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Western-blotting 技术鉴定人血清免疫球蛋白lgG分子实验报告
Western-blotting 技术鉴定人血清免疫球蛋白lgG摘要：本实验利用Western-blotting 技术鉴定人血清免疫球蛋白lgG，主要包括利用SDS-PAGE进行蛋白质分离之后，将其转移至NC膜上进行蛋白免疫印迹并进行检测，实验中我们用了正常人血清蛋白，肺炎患者，白血病人患者三种血清，使用彩虹Marker，并用其作出标准曲线，以此求出其余IgG的分子质量，并根据不同样本条带颜色，面积等简要判断不同样本LgG含量的多少并给予解释。
关键词：免疫印迹技术；免疫球蛋白；SDS-PAGE引言：蛋白质免疫印迹技术,是1979年斯坦福大学乔治.斯塔克发明的蛋白质印迹法,继southern-blotting 之后起名 Western-blotting,是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法,广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究,抗体活性检测和疾病早期诊断等多个方面，是一种将高分辨率凝胶电泳和免疫化学分析技术相结合的杂交技术，其分析容量大，敏感度高，特异性强，是检测蛋白质性质、表达与分布的一种最常用的方法。
聚丙烯酰胺凝胶电泳是网状结构，具有分子筛效应，蛋白在其中依三种因素分开：蛋白大小，形状和电荷。
SDS是阴离子去污剂，作为变性剂和助溶试剂，它能断裂分子内和分子间的氢键，使其去折叠。
聚丙稀酰胺是由丙稀酰胺和N,N’-亚甲基双丙稀酰胺经共聚合而成。
此聚合过程是由四甲基乙二胺和过硫酸胺激发的。
被激活的单体和未被激活的单体开始了多聚链的延伸，正在延伸的多聚链也可以随机地接上双丙稀酰胺，使多聚链交叉互连成为网状立体结构，最终多聚链聚合成凝胶状。
人血清中含有人类免疫球蛋白，根据其重链稳定区的分子结构和抗原特异性的不同，分为五类: lgG、lgA、lgM、lgD、lgE、lgG 是血清的主要抗体成分，占血清免疫球蛋白总量的70%~75%。
在电泳之后，利用抗原抗体结合的特异性，进行蛋白免疫印迹。
1.目的与要求a)掌握SDS-PAGE电源分离蛋白的实验技术和操作；并绘制蛋白质标准曲线,求目的蛋白分子量的方法；b)垂直板电泳装置的安装及灌胶；电泳所用试剂的配制；c)了解电泳过程中常见问题的原因及处理办法，不连续电泳系统分离蛋白质的原理以及垂直板电泳装置的安装和灌胶。
wb实验报告结果
wb实验报告结果WB实验报告结果一、实验目的和背景WB实验是一种常见的实验方法，用于检测和分析蛋白质的表达水平和相对分子量。
通过电泳分离蛋白质样品，再利用特定的抗体与目标蛋白结合，最后通过化学反应显色，可以得出蛋白质的表达情况。
二、实验设计和步骤本次实验旨在探究某种蛋白质在不同条件下的表达情况。
实验设计如下：1. 实验组和对照组的设置：将实验组和对照组分别处理不同的条件，以观察其对蛋白质表达的影响。
2. 细胞培养和处理：将细胞分成实验组和对照组，分别在不同培养基中培养，并添加相应的刺激物。
3. 蛋白提取和电泳：将培养的细胞收集，进行蛋白质提取，并进行电泳分离。
4. 转膜和抗体结合：将电泳分离后的蛋白转移到膜上，并与特定的抗体结合。
5. 显色和成像：利用化学反应显色，观察蛋白质的表达情况，并进行成像。
三、实验结果和分析通过实验的步骤，我们得到了以下结果：1. 实验组和对照组的蛋白质表达情况有明显差异。
在实验组中，某种蛋白质的表达水平较高，而在对照组中较低。
2. 不同刺激物对蛋白质表达的影响不同。
在实验组中，添加A刺激物后，蛋白质的表达水平显著增加；而添加B刺激物后，蛋白质的表达水平几乎没有变化。
3. 蛋白质的相对分子量也存在差异。
在实验组中，蛋白质的相对分子量较大，而在对照组中较小。
通过对实验结果的分析，我们可以得出以下结论：1. 实验组中的某种蛋白质在特定条件下表达水平较高，这可能与刺激物的作用机制有关。
