薄层层析分离方法
薄层层析法
2 展开操作
展开操作是在密闭的容器中进行的,根据薄层板的 大小，选择不同的层析缸，配好展开剂，将展开剂 （一般2-10mL）倒入层析缸，密闭放置一定时间， 待层析缸被展开剂饱和后（目的是防止边缘效应的 产生），再迅速将薄层板放入（注意：切勿使溶剂 浸没样品点，展开剂浸入薄层高度约0.5mm即 可），密闭，展开即开始。当溶剂移动到接近薄板 上端边缘时，取出薄板，画出溶剂前沿。
1、吸附剂
薄层层析最常用的吸附剂有氧化铝和硅胶等， 由于吸附剂的吸附能力有强有弱,吸附力弱的 对化合物的吸附就不甚牢固。这就是吸附层 析能分离不同物质的基本原理之一。
吸附力强弱与吸附剂本身的性质和被吸附的 化合物的性质有关。
吸附剂：吸附剂的选择常是分离工作成败 的关键，对吸附剂的选择与要求和吸附柱层 析相同。要求小于250目,并要求粒度均匀。 用于薄层层析的吸附剂或予制薄层一般活度 不宜过高，以Ⅰ-Ⅲ级为宜，而展开距离则 随薄层的粒度粗细而定，薄层粒度越细展开 距离相应缩短。一般不超过10cm。否则可
第八章 色谱分离技术 第四节 薄层层析法
薄层色谱法（Thin-Layer chromatography. 简写 TLC）是一种简便、快速、微量的层析 方法，一般是将某种吸附剂或支持剂均匀地 铺在玻璃板上,形成一个薄层而进行层析的一 种方法。广泛地用于化学成分的分离、精制、 定性鉴定和含量测定。其原理与柱层析基本
选择展开剂的原则是:若被分离的成分亲水性较强时，则 展开剂的极性也应较强。反之，成分亲脂性强，而展开 剂的亲脂性亦应较强。
中药薄层层析的操作方法
中药薄层层析的操作方法
中药薄层层析是一种常用的分离和鉴定中药有效成分的方法。
下面是中药薄层层析的操作方法：
1. 准备样品：将中药研磨成细粉，取适量样品称重。
2. 准备薄层板：将薄层板切成适当的大小，并在一侧标记样品的名称和位置。
3. 准备展开剂：将适量的展开剂溶解在合适的溶剂中，制备展开液。
4. 展开薄层板：将薄层板的标记面放在水平的工作台上，用玻璃棒均匀涂抹展开液，形成均匀的展开层。
5. 样品施加：将准备好的样品溶液或浸膏用微量注射器或毛细管均匀滴在展开层上。
6. 开始层析：将薄层板放入层析槽中，加入适量的层析剂，使液面高度超过薄层板的高度。
7. 进行层析：待溶剂渗透至展开层顶部后，取出薄层板，迅速晾干。
8. 显色：将晾干的薄层板放入显色槽中，使用合适的显色剂进行显色，使样品
斑点显现。
9. 分析结果：观察显色后的薄层板，记录样品斑点的颜色、形状和相对迁移距离等信息。
10. 鉴定成分：通过比对样品斑点与已知标准品斑点的色谱行为和颜色等特征，鉴定中药中的有效成分。
需要注意的是，中药薄层层析的操作过程需要严格控制温度、时间和药液浓度等因素，以保证分离和鉴定的准确性和可重复性。
同时，还要注意安全操作，避免有毒溶剂的接触和吸入。
薄层色谱层析操作规程
薄层色谱层析操作规程1. 引言薄层色谱（TLC）是一种常用的分离和分析技术，适用于有机物和天然产物的检测、纯化和鉴定。
本操作规程旨在提供一种标准化的TLC操作步骤，以确保结果的准确性和可重复性。
2. 实验材料和仪器设备•薄层色谱板：选择合适的固定相和基底材料的薄层色谱板。
•检测溶剂：根据需要选择合适的溶剂，常用的有乙醚、醋酸乙酯、甲醇、正己烷等。
•样品：准备待测物的溶液或提取液。
•试剂：例如显色剂、定位剂等。
•色谱槽：用于放置色谱板的槽状容器。
•喷雾开发箱：用于显色和可视化样品。
3. 操作步骤3.1 准备工作1.检查薄层色谱板是否完整，如有损坏需更换。
2.在色谱板上使用铅笔标记出样品和参比物的位置。
3.2 样品处理1.准备待测物的溶液或提取液，并将其过滤以去除杂质。
2.如需测定混合物中的成分，可先进行分离提取。
3.3 上样1.使用微量锥或玻璃管在标记位置上均匀地涂抹样品。
2.上样后务必避免接触色谱板其他区域。
