常见细胞核荧光染料
DAPI标记的原理
DAPI标记的原理，应用以及优缺点一、DAPI的特性DAPI荧光染料是由Dann等人于1971年合成的，共化学名称为4',6-diamidino-2-phenylindole, dihydrochloride (DAPI) 的中文名称是4，6-联脒-2-苯基吲哚，其结构式为是一种常用的荧光染料，分子量为350．3．这种二价阳离于的荧光染料是一种黄色晶体易镕于水，最大溶解度为2．5％．可按高浓度的两价或高价阴离于(硫酸盐离子和磷酸盐离子)所沉淀，其作用机理与溴化乙锭等染色剂的机理类似：DAPI具有与各种来源的、富古A—T碱基对的DNA专一结合的特点．DAPI与DNA形成的复合物发出志强度的浅蓝色荧光．共最大的激发波长为372nm，最大的发射波长为454nm，其荧光可按适当浓度的SO42－加强．DAPI最初是作为一种杀锥虫剂合成的，以后用于DNA的检测．Brunk等和Coleman等人证明了DAPI荧光强度与细胞内的DNA含量呈正比，并指出，在pH4—8范围内，DAPI－DNA 复合物的荧光强度不受pH 变化的影响．用DAPI染色法可以测出2x10－16g DNA。
近年来，DAPI多用于细胞生物学和细胞遗传学的研究，由于死、活细胞的细胞膜对DAPI的通透性不同，极低浓度(0.5ug／ml)的DAPI 就可与死亡细胞的DNA结合，产生明亮而稳定的荧光，所以人们开始把这一理想的话体荧光染科用于微生物、植物和动物细胞的细胞生物学和生物化学的研究。
作为一种新型的DNA荧光染科，它具有专一性强、灵敏度高、稳定性好等特点，而且迄今尚来见到DAPI致癌。
致畸等毒性报告．有文献称之为无毒性荧光染料(Renard，1982)．利用DAPI能与细胞DNA稳定结合这一特性，最近被人们用于干细胞的体内示踪。
如造血干细胞和间充质干细胞的体内移植。
DAPI是一种标记细胞核的荧光染料，因其与dsDNA有高度的亲和力，与DNA结合后会发出强烈的荧光。
核内体定位荧光染料
核内体定位荧光染料
核内体定位荧光染料是一种用于标记和定位细胞核内体结构的荧光染料。
细胞核内体是细胞核内的特定区域或结构，常常与基因表达、DNA修复和转录调控等生物学过程密切相关。
常见的核内体定位荧光染料包括:
1. DAPI（4',6-二胺-2-苯基-indole）：DAPI是一种DNA结合荧光染料，可以顺利穿透细胞膜和核膜，与DNA结合形成蓝色荧光，用于标记和观察细胞核。
2. Hoechst染料：Hoechst染料系列是一类与核酸结合的荧光染料，可用于核内体的定位和染色。
常见的Hoechst染料包括Hoechst 33342和Hoechst 33258。
3. SYTOX染料：SYTOX染料是一类高亲和力DNA结合的荧光染料，可以用于细胞核内运动的核茎环和组蛋白复合物的观察。
4. Acridine Orange（AO）：AO是一种DNA/RNA双链荧光染料，可以用于核内体的定位和染色。
5. propidium iodide（PI）：PI是一种DNA结合荧光染料，用于细胞凋亡、细胞周期和细胞核破裂等核内体相关实验。
这些核内体定位荧光染料能够提供细胞核内体结构的明亮和清
晰的荧光信号，帮助研究人员观察和研究细胞核内体的形态和功能。
hoechst33258染色原理
hoechst33258染色原理Hoechst 33258染色原理及其应用一、引言Hoechst 33258是一种广泛应用于细胞生物学和分子生物学研究中的DNA染色剂。
它能够与DNA结合形成荧光复合物，通过荧光显微镜观察，可以对细胞核进行定位和分析。
本文将介绍Hoechst 33258染色原理及其应用。
二、Hoechst 33258染色原理Hoechst 33258是一种荧光染料，其化学结构中含有两个吡啶环和一个三嗪环。
该染料可以通过静电作用与DNA结合，形成稳定的染色复合物。
Hoechst 33258与DNA的结合是通过静电相互作用和氢键形成的。