2. 不同刺激物对蛋白质表达的影响不同，这可能是由于刺激物的不同性质和作用方式导致的。
3. 蛋白质的相对分子量差异可能与其结构和功能有关，进一步研究可以揭示这种差异的原因。
四、实验的局限性和改进方向本次实验虽然取得了一定的结果，但仍存在一些局限性：1. 样本数量较少：由于实验条件的限制，我们只能使用有限的样本进行实验。
进一步扩大样本数量可以提高结果的可靠性。
2. 实验条件的控制：虽然我们尽力控制实验条件的一致性，但仍可能存在一些未知因素的干扰。
Western Blot 实验实用技术手册总结
Western Blot 实验技术手册Western Blot是通过聚丙烯酰胺凝胶电泳将蛋白根据分子量大小分开，然后转移到固相载体（杂交膜）上，然后通过抗原抗体反应检测杂交膜上的靶蛋白是否存在，从而检测到靶蛋白在待检测样本中的表达情况。
目前Western Blot已经是蛋白检测的最常用和成熟的技术之一.一、Western Blot基本操作流程图细胞/组织蛋白提取↓蛋白定量、蛋白变性上样、电泳↓一转膜↓封闭↓孵育一抗↓洗膜孵育二抗↓洗膜底物孵育↓曝光或显色二.Western Blot操作步骤1.蛋白提取、处理蛋白提取的质量直接决定着WB结果的好坏，因此，根据样本类型和检测类型选择合适的蛋白制备方法是至关重要的。
使用适当的裂解液裂解贴壁细胞、悬浮细胞或者组织样品.对于贴壁培养的细胞，经预冷的PBS漂洗2次，裂解液中加入蛋白酶和磷酸酶抑制剂，然后吸净PBS，加入预冷的裂解液，最后用细胞刮子刮取贴壁细胞，将细胞及裂解液温和地转移至预冷的微量离心管中，4℃离心12,000 rpm，20 min（根椐细胞种类不同调整离心力），轻轻吸取上清，转移至新预冷的微量离心管中置于冰上，即为蛋白样本，弃沉淀.对于组织样品，用灭菌的预冷的工具分离目的组织，尽量置于冰上以防蛋白酶水解，将组织块放在圆底的微量离心管或Eppendorf管中，加入液氮冻结组织于冰上均质研磨，长期可保存于-80°C，每约5 mg加入约300 μl 预冷的裂解液lysis buffer，冰浴匀浆后置于4℃摇动2小时，裂解液体积与组织样本量有适当比例，（最终的蛋白浓度至少达到0.1 mg/ml, 理想的蛋白浓度应为1-5 mg/ml).，4℃离心12,000 rpm，20 min，轻轻吸取上清，转移至新预冷的微量离心管中置于冰上，即为蛋白样本，弃沉淀提取蛋白后进行蛋白的定量，蛋白的快速定量方法主要蛋白本身的发色基团，或者与其他显色剂反应产生的紫外吸收来进行定量.目前常用的主要有直接紫外吸收法，Bradford法、和Lorry法或BCA法，一般推荐用BCA法.BCA测定方法如下:A．酶标板操作2、根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B（50:1）配制适量BCA工作液，充分混匀；3、各孔加入200μL BCA工作液；4、把酶标板放在振荡器上振荡30sec，37℃放置30分钟，然后在562nm下比色测定。
T2拟南芥阳性植物的western blot检测实验报告册
T2拟南芥阳性植物的western blot检测实验报告册一、实验原理Western Blot（WB）是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。
WB可用于鉴定某种蛋白，并能对蛋白进行定性和半定量分析，该法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术，具有SDS—PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性，现已成为蛋白分析的一种常规技术。
WB采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色，通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。
