临床生化检验试剂盒性能评价试验线性范围试验
临床生化检验试题库
一、名词解释1、抗凝剂：应用物理或化学方法除去或抑制血液中的某些凝血因子，阻止血液凝固，称为抗凝。
阻止血液凝固的化学试剂称为抗凝剂。
2、决定性方法：准确度最高，系统误差最小；经过详细研究未发现产生误差的原因，其测定结果与“真值”最为接近的方法。
主要有重量分析法、中子活化法、同位素稀释-质谱分析法（ID-MS）等。
3、参考方法：是指准确度与精密度已经被充分证实，且经公认的权威机构（国家主管部门、相关学术团体和国际性组织等）颁布的方法。
这类方法干扰因素少，系统误差很小，有适当的灵敏度、特异度、较宽的分析范围并且线性良好，重复测定中的随机误差可以忽略不计。
4、常规方法：具有足够的精密度、准确度和特异度，有适当的分析范围，经济实用，其性能指标符合临床或其它目的的需要的方法。
5、标准品：它的一种或几种物理或化学性质已经充分确定，可用以校正仪器和某种测定方法的物质。
6、一级标准品：已经确定的稳定而均一的物质，其数值已由决定性方法确定或由高度准确的若干方法确定，所含杂质已经定量。
主要用于校正决定性方法，评价和校正参考方法以及为“二级标准品”定值。
7、二级标准品：这类标准品可以是纯溶液（水或有机溶剂的溶液），也可以存在于相似基质中。
可由实验室自己配制或为商品，其中有关物质的量由参考方法定值或用一级标准品比较而确定。
主要用于常规方法的标化和控制物的定值。
8、控制物：控制物用于常规质量控制，以控制病人标本的测定误差。
有定值血清和未定值血清两种。
控制物不能用于标定仪器或方法。
9、实验误差：简称误差，是量值的给出值与其客观真值之差。
10、系统误差：是指一系列测定值对真值存在同一倾向的偏差。
它具有单向性，而没有随机性，常有一定的大小和方向；一般由恒定的因素引起，并在一定条件下多次测定中重复出现。
当找到引起误差的原因，采取一定措施即可纠正，消除系统误差能提高测定的准确度。
11、随机误差：是指在实际工作中，多次重复测定某一物质时引起的误差。
体外诊断试剂分析性能评估-线性范围
线性范围是指检测方法测量待检测物质时，能够提供一段具有线性关系的测量范围。而 灵敏度则是指检测方法的最小检测物质的能力。
线性范围的重要性
质量控制
其它指标如准确性、精密度等都建立在线性关系的基础上，因此线性范围的确定对质量控制 至关重要。
可靠性
如果测试物质的浓度高于线性范围，分析结果可能会低于实际值；如果浓度低于线性范围， 则可能会高于实际值，影响结果可信度。
发展前景
未来，该技术将继续发展， 以更好地满足人们对生活质 量和健康的需求。
Im proving the m etho d
改进分析方法，增加线性 范围的可靠性和精度。
M etho d com parison
比较分析方法的不同，选 择最适合的实验方法，以 确定线性范围。
总结
方法的优点
确定分析方法的线性范围， 保证分析结果的可靠性和可 比性。
应用价值
该方法广泛应用于医疗、环 境保护、食品安全等领域。
确定线性范围，分析误差和 数据可靠性。
实验条件设置
1
参比物质的选择
根据待测分析物质，选择与目标物
样品组成的影响
2
分析范围相近的参比物质，评估分 析方法的线性范围。
研究待测样品中其他成分对分析结
果的影响，以找到影响线性范围的
因素。
3
实验条件的确定
根据分析物质的特点，选择合适的 实验条件，如适当的反应时间ห้องสมุดไป่ตู้温 度。
数据分析及结果解读
标准曲线的绘制
绘制样品浓度与测量结果的标准曲线，并计算回归方程。
测定未知样品浓度
使用标准曲线计算出未知样品的浓度。
结果的解读
临床生化检验试剂盒性能评价试验—线性范围试验
包栝原包装和工作液在指定条件下稳
定性
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线性范围实验
目的与要求 掌握检测临床生化检验商品试剂盒测定线性范
围的原理和方法,计量反应曲线的绘制,统计 方法和性能评价;熟悉线性范围变窄的原因; 了解影响线性的因素.