3.4 开发1.将色谱板放置在色谱槽中，加入适当的检测溶剂。
注意溶剂的选择应根据待测物的性质和溶解性来确定。
2.等待溶剂上升至足够高度，将色谱板取出并迅速标记并扫描涂点位置。
3.5 显色和观察1.将色谱板放入喷雾开发箱中，并加入适当的显色剂。
2.等待显色剂完全插入后，将色谱板取出并进行观察。
3.6 数据处理1.使用适当的测量工具，如图像分析软件，测量色谱带的迁移距离和Rf值。
2.进行定性和定量分析，根据需要绘制色谱图。
4. 安全注意事项1.使用化学品和有机溶剂时必须戴上防护手套和防护眼镜，以防止溅入眼睛或与皮肤接触。
2.所有操作需在通风良好的实验室中进行，避免吸入有害气体。
3.注意操作时避免产生火源，如禁止吸烟和使用明火。
4.做好废弃物的处理工作，避免对环境造成污染。
5. 结论本操作规程提供了一套标准化的薄层色谱层析操作步骤，涵盖了样品准备、上样、开发、显色和观察、数据处理等关键步骤。
通过遵守操作规程和安全注意事项，可以准确、高效地进行薄层色谱层析实验，并获得可靠的结果。
实验柱层析和薄层层析
实验柱层析和薄层层析层析法是通过分离混合物组分的一种方法，主要有柱层析和薄层层析两种。
本文将介绍它们的原理、步骤和应用。
实验柱层析原理实验柱层析是一种液相色谱分离技术，基于混合物组分在固定相和流动相之间相互分配的差异进行分离。
实验柱层析一般采用正交试验法，即通过改变柱填料、流动相、流速和溶质质量浓度等参数，以缩小响应面，得到最佳分离条件。
步骤1.选择合适的柱径和柱高，并选用合适的柱填料。
2.准备流动相，并过滤除杂质。
将柱填料与流动相充分浸泡，使柱填料达到平衡状态。
3.将混合物加到柱顶，并开始淋洗。
此时各组分在流动相和固定相之间交替分配，被固定相吸附或溶解，同时前进，终于分离。
4.根据检测结果，确定样品组分并计算出分离效果和纯度。
应用实验柱层析作为一种分离技术，广泛应用于医药、化学、生物学等领域。
常见的应用包括：1.分离蛋白质、核苷酸等生物大分子。
2.对化合物进行分离、纯化和定量分析。
3.分离和提取天然产物和药物。
薄层层析原理薄层层析是一种比较简单、快速的分离方法，其原理与柱层析类似，只是采用了薄层硅胶或氧化铝等作为固定相，可直接对液态和固态样品进行分离。
步骤1.准备薄层柱。
2.准备固定相毛细管与混合样品。
3.在薄层柱上涂上一层液态固定相，然后将其晾干。
4.将样品分别点于薄层柱的一端，放入发展槽中，加入足量发展剂。
5.等到液面距离薄层柱顶端约0.5cm时取出，划线，停发展，晾干。
6.在笼罩于发展剂蒸汽中的小钵中烘干至静止。
应用薄层层析作为快速分离、纯化和检测生物和化学样品的一种常用手段，其应用包括：1.对合成的物质进行纯化和分离。
2.植物药的含量测定。
3.对复杂化学物质进行溶剂系统选择和定性分析。
实验柱层析和薄层层析都是常见的层析法，虽然原理类似但有各自的优缺点和应用场景。
在实际应用中，需要根据具体的分离任务选择合适的方法。
TLC（薄层层析色谱）技巧[资料]
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TLC（薄层层析色谱）技术原理与应用一、薄层层析（TLC）简介薄层层析是将吸附剂或者支持剂（有时加入固化剂）均匀地铺在一块玻璃上，形成薄层。
把欲分离的样品点在薄层上，然后用适宜的溶剂展开，使混合物得以分离的方法。
由于层析在薄层上进行故而得名。
薄层层析是一种微量、快速的层析方法。
它不仅可以用于纯物质的鉴定，也可用于混合物的分离、提纯及含量的测定。
还可以通过薄层层析来摸索和确定柱层析时的洗脱条件。
根据分离的原理不同，薄层层析可以分为两类：用吸附剂铺成的薄层所进行的层析为吸附薄层层析，吸附薄层中常用的吸附剂为氧化铝和硅胶；用纤维素粉、硅胶、硅藻土为支持剂铺成的薄层，属于分配薄层层析。
吸附TLC→固定相为吸附剂→氧化铝、硅胶。
