定苋菜红,509 nm测定胭脂红,483nm测定日落黄,528 nm测定赤藓红.结果表明,该法简便、快速、重现性好、回收率高.
【总页数】3页(P1099-1100,1098)
【作者】陈欣欣;谢娅黎;肖汉;杨彬
【作者单位】河南省产品质量监督检验院河南郑州450004;河南省产品质量监督检验院河南郑州450004;河南省产品质量监督检验院河南郑州450004;河南省产品质量监督检验院河南郑州450004
【正文语种】中文
【中图分类】TS261.7
【相关文献】
1.食品中6种人工合成着色剂的快速检测 [J], 刘恒;叶梅;朱明星;谭诗珂;曾琳;王艳琴;黄国华
2.测定葡萄酒中合成着色剂含量的不确定度评定 [J], 单祝庚;杨静
3.葡萄酒中合成着色剂检测方法的探讨 [J], 赵烨
4.固相萃取-高效液相色谱法在食品中合成着色剂检测中的应用 [J], 赵俊;刘虹
5.高效液相色谱-二极管阵列法同时测定卷烟爆珠壁材中10种水溶性合成着色剂[J], 李响丽;张凤梅;范多青;蔡昊城;高莉;王庆华;胡燕;李超
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葡萄酒中合成着色剂检测方法的探讨
葡萄酒中合成着色剂检测方法的探讨作者：赵烨来源：《中外食品工业》2013年第11期摘要：目的：提高葡萄酒中合成着色剂检测方法的回收率和精密度。
方法：改进试样前处理过程中的提取步骤。
结果：检测方法的回收率为91.5%-107.2%，测定结果相对标准偏差小于7.2%。
结论：改进后的检测方法操作简便，精密度好准确度高。
关键词：精密度准确度中图分类号：R155.5 文献标识码：A 文章编号：1672-5336（2013）22-0030-02色素（着色剂）作为食品添加剂，可分为食用天然色素和人工合成色素两大类，前者一般较为安全。
人工合成色素是用人工化学合成方法所制得的有机色素，主要是以煤焦油中分离出来的苯胺染料为原料制成的，本身无营养价值，但由于其成本低廉、色泽鲜艳、着色力强、性质稳定、配色方便，可以增加食品的感官美和提高人们的食欲，在食品生产加工行业中被广泛应用。
研究表明过量摄入人工合成色素，将会在体内畜积，对肾脏、肝脏产生一定的伤害。
偶氮化合物在体内代谢，可形成具有潜在致突变的化合物。
因此GB2760-2011《食品添加剂使用标准》中对着色剂的使用范围及限量有明确的规定，葡萄酒中禁止使用。
1 原理试样中的人工合成着色剂用聚酰胺吸附法提取，制成水溶液，注入高效液相色谱仪，经反相色谱分离，根据保留时间定性和峰面积外标法定量。
2 溶剂与材料（1）甲醇：色谱纯。
（2）聚酰胺粉（尼龙6）：过200目筛。
（3）甲醇+甲酸溶液：6+4。
（4）乙醇+氨水+水溶液：7+2+1。
（5）柠檬酸溶液：200g/L。
（6）pH6、pH4的水：水加柠檬酸溶液调pH值。
（7）乙酸铵溶液：0.02mol/L称取1.54g乙酸铵加水定容至1000ml 溶解，调pH=4经0.45μm滤膜过滤。
（8）合成着色剂标准溶液：采用国家标物中心的有证标准溶液。
3 仪器和测定条件（1）高效液相色谱仪：（HPLC）岛津SPD-10Avp配有紫外检测器。
超高效液相色谱法同时测定饮料中5种人工合成色素
Abstract ：Objective: To develop an ultra performance liquid chromatography (UPLC) method for the determination of five