静电相互作用是指Hoechst 33258的阳离子部分与DNA 的阴离子部分之间的吸引力。
氢键是指Hoechst 33258与DNA之间氢键的形成，通过吡啶环与DNA中的腺嘌呤碱基之间的氢键相互作用。
三、Hoechst 33258染色的步骤Hoechst 33258染色一般包括以下几个步骤：1. 细胞固定：将待染色的细胞进行固定，常用的方法有甲醛固定、乙醛固定等。
2. 细胞透化：使用适当的透化剂，如Triton X-100等，使细胞膜通透。
3. Hoechst 33258染色：将Hoechst 33258溶液加入到细胞中，使其与DNA结合。
4. 荧光显微镜观察：使用荧光显微镜观察染色结果，Hoechst 33258与DNA结合后产生蓝色荧光。
四、Hoechst 33258染色的应用1. 染色体分析：Hoechst 33258可以用于染色体的分析，通过观察染色体形态和数量的变化，可以研究染色体的结构和功能。
2. 细胞核定位：Hoechst 33258与DNA结合后产生荧光信号，可以用于细胞核的定位。
通过观察荧光信号的位置和强度变化，可以判断细胞核的形态和位置。
3. 细胞凋亡检测：细胞凋亡是一种重要的细胞死亡方式，Hoechst 33258可以用于检测细胞凋亡。
实验室常用染料性能介绍及常用药品试剂和培养基的配制
实验室常用染料性能介绍及常用药品试剂和培养基的配制一、实验室常用染料性能介绍1.苏木精：苏木精是一种常用的组织染料，其主要成分是吡啶类化合物。
苏木精具有很好的亲水性，对细胞核染色效果好，特别适用于观察细胞的核结构和形态。
2.基本蓝1：基本蓝1是一种亲水性染料，也是常用的组织染料。
它能与细胞内核酸结合，使细胞核显色。
基本蓝1在显微镜下观察时呈现出暗蓝色，有良好的穿透性，可以用来观察细胞的核仁、蛋白质沉积等。
3.伊红：伊红是一种细胞染色常用的酸碱指示剂。
它在碱性条件下呈红色，在酸性条件下呈黄色，可以用来染色观察细胞的酸性和碱性成分。
4.甲磺酸伊地洛尔：甲磺酸伊地洛尔是一种常用的荧光染料，可以与细胞膜结合，形成荧光标记的细胞，用于细胞增殖、迁移等研究。
在实验室中，还有很多常用的药品试剂和培养基需要配制。
下面介绍一些常见的配制方法：1.X溶液的配制：X溶液通常是用于细胞培养的培养基中的一种添加剂。
具体的配制方法是将X溶液的粉末称取适量加入适量的去离子水中，搅拌均匀即可。
X溶液可以用于抗菌、抗霉等作用。
2.磷酸缓冲盐水的配制：磷酸缓冲盐水经常用于细胞培养中的一种缓冲液。
配制磷酸缓冲盐水需要称取适量的氢磷酸盐和二氢磷酸盐加入适量的去离子水中，搅拌均匀并调节pH值即可。
3.阿霉素的配制：阿霉素是一种常用的抗生素，常用于细胞培养中的抗菌作用。
阿霉素的配制需要将相应的阿霉素粉末加入适量的溶剂中，搅拌均匀形成阿霉素溶液。
4.LB培养基的配制：LB培养基是著名的富含营养成分的培养基，常用于大肠杆菌等细菌的培养。
LB培养基的配制需要称取适量的草莓粉末、酵母粉末、纯化骨粉和氯化钠加入适量的去离子水中，通过高压灭菌形成LB培养基。
以上仅为常用染料性能介绍及部分常用药品试剂和培养基的配制方法，实验室中还有很多其他药品试剂和培养基需要进行配制或选购，要根据实际需要进行选择和使用。
hochest 染色及流式
hochest 染色及流式Hochest染色及流式染色技术在生物学和医学领域中起着重要作用，其中Hochest染色是一种常用的荧光染色方法。
Hochest染料是一类荧光染料，常用于细胞和组织的核酸染色。
本文将介绍Hochest染色的原理和应用，并结合流式细胞术探讨其在生物研究中的意义。
让我们了解一下Hochest染色的原理。
Hochest染料是一类DNA特异性染料，可以通过与DNA双链结合来发射荧光。
Hochest染料有多种不同的类型，如Hochest 33342和Hochest 33258等。