（较多用）TLC→分配TLC→固定相为液态（通常为水）→固定相吸附在支持剂上。
（一）吸附薄层的基本原理：吸附薄层主要是利用吸附剂对样品中各成分吸附能力不同，及展开剂对它们的解吸附能力的不同，使各成分达到分离。
吸附作用主要由于物体表面作用力、氢键、络合、静电引力、范德华力等产生。
吸附强度决定于吸附剂的吸附能力，还受被吸附成分的性质影响，更与展开剂的性质有关。
1.吸附薄层层析：在硅胶薄层板上，样品中的两成分是两种结构近似的染料，在展开剂四氯化碳的作用下。
在展开剂和薄层板之间不断地产生吸附、解吸，再吸附，再解吸，……。
由于对氨基偶氮苯的极性比偶氮苯的极性稍强一些，层析的结果，对氨基偶氮苯受到的吸附作用稍强于偶氮苯，从而将两者分离。
展开结束以后，会在薄层板上形成两个斑点，混合物中的成分得以分离。
中药中的有效成分复杂多样，结构近似者不少。
特别是对未知结构的成分分析，设计并摸索出合理的层析条件是首要任务。
只有先设计出可用的层析条件，再经摸索改进，才可能对未知或者已知成分进行成功地分离。
然后才能谈得上进一步的分析研究。
要设计出合理有效的层析条件，必须熟悉薄层层析条件的选择的基本要领。
下面对薄层层析条件的选择做一初步介绍。
中药化学分离方法及原理
中药化学分离方法及原理中药化学分离方法及原理中药是指源自植物、动物、矿物等天然物质，经过特定的加工方法制备而成的药物。
由于中药中含有大量的化合物，如何从中药中分离出目标化合物成为中药研究的重要一环。
为了实现中药中化合物的分离与纯化，研究者们开发出了多种中药化学分离方法。
本文将介绍常见的中药化学分离方法及其原理。
1.薄层层析法（Thin Layer Chromatography, TLC）薄层层析法是目前广泛应用于中药质控中的一种有效分离方法。
其原理是利用物质在固相上的吸附、分配和迁移的差异实现分离。
首先将待测物溶液点于薄层层析板上的起点位置，然后将层析板放入含有合适溶剂的封闭槽中，溶剂沿着层析板上升，使物质在固相上分离。
待移液行程到一定距离后，取出层析板，晾干后进行检测。
2.离子交换层析法（Ion Exchange Chromatography, IEC）离子交换层析法是一种基于样品中离子与交换相中离子的交换反应进行分离的方法。
其原理是将样品通过带电荷的固定相，利用样品中离子与交换相中离子的交换反应，实现目标化合物的分离。
该方法适用于分离具有不同电荷的化合物。
3.凝胶层析法（Gel Chromatography, GC）凝胶层析法是一种基于样品中化合物分子大小、形状等差异进行分离的方法。
其原理是利用多孔凝胶固体填料，将待测物通过填充柱，随着样品在凝胶中的迁移，分离出不同大小、形状的化合物。
较大分子将在凝胶孔隙内扩散较快，迁移速度较快，而较小分子则相反。
4.对流层析法（Column Chromatography, CC）对流层析法是一种适用于大量样品处理的常用分离方法。
其原理是将待测物样品通过填充在玻璃柱中的吸附剂，利用吸附剂对化合物的吸附能力不同进行分离。
通过在柱上加入适量的溶剂，使样品在柱中进行逐渐分离，进而获得目标化合物。
5.气相色谱法（Gas Chromatography, GC）气相色谱法是一种基于气相流动状态下化合物在固相或液相填充柱上的分配和迁移差异进行分离的方法。
五种层析方法和原理
五种层析方法和原理五种层析方法和原理1. 列点 1•新华字典定义：层析方法是一种通过分析物质内部不同成分在不同条件下的分布情况，从而推断物质组成、性质和结构的方法。
•原理：层析方法基于物质成分在固定相和流动相之间的分配行为。
固定相通常是固体或涂覆在固体上的物质，而流动相则是向上或向下流动的溶剂。
2. 列点 2•薄层层析法：–原理：薄层层析法是一种将样品溶解在溶剂中后涂覆在薄层板的表面上，然后通过毛细作用将溶剂上升至薄层表面，样品成分分离的方法。
根据样品成分的亲疏水性质和与固定相的相互作用，不同成分会以不同的速度在薄层板上移动，从而实现分离。