synthetic pigments such as tatrazine, amaranth, carmine, sunset yellow and brilliant blue in beverage. Methods: Synthetic
变宽，柱效降低，且综合考虑检测大量样品时溶剂的 消耗量，本实验选择 0.25mL/min 为最佳流速。在最佳 色谱条件下，对标准样品和实际样品进样分析，结果 见图 1 。
AU
2.00
高效液相色谱法同时测定葡萄酒中5种酸性红色素
Ａｂ ｓ ｒ ｍ ａ ｎ ｃ ｅ ｌ ｉ ｑ ｕ ｉ ｄ ｃ ｈ ｒ ｏ ｍａ ｔ ｏ ｇ ｒ ａ ｐ ｈ ｉ ｃ（ Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ）ｍ ｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｗ ａ ｓ ｄ ｅ ｖ ｅ ｌ ｏ ｐ ｅ ｄ ｆ ｏ ｒ ｓ ｉ ｍｕ ｌ ｔ ａ ｎ ｅ ｏ ｕ ｓ ｌ ｙ
（ １ ． 山东省食 品药 品检 验研究 院 ， 山东 济南 摘 ２ ５ ０ １ ０ １ ； ２ ． 中海油 山东化学工程 有限责任公司 ， 山东 济南 ２ ５ ０ １ ０ １ ）
要： 通过对提取溶剂 、 流 动相条件 、 最大吸收 波长及色谱条件 的优化 ， 建立 了一种 同时测定葡萄酒 中
为１ ． ５ ％ ～５ ． ８ ％。
关键 词 ： 葡萄酒 ； 酸性红 色素 ； 高效液 相色谱
中图分类号 ： ０ ６ ５ ７ ． ７ ２ 文献标识号 ： Ａ 文章编号 ： １ ０ ０ １ — ４ ９ ４ ２ （ ２ ０ １ ４ ） ０ ９— ０ １ １ ７ — ０ ４
Ｓ ｉ ｍｕ ｌ ｔ ａ ｎｅ ｏ ｕｓ Ｄｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｆｉ ｖ ｅ Ａｃ ｉ ｄ Ｒｅ ｄ Ｐｉ ｇ ｍｅ ｎ ｔ ｓ ｉ ｎ Ｇｒ ａ ｐ ｅ Ｗ＿ ｉ ｎ ｅ ｂ ｙ Ｈｉ ｇ ｈ Ｐｅ ｒ ｆ ｏ ｒ ｍａ ｎ ｃ ｅ Ｌｉ ｑ ｕ ｉ ｄ Ｃｈ ｒ ｏ ｍａ ｔ ｏ ｇ ｒ ａ ｐ ｈ ｙ
Ｗａ ｎ ｇ Ｙ ａ ｎ ｌ ｉ ， Ｊ ｉ ａ ｎ ｇ Ｔ ａ ｏ ，Ｓ ｕ Ｓ ｈ ｕ ￣ｎ ｇ ，Ｙ ｕ Ｗｅ ｎ ｊ ｉ ａ ｎ ｇ ， Ｘ ｕ ｅ Ｘ ｉ ａ
（ １ ． Ｓ ｈ ａ ｎ ｄ ｏ ｎ ｇＩ ｎ ｓ ｔ ｉ ｔ ｕ ｔ ｅ ｆ ｏ ｒＦ ｏ ｏ ｄ ａ ｎ ｄＤｒ ｕ ｇ Ｃ ｏ ｎ ｔ ｒ ｏ ｌ ， ／ｎ Ｊ ａ ｎ ２ ５ ０ １ ０ １ ，Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ； ２ ． Ｃ Ｎ Ｏ Ｏ Ｃ Ｓ ｈ ａ ｎ ｄ ｏ ｎ ｇ Ｃ ｈ ｅ ｍ ｉ ｃ ａ ｌ Ｅ ｎ ｇ ｉ ｎ ｅ ｅ ｒ ｉ ｎ ｇ Ｃ ｏ ． ， Ｌ ｔ ｄ ． ， Ｊ ／ ｎ ａ ｎ ２ ５ ０ １ ０ １ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
高效液相色谱法测定葡萄酒中人工合成色素
关键 词 ：高效液相 色谱 法 ；葡萄 酒 ； 柠 檬黄 ；苋菜红 ；胭脂 红 ；日落黄
中图分 类号 ： Ｔ Ｓ ２ ６ １ ． ７ 文 献 标 志 码 ：Ａ
由于葡 萄酒生 产 工 艺决 定 ， 葡 萄 酒 的 生产 需 要
一
个较 长 的酿制过 程 ．一些 生产 厂商 为 了快 速谋 取
ＯＤ Ｓ — Ｃ。 色谱 柱 ， 甲醇和 ０ ． ０ ２ ｍｏ ｌ ／ Ｌ 乙酸 铵 的 水 溶 液 为 流 动 相 进 行 梯 度 洗 脱 ， 流速为 ０ ． ８ ｍＬ ／ ｍｉ ｎ，