二、实验用物1.实验试剂30%丙烯酰胺、4X分离胶缓冲液、4X浓缩胶缓冲液、上样缓冲液（Loading Buffer）、电泳缓冲液Tris—甘氨酸缓冲系统、电转缓冲液、过硫酸铵溶液（AP，10%）、TEMED、考马斯亮蓝染色液R250、TBST溶液、PBST溶液、封闭液：PBST溶液+5%奶粉。
2.实验器材：孵育盒，剪刀，镊子，小滚子，小绿铲，电转夹子，厚滤纸，海绵，尺子，小梳子，枪头盒，离心管架，小烧杯，量筒，离心管，广口瓶，记号笔，大烧杯，电转电泳系统（槽、电转芯、电泳芯）透明夹子，绿夹子，胶条，移液器，玻璃板，蒸馏水，PVDF 膜。
三、实验步骤1. 蛋白样品制备2. 电泳（配制SDS—PAGE凝胶；上样，第一道是marker，第二道至第六道上蛋白质样品（GAPDH 36kDa），上样量分别为2、4、6、8、10微升；SDS—PAGE电泳电压90v溴酚蓝到达分离胶界面改120V，至溴酚蓝到达凝胶前缘）3. 转膜（选用PVDF膜，预先在甲醇中浸泡2min，然后转入转移缓冲液中浸泡。
电泳结束后，小心轻取卸胶，去掉上层浓缩胶，在分离胶左上切角标记。
将胶，海绵，滤纸，膜，筛孔版按黑色塞孔板、海绵垫、后滤纸、凝胶、PVDF膜、厚滤纸、海绵、白色筛孔板的顺序依次摆放好。
免疫印迹技术实验报告
免疫印迹技术实验报告一、引言免疫印迹技术（Western Blotting）是一种用于检测特定蛋白质的定性和定量分析方法。
它基于免疫学原理，通过将待测蛋白质进行电泳分离，并利用抗体与目标蛋白质特异性结合的原理，最终实现对目标蛋白质的检测和定量分析。
本实验旨在通过免疫印迹技术检测目标蛋白质在不同样本中的表达水平，并观察其变化情况，以深入了解该蛋白质的功能和作用机制。
二、实验步骤1. 样本制备首先，我们需要准备样本。
样本可以是细胞或组织。
在实验中，我们选择了A 细胞和B细胞作为样本，分别进行后续实验。
2. 蛋白质提取将A细胞和B细胞分别加入适量的细胞裂解缓冲液，通过离心等操作将细胞裂解并获取蛋白质提取物。
3. SDS-PAGE电泳分离将蛋白质提取物加入SDS-PAGE凝胶中，进行电泳分离。
电泳时间和电压根据实验需要来确定。
4. 转膜将电泳分离后的蛋白质从凝胶中转移到聚丙烯酰胺膜上。
转膜可以通过湿法或半湿法等方法实现。
5. 阻断将转膜后的聚丙烯酰胺膜放入阻断液中，在室温下进行阻断。
阻断的目的是防止非特异性结合。
6. 一抗处理将目标蛋白质的一抗加入到含有阻断液的培养皿中，将转膜的聚丙烯酰胺膜放置在一抗液中，进行一抗处理。
一抗的选择根据目标蛋白质的特异性来确定。
7. 洗涤将转膜的聚丙烯酰胺膜从一抗液中取出，进行洗涤。
洗涤的目的是去除非特异性结合的抗体。
8. 二抗处理将与目标蛋白质一抗结合的二抗加入到含有阻断液的培养皿中，将转膜的聚丙烯酰胺膜放置在二抗液中，进行二抗处理。
9. 洗涤将转膜的聚丙烯酰胺膜从二抗液中取出，再次进行洗涤，确保清洗干净。
10. 显色将合适的显色剂加入到含有阻断液的培养皿中，将转膜的聚丙烯酰胺膜放置在显色剂中，进行显色反应。
显色剂的选择根据实验需要和目标蛋白质的特性来确定。
11. 照相观察显色结果，并使用相机拍摄转膜的聚丙烯酰胺膜，记录实验结果。
三、结果与讨论根据实验步骤，我们成功地使用免疫印迹技术检测了A细胞和B细胞中目标蛋白质的表达情况。
WB DOE report template
13
Phase 2
DOE Matrix Custom Design (D-Optimal)
(2 Levels, 2 Factors)
14
Phase 2
DOE Characterization
1st Bond (responses plan)