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原理
使用不同浓度的葡萄糖标准溶液,用GOD-POD法 试剂测定各自的吸光度,以标准浓度为横坐 标,以其对应的吸光度为纵坐标,在方格纸上 作图.即可绘制出一条直线,即剂量反应曲线 (dose-response curve).
值，求估计值Y时，可直接输入X值，随后按 【Y】即可求得；若已知Y值求估计值X，则 输入Y值后按【INV】【X】即可求得X值．
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`
① 操作进入LR状态，清除内存【MODE】【2】 【INV】
【AC】 ②输入原始数据X 【X▫.Y▫】， Y 【DATA】 ③输出结果 回归方程的截距【INV】【A】 回归系数【INV】【B】 相关系数【INV】【r】 【A】
2.酶促反应时间曲线或化学反应速度时
间曲线观察.
以吸光度为纵坐标，反应时间为横坐标作图，观察 动态期（包栝延迟期，线性期，混和期）和平衡期 出现，持续和终止的时间，分析有关性能指标。
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临床生化试剂盒性能指标主要有
3.稳定性
是指试剂盒在规定条件下储存仍保持其 性能指标的期限
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血糖与GOD-POD试剂剂量反应曲线的 制作
加入物
标准管
5
葡萄糖标准液(ul) 0
4
16 20
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实验二、临床生化检验方法的性能评价-精品医学课件
干扰试验
试剂与器材
• 722分光光度计、加样枪、5ml刻度吸管等 • GOD-POD血糖测定试剂盒、6.7mmol/L的混合血
清、 250mg/L维生素C标准液、500mg/L维生素C标准液、 750mg/L维生素C标准液
干扰试验
• 操作步骤
• 1.样品制备 （1）基础样品： 血清0.9mL + 生理盐水0.1mL （2）干扰样品1：血清0.9mL + 250mg/L维C标准液0.1mL （3）干扰样品2：血清0.9mL + 500mg/L维C标准液0.1mL （4）干扰样品3：血清0.9mL + 750mg/L维C标准液0.1mL （5）维C样品：750mg/L维C标准液0.1mL +生理盐水0.9mL 混匀各管待测。
• 注意事项
• 1.加入可疑干扰物的浓度应明显高于通常所见浓度的上限，最好达到 病理标本的高值；
• 2.纯标准品溶液的加入体积不得超过血清样本的10%，避免将血清样 品过度稀释，产生基质效应；
• 3.方法学评价应对造成临床影响的多种干扰物质进行干扰实验的评价。
干扰试验
• 思考题 • 进行干扰试验时，如何分析干扰
（ml）
干扰值（mmol/L）=干扰样品测定值-基础样品测定值 干扰率（%）=干扰值/基础值×100%
干扰试验
• 结果与计算
• 将各项计算结果填入下表中:
样品 葡萄糖测定值（mmol/L） 加入维C值(mg/L) 干扰值(mmol/L)
基础样品 干扰样品1 干扰样品2 干扰样品3
干扰率 (%)
干扰试验
干扰试验
• 操作步骤 • 2.血糖浓度按下表测定：
临床生化检验试剂盒性能评价试验线性范围试验
临床生化检验试剂盒性能评价试验线性范围试验线性范围试验是评价试剂盒在测量不同浓度样本时的测量范围。
通常情况下，试剂盒都会提供一个标称的测量范围，但实际使用时需要验证其测量范围是否准确、可靠，以确保测量结果的准确性和可比性。
线性范围试验的基本原理是通过在试剂盒标准样本中制备一系列不同浓度的样本，然后使用试剂盒对这些样本进行测量。
使用不同浓度的样本测量所得的结果应当在试剂盒标称的测量范围内，且具有线性的关系。