采 用 紫外检 测 器 ， 检 测波 长为 ４ ７ ０ ｎ ｍ．该 方法测 定结 果的相 对标 准偏差 小于 ３ ％（ ｎ＝ ６ ） ， 平均 回收
纯 水．
Ｓ ｈ ｉ ｍａ ｄ ｚ ｕ １ ０ Ａ ｖ ｐ型 高效 液 相 色 谱 仪 ， 日本 岛 津 公 司 ；Ｏ Ｄ Ｓ — Ｃ 型 液 相 色 谱 柱 （ １ ５ ０ ｍ ｍ ×４ ． ６ ｍ ｍ， ５
Ｉ ｘ ｍ） ， Ｇ Ｌ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ公 司 ； ０ ． ４ ５ ｍ 水 相针 管 滤膜 ，
液相 色谱法 ， 并取 得 良好 效果 ．
１ ８ ． ０ ０ ｍｉ ｎ ， Ｖ （ Ｂ相 ） 为９ ８ ％； 紫 外 检 测 器 检测 波 长
４ ７ ０ ｎ ｍ．
收 稿 日期 ： ２ ０ １ ２—０ ７—０ ７ 作者简介 ： 宗万里 ， 男， 工程 师 ， 主要 从 事 食 品 检 测 方面 的研 究
第３ １ 卷 第 ２期
５ ８ ２ ０１ ３年 ４月
食 品 科 学 技 术 学 报
Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ｆ ｏ ｏ ｄ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ａ ｎ ｄ Ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ
高效液相色谱法测定蜜饯中的合成着色剂
高效液相色谱法测定蜜饯中的合成着色剂张建炀【摘要】采用了用高效液相色谱-二极管阵列法测定蜜饯中的5种合成着色剂.用Symmetry C18柱,甲醇-乙酸铵溶液(0.02 mol/L)为流动相,流速1.0 mL/min,二极管阵列检测器选择柠檬黄428 nm、苋菜红520 nm、胭脂红510 nm、日落黄485 nm、亮蓝629 nm波长进行检测,并以保留时间和光谱图定性,同时比较了不同前处理方式对测定结果的影响.不同样品的加标回收率为85%～92%.【期刊名称】《凯里学院学报》【年(卷),期】2010(028)003【总页数】3页(P63-65)【关键词】高效液相色谱;二极管阵列法;蜜饯;合成着色剂【作者】张建炀【作者单位】黔东南州质量技术监督检测所,贵州,凯里,556000【正文语种】中文合成着色剂即人工合成的色素,作为食品添加剂广泛用于各类食品,国家对其使用有明确的限量标准.合成着色剂的滥用会对人体造成不同程度的危害,包括一般毒性、致泻性、致突性与致癌作用.国标 GB/T 5009.35-2003中介绍了饮料、配制酒类、糖果蜜饯、巧克力豆及着色糖衣制品等产品的前处理方法,并用梯度洗脱,紫外检测器在254 nm波长处测定各合成着色剂的含量,用该方法处理部分蜜饯样品,样品中的果胶容易堵住 G3垂融漏斗,且在254 nm波长处,亮蓝的色谱吸收较弱,不能很好的进行定量.本文主要研究了蜜饯样品不同的前处理过程,并用高效液相色谱二极管阵列检测器的3D数据采集功能对各种合成着色剂进行测定,简单快速,结果准确,适用于食品安全监控.Waters高效液相色谱Alliance系统(E2695、2998 PDA检测器),Empower 2软件,超声波清洗器,真空泵.20%乙醇-氨水溶液(99+1),乙酸铵溶液(0.02 mol/L),合成着色剂标准溶液(国家标准物质),实验室用水为超纯水.