Response Ball Size Target (acc/rej) Min : 1.38 Max : 1.67 Min : 0.3 Max : 0.6 Min : 7g Min : 60% No crater No NSOP / Metal lifting # of run 13 runs 13 runs 13 runs 13 runs 13 runs 13 runs Sample size 5 balls/unit, 2 units/run 5 balls/unit, 2 units/run 10 balls/unit, 2 units/run 1 unit/run (all bond pad) 5 balls/unit, 1 unit/run 7 units/run Results Passed Passed Passed Passed Passed Passed No crater Machine Stoppages Record Remarks Min = CD+10% Max = <BPO 40~80% of wire size No Crater
7 units/run 7 units/run
NSOL
Remark : All responses has meet and passed UTAC specification. 10
Phase 1
Feasibility Study
免疫印迹实验报告
免疫印迹实验报告免疫印迹实验报告免疫印迹（Western blot）是一种常用的生物学实验技术，用于检测特定蛋白质在细胞或组织中的表达水平，以及研究其功能和相互作用。
本实验旨在通过免疫印迹技术，探究细胞中特定蛋白质的表达情况，为进一步的研究提供基础数据。
实验材料与方法：材料：1. 细胞或组织样本2. 细胞裂解液3. 蛋白质电泳样品缓冲液4. 聚丙烯酰胺凝胶5. 转印膜6. 蛋白质标记物7. 抗体8. 酶联免疫检测试剂盒方法：1. 提取细胞或组织中的蛋白质，制备细胞裂解液。
2. 将蛋白质样品与电泳样品缓冲液混合，进行电泳分离。
3. 将分离后的蛋白质转移到转印膜上。
4. 在转印膜上进行阻断，以防止非特异性结合。
5. 添加特异性抗体，与目标蛋白质结合。
6. 使用酶联免疫检测试剂盒，检测抗体与蛋白质结合的信号。
7. 分析实验结果，得出结论。
实验结果与讨论：通过免疫印迹实验，我们成功检测到目标蛋白质在细胞或组织中的表达情况。
实验结果显示，在细胞裂解液中，目标蛋白质呈现出明显的条带，证明其在细胞中存在且可被提取。
进一步分析实验结果，我们可以得出以下结论：1. 目标蛋白质在不同组织中的表达水平存在差异。
通过比较不同组织样本中目标蛋白质的表达情况，我们发现其表达水平在不同组织中存在差异。
这可能与细胞功能的差异以及组织特异性基因的调控有关。
2. 目标蛋白质在细胞发育过程中的变化。
通过对细胞或组织样本在不同发育阶段进行免疫印迹实验，我们可以观察到目标蛋白质在细胞发育过程中的表达变化。
这些变化可能与细胞分化、增殖以及功能转变等过程密切相关。
3. 目标蛋白质与其他蛋白质的相互作用。
通过免疫印迹实验，我们可以进一步研究目标蛋白质与其他蛋白质的相互作用。
通过添加不同抗体，我们可以检测到目标蛋白质与其他蛋白质的结合情况，揭示其在细胞信号传导和调控网络中的功能。
总结：免疫印迹实验是一种非常有用的生物学实验技术，可以用于检测特定蛋白质的表达水平以及研究其功能和相互作用。
WesternBlot实验实用技术手册总结
Western Blot 实验技术手册Western Blot 是通过聚丙烯酰胺凝胶电泳将蛋白根据分子量大小分开，然后转移到固相载体（杂交膜）上，然后通过抗原抗体反应检测杂交膜上的靶蛋白是否存在，从而检测到靶蛋白在待检测样本中的表达情况。
目前 Western Blot 已经是蛋白检测的最常用和成熟的技术之一 .一、 Western Blot 基本操作流程图细胞 / 组织蛋白提取↓ 蛋白定量、蛋白变性上样、电泳↓一转膜↓封闭↓孵育一抗↓洗膜孵育二抗↓洗膜底物孵育↓曝光或显色二. Western Blot 操作步骤1.蛋白提取、处理蛋白提取的质量直接决定着WB 结果的好坏，因此，根据样本类型和检测类型选择合适的蛋白制备方法是至关重要的。