这些染料都具有很高的DNA亲和力，能够与DNA的碱基序列发生相互作用，从而实现染色的效果。
Hochest染色在细胞和组织学研究中具有广泛的应用。
首先，Hochest染色可以用于检测细胞核的形态和数量。
通过将Hochest 染料与细胞一起处理，可以使细胞核发出荧光信号，从而观察和分析细胞核的形态和数量变化。
这对于细胞周期研究、细胞增殖和凋亡等过程的研究非常重要。
Hochest染色还可以用于染色体分析。
在细胞分裂过程中，可以使用Hochest染色来观察和分析染色体的形态和数量变化。
这对于研究染色体异常、染色体结构和功能等方面具有重要意义。
此外，Hochest染色还可以用于研究DNA损伤和修复、DNA合成和复制等过程。
除了Hochest染色技术本身，流式细胞术也是一种常用的生物研究技术。
流式细胞术利用荧光染料标记的细胞或细胞器，通过流式细胞仪进行检测和分析。
结合Hochest染色和流式细胞术，可以更精确地分析细胞核的形态和数量，进一步研究细胞的生物学特性。
流式细胞术在生物研究中有着广泛的应用。
首先，流式细胞术可以用于细胞表型分析。
通过荧光染料标记的抗体，可以对细胞表面标记物进行定量分析，如细胞膜蛋白、细胞间连接蛋白等。
这对于研究细胞分化、细胞功能和细胞亚群的分离非常重要。
流式细胞术还可以用于细胞周期分析。
通过Hochest染色和荧光染料标记的抗体，可以对细胞周期不同阶段的细胞进行定量分析。
细胞染色方法总结
Hoechst染色:hoechst可以穿过活细胞膜与细胞核结合(主要为凋亡活细胞)在紫外光下将核染为蓝色。
Hoechst染细胞核会影响共聚焦显微镜对该样本其他荧光的观察效果。
hoechst有hoechest33342和hoechst33258两种hoechsts33258，hoechst33342二者区别不大，但是hoechst33342对细胞的毒性作用更小一些，所以一般来说hoechsts33258用于细胞固定后再染色，而hoechst33342则可以对活细胞直接进行染色！染色步骤PI（Propidium Iodide碘化丙啶）染色：是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂,常用于细胞凋亡检测.碘化丙啶(Propidium Iodide，PI）是一种核酸染料（红色），它不能透过完整的细胞膜，但凋亡中晚期的细胞和坏死细胞由于细胞膜通透性的增加，PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红.用PI单一染色观测培养细胞，只能表示细胞的坏死情况,而不是凋亡（当然晚期凋亡PI亦可着色）.但是如果您只是想知道细胞的死亡情况，而不是仔细区分坏死或凋亡,那么PI单一染色也可以。
但是如果您一定要认定细胞的凋亡,那么PI单一染色显然不够！annexin—v染色细胞凋亡早期,细胞膜标志发生改变。
其中，磷脂酰丝氨酸（Annexin-V,PS）外翻,Annexin—V 在Ca+存在的条件下与其高亲和力特异性结合。
这样，Annexin-v 染色阳性，表示细胞处于早期凋亡状态。
Annexin—V结合不同的荧光抗体，就可以利用流式细胞仪、荧光显微镜以及共聚焦激光扫描显微镜检测细胞凋亡的发生。
Annexin V用FITC标记发绿色荧光;如果用PE标记就发红色荧光。
JC—1染色JC-1是一种阳离子染料，可以在线粒体内聚集,低浓度时主要以单体（monomer)存在，发射光以绿光（～525nm)为主；而在高浓度时则可以形成多聚体（aggregation），发射光以红光（-590nm）为主。
hoechst33342染色原理
hoechst33342染色原理Hoechst 33,342是一种荧光染料，它常用于分子生物学、细胞生物学和基因工程技术中。
它是一种穿越膜的含钠荧光染料，用于标记细胞核和染色体，可以通过荧光显微镜观察细胞和大多数组织中的特定结构，如DNA合成、染色体成形和修饰以及其他重要标记。