色谱柱,Symmetry C18 4.5 mm×150 mm,5μm;柱温30 ℃;流动相,甲醇—乙酸铵溶液(0.02 mol/L);流速 1 mL/min;检测波长,PDA 200～700 nm扫描;梯度洗脱,甲醇:20%～35%,3%;35%～80%,9%;80%,5 min;进样量10μL.a.按 GB/T 5009.35-2003聚酰胺吸附法进行处理[1].b.粉碎或剪碎后,称取10.00 g左右样品,加入20%乙醇 -氨水溶液 20 mL,超声波提取10 min,将上清经塞有玻璃纤维的漏斗抽滤,并用30～50 mL 20%乙醇—氨水溶液少量多次洗涤样品过滤,并合并滤液至烧杯,并用少量水多次清洗抽滤瓶,清洗液并入烧杯,将烧杯置电热板蒸发溶剂至30 mL左右,调p H至6.0,并按a方法进行处理.将柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、亮蓝的国家标准溶液配制成50.0μg/mL的混标,并稀释成1.00,5.00,10.00,20.00,50.00μg/mL的标准系列;选择柠檬黄 428 nm、苋菜红 520 nm、胭脂红510 nm、日落黄485 nm、亮蓝629 nm波长处进行定量根据保留时间及光谱定性,外标峰面积法定量.由图1可见,5种合成着色剂在200～700 nm波段中的最大吸收值所在波长分别为柠檬黄428(258)nm、苋菜红 520 nm、胭脂红510 nm、日落黄485(236)nm、亮蓝629 nm.波长越接近末端吸收波长200 nm,吸收光谱干扰越大,因此选择柠檬黄的最佳波长为 428 nm,日落黄的最佳波长为485 nm.为了进一步确认方法的专属性,在建立分析方法的过程中,利用了二极管阵列检测器的特性,还进行了峰纯度考察.经过试验,证明所有目标峰的纯度均大于纯度阈值,且纯度角均接近于0,即所有目标峰的光谱一致性均很理想,可以确保测定结果的专属准确.传统的液相色谱法通常使用保留时间进行定性.但是在复杂样品的分析中容易产生假阳性的结果.因此本文利用了二极管阵列检测器的优势,使用标准品溶液建立了光谱库,随后在样品测定中进行了光谱匹配,相对单一的保留时间定性,杜绝了假阳性误判的可能性,使得结果更为可靠.配制1.00,5.00,10.00,20.00,50.00μg/mL的标准溶液进行测定,以质量浓度ρ(μg/mL)对峰面积做标准曲线,回归方程和相关系数见表1.由表 1可知,5种合成着色剂在 1.00～50.00μg/mL范围内线性关系良好.取5份含合成着色剂的不同样品,用国标法即a方法和改进后的b方法处理样品后测定含量,结果见表2.配对比较显著性检验结果,p＞0.05,表明两法测定结果无显著差异,因此可采用本文试样处理b法替代国标法的样品处理,且能很好解决蜜饯样品前处理时果胶容易堵塞 G3垂融漏斗的问题.取2个代表性样品,制样后每个样品各取2份,其中一份加入合成着色剂标准溶液,混匀后按试样处理b方法测定其含量并计算回收率(见表3).结果表明,回收率在85%～92%之间,符合国标规定的加标回收率在70%～95%[2]的要求.本文采用20%乙醇—氨水溶液溶液洗脱蜜饯样品中的合成着色剂,再进行聚酰胺吸附分离,解决了样品前处理时果胶容易堵住 G3垂融漏斗的问题,且用二极管阵列检测器的3D数据采集功能对5种常用合成着色剂进行测定,用光谱匹配杜绝了假阳性的出现,同时采用各成分的最佳吸收波长进行定量,提高了数据的准确性,适用于蜜饯类食品的合成着色剂测定.【相关文献】[1]中华人民共和国卫生部,中国国家标准化管理委员会.食品卫生检验方法理化部分[S].北京:中国标准出版社,2004.[2]王竹天,杨大进,吴永宁,等.食品卫生检验方法(理化部分):注解(下)[M].北京:中国标准出版社,2008.。