线性范围试验的步骤如下：1.准备试剂盒和标准样本：选择合适的试剂盒，并根据试剂盒说明书中的建议，准备一系列不同浓度的标准样本。
样本的制备应当精确、稳定，并与生化水平的变化有一定的相关性。
2.设置测量参数：根据试剂盒说明书中的要求，设置试剂盒所需的测量参数，如波长、反应时间等。
确保所设置的参数与说明书的要求一致。
3.测量标准样本：使用试剂盒对准备好的标准样本进行测量。
将每个标准样本均匀地分配到试剂盒提供的反应容器中，按照说明书中的步骤进行反应，并使用试剂盒提供的光度计或分析仪器进行读数。
4.绘制标准曲线：将试剂盒测量结果与标准样本的浓度进行对比，绘制标准曲线。
通常，标准曲线具有一条近似直线的形状，且通过原点。
5.判断线性范围：根据绘制的标准曲线，通过线性回归分析或相关统计分析的方法，确定试剂盒的线性范围。
一般情况下，线性范围可由标准曲线所覆盖的浓度范围来确定。
6.评价线性范围：根据试剂盒的应用领域和临床需要，评价试剂盒的线性范围是否满足要求。
如果线性范围过窄或过宽，可能会导致浓度超出测量范围，使结果不准确。
线性范围试验的结果报告应当包含以下内容：1.试剂盒的标称测量范围。
2.标准样本的浓度和对应的测量结果。
3.绘制的标准曲线图和线性回归方程。
4.试剂盒的线性范围和评价结论。
总之，线性范围试验是临床生化检验试剂盒性能评价试验中的一个重要内容。
通过验证试剂盒在不同浓度样本中的测量范围，可以确保试剂盒的使用可靠性和测量结果的准确性。
临床生化检验试剂盒性能评价试验线性范围试验
临床生化检验试剂盒性能评价试验线性范围试验线性范围是指在一定的浓度范围内，检测结果与样本浓度之间呈线性关系的范围。
线性范围试验的目的是确定试剂盒的线性范围及其上下限。
线性范围的确定对于准确测量样品浓度非常重要，因为如果超出了线性范围，测量结果将不准确。
试验前需要准备一系列不同浓度的样品，通常使用稀释法制作。
然后依次使用这些样品进行检测，记录每个样品的测量结果。
在绘制一个标准曲线时，可以将样品的测量结果作为纵坐标，样品的浓度作为横坐标，在纸上标出一系列点，并通过这些点拟合一条直线。
这条直线称为标准曲线。
标准曲线的斜率和截距可以反映试剂盒的灵敏度和误差。
斜率表示单位浓度变化时，测量值的变化情况，斜率越大，灵敏度越高。
截距表示零浓度时的测量值，截距越小越接近零浓度。
通过分析标准曲线的相关系数可以评估试剂盒的线性程度。
相关系数越接近1，线性程度越好。
一般认为，相关系数超过0.99，即可认为试剂盒满足线性要求。
在进行线性范围试验时需要注意以下几个方面：1.样品浓度的选择：应根据所测定物质的生理浓度范围来选择样品浓度，以保证测试的实用性。
2.样品的制备与存储：样品的制备应精确控制，避免因稀释或浓缩不准确而影响试验结果。
样品的存储应避免长时间曝光于大气中，以免发生化学反应导致样品浓度的变化。
3.试剂盒的选择：应根据所测定物质的特性和预期的分析结果，选择适宜的试剂盒进行测试。
4.试剂盒的操作：应按照试剂盒说明书的要求进行操作，严格控制操作步骤和时间，以减少试验误差产生的可能性。
5.数据处理和分析：应根据所测定物质的特性和测量结果，采用适当的统计方法进行数据处理和分析，并在数据分析报告中详细说明试验设计、方法和结果。
通过进行线性范围试验，可以确定试剂盒的线性范围及其上下限，为临床生化检验提供可靠的测试数据，为临床诊断提供准确的参考依据。
同时，线性范围试验还可以评估试剂盒的稳定性和重复性，为试剂盒的质量控制提供参考依据。
体外诊断试剂分析性能评估-线性范围
1.2实验样本的制备方法