使用适当的裂解液裂解贴壁细胞、悬浮细胞或者组织样品.对于贴壁培养的细胞，经预冷的PBS 漂洗 2 次，裂解液中加入蛋白酶和磷酸酶抑制剂，然后吸净 PBS，加入预冷的裂解液，最后用细胞刮子刮取贴壁细胞，将细胞及裂解液温和地转移至预冷的微量离心管中，4℃离心 12,000 rpm ，20 min（根椐细胞种类不同调整离心力），轻轻吸取上清，转移至新预冷的微量离心管中置于冰上，即为蛋白样本，弃沉淀.对于组织样品，用灭菌的预冷的工具分离目的组织，尽量置于冰上以防蛋白酶水解，将组织块放在圆底的微量离心管或Eppendorf 管中，加入液氮冻结组织于冰上均质研磨，长期可保存于 -80 °C，每约 5 mg 加入约 300 μl预冷的裂解液lysis buffer ，冰浴匀浆后置于4℃摇动 2 小时，裂解液体积与组织样本量有适当比例，（最终的蛋白浓度至少达到0.1 mg/ml,理想的蛋白浓度应为 1-5 mg/ml). ，4℃离心 12,000 rpm ， 20 min ，轻轻吸取上清，转移至新预冷的微量离心管中置于冰上，即为蛋白样本，弃沉淀提取蛋白后进行蛋白的定量，蛋白的快速定量方法主要蛋白本身的发色基团，或者与其他显色剂反应产生的紫外吸收来进行定量.目前常用的主要有直接紫外吸收法，Bradford 法、和 Lorry 法或 BCA 法，一般推荐用 BCA 法 .BCA 测定方法如下:A ．酶标板操作1.标准曲线的绘制：取一块酶标板，按照下表加入试剂孔号 1 2 3 4 5 6 7 8蛋白标准溶液（μL）0 1 2 4 8 12 16 20去离子水（μL）20 19 18 16 12 8 4 0对应蛋白含量（μg）0 0.5 1.0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.02、根据样品数量，按 50 体积 BCA 试剂 A 加 1 体积 BCA 试剂 B（ 50:1）配制适量 BCA 工作液，充分混匀；3、各孔加入 200 μ L BCA工作液；4、把酶标板放在振荡器上振荡30sec，37℃放置 30 分钟，然后在 562nm 下比色测定。
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Western Blot实验报告
正式实验
客户姓名：
报告日期：
一、客户样品及抗体登记
1．样品种属来源：
2．样品标记：
3．抗体名称：
抗体来源：
抗体Cat. 及lot号：
二、材料和方法
1．试剂及耗材
蛋白抽提试剂（改进型RIPA配方）
BCA蛋白定量试剂盒
2mg/ml BSA标准品
5×还原样品缓冲液
10×Tris-Glycine-SDS电泳缓冲液
考马斯亮蓝染色液
10×TBST pH8.0
中分子量蛋白marker（7条带）
中分子量预染蛋白marker（7条带）
湿转缓冲液
NC膜，0.45um孔径Millipore 丽春红染色液
BSA Amresco PMSF Amresco 蛋白酶抑制剂Roche 磷酸酶抑制剂Roche 脱脂奶粉伊利ECL Millipore Stripping buffer（抗体洗脱液）
（抗体需要选择，选择后把多余的删除）
山羊抗兔IgG（H+L），HRP Jackson
山羊抗小鼠IgG（H+L），HRP Jackson
兔抗山羊IgG（H+L），HRP Jackson
Beta-actin 兔多抗
Beta-actin 鼠单抗
Beta-tubulin 兔多抗
Beta-tubulin鼠单抗
GAPDH 兔多抗
GAPDH 鼠单抗
2．实验仪器
Fresco低温冷冻离心机Thermo
MultiSkan3酶标仪Thermo
Mini P-4电泳槽Cavoy
湿转电泳槽Cavoy
电泳仪Bio-Rad
半干槽Bio-Rad
水平脱色摇床其林贝尔
酸度计 pH211 Hanna
电动组织匀浆器Fluka
三、实验方法及结果
3.1 蛋白抽提
3.1.1组织蛋白抽提
预冷RIPA蛋白抽提试剂，加入蛋白酶抑制剂（磷酸化蛋白需要同时加入磷酸酶抑制剂）。
在蛋白抽提开始前加入0.1M PMSF母液，PMSF终浓度1mM。
称取组织重量以重量：裂解液体积=1:9比例加入裂解液，用眼科剪剪碎组织块，Fluka电动组织匀浆器15000rpm转速进行匀浆，每次10s，间隔10s，进行三次匀浆。