Hoechst 33，342分子结构由三个环组成，其中包含一个异戊烯基和一个芳香环，并且连接在一起的末端拥有一个钠离子的载体。
此外，这种染料还具有一个氟化基团，有一个芳香胺基团，其中中和了由此产生的取代反应。
它也是一种比较不溶解度较高、比较低毒性和可分解性的染料。
染色过程非常简单，将Hoechst 33，342直接加入到细胞/组织样品的细胞培养液或琼脂糖溶液中，然后放置30分钟至2小时，使核内和核外的细胞得以被Hoechst 33，342染料荧光染色。
染料在低温条件下较快地通过细胞膜，然后被细胞内的某些酶吸收，尤其是核内的酶。
在细胞核中，组蛋白去氧核糖核酸（DNA）和染色体修饰酶会与染料结合，使它变得荧光发光。
然后，将干细胞样品放入荧光显微镜中，以获得特定细胞及其核内细胞机制的准确信息。
在荧光镜下，核膜、染色体和组蛋白/DNA混合物等都会闪耀出蓝色荧光。
染料标记的细胞和形成的染色体能够准确检测、定位和跟踪，以了解细胞的正常和病态的变化。
此外，Hoechst 33，342还可用于检测细胞核位点、细胞核定位和细胞染色体检测，以及细胞凋亡的定位和检测。
综上所述，Hoechst 33，342是一种非常有用的荧光染料，可用于分子生物学，细胞生物学和基因工程等研究。
它是一种穿越膜的含钠荧光染料，具有低溶解度，可分解性，低毒性等特点，可用于标记细胞核、染色体及其他至关重要的标记，从而提高了我们对细胞结构的观察。
核内体定位荧光染料
核内体定位荧光染料核内体定位荧光染料在细胞生物学和生物医学研究中起到了至关重要的作用。
在研究细胞结构和功能以及疾病的发生机制时，核内体定位荧光染料具有极大的潜力。
本文将介绍核内体定位荧光染料的原理、应用和发展前景，并分享我对其个人的观点和理解。
一、核内体定位荧光染料的原理和应用核内体定位荧光染料是一类能够选择性地染色细胞核或核仁的分子探针。
它们通过特定的结构和化学性质，与细胞核或核仁内的特定分子发生作用，从而实现对其定位和可视化。
常见的核内体定位荧光染料包括荧光染料DAPI、Hoechst染料、SYTO染料等。
核内体定位荧光染料的应用广泛。
它们可以用于研究细胞核的结构和组成。
通过使用核内体定位荧光染料，研究人员可以观察细胞核的形态、大小和核仁的位置，从而揭示细胞核在细胞中的功能和调控机制。
核内体定位荧光染料可用于研究细胞核的活动和功能。
通过观察核内体定位荧光染料与其他细胞分子的相互作用，研究人员可以了解细胞核在DNA复制、RNA转录和蛋白质合成等生命活动中的作用。
核内体定位荧光染料还可以应用于细胞凋亡、细胞分裂和肿瘤研究等领域，以促进对相关机制的理解和发现新的治疗策略。
二、核内体定位荧光染料的发展前景核内体定位荧光染料在过去几十年中取得了长足的发展。
随着对细胞核和核仁的研究不断深入，对核内体定位荧光染料的需求也在不断增加。
核内体定位荧光染料的发展前景非常广阔。
核内体定位荧光染料的选择性和灵敏度将不断提高。
目前，虽然已有多种核内体定位荧光染料可供选择，但它们的选择性和灵敏度仍然有待改进。
未来，研究人员将继续改进染料的结构和化学性质，以提高其在细胞核和核仁的定位效果。
核内体定位荧光染料将与其他成像技术相结合。
当前，核内体定位荧光染料常与其他成像技术如光学显微镜、共聚焦显微镜和荧光共振能量转移等相结合，以实现对细胞核和核仁的高分辨率成像。
在未来，这些成像技术将更加成熟和先进，进一步提高核内体定位荧光染料在细胞生物学研究中的应用效果。
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细胞核常用荧光染料有：
吖啶橙（Acridine Orange，AO）、溴化乙锭（Ethidium Bromide，EB）和碘化丙啶（Propidium Iodide，PI），DAPI、Hoechst染料、EthD III、7-AAD、RedDot1、2 等等。