运用高效液相色谱测定葡萄酒中的添加剂
运用高效液相色谱测定葡萄酒中的添加剂作者：来源：《食品界》2017年第04期在科学技术快速发展的背景下，许多新的检测技术和检测方法被广泛应用在食品安全检测中，有利于从技术层面保障食品的健康。
当前有不同类型的检测方法可以分别测定葡萄酒中的甜味剂、色素、防腐剂等，但是这些方法需要花费较长的检测时间，检测程序相对繁杂，不能同时快速测定葡萄酒中不同类型的添加剂。
高效液相色谱作为一种全新的检测方法，将其应用于葡萄酒的测定中，可以很好地检测出酒中的添加剂，达到良好的测定效果。
高效液相色谱法概述对于高效液相色谱法而言，其也称之为近代柱色谱、高分离度液相色谱、高速液相色谱、高压液相色谱等，可分为亲和色谱、离子色谱、吸附色谱、体积排阻色谱、分配色谱等类型，指的是在分析化学和生化中经常采用的柱层析仪。
作为色谱法中的重要内容，高效液相色谱是以液体为流动相，借助高压输液系统，在装有固定相的色谱柱中泵入不同比例的缓冲液、混合溶剂或不同极性的单一溶剂，当柱内的成分进行分离后加以检测，有效分析试样。
该方法可以及时准确解决不同学科领域中的数据问题，如法检、商检、工业、化学、农业、医学等，逐渐成为重要的分离分析技术。
材料与方法仪器设备和材料、试剂。
本实验中采用的仪器设备主要是沃特世高效液相色谱仪ACQUITY UPLC H-Class Bio、二极管阵列检测器、自动进样器。
而实验中使用的10份葡萄酒样品规格为750mL，试剂为0.5mg/mL的赤藓红、胭脂红、柠檬黄、苋菜红、日落黄与1.00mg/mL的诱惑红，纯度为99.5%的对羟基苯甲酸丁酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸甲酯、苯甲酸，纯度为99.9%的糖精钠、对羟基苯甲酸乙酯，纯度为91%的靛蓝与纯度为99%的山梨酸和安赛蜜，纯度为92%的新红。
仪器条件和样品处理。
（1）仪器条件。
首先是色谱条件。
本实验选用的色谱柱为ACQUITY UPLC 1.7μm，柱温为30℃，流速是1.0mL/min，而进样量为10μL，流动相为20mmol/L 乙酸铵-甲醇，检测波长涉及630nm的亮蓝、425nm的柠檬黄、515nm的诱惑红、日落黄、胭脂红、苋菜红等，下表1表示的是洗脱梯度。
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[作者简介] 欧阳燕玲(1967-),女,学士,副主任检验师,主要
从事理化检验工作。
【化学测定方法】
高效液相色谱法检测葡萄酒中5种人工合成色素方法的探讨
欧阳燕玲,谢维平,陈春祝
(福建省泉州市卫生防疫站,福建泉州 362000)
[摘要] 目的:建立葡萄酒中5种人工合成色素H PLC 检测新方法。
方法:采用梯度洗脱,利用每种色素最大可见吸收
波长,在检测过程中变化波长测定各色素。
结果:本法R SD 为2183%~3198%,回收率95%~99%。
结论:用于大批量的葡萄酒样测定,其干扰小,灵敏度高,线性范围好,精密度和准确度良好,结果满意。
[关键词] 高效液相色谱法;葡萄酒;人工合成色素;梯度洗脱;最大可见吸收波长
[中图分类号] O 65717+2 [文献标识码] A [文章编号] 1004-8685(2005)10-1218-02 近年来,高效液相色谱法(H PLC)是测定人工合成色素的首选方法之一,我们在国标的基础上简化了前处理步骤,建立了一种适用于葡萄酒基质测定人工合成色素的H PLC 方法,用甲醇-醋酸铵缓冲溶液为流动相进行梯度洗脱,充分利用每种色素最大可见吸收波长,在检测过程中变化波长测定各色素,避免了国标中采用单一波长254n m [1]繁琐的前处理,减少了提取过程的损失。