匀浆时EP管需要浸入冰水混合物中进行降温。
匀浆完成后在冰上孵育20min，4度离心，13000rpm，20min。
离心完成后取上清，分装保存，待测。
3.1.2细胞蛋白抽提
预冷RIPA蛋白抽提试剂，加入蛋白酶抑制剂（磷酸化蛋白需要同时加入磷酸酶抑制剂）。
在蛋白抽提开始前加入0.1M PMSF母液，PMSF终浓度1mM。
细胞计数，以细胞数量1×107加入1ml裂解液，用枪头吹打充分悬起细胞，完成后在冰上孵育20min，4度离心，13000rpm，20min。
离心完成后取上清，分装保存，待测。
3.2 BCA法蛋白定量
准备BCA工作液 A液：B液=50:1，稀释好各个提取BSA标准品。
样品用PBS进行稀释。
样品：BCA工作液=1:8，混匀后37度孵育30min或者室温孵育60min，酶标仪570nm 波长滤光片读取OD值。
蛋白浓度计算见下表：
3.3 蛋白浓度调整
以RIPA调整蛋白浓度，加入5×还原样品缓冲液后样品终浓度为2-4mg/ml（不同样品具体确定）。
煮沸变性5min。
样品蛋白浓度调整见下表：
3.4 SDS-PAGE
3.4.1 根据目的蛋白的分子量，配制12%分离胶，浓缩胶浓度为5%。
3.4.2 待检测蛋白样品上样量：上样20ug
3.4.3 电泳条件：浓缩胶恒压90V，约20min，溴酚蓝进行分离胶界面；分离胶恒压160V，
电泳至溴酚蓝到凝胶底部。
3.4.4 用考马斯亮蓝染色液进行染色。
染色结果见下图：
3.5 目的蛋白WB正式实验
3.5.1 根据目的蛋白的分子量，配制%分离胶，浓缩胶浓度为5%。
3.5.2 待检测蛋白样品上样量：
3.5.3 电泳条件：浓缩胶恒压90V，约20min；分离胶恒压160V，通过预染蛋白marker来
确定电泳停止时间。
3.5.4 湿转法，转膜条件：300mA恒流；0.45um孔径NC膜，转膜时间h。
转膜完成后丽春
红染色试剂对膜进行染色，观察转膜效果。
同时做好泳道标记，准备预实验时进行按照纵向泳道剪膜。
3.5.5 封闭：将膜完全浸没5%脱脂奶粉-TBST中室温轻摇60min。
3.5.6 一抗孵育：用5%脱脂奶粉-TBST稀释稀释一抗，室温孵育10min，放4℃过夜。
备注：按照预实验中确定的稀释度进行正式实验。
选择一种内参进行同步预实验。
3.5.7 第二天从4度拿出膜，在室温孵育30min。
洗膜：TBST洗膜5次，每次3min。
3.5.8 二抗孵育：用5%脱脂奶粉-TBST稀释二抗，山羊抗兔IgG（H+L） HRP 山羊抗小鼠
IgG（H+L） HRP，1:10000，室温轻摇 40min。
洗膜：TBST洗膜6次，每次3min。
3.5.9 ECL加到膜上后反应3-5min，胶片曝光：10s-5min（曝光时间随不同光强度而调整），
显影2min，定影。
胶片扫描后结果如下：
3.6 内参蛋白WB正式实验
3.6.1 Stripping Buffer洗膜，37℃洗膜30min （如果目的蛋白与内参蛋白分子量相
差在10K以上，可以不用stripping buffer洗膜这一步）。
3.6.2 洗膜：去离子水洗膜3次。
3.6.3 洗膜：TBST洗膜3次，每次3min
3.6.4 将膜完全浸没3%BSA-TBST中室温轻摇30min。
3.6.5 孵育内参：加Beta-actin兔多抗，用5%脱脂奶粉-TBST稀释抗体，1：3000稀释，
室温孵育2h。
3.6.6 洗膜：TBST洗膜5次，每次3min。
3.6.7 二抗孵育：用5%脱脂奶粉-TBST稀释二抗，山羊抗兔IgG（H+L） HRP 山羊抗小鼠
IgG（H+L） HRP，1:10000，室温轻摇 40min。
洗膜：TBST洗膜6次，每次3min。
3.6.8 洗膜：TBST洗膜5次，每次3min。
3.6.9 ECL加到膜上后反应3-5min，胶片曝光：10s-5min（曝光时间随不同光强度而调
整），显影2min，定影。
胶片扫描后结果如下：
四、实验结果分析
1．能检测到特异的阳性条带。
2．内参检测：检测结果为正常阳性结果。
2010-09-27。