透膜的染料如下：
AO：具有膜通透性，能透过细胞膜，将核DNA和RNA分别染成绿色和红色，因此使细胞核呈绿色或黄绿色荧光。
EB：一种高度灵敏的荧光染色剂，在标准302nm处激发出橙红色信号。
DAPI：蓝色一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，其与DNA结合后可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光，而与单链DNA结合无荧光的增强。
DAPI对双链DNA的染色灵敏度要高于EB和PI，荧光强度比Hoechst低，但光稳定性高于Hoechst。
Hoechst染料：蓝色一类在显微观察中标记DNA的荧光染料，最常见的两种是Hoechst33342和Hoechst33258。
这两种染料都在紫外350nm处被激发，在461nm处最大发射光附近发射青/蓝色荧光。
与DAPI相比，Hoechst33342加有乙基，具有更强的亲脂性，因此能更好的透过完整的细胞膜，并且细胞毒性更小。
RedDot 1染料：红色，超强的细胞核选择性，其光谱相似于Draq?5 和Draq?7。
RedDot?染料可被几种常见的激光激发并可在远红外区激发荧光。
RedDot? 的红色近红外荧光有效的与其他常用荧光探针区分开来。
不透膜的染料，如下：
PI：不同通过活细胞膜，但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。
PI作为红色荧光复染剂首选，PI经常与Calcein-AM或者FDA等荧光探针合用，区分死/活细胞。
EthD III、7-AAD、RedDot 2：不能透过细胞膜，但能将坏死细胞区分开来；更适合凋亡坏死实验的检测；
细胞核荧光染料（PI DAPI Hoechst33342）
细胞核荧光染料PI碘化丙啶（简称PI）是一种常用的细胞核荧光染色剂。
它不能透过完整的细胞膜，但PI能透过凋亡中晚期的细胞和死细胞的膜而将细胞核染红，PI在绿色光（540nm波长）的激发下，会在600nm（红色光）处发出明亮的荧光，与细胞核中的DNA结合的PI发出的荧光，与未结合的PI相比，强度会增强20-30倍。
40016Propidium iodide(PI)100mg40017Propidium iodide, 1.0mg/1mL solution in water10mL
碘化丙啶英文名：Propidium iodide, Propidium diiodide; PI 分子式：C27H34I2N4 分子量：668.39 外观：红棕SF末应用：DNA染色染色原理：碘化丙啶(PI)是一种溴化乙啶的类似物，它在嵌入双链DNA后释放红色荧光。
尽管PI不能通过活细胞膜，但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。
PI经常被用来与Calcein-AM或者FDA等荧光化合物一起使用，能同时对活细胞和死细胞染色。
光谱性质：PI-DNA复合物的激发和发射波长分别为535nm和615nm。
染色过程：1．用PBS或适当的缓冲液制备10～50μM的PI溶液。
a) 2．将1/10培养基体积的PI溶液加入到细胞培养基中。
b) 3．在37℃培养细胞10-20分钟。
4．用PBS或合适的缓冲液洗涤细胞两次。
5．用535nm激发波长，615nm发射波长的滤光器的荧光显微镜观察细胞。
a) 由于PI可能具有致癌性，请小心操作。
b) 也可以用1/10浓度的PI缓冲液代替培养基。
保存条件：4℃避光保存对人体有刺激性，请注意适当防护
DAPI即4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole)﹐是一种能够与DNA中大部分A，T碱基相互结合的荧光染料﹐常用与荧光显微镜观测。