1 材料与方法
111 仪器与试剂
Beck m an125高效液相色谱仪带二极管阵列检测器(Beck -m an 公司,美国);色谱工作站:32K arat510;超声波清洗器;UU p w -25N 超纯水系统;微量进样器。
标准工作液为国家标准物质稀释而成;醋酸铵(HPLC 级);甲醇(HPLC 级);实验用水为超纯水。
112 高效液相色谱条件
色谱柱为Sy mme try shield R P18反相色谱柱(416mm @250mm @5L m );流动相采用0105m o l/L 醋酸铵A -甲醇B ;根据每种人工合成色素最大可见吸收波长考虑选择变化波长进行检测;梯度洗脱条件(见表1);流速112m l/m i n ;进样量10L ;l 柱温30e ;光谱采集210~600nm 。
表1 梯度洗脱条件时间(m i n )
流动相
A(%)
B(%)时间(m in)
波长(n m )
010881210105842111029813152981410
88
12
01043081049811154081410
430
113 标准系列及样品测定
将柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、亮兰各贮备液稀释配制成标准混合液,混合标准溶液的浓度分别为:1100、5100、10100、25100、50100、100100m g /L 。
将样品调节p H =6~7左
右(用柠檬酸或稀氨水)[2],超声波脱气。
分别取上述标准液、样品液各10L ,l 经0145L m 针筒式滤膜过滤,微量注射器进
样,注入H PLC ,起动时间程序,每组分均在最大可见吸收波长下检测,按保留时间和光谱图定性,峰面积定量,以峰面积对浓度作图,计算回归方程,外标法定量。
分析运行14m i n ,平衡14m i n 。
2 结果与讨论211 流动相的选择
经试验采用梯度洗脱,在10m i n 甲醇从12%递增到42%,以3%/m in 增加,之后在1m i n 内由42%递增至98%,以98%继续洗脱215m i n 。
通过调整流动相比例,各峰分离完全,且峰形良好,保留时间稳定。
各色素混合标准溶液(5010mg /L )的色谱图如图1所示。
图1 柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、亮兰
标准溶液(5010m g /L)色谱图
11柠檬黄;21苋菜红;31胭脂红;41日落黄;51亮兰
212 HPLC 测定波长的选择
采用二极管阵列检测器,可以实现多个波长变化检测,用二极管阵列检测器采集210~600n m 光谱图,各色素最大可见吸收波长:柠檬黄430n m,苋菜红520n m,胭脂红510n m,日落黄490n m,亮兰408n m (210~600n m )。
由此来相应采用具体测定波长,0~8m in 是柠檬黄出峰,本文用430n m,8m i n 后出峰顺序是苋菜红、胭脂红、日落黄,综合考虑苋菜红、胭脂红、日落黄最大可见吸收波长,选用498n m,适合这3种色素,3种色素在此波长均有较大灵敏度,1115m i n 后改用408n m,它是亮兰600nm 内灵敏度最高的波长。
采用254n m 和430n m 通道的一实际样品和样品加标测定色谱图如图2所示,由图2可见430n m 波长杂质峰明显变少,干扰变小,谱图清晰,可避免因干扰峰存在而掩盖样品色素峰。
国标中采用单
一波长254n m 检测,在此波长下很多化学组分均有吸收,造成大量的干扰峰,一些色素峰难以从干扰峰中辨别出。