–应用：薄层层析法常用于化学品分析、食品检测和药物分析等领域。
3. 列点 3•气相层析法：–原理：气相层析法是利用气体（流动相）和涂覆在固体或涂覆在固体上的涂层（固定相）之间的分配作用，使样品成分在涂层上分离的方法。
样品经过蒸发后进入气化室，在高温和惰性气体的作用下，样品成分分解为气体状态，然后进入色谱柱，通过不同成分与固定相的相互作用，实现分离。
–应用：气相层析法广泛应用于环境监测、食品安全检测和生物医药领域。
4. 列点 4•液相层析法：–原理：液相层析法是通过溶液中样品成分与固定相之间的相互作用，实现样品分离的方法。
当溶液通过柱子时，样品成分会根据其与固定相的相互作用力的强度和性质不同，在固定相上停留的时间也不同，从而实现分离。
–应用：液相层析法广泛应用于药物分析、食品检测和环境监测等领域。
5. 列点 5•离子交换层析法：–原理：离子交换层析法利用带电粒子（离子）之间的静电相互作用，在一定条件下，使样品中的离子与固定相中的带电粒子发生相互作用，从而实现分离。
不同离子会在不同条件下被吸附或释放，从而实现分离。
–应用：离子交换层析法常用于水质分析、药物分析和环境监测等领域。
通过以上列点方式，我们对五种层析方法的原理和应用作了简要的介绍。
这些层析方法在不同领域的分析和检测中扮演重要角色，为我们获取准确的数据和信息提供了有效手段。
制备与使用薄层层析法分离混合物的方法指南
制备与使用薄层层析法分离混合物的方法指南混合物的分离是化学实验中常见的任务之一。
在分离混合物时，薄层层析法是一种简便有效的方法。
本文将介绍薄层层析法的制备和使用步骤，并提供一些实用的技巧和注意事项。
一、薄层层析法的制备步骤1. 准备薄层层析板：选择合适的薄层层析板，常见的有硅胶薄层板和铝箔支持的硅胶薄层板。
根据实验需要，选择适当的尺寸和厚度。
2. 准备层析溶剂系统：根据待分离混合物的性质选择合适的层析溶剂系统。
常用的有无水乙醇-正己烷、乙酸乙酯-正己烷等。
确保溶剂的纯度和质量。
3. 准备样品溶液：将待分离的混合物溶解在适当的溶剂中，制备样品溶液。
根据实验需要，可以进行预处理，如过滤、稀释等。
4. 准备层析槽：将层析槽清洗干净，并用层析纸或滤纸铺底，以防止溶剂渗漏。
将薄层层析板放入层析槽中，确保其与槽壁紧密贴合。
5. 样品施加：用毛细管或微量注射器将样品溶液施加在薄层层析板的起点处。
注意施加的量要适中，避免溶液溢出。
二、薄层层析法的使用步骤1. 开展层析：将层析槽密封，将其放置在适当的温度下。
待溶剂前端移动到薄层层析板的顶端时，取出层析槽，视觉观察或使用紫外灯照射，标记出前端的位置。
2. 固定层析板：将薄层层析板固定在层析槽中，可使用夹子或胶带固定。
确保薄层层析板不会移动或滑动。
3. 开发层析：将层析槽中的溶剂加入到层析槽中，使其液面浸没薄层层析板的底部。
注意不要让溶剂液面超过薄层层析板的顶部。
4. 可视化分离：待溶剂前端移动到薄层层析板的顶端时，取出层析槽，视觉观察或使用紫外灯照射，标记出前端的位置。
将薄层层析板放置在适当的条件下，等待斑点的形成。
5. 斑点收集：根据需要，可以使用刮刀或玻璃棒将斑点刮下，收集到试管或烧杯中。
注意收集时的卫生和安全。
三、薄层层析法的技巧和注意事项1. 溶剂选择：根据待分离混合物的性质选择合适的溶剂系统，确保其溶解度和分离效果。
2. 层析板处理：在使用前，可以将薄层层析板在烘箱中加热一段时间，以去除潮湿和杂质。
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Thin-layer chromatography
• Thin-layer chromatography and column chromatography and are different types of liquid chromatography.