（1）不同浓度水平的样本可通过将高浓度样本与低浓度样本进行倍 比稀释得到，注意在进行液体吸取时应选择精密度与准确性好的移液 装置。制备时应将样本完全混合并避免蒸发或其他使样本变质的情况。 每份样本的浓度与体积单位应统一。 （2）如果高/低浓度血清的值未知，可将每种血清编码，用编码代表 每个血清的相对浓度。对于等浓度间隔样本，可用连续整数（如1、2、 3、4、5）代表连续样本。进行数据处理时可用样本号代替X值。 （3）样本的特殊处理：在无法得到适用的人血清时，需对样本进行 一些特殊处理以满足实验要求。这些处理过程包括稀释、加入添加物 或透析、热处理等，无论进行何种处理均应以保持基质恒定为基本原 则。在评价报告中应对所使用的稀释液、添加物、溶剂等的材料来源 加以注明。 样本稀释液应选用由厂家推荐或经实验室证明可使用的产品，如 可采用5%牛血清白蛋白或人白蛋白溶液。 欲提高样本浓度时可在样本中添加分析物纯品。在添加物为溶液 状态时，应注意添加液体对样本的稀释作用（小于10%）并注明所用 溶剂。
事业发展部-刘会娟
一、概述 二、定义 三、研究时间 四、线性范围评估的基本原则 五、线性范围的评估及数据处理方法
一、概述
线性范围评估资料是评价拟上市产品 有效性的重要依据，也是产品注册所需的重 要申报资料之一。
二、定义
线性范围：是某一方法的校准曲线的直线部 分所对应的待测物质的浓度（或量）的变化 范围。
样本选择
EP6一A中建议应尽可能按以下顺序进行样本种类的选择：①病人混合血清；②用适当 稀释液稀释的病人血清；③添加分析物的病人样本；④用处理过的低浓度物质或处理过的 血清物质稀释的病人血清；⑤商业质控品，校准品／线性物质；⑥使用生理盐水稀释的样 本；⑦稀释不足或过度稀释的商业质控品；⑧水溶液；⑨其他溶剂的溶液。
实验十四临床生化检验试剂盒 - 副本
（一）终点法时间反应曲线试验
• 试剂 • 操作步骤
（一）终点法时间反应曲线试验
• 性能评价
• 试剂空白吸光度是否符合要求 • 试剂空白的反应速度时间曲线平坦，吸光度 在整个反应期间无明显波动，否则，说明试 剂本身不稳定，会导致测定偏差。 • 反映能否在规定时间内达到平衡，达到平衡 时间应在临床生化自动分析仪终点法读取测 定吸光度的时间之前。 • 反应测定期观察
（二）连续监测法时间反应曲线试验
• 目的与要求
• 掌握试剂盒连续检测法测定时间反应曲线的 方法和原理，并弄清试验的意义。 • 连续检测法测定时间反应曲线图绘制方法 • 熟悉试剂盒连续检测法测定的参数及其性能 评价方法
（二）连续监测法时间反应曲线试验
• 原理
• 连续检测法测定的实化学反应的初速度。本 试验用HK法测定血糖的试剂盒进行测定， 观察动态反应中的延迟期，线性期，混合期 的出现，持续和中止的时间，即可分析连续 检测法试剂盒的性能指标。
注意事项
• 有的测定特别是酶法测定，当酶量相对 不足时，用标准液所作的线性范围可以 达到指定的高限，但在测定同样高值的 样品时，结果却明显偏低，这往往是样 品中的介质效应引起的。
线性范围确定
• 测定上限 应使95％的临床标本不经稀 释即可进行测定，具体数值必须通过线性 范围实验加以确定，因为检测上限是不可 超越的界限，当测定值高于上限临界值时， 应减少标本用量或将标本稀释后重新测定 • 测定下限 实测多少就报告多少，如未 经验证，随意延长测定下限的做法是不正 确的
• 使用高浓度和低浓度临床标本若干分进 行实际的线性检查，理想的情况是该方 法的分析范围的最高浓度上限能使95％ 的临床标本不经稀释均能得到正确的测 定结果。 • 试剂盒测定线性范围是该试剂盒按其说 明使用时可准确测量的范围。
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① 操作进入LR状态，清除内存【MODE】【2】 【INV】 【AC】 ②输入原始数据X 【X▫.Y▫】， Y 【DATA】 ③输出结果 回归方程的截距【INV】【A】 回归系数【INV】【B】 相关系数【INV】【r】 【A】
2018/12/9 12
以吸光度为纵坐标，反应时间为横坐标作图，观察 动态期（包栝延迟期，线性期，混和期）和平衡期 出现，持续和终止的时间，分析有关性能指标。