采用每一组分的可见最大吸收波长进行检测可避免此缺陷,无颜色成分不会吸收,增加了灵敏度,
前处理也随之大大简化。
图2a 采用本法通道430n m 测定一实际样品的色谱图
11柠檬黄;21
苋菜红
图2b 采用通道254n m 测定一实际样品的色谱图
11柠檬黄;21
苋菜红
图2c 采用本法通道430n m 测定一实际样品加标的色谱图11柠檬黄;21苋菜红;31胭脂红;41日落黄;51
亮兰
图2d 采用通道254n m 测定一实际样品加标的色谱图11柠檬黄;21苋菜红;31胭脂红;41日落黄;51亮兰
213 光谱定性
由于采用二极管阵列检测器,可以采集210~600n m 光谱图,利用其光谱信息、光谱匹配度对色谱峰进行可靠的定性,避免了仅靠保留时间定性所引起的错误,本实验选用310~600nm ,避开了受杂质影响大的254n m 以下波长。
在较低
浓度(1100mg /L )仍有较好的光谱匹配度,这也才使前处理的简化成为可能。
214 方法的线性范围和检出限
在110~100100m g /L 范围内响应值与人工合成色素浓度呈良好线性关系,以Y 表示浓度,X 表示峰面积,回归方程为:柠檬黄Y =3452218X +9823145,相关系数r =019996;苋菜红Y =2092913X +5503121,r =019998;胭脂红Y =2312715X +1772212,r =019996;日落黄Y =2227713X +1058316,r =019999;亮兰Y =7062117X +2969162,r =019995。
6种标准曲线相关系数在019995~019999。
根据信噪比S /N =3计算检出限,柠檬黄01021m g /L,苋菜红01062mg /L,胭脂红01050mg /L,日落黄01048mg /L,亮兰0112mg /L 。
215 精密度试验
取一葡萄酒样品加标(50m g /L),按上述方法进行重复测定(n =6),计算精密度,其相对标准偏差(RSD )分别为:柠檬黄3101%,苋菜红3140%,胭脂红2183%,日落黄3146%,亮兰3198%。
216 加标回收率试验
加入高(8010mg /L )、低(1010mg /L )含量标准,按本法测定,计算回收率在95%~99%之间,符合方法学要求(见表2)。
表2 加标回收试验结果(n =3)
项目
本底值(m g /L)加标量(m g/L )测定值(mg /L)回收率(%)柠檬黄
9181010191196158010
87159714苋菜红1216101021199619801091119814胭脂红01010109179710801079129910日落黄01010109169610801079119819亮兰
010
101091595108010
7617
9519
217 方法的实际应用及样品测定结果
采用本方法对我市大批量的葡萄酒抽样测定,其干扰小,灵敏度高,测定结果表明,与国标法结果基本一致,无显著性差异。
3 小结
采用本方法梯度洗脱,变化波长测定葡萄酒中色素,充分利用各色素最大可见吸收波长,灵敏度高,受杂质峰干扰小的特点,样品峰得到很好的分离,预处理步骤简单,损失少,方法
稳定,线性范围好,精密度和准确度均获得满意的结果,能满足葡萄酒样的分析要求,很有实际应用价值。
[参考文献]
[1]GB /T5009135-20031食品卫生检验方法#理化部分(一)[S ]1[2]谷岩,曲明1高效液相色谱法测定饮料的食用色素[J]1化学分析
量,2004,13(1):42-431
(收稿日期:2005-06-16)。