• The mobile (moving) phase is a liquid. The stationary phase is usually silica or alumina. This phase is very polar.
各种特制薄层
混合薄层 酸碱薄层和pH缓冲薄层 络合薄层 : 用AgNO3。等无机试剂的水溶液 代替水调硅胶糊来铺制络合薄层
涂布固定液的薄层
高效薄层:它是由粒度十分均匀，直径最小为5µm，—般为
10µm左右的硅胶吸附剂，加上高度惰性的粘合剂，铺成质地十分致 密、平滑的高效高层预制板。这种预制板性能极稳定，层析展开后 所得斑点仍保持圆形不拖尾，分离清晰，分离效果极好。理论塔板 高度最小可达12µm，一般在20～30µm。展开3~7cm，理论塔板数可 达数千，为一般薄层的十倍。
A l
A l
A l
A l
A l
OOOOOO
Acidic: -Al-OH Neutral: -Al-OH + -Al-OBasic: -Al-O-
H 2C OC
H 2C H 2C H 2C H 2C
CH2
NH
OC
CH2 CH2 CH2
NH H 2C
CH2 H 2C
CH2 H 2C
CO
CO
HN
CH2 固定相
直线式展开
直线式展开技术可以分为 近水平展开、上行展开、下行 展开、双向展开和水平展开五 种形式，薄层色谱分寓一般样 品多采用上行展开方法。
1．近水平展开 将适量展开剂倾人长方形玻
璃展开槽中，点样后的薄层板 浸入溶剂0.5cm，薄层上端垫 高使薄层与水平成5～10º角，展 开剂由下而上进行展开，这种 方法常用于不含粘合剂的软板 展开．
2．上行展开 流动相沿薄层固定相向上运动
的展开方式。此时薄层板放置的 角度对流动相移动速率和
斑点形状有一定影响。薄层板水 平角度为75º时，对展开最为有利。 这种展开方式适合于含有粘合剂 的硬板展开。
3．下行展开
在展开槽内薄层板上端放置一个盛
展开剂的溶剂槽，用厚滤纸将溶剂引到 薄层板的上端，使展开剂自上而下流动。 下行法中展开剂受重力和毛细管作用双 重影响，因此展开速度较快。由于这种 展开方式采用的装置比较复杂，目前只 有在葡聚糖凝胶板上展开时或纸色谱中 采用．
4 注意事项： 4.1 所用玻璃板应洗净不挂水珠 ，光滑平整。
4.2 铺板要均匀，厚度适宜，并 于室温下晾干后在110℃活化30 分钟，置于有干燥剂的干燥箱或 干燥器中备用。
4.3 点样点一般为圆点，不能太 大。
铺板
铺板用的匀浆不宜过稠或过稀：过稠，板容易
• The principle of operation is the same!