因为DAPI可以透过完整的细胞膜﹐它可以用于活细胞和固定细胞的染色。
在荧光显微镜观察下，DAPI染剂是利用紫外光波长的光线激发。
当DAPI与双股DNA结合时，最大吸收波长为358nm，最大发射波长为461nm，其发散光的波长范围含盖了蓝色至青绿色。
DAPI也可以和RNA结合，但产生的荧光强度不及与DNA 结合的结果，其发散光的波长范围约在400nm左右。
DAPI的发散光为蓝色，且DAPI和绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein, GFP)或Texas Red染剂(红色荧光染剂)的发散波长，仅有少部分重叠，研究员可以善用这项特性在单一的样品上进行多重荧光染色。
DAPI能快速进入活细胞中与DNA结合，因此DAPI对生物体而言，也被视为一种毒性物质与致癌物。
使用过程中应注意操作与抛弃的处理程序。
DAPI 为一种荧光染料，可以穿透细胞膜与细胞核中的双链DNA结合而发挥标记的作用，可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光，和EB相比，对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。
显微镜下可以看到显蓝色荧光的细胞，荧光显微镜观察细胞标记的效率高(几乎为100 %) ，且对活细胞无毒副作用。
DAPI染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。
DAPI 也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色。
细胞经热激处理后用DAPI染色3分钟，在荧光显微镜下可以看到到细胞核的形态变化。
Hoechest 33258 是膜透性的,因此在活细胞时候能轻松进入;DAPI是半透性的,有选择性的进入.
因此Hoechest 33258 一般用来染活细胞,可以长驱直入;DAPI一般是染固定细胞.
2、两者都可以用紫外看，参见以下的激发发射波长
Hoechst 33258的最大激发波长为346nm，最大发射波长为460nm；Hoechst 33258和双链DNA结合后，最大激发波长为352nm，最大发射波长为461nm。
DAPI的最大激发波长为340nm，最大发射波长为488nm；DAPI和双链DNA结合后，最大激发波长为364nm，最大发射波长为454nm。
Hoechst 33342/PI双染色法
1．悬浮生长的细胞在培养状态下加入Heochst 33342，终浓度为1μg/ml；帖壁生长的细胞用含有0.02％EDTA的0.25％胰蛋白酶消化成单细胞悬液，离心，弃上清，用1ml全培养液重悬细胞，加入Heochst 33342，终浓度为1μg/ml，37℃孵育7～10min。
2．4℃500～1000r/min离心弃去染液。
3．加入1.0ml PI染液，4℃避光染色15min。
碘化丙啶染色
1．原理碘化丙啶(propidium iodide，PI)不能穿人完整的活细胞膜中，即正常细胞和凋亡细胞在不固定的情况下对PI拒染，而坏死细胞由于失去膜的完整性，PI可进入细胞内与DNA结合，根据此特点，使用PI染色可鉴别死细胞。
如果对活细胞染色必须在染色前进行固定，以增加细胞膜对染料的通透性。
2．溶液配制使用0．01mol／LPBS(pH 7．4)配制终浓度为0．5mg／ml的PI工作液。
3．染色程序
(1)单层细胞培养标本经预冷70％乙醇固定1小时，4℃；
(2)0．01mol／LPBS(pH 7．4)冲洗；
(3)沥干后加入PI工作液，室温孵育15分钟；
(4)冲洗后封片。
结果：PI最大激发波长和最大发射波长分别为488nm和630nm，荧光显微镜观察，DNA呈红色荧光。
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