2018/12/9
2
临床生化试剂盒性能指标主要有
3.稳定性
是指试剂盒在规定条件下储存仍保持其 性能指标的期限
包栝原包装和工作液在指定条件下稳 定性
2018/12/9
2018/12/9
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血糖与GOD-POD试剂剂量反应曲线的 制作
加入物 4 5 葡萄糖标准液(ul) 0 16 20 蒸馏水(ul) 10 20 4 0 GOD-POD试剂 3 3 3 (ml)
2018/12/9标准管0Fra bibliotek4 16
1
8 12
2
12 8
3
3
3
3
8
结果计算
1.测定结果 5个不同浓度的标本,(应每管 平行做3管取平均值) 2.线性评价统计 采用回归分析,求出此直 线的截距a和斜b,建立直线回归方程y=a+bx; 并作相关分析,求出相关系数(r).
2018/12/9
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注意事项
1.葡萄糖标准液的加量必须十分准确,应用计量性 能准确度很高的微量进样器加样. 2.本方法线性可达22.24mm/L,(指生化分析仪)造成 线性变窄的原因试剂配料中组分投料不足;试剂配 制后组分稳定性差;因运输或储存不当等导致试剂 组分的含量发生变化. 3.酶法测定时,有时当酶量相对不足时,用标准液所 作的线性范围可以达到指定的高值,但在测定同样 高值样本时,结果却明显偏低,这往往 是样本中介质效应引起的，值得注意.
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线性范围实验
目的与要求 掌握检测临床生化检验商品试剂盒测定线性范 围的原理和方法,计量反应曲线的绘制,统计 方法和性能评价;熟悉线性范围变窄的原因; 了解影响线性的因素.
2018/12/9
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原理
使用不同浓度的葡萄糖标准溶液,用GOD-POD法 试剂测定各自的吸光度,以标准浓度为横坐 标,以其对应的吸光度为纵坐标,在方格纸上 作图.即可绘制出一条直线,即剂量反应曲线 (dose-response curve).
2018/12/9 10
线形回归计算法
1.按下【MODE】【2】.进入回归分析状态, 显示“LR”,同样数据前要先按【INV】 【AC】,以清除可能存储的其他数据,输入X 值后既按【X▫.Y▫】键，输入Y值后既按 【DATA】键.若已知变量X的一个观察 值，求估计值Y时，可直接输入X值，随后按 【Y】即可求得；若已知Y值求估计值X，则 输入Y值后按【INV】【X】即可求得X值．
2018/12/9
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试剂
1. 25mmol/L葡萄糖标准溶液 2. 其他试剂 同GOD-POD法试剂,试剂配制: 用蒸馏水将试剂2进行10倍稀 释,然后等量与试剂1混合成 酶
2018/12/9
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操作步骤
按表操作.为提高计量反应曲线制作的可靠 性,可将表中葡萄糖标准液和蒸馏水同时扩 大10倍,制备1,2,3,4各浓度管,然后分别取 20ul,各加GOD-POD试剂3ml测定.
临床生化试剂盒性能指标主要有
1.线性范围
这一点在试剂盒评价中很重要,是指试 剂盒按说明书使用可准确测量的范 围。试剂盒测定线性范围是衡量其 质量的重要指标,也是保证正确使 用和鉴定试剂盒关键指标之一。
2018/12/9 1
临床生化试剂盒性能指标主要有 2.酶促反应时间曲线或化学反应速度时 间曲线观察.