Thin Layer Chromatography
The surface of the plate consists of a very thin layer of silica on a plastic or aluminum backing. The silica is very polar. This is the stationary phase. Spot the material at the origin (bottom) of the TLC plate. Place the plate into a glass jar with a small amount of a solvent in the glass jar. This solvent acts as the moving phase. Remove the plate from the bottle when the solvent is close to the top of the plate. Visualize the spots. Non-polar compounds will be less strongly attracted to the plate and will spend more time in the moving phase. This compound will move faster and will appear closer to the top of the plate. Polar compounds will be more strongly attracted to the plate and will spend less time in the moving phase and appear lower on the plate.
Stationary Phase: Silica (SiO2)
OH
OH
O
OH
OH
OH
Si
Si
O
Si O O
Si O O
O
O
Si O O
Si O O
Si O O
Si O O
Si O O
O O
Si O O
O
Si
O O
Si
O O
Stationary Phase: Alumina
O O H O H O H O H
others unaffected.
Thin-Layer Chromatography: Determination of Rf Values
Rf of component A = dA dS
Rf of component B = dB dS
The Rf value is a decimal fraction, generally only reported to two decimal places
3.2 点样：除另有规定外，用点样器点样于 薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边 2.0cm，点样直径为2—4mm，点间距离约 为1.5—2.0cm，点间距离可视斑点扩散情况 以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤 薄层表面。
3.3 展开：展开室如需预先用展开剂饱和， 可在室中加入足够量的展开剂，并在壁上贴 二条与室一样高、宽的滤纸条，一端浸入展 开剂中，密封室顶的盖，使系统平衡或按正 文规定操作。将点好样品的薄层板放入展开 室的展开剂中，浸入展开剂的深度为距薄层 板底边0.5—1.0cm（切勿将样点浸入展开剂 中），密封室盖，等展开至规定距离（一般 为10—15cm），取出薄层板，晾干，按各 品种项下的规定检测，如需用薄层扫描仪对 色谱斑点作扫描检出，或直接在薄层上对色 谱斑点作扫描定量，则可用薄层扫描法。
• A visualization method can be:
– Ultraviolet light – Iodine vapors to stain spots – Colored reagents to stain spots – Reagents that selectively stain spots while leaving
接涂布于玻璃板上，后者系在固定相中加入 一定量的粘合剂，一般常用10—15%煅石膏 （CaSO4·2H2O在140℃烘4小时），混匀后 加水适量使用，或用羧甲基纤维素钠水溶液 （0.5—0.7%）适量调成糊状，均匀涂布于 玻璃板上。也有含一定展开液或缓冲液的薄
2.3 涂布器：应能使固定相或载体在玻 璃板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄 层。 2.4 点样器：常用具支架的微量注射器 或定时毛细管，应能使点样位置正确集 中。 2.5 展开室：应使用适合薄层板大小的 玻璃制薄层色谱展开缸，并有严密盖子 ，除另有规定外，底部应平整光滑，应 便于观察。
4．二维展开
在正方形薄层板上，在两个垂直的方向
进行基于相同或不同机理的展开．将样品点 在薄层板的一个角上，第一方向展开适当距 离后，取出薄层板，并使溶剂完全蒸发，再 以与原点成90º方向展开。第二方向展开可采 用不同溶剂，也可将薄层板进行化学反应后， 再行第二方向展开，通称双向展开.
二维展开常用于复杂较多组分样品的展
聚酰胺吸附作用原理
O
HO 流动相
Thin-Layer Chromatography: A Two-Component Mixture
solvent front
solvent front
component B
origin mixture
solvent front
component A origin
Increasing Development Time
Reason: the solvent is evaporating as it moves up the plate.
Results: If you don’t remove the plate all of the spots will appear near the top of the plate!!!!! This isn’t a pretty sight and makes it difficult to get good Rf values!
3 操作方法：
3.1 薄层板制备：除另有规定外，将1份 固定相和3份水在研钵中向一方向研磨混 合，去除表面的泡后，倒入涂布器中，
在玻璃板上平稳地移动涂布器进行涂布 （厚度为0.2—0.3mm），取下涂好薄层 的玻璃板，置水平台上于室温下晾干， 后在110℃烘30分钟。即置有干燥剂的 干燥箱中备用。使用前检查其均匀度（ 可通过透射光和反射光检视）。
Visualization Method
• The previous slide shows colored spots. Most of the time, the spots won’t show unless they are visualized!